医学微生物学课件：肝炎病毒.ppt

1、乏力乏力食欲减退食欲减退恶心、呕吐恶心、呕吐肝肿大肝肿大肝功能损害肝功能损害黄疸黄疸 病毒性肝炎病毒性肝炎是以肝细胞发生是以肝细胞发生变性、坏死，同变性、坏死，同时出现肝细胞再时出现肝细胞再生，以单核细胞生，以单核细胞和淋巴细胞浸润和淋巴细胞浸润为主的炎症。为主的炎症。 世界性传染病世界性传染病 传染性强传染性强 传播途径复杂传播途径复杂 流行广泛流行广泛 发病率较高发病率较高 中国是中国是“肝炎大国肝炎大国” ” ，病毒性肝炎发，病毒性肝炎发病数位居法定管理病数位居法定管理传染病的第一位传染病的第一位。肝炎病毒肝炎病毒巨细胞病毒巨细胞病毒EBEB病毒病毒单纯疱疹病毒单纯疱疹病毒黄热病毒等黄热

2、病毒等l一类主要侵犯肝脏并引起病毒性肝炎的病毒一类主要侵犯肝脏并引起病毒性肝炎的病毒类类型型一、甲型肝炎病毒一、甲型肝炎病毒(hepatitis A virus)(hepatitis A virus)甲型肝炎病毒甲型肝炎病毒甲型肝炎的病原体甲型肝炎的病原体甲型肝炎甲型肝炎 世界性急性传染病世界性急性传染病占病毒性肝炎的占病毒性肝炎的5050 年发病数超过年发病数超过200200万万19731973年年FeinstoneFeinstone首次从病人粪便中首次从病人粪便中 发现发现HAVHAV19791979年年ProvostProvost和和HillemanHilleman首次用原首次用原 代狨

3、猴肝细胞和传代恒河猴肾细代狨猴肝细胞和传代恒河猴肾细 胞培养病毒成功胞培养病毒成功1 1月月1818日日 4343例例1 1月月1919日日 134134例例1 1月月2121日日 380380例例1 1月月2727日日 54675467例例1 1月月3131日日 1239912399例例 1988 1988年上海市甲型肝炎爆发流行年上海市甲型肝炎爆发流行3131万万人患病，引起人群大恐慌。人患病，引起人群大恐慌。 小核糖核酸病毒科，嗜肝病毒属小核糖核酸病毒科，嗜肝病毒属 球形，无包膜，直径球形，无包膜，直径272732 nm32 nm 电镜下有空心和实心两种颗粒电镜下有空心和实心两种颗粒 只

4、有一种血清型只有一种血清型1.核心核心 单股单股(+)RNA。2.衣壳衣壳 20面体立体对称。面体立体对称。HAVHAV电镜图电镜图HAVHAV结构模式图结构模式图 基因组为单正链基因组为单正链RNARNA，约约7 7. .5 5KbKb 有有7 7个基因型个基因型(型型) ) 编码区只有一个开放读码框架（编码区只有一个开放读码框架（ORFORF） 分为分为P1P1、P2P2、P3P3功能区功能区 HAVHAV的基因组结构的基因组结构l VP1VP1l VP2 VP2 衣壳蛋白，含中和抗原决定簇衣壳蛋白，含中和抗原决定簇l VP3VP3l VP4 VP4 小分子多肽小分子多肽 l VPg RN

5、AVPg RNA多聚酶，参与复制的起始多聚酶，参与复制的起始l NS NS 参与病毒的复制过程参与病毒的复制过程 耐受乙醚、氯仿等脂溶剂耐受乙醚、氯仿等脂溶剂 耐酸：在耐酸：在pH3pH3的酸性环境中稳定的酸性环境中稳定 00可生存可生存1414个月，个月，-20-20数年仍保数年仍保 持感染性持感染性 100 5100 5 minmin可使之灭活可使之灭活 易感动物：易感动物： 黑猩猩，狨猴，鹰面猴，短尾猴黑猩猩，狨猴，鹰面猴，短尾猴允许性细胞：允许性细胞： VeroVero、恒河猴胚肾细胞（、恒河猴胚肾细胞（FRHK-4FRHK-4） 人肝癌细胞株（人肝癌细胞株（PLC/PRF/SPLC/

6、PRF/S）等）等 在培养细胞中生长缓慢，无在培养细胞中生长缓慢，无CPECPE传染源传染源：急性期患者和隐性感染者：急性期患者和隐性感染者传播途径传播途径：粪：粪- -口传播口传播潜伏期潜伏期：15155050天，平均天，平均3030天天传染期传染期：潜伏末期至起病后：潜伏末期至起病后3 3周周会会绕绕道道的的病病毒毒 NKNK细胞的杀伤作用细胞的杀伤作用 特异性细胞免疫特异性细胞免疫IFNIFN- -分泌增加，促进肝细胞表达人类分泌增加，促进肝细胞表达人类白细胞抗原白细胞抗原（human leukocyte antigenhuman leukocyte antigen，HLAHLA），HL

7、AHLA介导的介导的CTLCTL对肝细胞的细胞对肝细胞的细胞毒作用增强。毒作用增强。 肝细胞溶解肝细胞溶解 临床型临床型 20% 20% 亚临床型亚临床型 45.7% 45.7% 隐性感染隐性感染 34.3% 34.3% 肝脾肿大肝脾肿大 黄疸黄疸 转氨酶升高转氨酶升高 血胆红素升高血胆红素升高 恶心、呕吐、食欲减退、发热恶心、呕吐、食欲减退、发热 一般为自限性疾病，预后良好，不发一般为自限性疾病，预后良好，不发展成慢性肝炎和慢性携带者。展成慢性肝炎和慢性携带者。 IgM IgM：早期出现，维持两个月左右：早期出现，维持两个月左右 IgG IgG：急性期后期或恢复期早期出现，：急性期后期或恢复

8、期早期出现， 维持多年，对再感染有免疫保护作用。维持多年，对再感染有免疫保护作用。急性过程急性过程无慢性化无慢性化基本终身免疫基本终身免疫QuestionQuestionHAVHAV只有一种血清型，感只有一种血清型，感染后又可获得终身免疫，染后又可获得终身免疫，那么，那么，HAVHAV如何存活？如何存活？HAV-IgMHAV-IgM检测：检测： 早期、快速诊断最可靠的血清学指标早期、快速诊断最可靠的血清学指标 HAV-IgGHAV-IgG检测：检测： 主要用于了解既往感染史、疫苗免疫主要用于了解既往感染史、疫苗免疫 效果评价或流行病学调查效果评价或流行病学调查一般性预防：一般性预防： 卫生宣传

9、卫生宣传 保护水源保护水源 加强粪便管理加强粪便管理 搞好饮食卫生搞好饮食卫生 特异性预防：特异性预防： 减毒活疫苗（我国已广泛使用）减毒活疫苗（我国已广泛使用） 灭活疫苗灭活疫苗二、乙型肝炎病毒二、乙型肝炎病毒(hepatitis B virus)(hepatitis B virus)无症状携带者无症状携带者重症乙肝重症乙肝急性乙肝急性乙肝慢性乙肝慢性乙肝与肝硬化和肝癌密切相关与肝硬化和肝癌密切相关HBVHBV流行久远、传播广泛，是全球性公共流行久远、传播广泛，是全球性公共卫生问题：全球卫生问题：全球3.3.7 7亿人携带亿人携带HBVHBV我国为高流行区我国为高流行区 感染率感染率 60%

10、 60% HBsAg HBsAg携带率携带率 8%8%10%10% 慢性乙肝病人慢性乙肝病人 10001000万万80%80%原发性肝癌与原发性肝癌与HBVHBV慢性感染有关慢性感染有关 Dane Dane颗粒：颗粒： 直径直径42nm42nm，完整，完整病毒，有传染性病毒，有传染性小球形颗粒：小球形颗粒： 直径直径22nm22nm，中空，中空，无核酸，仅有外衣壳无核酸，仅有外衣壳管型颗粒：由小球形颗粒聚集而成管型颗粒：由小球形颗粒聚集而成 外衣壳外衣壳( (包膜包膜) )：双层脂质双层脂质HBsAgHBsAgPreS1,PreS1,PreS2PreS2内衣壳内衣壳( (核衣壳核衣壳):):

11、HBcAgHBcAg核心核心：DNA+DNADNA+DNA聚合酶聚合酶小形球颗粒：小形球颗粒：由由HBsAgHBsAg组成，不是组成，不是HBVHBV。管形颗粒：管形颗粒： 实际上是由实际上是由小球形颗粒串联小球形颗粒串联聚合而成，内部聚合而成，内部不含核酸。不含核酸。 基因组为不完全双链环状基因组为不完全双链环状DNADNA 长链（负链），长度固定，长链（负链），长度固定，3200 bp 3200 bp 短链（正链）：长链的短链（正链）：长链的50%50% - -100% 100% 负链含负链含4 4个个ORFORF S S区、区、C C区、区、P P区、区、X X区区 S S区区： C C

12、区区： P P区区： X X区区： 由由S S基因、基因、PreSPreS1 1和和PreSPreS2 2基因组成基因组成 编码编码HBsAgHBsAg、PreSPreS1 1、PreSPreS2 2 由前由前C C和和C C基因基因 C C基因编码核心蛋白基因编码核心蛋白HBcAg HBcAg Pre-C Pre-C与与C C基因共同编码基因共同编码Pre-CPre-C蛋白蛋白 Pre-C Pre-C蛋白经切割加工后形成蛋白经切割加工后形成HBeAg HBeAg 编码编码DNADNA多聚酶多聚酶 反式激活肝细胞癌基因，与肝反式激活肝细胞癌基因，与肝癌的发生、发展有密切的关系癌的发生、发展有密

13、切的关系DNADNA聚合酶、逆转录聚合酶、逆转录酶和酶和RNARNA酶的活性酶的活性编码编码HBxAgHBxAge e抗原抗原l表面抗原表面抗原HBsAgHBsAgl核心抗原核心抗原HBcAg HBcAg le e抗原抗原HBeAgHBeAg HBsAgHBsAg（表面抗原）表面抗原） 有四个不同亚型有四个不同亚型：a ad dr r、a ad dw w、a ay yr r、a ay yw w 在血液中大量存在在血液中大量存在 诱导产生保护性抗体诱导产生保护性抗体 抗抗HBsHBs 不同亚型间有交叉免疫保护作用不同亚型间有交叉免疫保护作用 诱导细胞免疫反应诱导细胞免疫反应感染的标志感染的标志恢

14、复的标志恢复的标志HBcAgHBcAg（核心抗原）（核心抗原） 病毒的核心、被感染的肝细胞表面病毒的核心、被感染的肝细胞表面 一般一般不不游离于血循环中游离于血循环中 具有很强的抗原性具有很强的抗原性 抗抗HBcHBc没有没有免疫保护作用免疫保护作用 抗抗HBcHBc- -IgMIgM是病毒复制的指标是病毒复制的指标 具有具有T T细胞表位，产生细胞免疫反应细胞表位，产生细胞免疫反应肝内增殖的标志肝内增殖的标志检测不到检测不到HBHBe eAgAg（e e抗原）抗原） 非结构蛋白，非结构蛋白，不出现不出现在在HBVHBV颗粒中颗粒中 游离存在于血液中游离存在于血液中 与病毒的复制成正比与病毒的

15、复制成正比 是病毒复制的指标之一是病毒复制的指标之一 抗抗HBeHBe抗体具有免疫保护作用抗体具有免疫保护作用 pre-Cpre-C区突变区突变 免疫逃逸免疫逃逸预后良好预后良好强传染性强传染性PreS1PreS1、PreS2PreS2 抗原性强抗原性强 与肝细胞表面受体结合与肝细胞表面受体结合 特异性抗体有免疫保护作用特异性抗体有免疫保护作用 抗抗PreS1持续时间长持续时间长 抗抗PreS2持续时间短（持续时间短（2 23 3个月）个月）阻止侵入阻止侵入肝细胞肝细胞除肝细胞外，在其他细胞中复制的可能。除肝细胞外，在其他细胞中复制的可能。HBxAgHBxAgS S和和M M蛋白蛋白L L蛋白

16、蛋白HBcAgHBcAg、HBeAgHBeAg前蛋白、前蛋白、DNADNA酶、复制子代酶、复制子代DNADNA细胞培养：无，细胞培养：无，DNADNA转染技术转染技术动物模型：动物模型：黑猩猩黑猩猩（致病机制和疫苗效果）（致病机制和疫苗效果） 鸭鸭（抗病毒药和免疫耐受）（抗病毒药和免疫耐受） 土拨鼠、地松鼠土拨鼠、地松鼠耐受：低温、干燥、紫外线等耐受：低温、干燥、紫外线等不能用不能用70%70%乙醇灭活乙醇灭活3737活性维持活性维持7 7天，天，-20-20保存保存2020年年强100100，10min10min、0.5%0.5%过氧乙酸、过氧乙酸、5%5%次氯酸和环氧乙烷等均可灭活次氯酸和

17、环氧乙烷等均可灭活 血液、血制品血液、血制品（1010-7-71010-6-6mlml） 母婴传播母婴传播 HBsAg HBsAg（+ +）：）：40%40%； HBsAg HBsAg（+ +）HBeAgHBeAg（+ +）：）：83% 83% 性接触和密切接触传播性接触和密切接触传播传染源传染源：病人、无症状携带者：病人、无症状携带者 传播途径传播途径： HBVHBV的致病机制尚未完全清楚的致病机制尚未完全清楚 免疫病理反应以及病毒与宿主细胞间的免疫病理反应以及病毒与宿主细胞间的相互作用是肝细胞损伤的主要原因相互作用是肝细胞损伤的主要原因 “温柔地温柔地”感染靶细胞；感染靶细胞；空心囊膜空心

18、囊膜“诱骗诱骗”中和抗体；中和抗体； 特异性特异性CTLCTL的直接杀伤作用的直接杀伤作用 识别肝细胞膜上的识别肝细胞膜上的HLA-IHLA-I类分子和病毒类分子和病毒抗原直接杀伤靶细胞抗原直接杀伤靶细胞 细胞因子的抗病毒效应细胞因子的抗病毒效应 活化非特异细胞、抑制活化非特异细胞、抑制HBVHBV复制等复制等 细胞凋亡作用：细胞凋亡作用：感染细胞表达感染细胞表达FasFas基因基因细胞免疫的双重性细胞免疫的双重性 特异性抗体特异性抗体HBsAbHBsAb、PreSPreS1 1-Ab-Ab和和PreSPreS2 2-Ab-Ab直接清除血循环中游离的病毒直接清除血循环中游离的病毒 免疫复合物沉

19、积于肾小球基底膜、关节免疫复合物沉积于肾小球基底膜、关节滑液囊等处，激活补体，导致滑液囊等处，激活补体，导致型超敏反型超敏反应应免疫复合物沉积于肝内，可使肝毛细管栓免疫复合物沉积于肝内，可使肝毛细管栓塞，导致急性肝坏死，表现为重症肝炎。塞，导致急性肝坏死，表现为重症肝炎。 H B VH B V 感 染 使感 染 使 肝 特 异 性 脂 蛋 白 抗 原肝 特 异 性 脂 蛋 白 抗 原（liver specific protein, LSPliver specific protein, LSP）暴露，暴露，LSPLSP作为自身抗原诱导机体产生作为自身抗原诱导机体产生自身抗体，通过直接或间接作用，

20、导自身抗体，通过直接或间接作用，导致肝细胞损伤。致肝细胞损伤。 1 1免疫力极度底下免疫力极度底下胎儿时期宫内感染胎儿时期宫内感染幼儿时期感染幼儿时期感染病毒量非常大病毒量非常大2 23 34 4机体不能有效地清除病毒，机体不能有效地清除病毒，HBVHBV持续性感染持续性感染耐受耐受低下低下正常正常过强过强A爆发型爆发型肝炎，肝炎，即重症即重症肝炎肝炎B急 性 肝急 性 肝炎 或 隐炎 或 隐形感染形感染C慢 性 肝慢 性 肝炎 或 慢炎 或 慢性 活 动性 活 动性肝炎性肝炎D无 症 状无 症 状携带者携带者 近近90%90%转为无症状携带者，其中转为无症状携带者，其中2525或更多的病人，

21、转为慢性乙型肝炎，或更多的病人，转为慢性乙型肝炎，并可以进一步转化为肝硬化或肝癌。并可以进一步转化为肝硬化或肝癌。S S基因变异基因变异：a a抗原表位基因发生变异抗原表位基因发生变异，导致导致HBsAgHBsAg抗原性抗原性改变改变, , 出现免疫逃逸出现免疫逃逸和和“诊断逃逸诊断逃逸”。PreCPreC基因的变异基因的变异：1896 nt G-A1896 nt G-A突变导致突变导致第第2828位位TGGTGG变为变为TAGTAG，使使PreCPreC基因基因不能转不能转译出完整的译出完整的HBeAgHBeAg。C C基因的变异基因的变异：HBcAgHBcAg抗原位点抗原位点的改变的改变。

22、尚无直接证据，但：尚无直接证据，但： 新生土拨鼠感染新生土拨鼠感染WHV, 3WHV, 3年后年后100100发发 生肝癌生肝癌, , 未感染者无一发生；未感染者无一发生； 肝癌组织检测肝癌组织检测, , 约约5050含含X X基因基因片段，片段， HBxAg HBxAg可能是致癌的启动因子。可能是致癌的启动因子。 HBsAgHBsAg携带者较无携带者较无HBVHBV感染者发生肝感染者发生肝 癌的危险率高癌的危险率高217217倍倍；窗口期窗口期窗口期窗口期1. HBV DNA的检测的检测 方法：核酸杂交技术和方法：核酸杂交技术和PCRPCR 药物治疗疗效的考核指标药物治疗疗效的考核指标 2.

23、 HBV抗原抗体的检测：抗原抗体的检测：“两对半两对半” 方法：方法：RIARIA和和ELISAELISAQuestionQuestionHBVHBV的抗原抗体系统？的抗原抗体系统？HBsAg HBsAg HBVHBV感染的重要指标感染的重要指标 感染早期出现感染早期出现 急性肝炎恢复后急性肝炎恢复后1 14 4个月内消失个月内消失 6 6个月以上提示为慢性肝炎或个月以上提示为慢性肝炎或HBVHBV携带者携带者 HBsAbHBsAb 中和抗体中和抗体 见于恢复期、既往感染、疫苗接种后见于恢复期、既往感染、疫苗接种后 阳性提示机体对乙肝有免疫力阳性提示机体对乙肝有免疫力 HBcAgHBcAgl不

24、易检出不易检出l阳性提示病毒颗粒存在阳性提示病毒颗粒存在l血液具有传染性血液具有传染性HBcAb-IgHBcAb-IgM M 阳性提示阳性提示HBVHBV处于复制状态，具有处于复制状态，具有强的传染性强的传染性HBcAb-IgHBcAb-IgG G 低滴度提示既往感染，低滴度提示既往感染， 高滴度高提示急性感染高滴度高提示急性感染HBeAgHBeAg 阳性提示病毒在体内复制，具有阳性提示病毒在体内复制，具有传染性传染性HBeAbHBeAb 机体获得免疫力机体获得免疫力 病毒复制减弱病毒复制减弱 传染性降低传染性降低两对半检查两对半检查 HBsAg, HBsAbHBsAg, HBsAb HBeA

25、g, HBeAb HBeAg, HBeAb HBcAbHBcAb大三阳大三阳 HBsAg(+), HBeAg (+) HBsAg(+), HBeAg (+) ，HBcAb (+)HBcAb (+)小三阳小三阳 HBsAg (+), HBeAb (+), HBcAb (+)HBsAg (+), HBeAb (+), HBcAb (+)高危人群（血透、肾高危人群（血透、肾移植、传染病院）移植、传染病院）注射注射3 3针（针（0 0、1 1、6 6方案）方案） 抗体阳转率抗体阳转率80.380.396.296.2血源疫苗血源疫苗基因工程疫苗基因工程疫苗好新生儿新生儿（阻断母婴传播）（阻断母婴传播）高

26、效价高效价HBIGHBIGn用于紧急预防用于紧急预防n一周内注射有效一周内注射有效l切断传播途径切断传播途径l保护易感者保护易感者l急性患者：急性患者：“三早三早”l了解了解HBVHBV的相关知识的相关知识l严格血液及血制品的筛选严格血液及血制品的筛选无特效疗法无特效疗法- -IFN IFN 拉米夫定（拉米夫定（lamivudinelamivudine）泛昔洛韦（泛昔洛韦（famciclovirfamciclovir） 有一定疗效有一定疗效单磷酸阿糖腺苷（单磷酸阿糖腺苷（Ara-AAra-A）三、丙型肝炎病毒三、丙型肝炎病毒(hepatitis C virus)(hepatitis C vir

27、us)形态与结构形态与结构l病毒颗粒呈球型，有包膜病毒颗粒呈球型，有包膜l直径约直径约 5050 nm nm HCV-RNA HCV-RNA由由9 9个基因区组成，其中个基因区组成，其中C C区和区和E1E1区为病毒结构蛋白编码区。区为病毒结构蛋白编码区。E1E1、E2NS1E2NS1区基区基因易发生变异。因易发生变异。 包膜变异包膜变异 有严格的宿主限制性有严格的宿主限制性 黑猩猩为敏感动物黑猩猩为敏感动物 体外培养困难体外培养困难无理想的细胞培养模型无理想的细胞培养模型 主要经血液及血制品传播主要经血液及血制品传播 潜伏期短（潜伏期短（7 73333天）天） 感染易于慢性化感染易于慢性化

28、40%40%50%50%的丙肝患者可转变成慢的丙肝患者可转变成慢性肝炎性肝炎20 位患者位患者20% 痊愈痊愈100 位位 HCV 急性感染急性感染80 位患者位患者80% 持续感染持续感染24 位患者位患者30% 稳定慢性无进展稳定慢性无进展30% 呈严重进展呈严重进展40% 有不同有不同程度的进展程度的进展32 位患者位患者24 位患者位患者28 位患者位患者28 位患者位患者 56 位患者接受抗病毒治疗位患者接受抗病毒治疗持续性应答持续性应答 (50%)肝脏疾病终末期，肝脏疾病终末期，肝细胞癌，肝脏移肝细胞癌，肝脏移植，死亡植，死亡治疗失败治疗失败 (50%)l包膜的变异造成免疫逃逸包膜

29、的变异造成免疫逃逸l病毒低水平复制，无高水平免疫应答病毒低水平复制，无高水平免疫应答l病毒可在外围血单核细胞中生存病毒可在外围血单核细胞中生存 部分可发展成肝硬化和肝癌部分可发展成肝硬化和肝癌 20%20%慢性肝炎可发展成肝硬化慢性肝炎可发展成肝硬化 肝癌患者血中抗肝癌患者血中抗-HCV-HCV阳性率高阳性率高 HCVHCV与与HBVHBV重叠感染易发展成重症肝炎重叠感染易发展成重症肝炎 免疫力不稳定、不持久免疫力不稳定、不持久HCVHCV感染时间与肝硬化的发生感染时间与肝硬化的发生 病毒的直接致病作用病毒的直接致病作用 病毒在肝细胞内复制，直接损伤肝细胞病毒在肝细胞内复制，直接损伤肝细胞 免

30、疫病理作用免疫病理作用 特异性特异性CTLCTL对肝细胞的杀伤作用对肝细胞的杀伤作用 1 1. .RT-PCRRT-PCR、荧光定量、荧光定量PCRPCR技术检测病毒技术检测病毒RNA RNA 用于丙型肝炎的快速诊断用于丙型肝炎的快速诊断 2.ELISA2.ELISA法检测特异性抗体法检测特异性抗体 用于丙型肝炎的诊断、筛选献血员和用于丙型肝炎的诊断、筛选献血员和流行病学调查流行病学调查HCVHCV感染无症状人群的检测流程感染无症状人群的检测流程 缺乏有效疫苗缺乏有效疫苗 缺乏特效药物缺乏特效药物 最常用的药物最常用的药物 IFN-IFN- 主要预防措施主要预防措施 筛选供血员筛选供血员 控制血制品控制血制品1肝炎病毒的种类和特征肝炎病毒的种类和特征2HAVHAV的特性的特性3HBVHBV的生命活动规律及致病性的生命活动规律及致病性4HCVHCV的特征的特征1 1、名词：、名词：DaneDane颗粒颗粒2 2、肝炎病毒的种类有哪些？传播途径、肝炎病毒的种类有哪些？传播途径? ?3 3、HBVHBV外衣壳和内衣壳分别存在哪些抗原？外衣壳和内衣壳分别存在哪些抗原？4 4、试述、试述HBVHBV的抗原抗体系统及其结果分析。的抗原抗体系统及其结果分析。