弧菌科及检验课件.ppt

1、弧菌科常规检验弧菌科常规检验弧菌科种类弧菌科种类弧菌属弧菌属气单胞菌属气单胞菌属邻单胞菌属邻单胞菌属发光菌属等发光菌属等弧菌科共同特征弧菌科共同特征革兰阴性菌革兰阴性菌需氧兼性厌氧需氧兼性厌氧营养要求不高营养要求不高氧化酶氧化酶发酵葡萄糖产酸不产气发酵葡萄糖产酸不产气弧菌科三个菌属的鉴别弧菌科三个菌属的鉴别试验试验弧菌属弧菌属气单胞菌气单胞菌属属邻单胞菌邻单胞菌属属甘露醇甘露醇+/-+-鸟氨酸鸟氨酸+/-+精氨酸精氨酸+/-+/-+O/129敏感敏感SRSTCBS生长生长+-嗜盐性嗜盐性+/-霍乱弧菌霍乱弧菌是引起烈性肠道传染病霍乱的病原体是引起烈性肠道传染病霍乱的病原体包括古典生物型和包括古

2、典生物型和ElTor生物型生物型O139是新的流行菌株是新的流行菌株形态染色形态染色革兰阴性革兰阴性弧形或逗点状弧形或逗点状单鞭毛，运动呈单鞭毛，运动呈“穿梭样穿梭样”或或“流星样流星样”无芽孢，无荚膜无芽孢，无荚膜在新鲜粪便中成在新鲜粪便中成“鱼群样鱼群样”排列排列霍乱弧菌霍乱弧菌革兰染色革兰染色鞭毛染色鞭毛染色培养特性培养特性兼性厌氧兼性厌氧营养要求不高营养要求不高耐碱不耐酸，常用耐碱不耐酸，常用pH8.49.2碱性培养碱性培养基基在液体培养基中形成菌膜在液体培养基中形成菌膜菌落圆形、较大、扁平菌落圆形、较大、扁平霍乱弧菌常用培养基霍乱弧菌常用培养基碱性蛋白胨水碱性蛋白胨水碱性琼脂平板碱性

3、琼脂平板庆大霉素琼脂平板（含亚碲酸钾）庆大霉素琼脂平板（含亚碲酸钾）硫代硫酸钠硫代硫酸钠-枸櫞酸盐枸櫞酸盐-胆盐胆盐-蔗糖琼脂平蔗糖琼脂平板（板（TCBS）亚碲酸钾琼脂平板亚碲酸钾琼脂平板生化反应生化反应试验名称试验名称结果结果试验名称试验名称结果结果氧化酶氧化酶+吲哚吲哚+硝酸盐还原硝酸盐还原+葡萄糖葡萄糖+赖氨酸赖氨酸+蔗糖蔗糖+鸟氨酸鸟氨酸+甘露醇甘露醇+精氨酸双水解精氨酸双水解-0、1NaCl+V-Pd7、10 NaCl-明胶液化明胶液化+抗原结构和分型抗原结构和分型O抗原抗原H抗原抗原霍乱弧菌生物型霍乱弧菌生物型O1群霍乱弧菌分为古典生物型和群霍乱弧菌分为古典生物型和ElTor生生物

4、型物型两种生物型具有相同的抗原结构两种生物型具有相同的抗原结构两种生物型多数生物学性状相似两种生物型多数生物学性状相似霍乱弧菌两种生物型的鉴别霍乱弧菌两种生物型的鉴别鉴别试验鉴别试验古典生物型古典生物型ElTor生物型生物型V-P-+羊红细胞溶解羊红细胞溶解-+50U多粘菌素多粘菌素SR鸡红细胞凝集鸡红细胞凝集-+组噬菌体裂解组噬菌体裂解+-组噬菌体裂解组噬菌体裂解-+霍乱弧菌分群、型霍乱弧菌分群、型O抗原是霍乱弧菌分群和型的基础抗原是霍乱弧菌分群和型的基础根据根据O抗原不同分为抗原不同分为139个血清群个血清群O1群包括古典生物型和群包括古典生物型和ElTor生物型生物型其他群称为非其他群称

5、为非O1群（非凝集弧菌）群（非凝集弧菌）O1群血清型（见下表）群血清型（见下表）血清型血清型A抗原抗原B抗原抗原C抗原抗原小川型（小川型（AB）+-稻叶型（稻叶型（AC）+-+彦岛型（彦岛型（ABC）+抵抗力与变异抵抗力与变异ElTor型抵抗力较古典型强，型抵抗力较古典型强，在水中存活时间长在水中存活时间长对酸性物质敏感对酸性物质敏感对庆大霉素耐受对庆大霉素耐受多次传代可失去典型形态而成为杆状多次传代可失去典型形态而成为杆状临床意义临床意义致病物质：霍乱肠毒素，导致小肠上皮致病物质：霍乱肠毒素，导致小肠上皮细胞分泌功能亢进，分泌大量肠液。细胞分泌功能亢进，分泌大量肠液。所致疾病：所致疾病：经经

6、肠道传染肠道传染，引起烈性肠道传染病，引起烈性肠道传染病霍乱，为甲类传染病。霍乱，为甲类传染病。典型病人粪便呈典型病人粪便呈“米泔水米泔水”样样病后可获得牢固免疫，以病后可获得牢固免疫，以SIgA为主。为主。我国霍乱流行菌株以我国霍乱流行菌株以ElTor小川型为主。小川型为主。作用机制示意图作用机制示意图微生物检验微生物检验标本采集标本采集发病早期采集标本发病早期采集标本以以“米泔水米泔水”样便为主，及时送检样便为主，及时送检卡布培养基保存卡布培养基保存严密包装，专人送检严密包装，专人送检检验程序检验程序标本标本 增菌培养增菌培养碱性蛋白胨水碱性蛋白胨水 分离培养（分离培养（TCBS、碱性平板

7、）、碱性平板）生化鉴定分型生化鉴定分型血清学鉴定血清学鉴定确诊报告确诊报告初步报告初步报告快速诊断快速诊断 直接涂片直接涂片 动力、制动试验动力、制动试验检验方法检验方法显微镜检查显微镜检查涂片染色：标本直接涂片革兰染色，注涂片染色：标本直接涂片革兰染色，注意形态、排列意形态、排列动力观察：压滴法或暗视野镜检，注意动力观察：压滴法或暗视野镜检，注意运动方式运动方式制动试验：制动试验：O1诊断血清与菌体结合，动诊断血清与菌体结合，动力消失力消失分离培养分离培养标本接种碱性蛋白胨水增菌标本接种碱性蛋白胨水增菌68小时，小时，转种转种TCBS或庆大霉素琼脂，或庆大霉素琼脂， TCBS：出现黄色菌落：

8、出现黄色菌落庆大霉素琼脂：出现中心灰褐色的菌落庆大霉素琼脂：出现中心灰褐色的菌落鉴定鉴定生化反应：粘丝试验、霍乱红反应生化反应：粘丝试验、霍乱红反应确定血清群：确定血清群：O1群诊断血清与可疑菌落作玻群诊断血清与可疑菌落作玻片凝集，以确定是否为片凝集，以确定是否为O1群群确定血清型：与分型诊断血清作玻片凝集，以确定血清型：与分型诊断血清作玻片凝集，以确定血清型别确定血清型别 确定生物型：确定生物型： 第第组噬菌体裂解试验组噬菌体裂解试验 多粘菌素多粘菌素B敏感试验敏感试验 鸡红细胞凝集试验鸡红细胞凝集试验 溶血试验溶血试验副溶血性弧菌副溶血性弧菌生物学性状生物学性状革兰阴性杆菌，或微弯，单端鞭

9、毛，无芽孢，革兰阴性杆菌，或微弯，单端鞭毛，无芽孢，无荚膜无荚膜营养要求营养要求 不高，嗜盐性，最适盐浓度不高，嗜盐性，最适盐浓度3.5NaCl，无盐培养基不生长，无盐培养基不生长TCBS：形成不发酵蔗糖的绿色菌落：形成不发酵蔗糖的绿色菌落神奈川现象：致病性副溶血性弧菌能溶解神奈川现象：致病性副溶血性弧菌能溶解人或兔红细胞，不溶解马红细胞人或兔红细胞，不溶解马红细胞副溶血性弧菌副溶血性弧菌临床意义临床意义致病物质：溶血素（耐热直接溶血素和致病物质：溶血素（耐热直接溶血素和耐热相关溶血素）耐热相关溶血素）所致疾病：所致疾病：食入副溶血性弧菌污染的盐腌食品，引食入副溶血性弧菌污染的盐腌食品，引起食

10、物中毒起食物中毒气单胞菌属气单胞菌属形态染色：形态染色： 革兰阴性杆菌，或球杆状、丝状，极端革兰阴性杆菌，或球杆状、丝状，极端鞭毛，无芽孢鞭毛，无芽孢生长条件：生长条件： 兼性厌氧；营养要求不高兼性厌氧；营养要求不高 生长温度较宽，生长温度较宽，045 嗜冷菌嗜冷菌37以下生长以下生长 嗜温菌嗜温菌1042生长生长气单胞菌属气单胞菌属生长现象生长现象 TCBS上不生长上不生长 血平板：灰白、光滑、凸起菌落血平板：灰白、光滑、凸起菌落 肠道选择平板：形成不发酵乳糖菌落肠道选择平板：形成不发酵乳糖菌落生化反应生化反应氧化酶、触酶氧化酶、触酶 发酵葡萄糖产酸产气发酵葡萄糖产酸产气 6.5NaCl不生

11、长不生长 O129不敏感不敏感多数菌株产多数菌株产-内酰胺酶，对青霉素耐药内酰胺酶，对青霉素耐药气单胞菌属气单胞菌属临床意义临床意义致病物质：溶血毒素、细胞毒素致病物质：溶血毒素、细胞毒素所致疾病：所致疾病： 肠道感染：是夏季腹泻常见病原菌肠道感染：是夏季腹泻常见病原菌 肠外感染：败血症、伤口感染等肠外感染：败血症、伤口感染等多数菌株产多数菌株产-内酰胺酶，对青霉素耐药内酰胺酶，对青霉素耐药检验程序检验程序标本标本 增菌增菌 分离培养分离培养（血平板、（血平板、Mac）全面生化反应全面生化反应可疑菌落可疑菌落肠毒素测定肠毒素测定初步生化反应初步生化反应 涂片涂片染色镜检染色镜检血标本血标本氧化

12、酶氧化酶TCBS生长生长O/129耐盐试验耐盐试验鉴定试验鉴定试验与肠道杆菌、非发酵菌鉴别与肠道杆菌、非发酵菌鉴别与邻单胞菌属和弧菌属鉴别与邻单胞菌属和弧菌属鉴别气单胞菌属种间鉴别气单胞菌属种间鉴别肠道杆菌、非发酵菌、弧菌科鉴别肠道杆菌、非发酵菌、弧菌科鉴别鉴定试验鉴定试验肠杆菌科肠杆菌科非发酵菌非发酵菌弧菌科弧菌科氧化酶氧化酶葡萄糖氧化葡萄糖氧化/发酵（发酵（O/F）FOF鞭毛鞭毛周鞭毛周鞭毛单、丛、周单、丛、周单、丛单、丛鉴定依据鉴定依据革兰阴性杆菌，丛鞭毛革兰阴性杆菌，丛鞭毛肠道选择平板上无色透明菌落肠道选择平板上无色透明菌落氧化酶、葡萄糖发酵氧化酶、葡萄糖发酵O/129：RTCBS：6

13、.5NaCl：邻单胞菌属邻单胞菌属主要性状主要性状只有一个菌种：类志贺邻单胞菌只有一个菌种：类志贺邻单胞菌革兰阴性杆菌，单鞭毛或丛鞭毛，无芽孢，无革兰阴性杆菌，单鞭毛或丛鞭毛，无芽孢，无荚膜荚膜兼性厌氧，营养要求不高兼性厌氧，营养要求不高在在SS平板形成不发酵乳糖菌落平板形成不发酵乳糖菌落氧化酶，葡萄糖发酵氧化酶，葡萄糖发酵O/129：STCBS：不生长：不生长6.5NaCl：不生长：不生长赖氨酸、鸟氨酸、精氨酸双水解均赖氨酸、鸟氨酸、精氨酸双水解均多数菌株产多数菌株产-内酰胺酶，对青霉素耐药内酰胺酶，对青霉素耐药邻单胞菌属邻单胞菌属临床意义临床意义腹泻、食物中毒，多见于夏季腹泻、食物中毒，多

14、见于夏季败血症、脑膜炎等，多见于免疫力低下败血症、脑膜炎等，多见于免疫力低下者，感染率低，但死亡率高。者，感染率低，但死亡率高。邻单胞菌属邻单胞菌属检验程序检验程序标本标本 增菌增菌 分离培养分离培养（血平板、（血平板、Mac）全面生化反应全面生化反应可疑菌落可疑菌落初步生化反应初步生化反应 涂片涂片染色镜检染色镜检血标本血标本氧化酶氧化酶TCBS生长生长O/129耐盐试验耐盐试验邻单胞菌属邻单胞菌属鉴定鉴定与志贺菌属鉴别：氧化酶、动力、血清与志贺菌属鉴别：氧化酶、动力、血清学学与气单胞菌属鉴别：与气单胞菌属鉴别：O/129，肌醇试验，肌醇试验与弧菌属鉴别：与弧菌属鉴别：TCBS、6.5NaCl生长生长试验试验