流式应用研究进展课件.pptx

1、1流式细胞术流式细胞术(flow cytometry, FCM)(flow cytometry, FCM) 是用流式细胞仪测量液相中悬浮细胞或微是用流式细胞仪测量液相中悬浮细胞或微粒的一种现代分析粒的一种现代分析新新技术技术, ,能快速、精确的能快速、精确的对单个细胞理化特性进行多参数定量分析对单个细胞理化特性进行多参数定量分析和分选和分选。它是众多不同学术背景、不同科。它是众多不同学术背景、不同科技领域相结合的结晶。它是物理学、生物技领域相结合的结晶。它是物理学、生物学、医学等综合运用的产物。学、医学等综合运用的产物。2 流式细胞术流式细胞术最大的特点最大的特点是能在保持细是能在保持细胞及细

2、胞器或微粒的结构及功能不被破坏胞及细胞器或微粒的结构及功能不被破坏的状态下，通过荧光探针的协助，从分子的状态下，通过荧光探针的协助，从分子水平上获取多种信号对细胞进行定量分析水平上获取多种信号对细胞进行定量分析或纯化分选。或纯化分选。 细胞不被破坏，测量快速、大量、准确、灵敏、定量细胞不被破坏，测量快速、大量、准确、灵敏、定量流式细胞术的特点流式细胞术的特点3 从流式细胞术的发明、发展直到今天在各个从流式细胞术的发明、发展直到今天在各个领域应用的拓展领域应用的拓展,每一步都是诸如电子技术、流体每一步都是诸如电子技术、流体力学、计算机科学、激光技术、生物学、生物技力学、计算机科学、激光技术、生物

3、学、生物技术、高等数学、临床医学、分子生物学、有机化术、高等数学、临床医学、分子生物学、有机化学和生物物理学等学科知识综合运用的结晶。现学和生物物理学等学科知识综合运用的结晶。现代流式细胞术更是由于它结合单克隆抗体技术、代流式细胞术更是由于它结合单克隆抗体技术、定量细胞化学技术和定量荧光细胞化学定量细胞化学技术和定量荧光细胞化学,使其在生使其在生物学、临床医学、药物学、材料学等众多研究领物学、临床医学、药物学、材料学等众多研究领域中的应用有更加突飞猛进的发展。域中的应用有更加突飞猛进的发展。4 流式细胞仪流式细胞仪是测量染色细胞标记物荧是测量染色细胞标记物荧光强度的细胞分析仪，是在单个细胞分光

4、强度的细胞分析仪，是在单个细胞分析和分选基础上发展起来的对细胞的物析和分选基础上发展起来的对细胞的物理或化学性质（如大小、内部结构、理或化学性质（如大小、内部结构、DNADNA、RNARNA、蛋白质、抗原等）进行快速、蛋白质、抗原等）进行快速测量并可分类收集。测量并可分类收集。5流式细胞术流式细胞术6细胞组成细胞组成细胞功能细胞功能大小大小细胞表面细胞表面/ /胞浆胞浆/ /核核-特异性抗原特异性抗原粒度粒度细胞活性细胞活性DNA, RNADNA, RNA含量含量胞内细胞因子胞内细胞因子蛋白质含量蛋白质含量激素结合位点激素结合位点钙离子钙离子,PH,PH值值, ,膜电位膜电位酶活性酶活性流式细

5、胞仪常检测的细胞特性流式细胞仪常检测的细胞特性7采用采用激光激光作为激发光源，保证其具有更好作为激发光源，保证其具有更好的单色性与激发效率；的单色性与激发效率；利用利用荧光染料荧光染料与与单克隆抗体技术单克隆抗体技术结合的标结合的标记技术，保证检测的灵敏度和特异性；记技术，保证检测的灵敏度和特异性；用计算机系统对流动的单细胞悬液中用计算机系统对流动的单细胞悬液中单个单个细胞细胞的的多个参数信号多个参数信号进行数据处理分析，保进行数据处理分析，保证了检测速度与统计分析精确性。证了检测速度与统计分析精确性。 工作原理工作原理 8流式细胞术流式细胞术流式细胞术流式细胞术的基本原理的基本原理910前向

6、散射光（前向散射光（forward scatter, FSCforward scatter, FSC）：激光束照射细胞时，：激光束照射细胞时，光以相对轴较小角度光以相对轴较小角度(0.5(0.51010) )向前方散射的讯号用于向前方散射的讯号用于检测细胞等粒子的表面属性，信号强弱与细胞体积大小成正检测细胞等粒子的表面属性，信号强弱与细胞体积大小成正比比。11侧向散射光（侧向散射光（side scatter, SSCside scatter, SSC）：激光束照射细胞时，光激光束照射细胞时，光以以9090角散射的讯号，用于检测细胞内部结构属性。角散射的讯号，用于检测细胞内部结构属性。12 测得

7、的测得的FSCFSC与与SSCSSC信号通过计算机处理，信号通过计算机处理，可得到可得到FS-SSFS-SS图，由图，由此可仅用散射光信号此可仅用散射光信号对对未染色的活细胞未染色的活细胞进进行分析或分选。行分析或分选。 此为血细胞分类此为血细胞分类的基本原理，但不能的基本原理，但不能分析表面分子。分析表面分子。光散射测量最有效用途：从非均一群体中鉴别出某些亚群光散射测量最有效用途：从非均一群体中鉴别出某些亚群 13 荧光信号由被检细胞上标记的荧光信号由被检细胞上标记的特异性荧光染料特异性荧光染料受激受激发后产生，发射的荧光波长与激发光波长不同。发后产生，发射的荧光波长与激发光波长不同。 每种

8、荧光染料会产生每种荧光染料会产生特定波长的荧光和颜色特定波长的荧光和颜色，通过，通过波长选择通透性滤片，可将不同波长的散射光和荧波长选择通透性滤片，可将不同波长的散射光和荧光信号区分开，送入不同的光电倍增管。光信号区分开，送入不同的光电倍增管。 选择不同的选择不同的单抗及染料单抗及染料就可同时测定一个细胞上的就可同时测定一个细胞上的多个不同特征。多个不同特征。 线性放大器和对数放大器线性放大器和对数放大器荧光测量荧光测量14荧光染料的特性荧光染料的特性激发波长激发波长(EXCITING)(EXCITING)发射波长发射波长(EMISSION)(EMISSION)15FSCFSC：反映颗粒的大小

9、：反映颗粒的大小SSCSSC：反映颗粒的内部结构复杂程度：反映颗粒的内部结构复杂程度FLFL：反映颗粒被染上的荧光数量多少：反映颗粒被染上的荧光数量多少参参 数数 16D1 CD4+/CD3-D2 CD4+/CD3+D3 CD4- /CD3-D4 CD4- /CD3+如十字门分析时，起如十字门分析时，起就可以由四个区域构就可以由四个区域构成，即成，即G=D1+D2+D3+D4。 17免疫细胞的检测 免疫细胞的分离流式细胞术18免疫细胞的检测19免疫细胞的检测 免疫细胞的计数免疫细胞的计数T T细胞及其亚群细胞及其亚群ThTh细胞亚群细胞亚群B B细胞细胞NKNK细胞细胞20 Cell surf

10、ace markers Intracellular cytokines Sorting to isolate cell populations流式细胞仪的基本应用流式细胞仪的基本应用21流式细胞术发展趋势流式细胞术发展趋势: : 流式细胞仪从单纯大型仪器发展为适应各种实际应流式细胞仪从单纯大型仪器发展为适应各种实际应用的便携式、台式、分辨率、高质量分选的研究型用的便携式、台式、分辨率、高质量分选的研究型流式细胞仪流式细胞仪; ; 对流式细胞术检测荧光参数对流式细胞术检测荧光参数, ,从采用荧光单色、双从采用荧光单色、双色分析发展为多色分析色分析发展为多色分析, ,目前最多可同时检测目前最多可同

11、时检测15 15 种种荧光信号荧光信号; ; 从检测参数的相对定量发展为绝对定量从检测参数的相对定量发展为绝对定量; ; 从检测参数的手动人工分析发展为利用计算机软件从检测参数的手动人工分析发展为利用计算机软件的自动分析的自动分析; ; 所采用的荧光试剂所采用的荧光试剂, ,从非配套试剂发展为配套的试从非配套试剂发展为配套的试剂盒试剂剂盒试剂222425 流式细胞术目前已广泛地被应用于免疫流式细胞术目前已广泛地被应用于免疫学基础研究和逐步进入临床应用各方面，用学基础研究和逐步进入临床应用各方面，用流式细胞仪对细胞表面的抗原成分进行标记流式细胞仪对细胞表面的抗原成分进行标记分析，可区别多种细胞的

12、特性，为细胞免疫分析，可区别多种细胞的特性，为细胞免疫的研究增加了有效的手段和帮助。的研究增加了有效的手段和帮助。 26流式细胞仪的临床应用流式细胞仪的临床应用= HIVHIV免疫分型，免疫分型，CD4CD4绝对计数绝对计数= 淋巴细胞亚群分析淋巴细胞亚群分析= 白血病和淋巴瘤的免疫分型白血病和淋巴瘤的免疫分型= 肿瘤的细胞周期和倍体分析肿瘤的细胞周期和倍体分析= 网织红细胞计数网织红细胞计数= 细胞移植的免疫状态监测细胞移植的免疫状态监测= 干细胞计数干细胞计数= 阵发性血红蛋白尿阵发性血红蛋白尿= HLA-B27HLA-B27检查检查= 血小板功能及相关疾病血小板功能及相关疾病27T T淋

13、巴细胞及其亚群分析淋巴细胞及其亚群分析Th(CD3+CD4+CD8-T); Tc(CD3+CD4-CD8+T)B淋巴细胞及其亚群分析淋巴细胞及其亚群分析B1(CD19+CD5+):产生产生IgM型自身抗体型自身抗体, 参与免疫调节、参与免疫调节、与自身免疫病的发生有关与自身免疫病的发生有关B2(CD19+CD5-):受外来抗原刺激受外来抗原刺激, 产生高亲和性特异性产生高亲和性特异性抗体抗体NK细胞分析细胞分析NK(CD3-CD16+CD56+)一、淋巴细胞及其亚群的分析一、淋巴细胞及其亚群的分析28 细胞介导细胞毒性试验细胞介导细胞毒性试验( (死细胞与死细胞与活细胞比例活细胞比例) ) 细

14、胞内细胞因子测定细胞内细胞因子测定二、淋巴细胞功能分析二、淋巴细胞功能分析29三、淋巴造血系统及白血病免疫分型三、淋巴造血系统及白血病免疫分型对淋巴瘤和白血病进行多色免疫分型对淋巴瘤和白血病进行多色免疫分型用于选择化疗方案、判断预后及检出用于选择化疗方案、判断预后及检出微小残留病变微小残留病变30CD4+Th细胞、细胞、CD4+/CD8+比例比例MDR(+)表示对化疗药物耐药表示对化疗药物耐药四、肿瘤耐药基因分析四、肿瘤耐药基因分析五、五、AIDS病检测中的应用病检测中的应用31HLA-B27可出现在可出现在58%97%的强直的强直性脊椎炎性脊椎炎(As) 患者患者六、自身免疫病相关六、自身免

15、疫病相关HLA抗原分析抗原分析32流式细胞仪的科研应用流式细胞仪的科研应用 免疫功能研究（淋巴细胞亚群分析、细胞活化、细胞因子）免疫功能研究（淋巴细胞亚群分析、细胞活化、细胞因子） 磷酸化蛋白的检测磷酸化蛋白的检测 干细胞研究干细胞研究/树突细胞研究树突细胞研究 细胞功能研究（细胞内细胞功能研究（细胞内PH值、细胞内钙离子流、细胞膜电位、值、细胞内钙离子流、细胞膜电位、线粒体膜电位）线粒体膜电位） 血小板分析（心脑血管疾病）血小板分析（心脑血管疾病） 肿瘤相关基因表达的研究肿瘤相关基因表达的研究 抗肿瘤药物作用机制以及多药耐药性的研究抗肿瘤药物作用机制以及多药耐药性的研究 细胞周期和倍体分析细

16、胞周期和倍体分析 细胞凋亡及凋亡相关蛋白细胞凋亡及凋亡相关蛋白 转染转染&基因沉默效率检测基因沉默效率检测 细胞分选、分选后培养及相关生物学研究细胞分选、分选后培养及相关生物学研究33近期流式应用研究进展近期流式应用研究进展v 细胞因子检测细胞因子检测 v 树突状细胞树突状细胞v 调节性调节性T T细胞细胞细胞因子检测细胞因子检测35细胞活化细胞活化 细胞数目增殖细胞数目增殖 细胞表面表达细胞表面表达活化标记活化标记 分泌细胞因子分泌细胞因子36细胞因子细胞因子病毒、细菌病毒、细菌寄生虫、过敏源寄生虫、过敏源37细胞因子相关的主要研究领域细胞因子相关的主要研究领域 肿瘤肿瘤 肾炎肾炎 感染感染

17、（SARS/禽流禽流感）感） 自身免疫病自身免疫病 超敏反应超敏反应 移植排斥反应移植排斥反应 免疫缺陷病免疫缺陷病 血液疾病血液疾病 基于细胞水平的研究基于细胞水平的研究 胞内因子胞内因子 胞外因子胞外因子38胞内因子测定胞内因子测定 未活化的细胞所分泌的细胞因子很少，很难在流式细胞仪未活化的细胞所分泌的细胞因子很少，很难在流式细胞仪上检测。上检测。需用需用刺激剂刺激剂PMA+IonomycinPMA+Ionomycin等激活细胞分泌细胞因子，等激活细胞分泌细胞因子，为了阻止产生的细胞因子分泌到细胞外，需要同时加入为了阻止产生的细胞因子分泌到细胞外，需要同时加入BrefedlinABrefe

18、dlinA或或MonensinMonensin等共孵育细胞，使等共孵育细胞，使胞内细胞因子蓄胞内细胞因子蓄积积。胞内染色前需用多聚甲醛胞内染色前需用多聚甲醛固定固定，保留细胞形态完整性和胞，保留细胞形态完整性和胞内物质抗原性，随后用皂角苷（内物质抗原性，随后用皂角苷（破膜剂破膜剂）增加细胞膜通透）增加细胞膜通透性，使细胞因子特异性抗体渗入到胞内，达到流式细胞仪性，使细胞因子特异性抗体渗入到胞内，达到流式细胞仪检测目的。检测目的。树突状细胞树突状细胞（dendritic cell，DC）40DC的生物学特点的生物学特点 DCDC因其具有膜样或树突样突起而得名因其具有膜样或树突样突起而得名 DCD

19、C包括郎罕氏细胞、间隙包括郎罕氏细胞、间隙DCDC、滤泡、滤泡DCDC（FDCFDC）、并指）、并指DCDC（IDCIDC）等等。其在体内含量甚微，仅占外周血单个核细胞）等等。其在体内含量甚微，仅占外周血单个核细胞（PBMCPBMC）的）的1 1以下，以下， 但分布非常广泛，但分布非常广泛， 在血液、肝、在血液、肝、脾、淋巴结及非免疫器官组织中都有存在。脾、淋巴结及非免疫器官组织中都有存在。41DC的生物学功能的生物学功能 是一类抗原呈递细胞（是一类抗原呈递细胞（APCAPC），将抗原递呈给特殊），将抗原递呈给特殊的初始的初始T T淋巴细胞，引发初次免疫反应，在诱导免淋巴细胞，引发初次免疫反应

20、，在诱导免疫耐受和调控免疫活性方面扮演着重要角色，是疫耐受和调控免疫活性方面扮演着重要角色，是机体内惟一能激活初始机体内惟一能激活初始T T细胞的细胞的APCAPC。 通过激活巨噬细胞，通过激活巨噬细胞，NKNK细胞和嗜酸性粒细胞引发细胞和嗜酸性粒细胞引发机体对入侵感染因素的反应，连接天然免疫系统机体对入侵感染因素的反应，连接天然免疫系统和适应性免疫系统和适应性免疫系统 受细胞因子调控的同时受细胞因子调控的同时, , 本身也可产生多种细胞本身也可产生多种细胞因子因子, , 如如IFN-, IL - 12, GM - CSF, IL - 1, IFN-, IL - 12, GM - CSF, I

21、L - 1, IL - 6IL - 6和和TNF- TNF- 等等42DC的表面标志的表面标志 人人DC的主要特征性表面标志为的主要特征性表面标志为CD1a和和CD83，CD83还是还是DC充分成熟的标志。充分成熟的标志。 成熟成熟DC高表达高表达CD80（B7-1），），CD86，CD40和和CD54等共刺激分子，而未成熟等共刺激分子，而未成熟DC不表达或低表不表达或低表达这些分子达这些分子 未成熟未成熟DC具有强大的内吞作用，并高表达大多具有强大的内吞作用，并高表达大多数趋化因子受体数趋化因子受体 43DC的表面标志的表面标志 所有所有DC共同的突出特点是能高水平表达共同的突出特点是能高水

22、平表达MHC-II类分子类分子如如HLA-DR。DC成熟过程突出的标志是成熟过程突出的标志是MHC-II类分子类分子的重分布，从主要在细胞浆内转变为主要在细胞膜表面的重分布，从主要在细胞浆内转变为主要在细胞膜表面44体外人体外人DC制备制备 前体前体DC来源来源 外周血单个核细胞外周血单个核细胞/单核细胞单核细胞 密度梯度离心密度梯度离心 BD IMag Cell Separation System 骨髓、新生儿脐带血的骨髓、新生儿脐带血的CD34+细胞细胞 在细胞因子（如在细胞因子（如GM-CSF，IL-4和TNF-）的作用下诱导）的作用下诱导DC体外分化体外分化45DC体外诱导分化体外诱导

23、分化46树突状细胞分泌的细胞因子树突状细胞分泌的细胞因子DC分泌的细胞分泌的细胞因子有很多种，因子有很多种，但各种细胞因子但各种细胞因子与与DC功能的相功能的相关性尚在探讨中关性尚在探讨中47DC临床和科研应用临床和科研应用1 肿瘤发生发展机制的探讨肿瘤发生发展机制的探讨肿瘤通过分泌免疫抑制性细胞因子阻止肿瘤通过分泌免疫抑制性细胞因子阻止DC成熟，并降低成熟，并降低抗原递呈能力导致机体的免疫耐受，使肿瘤细胞逃避宿抗原递呈能力导致机体的免疫耐受，使肿瘤细胞逃避宿主免疫反应。主免疫反应。 DC瘤苗研发瘤苗研发将经肿瘤抗原在体外冲击致敏的将经肿瘤抗原在体外冲击致敏的DC回输体内，再与自体回输体内，再

24、与自体T细胞共育，有利于打破免疫耐受，有效诱导细胞共育，有利于打破免疫耐受，有效诱导CTL介导介导的特异性抗肿瘤免疫应答。的特异性抗肿瘤免疫应答。已用于黑色素瘤，前列腺癌，肾癌，多发性骨髓瘤，淋已用于黑色素瘤，前列腺癌，肾癌，多发性骨髓瘤，淋巴瘤，肝癌，妇科肿瘤，恶性脑神经胶质瘤等的临床治巴瘤，肝癌，妇科肿瘤，恶性脑神经胶质瘤等的临床治疗实验疗实验48DC临床和科研应用临床和科研应用2 病毒感染病毒感染背景：背景：DCs的功能缺陷的功能缺陷也也是病毒逃避宿主免疫反应的重是病毒逃避宿主免疫反应的重要机要机制，制，很多病毒的持续性感染很多病毒的持续性感染（如（如HBV，HIV）均伴均伴有不同程度的

25、有不同程度的DCs数量数量减少，表型不成熟（如共刺激分减少，表型不成熟（如共刺激分子表达水平下降）及子表达水平下降）及功能的下降功能的下降，造成感染的免疫耐受，造成感染的免疫耐受，使感染慢性化使感染慢性化与对照组和与对照组和HBV携带者相比，慢性乙型肝炎患者外周血携带者相比，慢性乙型肝炎患者外周血PDC单位数量和功能下降，且单位数量和功能下降，且PDC数量随病程进展而进数量随病程进展而进行性下降行性下降49DC与与HIVThe Journal of Immunology, 2002, 168: 47964801.PDCMDC-50DC临床和科研应用临床和科研应用3 移植物抗宿主反应移植物抗宿主

26、反应抑制受者体内抑制受者体内DC的成熟，使的成熟，使DC表面的共刺激分子表达下表面的共刺激分子表达下调，抗原呈递能力减弱，从而有助于诱导同种移植免疫耐调，抗原呈递能力减弱，从而有助于诱导同种移植免疫耐受，延长移植器官存活时间。受，延长移植器官存活时间。 过敏和超敏反应过敏和超敏反应肺肺DC&哮喘：皮肤、肠道和气道中的哮喘：皮肤、肠道和气道中的MDC为未成熟形式，为未成熟形式，捕捉外来抗原后，携带抗原由外周血迁移到肺，捕捉外来抗原后，携带抗原由外周血迁移到肺， 12h内即内即可在肺纵隔淋巴结的可在肺纵隔淋巴结的T细胞区出现肺细胞区出现肺DC，因此在吸入抗原，因此在吸入抗原刺激刺激624h后后MD

27、C在血液中的数量迅速下降，诱导在血液中的数量迅速下降，诱导Th2分分化（在儿童和特应性成人个体中肺呼吸道对吸入抗原的反化（在儿童和特应性成人个体中肺呼吸道对吸入抗原的反应倾向于应倾向于Th2） 自身免疫性疾病自身免疫性疾病调节性调节性T细胞细胞52 调节性调节性T细胞（细胞（Treg）是）是一一类具有独特免疫调节功类具有独特免疫调节功能的能的T细胞亚群细胞亚群，可分为可分为：天然存在的天然存在的Treg诱导产生的诱导产生的Treg调节性调节性T分类及生物学特征分类及生物学特征53天然存在的天然存在的Treg表型为表型为CD4+CD25int/hiFoxP3+，1995年由年由Sakaguchi

28、等首次报道，是研究最多的调节性等首次报道，是研究最多的调节性T细胞，是由胸腺细胞，是由胸腺T细胞在胸腺内经自身抗原刺激后、经阳性选择自然细胞在胸腺内经自身抗原刺激后、经阳性选择自然分化发育形成的，在小鼠和正常人的外周血及脾脏分化发育形成的，在小鼠和正常人的外周血及脾脏组织中天然存在的组织中天然存在的CD4+CD25+Treg约占约占CD4+T细胞细胞群体的群体的5-10%；调节性调节性T分类及生物学特征分类及生物学特征54天然存在的天然存在的TregCD4+CD25+Treg一定要经一定要经TCR介导信号的刺激才能介导信号的刺激才能活化，活化后主要通过接触抑制方式、粒酶活化，活化后主要通过接触

29、抑制方式、粒酶B依赖性依赖性的细胞杀伤作用抑制的细胞杀伤作用抑制CD4+及及CD8+T细胞的活化和增细胞的活化和增殖，从而抑制免疫反应殖，从而抑制免疫反应CD25是是IL-2 R的的链链FOXP3（Forkhead box protein P3）是天然）是天然CD4+CD25+Treg细胞相对特异性的蛋白标记，表达细胞相对特异性的蛋白标记，表达于胞内，该转录因子可调控于胞内，该转录因子可调控Treg细胞发育并维持其细胞发育并维持其免疫抑制功能。免疫抑制功能。调节性调节性T分类及生物学特征分类及生物学特征55诱导产生的诱导产生的TregTr1和和Th3是由初始是由初始T淋巴细胞在外周淋巴组织中接

30、淋巴细胞在外周淋巴组织中接触特异性抗原或在免疫抑制因子的作用下活化而形触特异性抗原或在免疫抑制因子的作用下活化而形成的，表型均为成的，表型均为CD4+CD25-FoxP3-，Tr1和和Th3分别分别通过分泌抑制性的细胞因子通过分泌抑制性的细胞因子IL-10和和TGF-下调免下调免疫反应，在体外疫反应，在体外CD4+CD25-FoxP3-细胞在细胞在TGF-刺刺激下也可转化为激下也可转化为 CD4+CD25+FoxP3+ 细胞细胞CD8+调节性调节性T细胞：研究尚不充分细胞：研究尚不充分调节性调节性T分类及生物学特征分类及生物学特征256天然天然Treg的纯化和体外克隆扩增的纯化和体外克隆扩增

31、体外分离的体外分离的CD4+CD25+Treg可来源于淋巴结、脾脏、外周可来源于淋巴结、脾脏、外周血及脐血，通过免疫磁珠或荧光标记流式分选可获得血及脐血，通过免疫磁珠或荧光标记流式分选可获得:BD IMagTM CD4 T Lymphocyte Enrichment SetBD IMagTM Regulatory T Lymphocyte Separation SetCD4/CD25/CD127抗体组合，对抗体组合，对CD4+CD25int-hiCD127lo组组分（高保真分（高保真Treg）进行流式分选）进行流式分选/分析分析 CD4+CD25+Treg在体外经在体外经TCR与抗原结与抗原结合，可给予抗合，可给予抗CD3和抗和抗CD28单克隆抗体单克隆抗体刺激而活化增殖，实验证明体外大量活刺激而活化增殖，实验证明体外大量活化扩增的化扩增的CD4+CD25+Treg仍具有免疫抑仍具有免疫抑制功能。制功能。57一个人的爱琴海Thanks!Thanks!