第十章-色谱分离过程课件.ppt

1、 第一节 概 述 一、色谱法的由来一、色谱法的由来 1 119061906年由俄国植物学家年由俄国植物学家TsweetTsweet创立创立 植物色素分离植物色素分离见图示见图示 4040年代年代 TLCTLC，纸色谱，纸色谱 5050年代年代 GCGC出现使色谱具备分离和在线分析功能出现使色谱具备分离和在线分析功能 6060年代末年代末 HPLCHPLC出现，使色谱分析范围进一步扩大出现，使色谱分析范围进一步扩大 2 2现在：一种重要的分离、分析技术现在：一种重要的分离、分析技术 分离混合物各组分并加以分析分离混合物各组分并加以分析图示固定相固定相CaCO3颗粒颗粒流动相流动相石油醚石油醚 定

2、义：利用物质的物理化学性质建立的分离、分析定义：利用物质的物理化学性质建立的分离、分析 方法方法实质：分离实质：分离目的：定性分析或定量分析目的：定性分析或定量分析 其中的一相固定不动，称为其中的一相固定不动，称为固定相固定相； 另一相是携带试样混合物流过此固定相的流体（气另一相是携带试样混合物流过此固定相的流体（气体或液体），称为体或液体），称为流动相流动相。 固定相固定相除了固体，还可以是液体除了固体，还可以是液体 流动相流动相液体或气体液体或气体 色谱柱色谱柱各种材质和尺寸各种材质和尺寸 被分离组分被分离组分不再仅局限于有色物质不再仅局限于有色物质 当流动相中携带的混合物流经固定相时，其

3、与固定当流动相中携带的混合物流经固定相时，其与固定相发生相互作用。由于混合物中各组分在性质和结构上的相发生相互作用。由于混合物中各组分在性质和结构上的差异，与固定相之间产生的差异，与固定相之间产生的作用力的大小、强弱不同作用力的大小、强弱不同，随，随着流动相的移动，混合物在两相间经过反复多次的分配平着流动相的移动，混合物在两相间经过反复多次的分配平衡，使得各组分被固定相保留的时间不同，从而按一定次衡，使得各组分被固定相保留的时间不同，从而按一定次序由固定相中流出。序由固定相中流出。n 与适当的与适当的柱后检测方法柱后检测方法结合，实现混合物中各组分的结合，实现混合物中各组分的分离与检测。分离与

4、检测。n 两相及两相的相对运动构成了色谱法的基础两相及两相的相对运动构成了色谱法的基础三三. .色谱法的特点色谱法的特点（1 1）分离效率高分离效率高 复杂混合物，有机同系物、异构体。手性异构体。复杂混合物，有机同系物、异构体。手性异构体。（2 2） 灵敏度高灵敏度高 可以检测出可以检测出g.gg.g-1-1(10(10-6-6) )级甚至级甚至ng.gng.g-1-1(10(10-9-9) )级的物质量。级的物质量。（3 3） 分析速度快分析速度快 一般在几分钟或几十分钟内可以完成一个试样的分析。一般在几分钟或几十分钟内可以完成一个试样的分析。（4 4） 应用范围广应用范围广 气相色谱：沸点

5、低于气相色谱：沸点低于400400的各种有机或无机试样的分析的各种有机或无机试样的分析。 液相色谱：高沸点、热不稳定、生物试样的分离分析。液相色谱：高沸点、热不稳定、生物试样的分离分析。 不足之处不足之处： 被分离组分的定性较为困难。被分离组分的定性较为困难。第二节 色谱分离过程的基本原理一、分离原理一、分离原理 色谱分离过程的实质是溶质在不互溶的固定相和流动色谱分离过程的实质是溶质在不互溶的固定相和流动相之间进行的一种连续多次的交换过程，它借助溶质在亮相之间进行的一种连续多次的交换过程，它借助溶质在亮相间分配行为的差别而使不同的溶质分离。相间分配行为的差别而使不同的溶质分离。以吸附色谱为例以

6、吸附色谱为例 吸附吸附 解吸解吸再吸附再吸附 再解吸再解吸 反复多次洗反复多次洗脱脱被测组分分配系数不同被测组分分配系数不同 差速迁移差速迁移 分离分离n分配系数的微小差异分配系数的微小差异吸附能力的微小差异吸附能力的微小差异n微小差异积累微小差异积累较大差异较大差异吸附能力弱的组分先流出；吸附能力弱的组分先流出； 吸附能力强的组分后流出吸附能力强的组分后流出二、固定相（色谱柱填料）二、固定相（色谱柱填料）1.1.固体固定相固体固定相a a 常用的固体吸附剂：活性炭，硅胶，氧化铝，分子筛等常用的固体吸附剂：活性炭，硅胶，氧化铝，分子筛等 作用机理：吸附占主导地位作用机理：吸附占主导地位b b

7、新型的固体固定相：高分子多孔微球新型的固体固定相：高分子多孔微球 低温时，吸附占主导地位，高温时分配占主导地位低温时，吸附占主导地位，高温时分配占主导地位c c 化学键合固定相：分配占主导地位化学键合固定相：分配占主导地位 主要用于分析永久性气体，如低级烷烃、氢、氧、一氧主要用于分析永久性气体，如低级烷烃、氢、氧、一氧化碳、二氧化碳、氮氧化物、硫化氢等。化碳、二氧化碳、氮氧化物、硫化氢等。2.2.液体固定相液体固定相 组成结构：组成结构：担体担体+ +固定液固定液，前者是具有较大比表，前者是具有较大比表面、化学呈惰性的一类物质，后者在色谱使用温度面、化学呈惰性的一类物质，后者在色谱使用温度下呈

8、液体膜状态，化学性质稳定，不流失或挥发，下呈液体膜状态，化学性质稳定，不流失或挥发，主要用于分析较高沸点的有机物。主要用于分析较高沸点的有机物。 对固定液的基本要求：对固定液的基本要求： a a 蒸汽压要低，使用温度下为液体蒸汽压要低，使用温度下为液体 b b 热稳定要好，不挥发热稳定要好，不挥发 c c 惰性，与分析物质不产生化学反应。惰性，与分析物质不产生化学反应。固定液的选择原则：固定液的选择原则：“相似相溶相似相溶”，选择与试样性质相近的固定相。，选择与试样性质相近的固定相。A A 非极性样品选用非极性固定液（主要作用力为色散力）非极性样品选用非极性固定液（主要作用力为色散力）流出顺序

9、：沸点低的先流出，同沸点的极性组分先流出流出顺序：沸点低的先流出，同沸点的极性组分先流出B B 中等极性样品选用中等极性固定液（主要作用力为静电力）中等极性样品选用中等极性固定液（主要作用力为静电力）流出顺序：沸点低的先流出，同沸点的极性小的组分先流出流出顺序：沸点低的先流出，同沸点的极性小的组分先流出C C 强极性样品选用强极性固定液（主要作用力为静电力）强极性样品选用强极性固定液（主要作用力为静电力）流出顺序：极性低的先流出流出顺序：极性低的先流出三、色谱柱及柱技术三、色谱柱及柱技术 色谱柱的性能依赖于三个因素：色谱柱填充技术、柱色谱柱的性能依赖于三个因素：色谱柱填充技术、柱设计和生产设计

10、和生产1.1.色谱柱装填方法色谱柱装填方法 高压匀浆填充高压匀浆填充 干法填充干法填充 径向压缩法径向压缩法 轴向压缩法轴向压缩法 环形压缩技术环形压缩技术2.2.色谱柱的设计色谱柱的设计 多采用大直径、短柱长的多采用大直径、短柱长的“饼式饼式”柱柱第三节第三节 色谱的分类色谱的分类1. 1. 按固定相及流动相的状态分类：液相色谱、按固定相及流动相的状态分类：液相色谱、气相色谱气相色谱2. 2. 按固定相形状性质分类：柱色谱、纸色谱、按固定相形状性质分类：柱色谱、纸色谱、薄层色谱薄层色谱3.3.按色谱过程的机理分类：按色谱过程的机理分类：吸附色谱吸附色谱：用固体吸附剂作固定相，利用组分在吸附剂

11、上：用固体吸附剂作固定相，利用组分在吸附剂上吸附吸附力的不同力的不同，因而吸附平衡常数不同而将组分分离，因而吸附平衡常数不同而将组分分离分配色谱分配色谱：用液体作固定相，利用组分在：用液体作固定相，利用组分在液相中的溶解度液相中的溶解度不同，不同，因而分配系数不同进行分离因而分配系数不同进行分离离子交换色谱离子交换色谱：利用离子交换原理：利用离子交换原理排阻色谱排阻色谱：利用：利用分子大小分子大小不同不同电色谱电色谱：利用带电物质：利用带电物质在电场作用下移动速度在电场作用下移动速度不同进行分离不同进行分离4.4.可按仪器分可按仪器分: :a a 气相色谱气相色谱( Gas chromatog

12、raphy )( Gas chromatography ) 填充柱气相色谱（填充柱气相色谱（Packed column gas chromatographyPacked column gas chromatography） 毛细管气相色谱毛细管气相色谱 (Capillary column gas chromatography)(Capillary column gas chromatography) 裂解气相色谱裂解气相色谱(Pyrolysis gas chromatography )(Pyrolysis gas chromatography ) 顶空气相色谱顶空气相色谱 ( Headspac

13、e gas chromatography)( Headspace gas chromatography) 气相质谱联用技术（气相质谱联用技术（Gas chromatography-Mass spectrometryGas chromatography-Mass spectrometry）b b 液相色谱仪液相色谱仪( Liquid chromatography )( Liquid chromatography ) 高效液相色谱高效液相色谱( High performance liquid chromatography)( High performance liquid chromatograp

14、hy) 超临界流体色谱超临界流体色谱( Supercritical fluid chromatography)( Supercritical fluid chromatography) 高效毛细管电泳高效毛细管电泳(High performance capillary electrophoresis)(High performance capillary electrophoresis) 毛细管电色谱毛细管电色谱(Capillary electrochromatography)(Capillary electrochromatography) 液相质谱联用技术（液相质谱联用技术（Liquid

15、chromatography- Mass spectrometryLiquid chromatography- Mass spectrometryc c 平面色谱法（平面色谱法（Planar chromatographyPlanar chromatography） 薄层色谱薄层色谱 ( Thin layer chromatography)( Thin layer chromatography) 薄层电泳色谱薄层电泳色谱 (Thin layer electrophoresis )(Thin layer electrophoresis ) 纸色谱纸色谱( Paper chromatography)

16、( Paper chromatography) (1)(1)色谱过程热力学色谱过程热力学高选择性色谱分离的理论基础；高选择性色谱分离的理论基础； 色谱过程动力学色谱过程动力学高效色谱分离的理论基础；高效色谱分离的理论基础； 色谱分离条件的选择色谱分离条件的选择多元混合物分离最优化理论。多元混合物分离最优化理论。 色谱理论研究色谱过程中分子运动的规律，探讨色谱理论研究色谱过程中分子运动的规律，探讨微观分子运动与色谱分离的内在联系。它包括三个微观分子运动与色谱分离的内在联系。它包括三个基本理论问题：基本理论问题：第四节第四节 色谱分离过程基础理论色谱分离过程基础理论一、色谱过程 色谱柱色谱柱 检测

17、器检测器 色谱图色谱图 组分在色谱柱内运动组分在色谱柱内运动溶质浓度分布溶质浓度分布 柱内：谱带柱内：谱带 柱后：色谱峰柱后：色谱峰色谱仪色谱仪 差速迁移指不同组分通过色谱柱时的差速迁移指不同组分通过色谱柱时的移动速度移动速度不同。样品注不同。样品注入色谱柱时，由于流动相以一定速度通过固定相，使样品中各入色谱柱时，由于流动相以一定速度通过固定相，使样品中各组分在两相之间进行连续多次的分配。组分在两相之间进行连续多次的分配。 由于组分与固定相和流动相作用力的差别，在两相中的分配由于组分与固定相和流动相作用力的差别，在两相中的分配系数不同。系数不同。 在固定相溶解或吸附大的，即分配系数大的组分，迁

18、移速度在固定相溶解或吸附大的，即分配系数大的组分，迁移速度？ 慢慢 在固定相溶解或吸附小，即分配系数小的组分，迁移速度在固定相溶解或吸附小，即分配系数小的组分，迁移速度？ 快快 结果是样品各组分同时进入色谱柱，而以不同的结果是样品各组分同时进入色谱柱，而以不同的速度在色谱柱内迁移，导致各组分分离。组分通过速度在色谱柱内迁移，导致各组分分离。组分通过色谱柱的速度，取决于各组分在色谱体系中的平衡色谱柱的速度，取决于各组分在色谱体系中的平衡分布。因此，影响平衡分布的因素，即分布。因此，影响平衡分布的因素，即流动相和固流动相和固定相的性质、色谱柱柱温等影响组分的迁移速度。定相的性质、色谱柱柱温等影响组

19、分的迁移速度。二、保留值、分离度和柱效率二、保留值、分离度和柱效率1.1.保留值保留值 通常以保留时间通常以保留时间t tR R及容及容量因子量因子kk表示表示保留时间保留时间t tR R：从进样开始到：从进样开始到某组分色谱峰顶（浓度极某组分色谱峰顶（浓度极大点）的时间，即组分在大点）的时间，即组分在色谱柱中的色谱柱中的停留时间停留时间或组或组分流经色谱柱所需要的时分流经色谱柱所需要的时间。间。容量因子容量因子( (新定义为保留因子，新定义为保留因子，Retention factor)Retention factor) 在色谱法中，保留值是表示组分在色谱柱内滞留状况的一在色谱法中，保留值是表

20、示组分在色谱柱内滞留状况的一个指标。而容量因子（个指标。而容量因子（k k）是一个具有普遍意义的色谱保留值，）是一个具有普遍意义的色谱保留值，它指在一定柱温下它指在一定柱温下, , 溶质在两相间达到分配平衡时溶质在两相间达到分配平衡时, , 分配在固分配在固定相和流动相中的总量之比定相和流动相中的总量之比。 k k = w = ws s /w /wm m = K = KV Vs s/ V/ Vm m = K / = K / 可见，可见，k k与组分的分配系数与组分的分配系数K K和相比和相比 有关，但与流动相流速有关，但与流动相流速无关。无关。k k值大小可直接从色谱图上测量。有关计算式如下：

21、值大小可直接从色谱图上测量。有关计算式如下：ktttVVVrr0000 tr = t0 (1k) Vr = F tr VVkVKVrs001()基本保留方程基本保留方程ttKKkkrr212121分离因子分离因子恒流速恒流速t t0 0 的测定的测定2.2.分离度分离度分离条件的选择主要是提高分离条件的选择主要是提高“难分离物质对难分离物质对”的分离度的分离度峰宽分离度峰宽分离度R R 国家标准分离度国家标准分离度 当两峰高相差不大当两峰高相差不大, ,且峰型接近时且峰型接近时可以认为可以认为W W1 1=W=W2 2 =W=W当当R=1R=1时，分离程度达到时，分离程度达到94%94% 当当

22、R=1.5R=1.5时，分离程度达到时，分离程度达到100%100%WttWWttRRRRR122112)(23.3.柱效应柱效应 色谱柱的理论塔板数、塔板高度色谱柱的理论塔板数、塔板高度 反应不同时刻溶质在色谱柱中的分布以及分离度与柱高之反应不同时刻溶质在色谱柱中的分布以及分离度与柱高之间的关系间的关系n理论塔板数的计算方法：理论塔板数的计算方法：nN-N-理论塔板数理论塔板数 tR-tR-保留时间保留时间nW W1/21/2-半峰宽半峰宽 Wb-Wb-峰底宽度峰底宽度n理论塔板高度：理论塔板高度：L-L-柱长柱长22/1)(54. 5WtNR2)(16bRWtN NLH 三、平衡色谱理论三

23、、平衡色谱理论 WilsonWilson等人提出的平衡色谱理论的三个基本假设：等人提出的平衡色谱理论的三个基本假设：l.l.溶质在流动相和固定相之间的分配平衡在整个色谱溶质在流动相和固定相之间的分配平衡在整个色谱过程中都能过程中都能瞬间实现瞬间实现；2.2.传质阻力，传质阻力，纵向扩散对平衡的影响可以忽略纵向扩散对平衡的影响可以忽略；3.3.溶质在色谱柱迁移过程中，在一定时间内，色谱柱溶质在色谱柱迁移过程中，在一定时间内，色谱柱每一小段溶质量的每一小段溶质量的变化符合物料平衡原理变化符合物料平衡原理。 qudtdCCmm)(dxquadtCmxdttCqdxm)(dttCqdxxs)()1 (

24、 流动相固定相 平衡色谱理论物料平衡示意图平衡色谱理论物料平衡示意图 根据物料平衡：根据物料平衡：溶质在两相间的分配或吸附平衡常数：溶质在两相间的分配或吸附平衡常数：dttCadxdttCadxaudtdCCaudtCxsxmmmm)()1 ()()()(msCCK 通过数学处理，通过数学处理，组分的保留值为：组分的保留值为：KLaLqVKuLtRR)1 ()1(1 从平衡色谱理论导出的溶质谱带迁移速率方程及相应的从平衡色谱理论导出的溶质谱带迁移速率方程及相应的保留时间、保留体积表达式，初步揭示了物质在色谱柱的差保留时间、保留体积表达式，初步揭示了物质在色谱柱的差速迁移过程。非线性等温线比较好

25、地解释了不对称色谱峰，速迁移过程。非线性等温线比较好地解释了不对称色谱峰，特别是拖尾峰的成因。特别是拖尾峰的成因。但它未能阐明色谱流出曲线，实际应但它未能阐明色谱流出曲线，实际应用比较有限。用比较有限。 根据平衡色谱理论，当分布等温线呈线性时，溶质的根据平衡色谱理论，当分布等温线呈线性时，溶质的K K为常为常数，谱带迁移速率不变，不产生色谱谱带扩张。若分布等温线数，谱带迁移速率不变，不产生色谱谱带扩张。若分布等温线为非线性，则为非线性，则K K随随C Cm m变化溶质迁移速度亦变化，引起色谱峰扩变化溶质迁移速度亦变化，引起色谱峰扩张，形成不对称色谱峰。张，形成不对称色谱峰。四、塔板理论 (th

26、e plate model) 19411941年，年，MartinMartin和和SyngeSynge阐明了色谱、阐明了色谱、蒸馏和萃取之间的相似性，将色谱柱设想蒸馏和萃取之间的相似性，将色谱柱设想成由许多液液萃取单元或理论塔板组成；成由许多液液萃取单元或理论塔板组成；与精馏相似，色谱分离也是一个分配平衡与精馏相似，色谱分离也是一个分配平衡过程。这就是过程。这就是MartinMartin等人提出的塔板理论等人提出的塔板理论。掌握这一理论的要点是：掌握这一理论的要点是：假设假设二项式分布（概率密度函数）二项式分布（概率密度函数）流出曲线流出曲线实验事实实验事实塔板理论基本假设塔板理论基本假设固定

27、相，固定相，流动相，流动相，H, vm， v3l l 色谱柱由一系列塔板组成色谱柱由一系列塔板组成l l 塔板内，组分在两相间塔板内，组分在两相间迅速达到迅速达到平衡平衡（理想色谱）（理想色谱）l l 组分的组分的分配系数不随它的浓度变分配系数不随它的浓度变化而变化化而变化（线性分布等温线）（线性分布等温线）l l 组分的组分的轴向扩散为零轴向扩散为零l l 流动相的流动是流动相的流动是跳跃过程跳跃过程流动相流动相固定相固定相塔板号 0 1 2 3 r-1 r 塔板理论示意图塔板理论示意图 如果把上述错流萃取过程继续下去，即如果把上述错流萃取过程继续下去，即“平衡平衡转移转移再平衡再平衡再转移

28、再转移。” 0加样加样 0平衡平衡流动流动0 10 1再平衡再平衡流动流动0 1 2 塔板理论示意图塔板理论示意图 第五节第五节 典型制备色谱工艺及应用典型制备色谱工艺及应用一、模拟移动床色谱（一、模拟移动床色谱（simulated moving bed,SMD） SMB SMB 色谱分离技术是色谱分离技术是20 世纪世纪60 年代发展起来的一种年代发展起来的一种现代化分离技术现代化分离技术, ,具有分离能力强具有分离能力强, ,设备体积小设备体积小, ,投资成本投资成本低低, ,便于实现自动控制并特别有利于分离便于实现自动控制并特别有利于分离热敏性及难以分热敏性及难以分离的物系离的物系等优点

29、等优点, ,在制备色谱技术中最适用于进行在制备色谱技术中最适用于进行连续性连续性大规模工业化生产大规模工业化生产。 1.1.模拟移动床色谱的原理模拟移动床色谱的原理 SMBSMB色谱由多根色谱柱（大多为色谱由多根色谱柱（大多为5-125-12根）组成。每根柱子之间用根）组成。每根柱子之间用多位阀多位阀和管和管子连接在一起，每根柱子均设有样品的子连接在一起，每根柱子均设有样品的进出口，并通过多位阀沿着流动相的流进出口，并通过多位阀沿着流动相的流动方向，周期性地改变样品进出口位置，动方向，周期性地改变样品进出口位置，以此以此模拟固定相与流动相之间的逆流移模拟固定相与流动相之间的逆流移动动，实现组分

30、的连续分离，实现组分的连续分离2.2.建立建立SMBSMB色谱分离工艺的步骤色谱分离工艺的步骤（1 1）设置工艺要求）设置工艺要求（2 2）确定溶解度）确定溶解度（3 3）选择固定相）选择固定相（4 4）优化分离条件）优化分离条件（5 5）工艺参数模拟）工艺参数模拟（6 6）中试研究）中试研究3.SMB3.SMB色谱的应用色谱的应用 2020世纪世纪9090年代以来，年代以来，SMBSMB色谱开始用于药物尤其是手性色谱开始用于药物尤其是手性药物的分离，到现在药物的分离，到现在SMBSMB已发展到吨级工艺。已发展到吨级工艺。 SMBSMB色谱技术在生物分离领域也有较广泛的应用。色谱技术在生物分离

31、领域也有较广泛的应用。 SMBSMB色谱正逐步地取代色谱正逐步地取代cyclosporin Acyclosporin A的传统间歇色谱的传统间歇色谱纯化工艺。纯化工艺。 一般地，一般地，SMBSMB色谱技术应用于两组分分离系统。在制色谱技术应用于两组分分离系统。在制药工业中，作为结晶、选择性手性合成等拆分手性药物技药工业中，作为结晶、选择性手性合成等拆分手性药物技术的取代技术。术的取代技术。4.SMB4.SMB色谱技术的优势色谱技术的优势（1 1）SMBSMB色谱是一个连续色谱分离过程色谱是一个连续色谱分离过程（2 2）SMBSMB色谱技术比其他制备色谱的分离效率高色谱技术比其他制备色谱的分离

32、效率高（3 3）SMBSMB色谱技术可以实现旋光异构物分离过程从色谱技术可以实现旋光异构物分离过程从分析型色谱条件快速、可靠的放大至生产规模分析型色谱条件快速、可靠的放大至生产规模（4 4）SMBSMB色谱装置可以适合不同规模的色谱分离过色谱装置可以适合不同规模的色谱分离过程程二、扩展床吸附色谱二、扩展床吸附色谱(expanded bed absorption,EBA)1.EBA1.EBA色谱的基本原理和特点色谱的基本原理和特点 使用特殊设计的扩张床介质在床层中适度膨胀，使用特殊设计的扩张床介质在床层中适度膨胀，介质与介质间的空隙能让发酵液中的不吸附的固介质与介质间的空隙能让发酵液中的不吸附的

33、固体颗粒直接穿过扩张床；同时，特殊设计的体颗粒直接穿过扩张床；同时，特殊设计的扩张扩张床介质床介质能够形成稳定分级的床层结构，在经过优能够形成稳定分级的床层结构，在经过优化的条件下，从混浊的样品中直接吸附目标产品。化的条件下，从混浊的样品中直接吸附目标产品。 nStreamline介质是一系列不同比重、包裹着侍应芯或不锈介质是一系列不同比重、包裹着侍应芯或不锈钢芯，以琼脂糖为基架的介质。钢芯，以琼脂糖为基架的介质。2.EBA2.EBA色谱常用固定相（凝胶）及选择原则色谱常用固定相（凝胶）及选择原则（1 1）常用）常用EBAEBA凝胶凝胶 Streamline系列凝胶、系列凝胶、Cetamic

34、Hypet D系列、系列、 Fractosil系列系列 、Biotran系列系列（2 2）EBAEBA色谱的凝胶选择原则色谱的凝胶选择原则 凝胶介质的颗粒大小和密度能使原材料的生物体和吸附剂颗粒凝胶介质的颗粒大小和密度能使原材料的生物体和吸附剂颗粒间的临界沉积流速产生明显的区别；间的临界沉积流速产生明显的区别；凝胶介质的颗粒大小和你度分布应使凝胶介质的颗粒大小和你度分布应使EBAEBA扩展过量尽量小的固液扩展过量尽量小的固液轴向混合；轴向混合；吸附剂应能耐受培养基中生物体、核酸、脂类物质等的污染；吸附剂应能耐受培养基中生物体、核酸、脂类物质等的污染；连接到吸附剂上的配基应足够稳定；连接到吸附剂

35、上的配基应足够稳定；吸附剂的物质转移能力在吸附剂的物质转移能力在EBAEBA色谱应用中足够有效。色谱应用中足够有效。 3.EBA3.EBA色谱的应用色谱的应用（1 1）细胞匀浆液中提取酶）细胞匀浆液中提取酶（2 2）大规模质粒）大规模质粒DNADNA的提取的提取三、制备型超临界流体色谱三、制备型超临界流体色谱（Pre-SFC)1.1.超临界流体色谱的原理及特点超临界流体色谱的原理及特点（1 1）可以用于多种用途的分离，而无需为柱平衡耗费时间）可以用于多种用途的分离，而无需为柱平衡耗费时间（2 2）收集的馏分中的流动相容易去除）收集的馏分中的流动相容易去除（3 3）流动相回收简便）流动相回收简便（4 4）技术昂贵）技术昂贵（5 5）不能溶解所有物质，需加入改良剂）不能溶解所有物质，需加入改良剂2.Pre-SFC2.Pre-SFC的应用的应用（1 1）分离纯化）分离纯化EPA-EEEPA-EE（2 2）分离极性化合物）分离极性化合物 黄酮类化合物、生物碱混合体系黄酮类化合物、生物碱混合体系