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水质粪大肠菌群的测定课件.ppt

1、 自然界的水可分为地下水和地面水,除了地下深层水外,如湖泊,河流,海洋等各种地面水中都存在着各种各样的微生物。但它们所含的微生物种类,数量和分布都不相同。其中有些是“土生土长”的。另一些水生细菌是外来的,它们来自土壤,空气,垃圾,工厂废物或城市下水道污水。而来自下水道的微生物中,很可能含有人体肠道致病菌,例如霍乱,伤寒,副伤寒和痢疾等病原菌。 水质的细菌学检验主要包括两个常规项目:细菌总数和总大肠菌群。 多管发酵法多管发酵法 滤膜法滤膜法 粪大肠菌群粪大肠菌群是总大肠菌群的一部分,主要来自粪便。在44.5温度下能生长并发酵乳糖产酸产气的大肠菌群称为粪大肠菌群。用提高培养温度的方法,造成不利于来

2、自自然环境的大肠菌群生长的条件,使培养出来的菌主要为来自粪便中的大肠菌群,从而更准确地反映出水质受粪便污染的情况。 本标准适用于地表水,地下水及废水中粪大肠菌群的测定。 多管发酵法多管发酵法是以最可能数(most probable number),简称MPN 来表示试验结果的。实际上它是根据统计学理论,估计水体中的大肠杆菌密度和卫生质量的一种方法。如果从理论上考虑,并且进行大量的重复检定,可以发现这种估计有大于实际数字的倾向。不过只要每一稀释度试管重复数目增加,这种差异便会减少,对于细菌含量的估计值,大部分取决于那些既显示阳性又显示阴性的稀释度。因此在实验设计上,水样检验所要求重复的数目,要根

3、据所要求数据的准确度而定。 本标准所用试剂除另有说明,均为符合国家标准的分析纯化学试剂;实验用水为新制备的去离子水。 单倍乳糖蛋白胨培养液单倍乳糖蛋白胨培养液: 将10g 蛋白胨、3g 牛肉寖膏、5g 乳糖和5g 氯化钠加热溶解于1000mL 蒸馏水中,调节溶液pH 为7.27.4,再加入1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1mL,充分混匀,分装于试管中,于115高压灭菌器中灭菌20min,贮存于冷暗处备用。 三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液: 按上述乳糖蛋白胨培养液的制备方法配制。除蒸馏水外,各组分用量增加至三倍。(即按上述配方比例三倍(除蒸馏水外),配成三倍浓缩的乳糖蛋白胨培养液) E

4、C培养液:培养液: 成分: 胰胨 20克, 乳糖 5克, 胆盐三号 1.5克,磷酸氢二钾(K2HPO4)4克,磷酸二氢钾(KH2PO4)1.5克,氯化钠5克,蒸馏水1000毫升。 制法:将上述成分加热溶解,然后分装于含有 玻璃倒管的试管中。置高压蒸气灭菌器中,115高压灭菌器中灭菌20min,灭菌后pH应为6.9。 在密封瓶中的脱水培养基成品要存放在大气湿度低,温度低于30摄氏度的暗处,存放时应避免阳光直接照射,并且要避免杂菌倾入和液体蒸发。当培养液颜色变化,或体积变化明显时应废弃不用。 1. 水样接种量的选择水样接种量的选择 将水样充分混匀后,根据水样污染的程度将水样充分混匀后,根据水样污染

5、的程度确定水样接种量。每个样品至少用三个不确定水样接种量。每个样品至少用三个不同的水样量接种。同一接种水样量要有五同的水样量接种。同一接种水样量要有五管。管。 相对未受污染的水样接种量为相对未受污染的水样接种量为10ml、1 ml、0.1 ml。受污染水样接种量根据污染程度接。受污染水样接种量根据污染程度接种种1 ml、0.1 ml、0.01 ml、或、或0.1 ml、0.01 ml、0.001 ml等。等。 培养液的浓度和量的选择:培养液的浓度和量的选择: 如接种体积为10 ml,则试管内应装有三倍浓度乳糖蛋白胨培养液5mL;如接种量为1mL或少于1mL,则可接种普通浓度的乳糖蛋白胨培养液1

6、0mL中。 2. 初发酵试验初发酵试验 将水样分别接种到盛有乳糖蛋白胨培养液的发酵管中。在370.5下培养24h2h。产酸和产气的发酵管表明试验阳性。入在倒管内产气不明显,可轻拍试管,有小气泡升起的为阳性。 注意:注意: 加入水样时,先将培养管管口用酒精灯消毒一次,加入水样后再用酒精灯消毒一次,封口。 阳性的判别阳性的判别:既产酸又产气: 观察观察:24h小时后取出观察培养 管,颜色由紫色变为黄色和有 气泡产生两个方面才能判为阳性3. 复发酵试验复发酵试验 轻微震荡初发酵试验阳性结果的发酵管,用3mm接种环或灭菌棒将培养物转移到EC培养液中。在44.50.5下培养24h2h(水浴箱的水面应高于

7、试管中培养基液面)。接种后所有发酵管必须在30分钟内放进水浴中。培养后立即观察,发酵管产气则证实为粪大肠菌群阳性。 根据不同接种量的发酵管所出现阳性结果的数目,从表2或表3中查得每升水样中的粪大肠菌群。 接种水样为100ml 2份,10ml 10份,总量300ml 时,查表2可得每升水样中粪大肠菌群; 接种5份10ml 水样,5份1ml水样,5份0.1ml水样时,查表3求得MPN指数,MPN值再乘10,即为1升水样中的粪大肠菌群; 举例举例: 某水样接种10mL 的5 管均为阳性;接种1mL 的5 管中有2 管为阳性;接种1:10 的水样1mL 的5 管均为阴性。从最可能数(MPN)表中查检验

8、结果5-2-0,得知100mL 水样中的总大肠菌群数为49 个,故1L 水样中的总大肠菌群数为4910=490 个。 如果接种的水样量不是10mL、1mL 和0.1mL,而是较低或较高的三个浓度的水样量,也可查表求得MPN 指数,再经下面公式换算成每100mL 的MPN 值。1838 灭菌 初发酵后以有阴、有阳稀释效果最好。 水样一定要摇均。 每个稀释倍数要求做5管。 接种环要求用酒精灯灼烧消毒,复发酵接种时每一管都要在酒精灯上灼烧消毒。 配制好的培养基保存多少时间?存放时应注意哪些事项? 答:配制好的培养基不宜保存过久,以少量勤配为宜。已灭菌的培养基可在4100C存放一个月。存放时应避免阳光直射,并且避免杂菌侵入和液体蒸发。 1. 细菌采样玻璃瓶洗涤干燥后,要在 0C干热灭菌 或高压蒸汽 0C灭菌 min。 2. 对受污染严重的水体,可选择 方法测定其总大肠菌群数。 3. 总大肠菌群测定过程的复发酵试验中,接种完菌落后,应将发酵管置于 0C温度下培养 h。 4. 复发酵试验使用 培养基。精品课件精品课件!精品课件精品课件! 计算题:计算题: 某水样接种10mL 的5 管中有4管为阳性;接种1mL 的5 管中有3 管为阳性;接种1:10 的水样1mL 的5 管中有1管为阳性。求1L 水样中的总大肠菌群数为多少?

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