多肿瘤标志物蛋白芯片检测课件.ppt

1、多肿瘤标志物蛋白芯片检测多肿瘤标志物蛋白芯片检测 肿瘤标志物的一般概念肿瘤标志物的一般概念 v肿瘤标志物（Tumor marker）是19781978年在美国国立癌症研究所召开的人类肿瘤免疫诊断会议上，由Herbeman首次提出此概念后,在英国第七次肿瘤发生生物学和医学会议上被确认并开始引用。肿瘤标志物有几个重要的突出时期：v 1848年Herry Beuce Jones 在多发性骨髓瘤患者尿中发现一种特殊蛋白，后来被称作为BJ蛋白，用于多发性骨髓瘤的诊断指标。v 1964年TaTarinov 从肝细胞癌患者血清中发现甲胎蛋白（AFP）。v 1965年Goldt 和Freedman 从结肠癌患

2、者组织中发现了癌胚抗原（CEA），从而建立了临床上能广泛应用的肿瘤标志物。v 1975年Kohler和Mishop 成功创建了淋巴细胞杂交瘤技术，人们利用此生物高技术制备了许多单克隆抗体，并建立了一系列灵敏度、特异性较强的肿瘤标志物。v 1976年Bishop 发现了鸡正常细胞中含有某些原癌基因，而这些基因与肿瘤的发生有关，称作为肿瘤基因标志物。（为此获得1989年度诺贝尔医学奖）。使肿瘤标志物的研究从分子水平提高到基因水平，为肿瘤的诊断和治疗定了基础。 脂类和氨基酸衍生物； 蛋白质（肽类激素和酶）； 低分子量复合物； 细胞受体和细胞标志物； 内源性代谢产物； 肿瘤前期静止状态的基因产物（异位

3、激素、癌胚蛋白、特殊酶） 理想的肿瘤标志物应对某种肿瘤具有较高的特异性、能在影像学方法发现占位性病变前检出肿瘤，能较精确的反应肿瘤的发展进程并能适用于临床，又可用较简便的方法快速检测。用于临床诊断的肿瘤标志物有许多种，一般分为： 癌胚抗原类； 酶类； 激素类； 糖蛋白类； 癌基因类； 细胞表面肿瘤抗原类细胞肿瘤标志物细胞肿瘤标志物血清肿瘤标志物血清肿瘤标志物v 肿瘤是在环境和遗传因素共同作用下,由多基因参与,经过多步骤，多阶段复杂的生物学演变过程而形成的疾病。面对肿瘤发病率呈不断上升的趋势，如何“早期早期发现、早期诊断、早期治疗发现、早期诊断、早期治疗”以及如何在治疗过程中进行疗效判断、病情监

4、测疗效判断、病情监测已成为广大医务工作者共同关注的课题。v 肿瘤发生发展，由于细胞基因组改变产生的物质代谢异常，一些肿瘤相关和/或肿瘤特异的小分子蛋白质/肽释放到血液或体液中，形成肿瘤蛋白标志物。通过对正常及病变标本在蛋白质种类和数量上的差异比较，确定和筛选特异的肿瘤标志物，将对肿瘤的早期发现、诊断、个体化治疗方案的选择和预后判断具有重要的意义。物理学物理学（影像学影像学）生物化学生物化学（免疫学）（免疫学）组织学、组织学、细胞学细胞学物理学（影像学）物理学（影像学） 组织学、细胞学（组织学、细胞学（形态学形态学）v在物理学检查定位的基础上获取标本（切片或手术、穿刺）。病理组织学取样大多操作较

5、复杂，需要施行手术，给病人带来痛苦，给机体造成损伤,费用也相对较高 。细胞学虽然方便快捷，但取样、定性、定量都有一定的局限性。生物化学（生物化学（免疫学免疫学）v 通过检测肿瘤发生、发展过程中所分泌的一些具有特异性的蛋白成分，即某一项肿瘤标志物来实现的。但受方法的灵敏度、特异性、假阳性、假阴性等诸多因素限制。v生物芯片技术是20世纪90年代中期兴起的新型生物学技术。它基于生物大分子（核酸、蛋白质等）间相互作用，结合微电子、微机械、化学、物理、计算机等多领域的技术，将多种生物探针高密度的固定在固相基质上，使样品反应，检测，分析等过程成为连续化、集成化、微型化。生物芯片技术的分类生物芯片技术的分类

6、根椐芯片固定探针不同,生物芯片可分为：基因芯片基因芯片（芯片上的固定分子是寡核甘酸探 针或靶DNA）；蛋白芯片蛋白芯片（芯片上固定分子是肽或蛋白）； 细胞芯片细胞芯片；组织芯片；组织芯片；芯片实验室芯片实验室。生物芯片分类生物芯片分类D N A C h ip s P ro te in C h ip sL a b C h ip sB io c h ip s蛋白芯片蛋白芯片(Protein Chips(Protein Chips) )v 蛋白芯片是生物芯片的一种。各种蛋白质被有序地固定在合适的各种载体上（滴定板、滤膜、载玻片等）。成为检测用的芯片。蛋白芯片上固定探针是特定蛋白的抗体或受体。制备时常

7、用直接占样法以避免蛋白质的空间结构改变。.v 标记了特定荧光抗体的蛋白质或其他成分经过与芯片结合作用，用漂洗的方法，将未与芯片上蛋白质结合的成分洗去。用荧光扫描仪或激光共聚焦扫描仪记录芯片上各荧光强度。通过荧光强度来分析蛋白分子、蛋白与核酸、蛋白与其他成分的相互作用关系。以实现对蛋白质准确、快速、大信息量的评价。 微阵列芯片微阵列芯片（样品直径150-50m）纳阵列芯片（纳阵列芯片（样品直径300nm抗体-抗原芯片配体-受体芯片酶-底物芯片 固化抗体于固相载体上 捕捉检测样品中的对应肿瘤标志物 结合第二抗体（标有示踪标记物） 催化化学反应发光 专属的芯片阅读仪读取光信号蛋白质芯片检测原理图蛋白

8、质芯片检测原理图发光底物发光底物酶酶二抗二抗一抗一抗膜膜 抗原抗原Tumor MarkerTumor MarkerAntibodyAntibodySignalSignalEnzymeEnzymeFilmFilm多肿瘤标志物蛋白芯片检测流程：多肿瘤标志物蛋白芯片检测流程：反应完成后反应完成后的蛋白芯片的蛋白芯片 捕捉图象读取数据软件处理数据分析数据分析检测报告检测报告实验仪器仪与设备多肿瘤标志物蛋白芯多肿瘤标志物蛋白芯片片1212种肿瘤标志物种肿瘤标志物f-PSAf-PSAPSAPSACA125CA125HGHHGHCA15-3CA15-3AFPAFPFerrFerrCA242CA242CEAC

9、EANSENSECA19-9CA19-9-HCG-HCG 糖链抗原糖链抗原19-919-9 神经原特异性烯醇化酶神经原特异性烯醇化酶 癌胚抗原癌胚抗原 糖链抗原糖链抗原242242 铁蛋白铁蛋白 人绒毛膜促性腺激素人绒毛膜促性腺激素 甲胎蛋白甲胎蛋白 游离前列腺特异性抗原游离前列腺特异性抗原 前列腺特异性抗原前列腺特异性抗原 癌抗原癌抗原125125 生长激素生长激素 癌抗原癌抗原15-315-3 各肿瘤标志物的各肿瘤标志物的临界值临界值v 多肿瘤标志物蛋白芯片检测12种肿瘤标志物临界值是该系统对大量“正常人群”进行检测，然后对结果进行统计学处理而确定的。由于存在个体差异，因此该值只是一个正常

10、参考值。当然并不是所有正常人值都绝对应该在临界值以下。 CA19-9CA19-935U/ml f-PSA35U/ml f-PSA1.0g/L1.0g/L NSE NSE13g/L PSA13g/L PSA5.0g/L5.0g/L CEA CEA5.0g/L CA1255.0g/L CA12535U/ml35U/ml CA242 CA24220U/ml HGH20U/ml HGH7.5g/L7.5g/L -HCG -HCG3.0g/L CA1533.0g/L CA15335U/ml 35U/ml AFP AFP20g/L Ferritin20g/L Ferritin322g/L322g/L 21

11、9g/L219g/L多肿瘤标志物蛋白芯片检测多肿瘤标志物蛋白芯片检测取样要取样要求求v多肿瘤标志物蛋白芯片临床样品检测结果准确性由许多因素决定。特别是: 1.临床医师的重视； 2.取样者的规范操作; 3.受检者依从性。 只有以上三者紧密配合，才能获取一份真实、可靠的适应于临床检测样品。标准化、规范化的采集样品、留取样品、保存样品和处理样品方法，都将大大保证待测样品准确结果和提高检测数据的临床参考价值。血清样品：血清样品： 抽取晨空腹静脉血1ml置无抗凝剂洁净 试管中，静置后，2000rpm5min离心分离出清亮血清，移至另一洁净试管中待测。腹水样品：腹水样品： 取腹水样品后，同血清样品离心，分

12、 出上清液待测。 溶血样品、黄疸血样、乳糜脂血样品都会对结果准确性产生干扰，应当避免。 从临床样品送检、到最后实验室分析检测需要一定的时间，必须保证蛋白质标志物的稳定性。提倡当天样品当天分析，否则应将样品置28 。大于一周不能检测样品应置-20 保存，冻融后应立即检测。肿瘤蛋白标志物的临床应用价值肿瘤蛋白标志物的临床应用价值v 当一个新的检验技术、诊断试验问世时，都必须正视和考虑下列问题： 试验结果阳性对诊断某病的价值如何？ 试验结果阴性对排除某病价值如何？ 在什么情况下选用患者受益最大？等等。v 这不仅对推广应用一个新的诊断试验十分必要，而且对提高临床医学科学水平也是非常重要的。1.1.糖链

13、抗原糖链抗原19-9(Carbohydrate antigen19-19-9(Carbohydrate antigen19-9, CA19-9):9, CA19-9):v 它是一种低聚糖类肿瘤相关的糖类抗原。是胰腺癌和结、直肠癌的特异性肿瘤标志物。是迄今为止报道的对胰腺癌敏感性最高的标志物。胰腺癌患者阳性率高达85%95%。当肿瘤负荷切除后该数值会有明显下降，如果再上升，则可预示复发，而这种预示常常发生于影像学能够作出诊断之前。v 提示：CA19-9不仅可作为胰腺癌诊断指标，更重要的是可为胰腺癌的治疗、动态观察、合理用药及预后评价提供临床指导。如果对CA19-9阳性者再配合作CT、逆行胰胆管造

14、影（ERCP） ，则其临床意义更大，临床诊断会更明确。v 许多研究者肯定CA19-9对胰腺癌、胆管（囊）癌、结、直肠癌临床诊断价值,认为CA19-9对胰腺癌的早期发现、早期诊断、早期治疗更具有重要的临床意义，且该方法取样、检测方便、快捷，有利于高危人群或健康人群的普查和筛选。2.2.神经原特异性烯醇化酶神经原特异性烯醇化酶（neuron-spe,NSEneuron-spe,NSE）v NSE仅存在于神经元和神经内分泌细胞内, 它是烯醇酶的异构体。作为神经母细胞瘤的标志物，对该病的早期诊断具有较高的特异性。当患者经治疗临床症状改善时，血清中NSE水平降至正常。有人认为血清中NSE水平的测定比测定

15、患者尿中儿茶酚胺的代谢物更具有监测疗效和预报复发的临床参考价值。v 小细胞肺癌（SCLC）可表现神经内分泌细胞特性，有过量的NSE表达。Johnson等研究发现，SCLC复发时，其NSE水平通常较临床确诊前约412周，有明显升高，而此时X线尚无可见病灶。有报道，NSE水平与SCLC患者发生转移程度相关，并对治疗的反应性和预报复发也具有良好的相关性。 但有些SCLC复发病例的NSE有时并不升高，其原因可能是： 1.复发肿瘤不分泌NSE； 2.NSE没能释放到血液中去； 3.复发的肿瘤组织类型发生改变（SCLC转 化为NSCLC）。v 正常红细胞中含有NSE，红细胞破裂以后会释放出NSE，造成NS

16、E升高的假象；在处理样品时要引起足够注意。3.3.癌胚抗原癌胚抗原（carcinoembryonic,CEAcarcinoembryonic,CEA）v CEA是分子量为150000300000的糖蛋白，45%是蛋白质。其编码基因位于19号染色体。CEA是与细胞表面糖蛋白相关的大家族，是免疫球蛋白基因超家族的一部分。胎儿和成人消化道均产生CEA。正常CEA分泌入胃肠道，而失去极性的癌细胞分泌CEA则进入血液和淋巴。v 分泌CEA的肿瘤大多位于空腔脏器，像胃肠道、呼吸道、泌尿道等。在肿瘤状态时CEA进入血液和淋巴循环，引起上述各种肿瘤患者血清中CEA异常性增高。像肺癌、乳腺癌、膀胱癌和卵巢癌患者

17、血清中CEA浓度明显升高时，表明有病变残存或病情进展，多显示为肿瘤浸润或为转移性癌。v 一般而言，患者手术后6周，CEA恢复正常，否则提示有残存肿瘤，若其值持续不断升高（超过正常值数倍），均提示预后不良。研究表明， CEA对肿瘤术后复发的敏感性很高，甚至在临床、病理组织学或X线检查证实复发的前几个月（平均5个月）即可出现CEA含量的异常。v 目前，CEA主要用于监测术后肿瘤有无复发和治疗（手术、化疗、放疗）的效果。另外，对胃肠道及乳腺肿瘤患者，血清CEA水平与肿瘤的大小或有无转移存在一定关系，特别是肝、腹膜转移时，血中或腹水中CEA升高更为明显。因此，连续随访（术前、术后46周）定量检测患者血

18、清中CEA含量，可作为整个随诊内容之一。血清中CEA含量临床意义如下：1.CEA值降至正常，表明手术、化疗和放疗已有一定的疗效；2.CEA值升高，常在肿瘤复发前114个月出现；3.CEA值迅速升高，用于指示再次手术探查，也可应用其他检查方法，以确定复发部位；4.较高CEA值，提示预后差或有肿瘤转移。4.4.糖链抗原糖链抗原242(Carbohydrate 242(Carbohydrate antigen 242, CA 242):antigen 242, CA 242):v CA242是从人结肠、直肠癌细胞系单克隆抗体中发现的，是一种唾液酸化的鞘糖脂抗原。当消化道发生肿瘤时，其值明显升高。v

19、CA242是CEA之后又一个结、直肠癌标志物，且两者之间具有互补性。v 有研究表明， CA242对结、直肠癌复发或远处转移的敏感性低于CEA，二者同时检测则敏感性大大增高。 CA242对胰腺癌也具有较高的阳性检出率，其敏感性与CA19-9相似或略低。5.5.铁蛋白铁蛋白（ferritinferritin）v 1965年Richter等人从恶性肿瘤细胞株中分离铁蛋白。是一种大分子结构的糖蛋白，由24个亚单位的多肽链组成。铁蛋白有两个亚基： 酸性铁蛋白；碱性铁蛋白。 研究认为酸性同分异构铁蛋白对肿瘤细胞更具有特异性。v 肝癌患者血清铁蛋白含量明显升高，特别是对AFP阴性肝癌患者阳性率较高，甚至有研

20、究表明AFP浓度越低，铁蛋白含量越高，二者呈负相关。测定血清酸性同工铁蛋白可提高其对肝癌诊断的特异性和敏感性，起到与AFP互补的作用。v 在肿瘤状态时（白血病，肺癌，乳腺癌），酸性同分异构体铁蛋白增高，其他患者在出现肝转移时阳性率也较高。v 有报道脑胶质瘤患者手术后血清铁蛋白含量下降。经免疫电镜观察铁蛋白主要存在于细胞浆及二级溶酶体内，说明胶质瘤细胞合成铁蛋白并释放，使其升高。认为可作为脑胶质瘤患者治疗效果和预后参考指标。v 但多种疾病，特别是良性肝病（肝炎、肝硬化）以及发热、炎症、甲亢、色素沉着均发生血清铁蛋白升高。v 铁蛋白虽然是一种特异性指标，但单独出现阳性，对肿瘤通常无特殊预警意义，必

21、须结合其它检测指标才能作出判断。 6.6.甲胎蛋白甲胎蛋白（alpha-fetoproteinalpha-fetoprotein，AFPAFP）v AFP是单一多聚体肽键糖蛋白，含590个氨基酸、4%糖，与血清白蛋白、维生素D结合蛋白属同一基因家族。正常肝细胞不产生AFP，而合成白蛋白。当肝细胞发生癌变后，AFP则重新表达。v AFP是原发性肝癌最灵敏、最特异的肿瘤标志物。当血清中测定结果大于参考值并持续不断增高者（一个月），应高度警惕。肝癌患者血清中AFP含量变化与肿瘤大小和组织分化程度正相关。有研究认为，中等分化程度肝癌多能合成AFP，而高、低分化肝癌很少或不合成AFP。测定AFP有助于对

22、病情、手术效果、治疗方法的评价。v 血清中AFP含量的检测对其它恶性肿瘤亦有较重要的临床价值。像睾丸癌、畸胎瘤、胰腺癌等。但某些非恶性肝脏病变，如病毒性肝炎、肝硬化等，AFP水平也可能升高。7.(8.7.(8.游离游离) )前列腺特异性抗原前列腺特异性抗原（prostate specific antigen prostate specific antigen ，PSAPSA、f-f-PSAPSA）v 1971年，Hara等首先发现PSA是精浆主要成分。1979年Wang等人从前列腺组织、前列腺上皮细胞中提取PSA。v前列腺抗原是激肽释放酶基因家族的表达产物。它主要由前列腺组织和尿道周围腺体中的

23、柱状上皮细胞分泌，而单个细胞PSA含量是相对恒定的。 当某些病理改变使前列腺组织结构遭到破坏或者当前列腺管上皮细胞遇到挤压、破坏时，PSA经过基质由毛细血管及淋巴结进入血液循环，从而使血清中PSA浓度升高，因此挤压或破坏前列腺细胞的疾患均可造成PSA不同程度的升高。 前列腺癌不仅存在腺体的挤压，而且有较严重的细胞破坏，因此该值较其他前列腺疾病升高明显。PSA是目前前列腺癌中最敏感、最特异的标志物，也是目前少数器官特异性标志物之一，一般该值随病变进展升高。诊断的特异性达90%97%。在随访过程中，全身骨扫描发现新增病灶明显要晚于血清PSA值异常25周。v大多检测血清中PSA除了作为早期发现前列腺

24、癌以外，还可用于治疗后的监控。v多数患者术后血清中PSA值可降至正常，若术后血清PSA升高，则提示存在残存肿瘤。v另外PSA一直被认为是前列腺特异性标志物，但我们实验结果显示，女性也可出现PSA阳性。 v国内学者检测了85名乳腺患者和30名健康女性血清中的PSA和f-PSA，其阳性率分别为23.5%和27.1%。而PSA阳性者中，淋巴结转移率高（70%，p0.05）。结论：血清检测PSA对乳腺癌诊断和预后判断有一定意义。（中国肿瘤临床，2004，31（17）：997）v此结果与国外学者Blacks研究结论一致。（Clin Cancer Res，2000，6(2)：467）v美国南佛罗里达大学癌

25、症研究中心综合肿瘤学兼泌尿生殖系肿瘤学研究项目负责人Julio Pow-Sang教授指出“应实现PSA检查的常规化，本项研究最为显著的特征是男性应更注意身体健康状况，定期进行PSA检查。将PSA作为每年体检项目的现象越来越普遍。（Oncology Times,2004,9: 17）vPOW-Sang教授说“上述发现表明医生应鼓励男性进行PSA检查，我们应该告诉患者，虽然PSA测定不是万能的，但它仍然是一项非常有价值的检查，我们需要让男性知道自身PSA的实际水平、PSA的水平是否升高，更要让他们了解其具体的临床意义。（Oncology Times,2004,9: 17）vCity of Hope

26、 癌症中心泌尿外科S. Adam Ramin副教授说：“我们可以判断，如果患者的PSA水平快速升高，那么患者在手术后死于前列腺癌的危险较高”。他鼓励肿瘤科的医生在接诊患者时能够运用上述发现并认为PSA的升高速度能够作为一项预测指标被纳入到更多研究中。（Oncology Times,2004,9: 17）v 尽管PSA水平与前列腺癌的诊断和分期密切相关，但在20%的急性前列腺炎和3.3%慢性前列腺炎中PSA可能升高。因此有学者认为PSA值不能单独用于前列腺癌的确诊和分期，而必需与直肠指检，直肠超声，前列腺活检等方法联合应用，经综合分析才能下结论。9.9.癌抗原癌抗原125125（Cancer A

27、ntigen 125Cancer Antigen 125；CA125CA125）v CA125是卵巢癌和子宫内膜癌的标志物。当卵巢癌复发时，在临床确诊前几个月就可呈现出CA125增高，尤其卵巢癌转移患者血清中CA125更明显高于正常参考值。当检测CA125同时与盆腔检查相结合则更能提高诊断卵巢癌的特异性。动态观察血清中CA125浓度有助于卵巢癌患者的预后评价和治疗的控制。一般患者经治疗后，其CA125含量可明显下降，当不能恢复至正常范围，应考虑有残存肿瘤存在的可能。纽约大学医学院肿瘤研究所妇科肿瘤学系主任、癌症预防和早期检测项目负责人David A.Fishman教授指出“基因组学和蛋白质组学

28、检测技术能比细胞学方法早数年检测出癌前病变和卵巢癌患者”。他相信联合应用生物标志物将有助于医生检测早期卵巢癌。（Oncology Times,2005,10: 6）NCI的乳腺癌与妇科肿瘤研究项目主任Terri L.Cornelison教授也持相同的观点：“蛋白质组学技术为卵巢癌的早期检出带来了希望。当临床简便可行的卵巢癌蛋白组学检测技术面世后，将极大地改变患者的预期生存率”。（Oncology Times,2005,10: 6）然而，CA125血清浓度轻微上升还见于良性卵巢疾病或非肿瘤患者，像： 子宫内膜异位、 子宫纤维变性、 急性输卵管炎等。10.10.癌抗原癌抗原15-315-3（ Ca

29、ncer Antigen 15-3Cancer Antigen 15-3； CA15-3 CA15-3 ）v 1984年，Kufu等自肝转移乳腺癌细胞膜制成可识别CA15-3的单克隆抗体，它是一种大分子量的糖蛋白。v 大多数乳腺癌乳腺癌患者CA15-3值明显升高。研究表明在未转移乳腺癌中阳性率约为20%，转移患者约为63%，良性乳腺病约为8%。但CA15-3的临界值不宜作为确诊依据，而是监测患者是否转移、术后是否复发较好指标。v 当CA15-3持续上升时，认为有转移性病变；治疗有效时，其浓度下降，复发时上升，其变化与治疗结果密切相关，并在临床症状出现之前。v 要注意其它肿瘤患者血清中CA15-

30、3也可升高（妇科肿瘤、肺癌、胃癌等）。要特别注意排除某些妊娠引起的假阳性。11.11.人绒毛膜促性腺激素人绒毛膜促性腺激素（human chorionic human chorionic gonagotropingonagotropin，hCGhCG、-HCG-HCG）v 由胎盘合体滋养层细胞分泌的一类糖蛋白类激素，含145个氨基酸,由两个独立的氨基酸肽链及亚基组成。二者结构和抗原不同。链与垂体激素促黄体生成素（LH） 、促卵泡生成素（FSH）和促甲状腺激素（TSH）相同。链为特异链，-HCG是较好的女性激素类肿瘤标志物 。v 绒毛膜上皮癌能合成HCG并释放-hCG至血中，导致生殖细胞瘤患者该

31、指标升高。当病灶去除后会下降，肿瘤复发重新升高。另外绒毛膜滋养层细胞恶变为恶性葡萄胎后，-hCG会明显增高。它还会在乳腺癌、卵巢癌中表达。 研究表明，它对妇科肿瘤有较高的特异诊断价值，主要用于治疗效果判断和随访。但子宫内膜异位症、卵巢囊肿、肝硬化等非肿瘤状态时，-hCG含量也会增高。在正常妊娠妇女血中可以测出hCG（约9%健康对照也会升高）。 1212. .人类生长激素（人类生长激素（human growth human growth hormone,HGHhormone,HGH）v 由垂体前叶GH细胞分泌、合成的蛋白质激素，受下丘脑分泌的生长抑制素等调节。其为191个氨基酸单链多肽，也可由异

32、位激素释放产生。主要作用：1.促进骨、肌肉、结缔组织和内脏增大；2.促进DNA、RNA合成。 垂体瘤、肾、肺等器官肿瘤均会引起血清中HGH含量升高，因此HGH的检测可作为垂体瘤的标志物，同时也可用于肾癌、肺癌、胰腺癌等的诊断。 异位激素是非内分泌组织肿瘤分泌的一种或数种激素类似物或其他激素所致的症侯群。分泌异位激素的肿瘤多为恶性肿瘤，其在临床上越来越受到重视。肿瘤标志物常用组合的临床应用肿瘤标志物常用组合的临床应用v 由于同一种肿瘤可含有一种或多种肿瘤标志物，而同一肿瘤标志物也会在多种肿瘤存在。因此，选择一些特异性较高的肿瘤标志物联合测定某一肿瘤，有利于提高检出的阳性诊断率。引用文献几种常见肿

33、瘤的常用联合检测谱如下：胰腺癌：CA19-9 + CA125 + CA50；结肠癌：CEA + CA19-9；卵巢癌：CA125 + CA19-9 + 铁蛋白；肺癌： CEA + NSE + 唾液酸；胃癌： CEA + CA19-9 + CA72-4； 等等。对检测结果解释的参考建议：对检测结果解释的参考建议：v 近年来，人们在医疗活动中越来越重视肿瘤的检测，它成为一种必要的内容。另外，在更多更广的医疗保健领域，人们也都开始注重肿瘤的早期发现。多肿瘤蛋白芯片检测系统正适应了人们对健康的需求，它具有多项指标一次检测的优势，如同一把筛子可以对病人进行全面的检测，大大减少漏诊率。v 当被检者是正常体

34、检人群时，若检测出的某肿瘤标志物浓度高于参考值，此时受检者虽无临床症状和体征，但提示其机体可能含有不同种类的肿瘤标志物，也可以说阳性者有可能患有早期肿瘤。因此建议采取的方法是：v 根据被检查的情况综合判断； 建议被检者短期随访，隔周或隔月复查； 咨询专科医师是否要进一步做相关的其他检查（影像学、组织学检查）。 当复检结果持续性上升，持续阳性，则应引起受检者及临床医师的高度警惕，避免误诊、漏诊。v当被检者是已被高度怀疑的肿瘤病人时，其肿瘤标志物值高于参考值，应引起被检者和临床医师的高度重视。建议病人结合其它相关的检查方法，如B超、CT、核磁共振、病理、细胞组织学等进行检查，这样可迅速对病情作出诊

35、断，为治疗赢得时间。v 当被检者是经治疗后的肿瘤患者。其肿瘤标志物浓度高于参考值，应怀疑被检者有肿瘤复发的可能性，建议患者做进一步的跟踪检测或选用其它检查方法，以便为临床提供下一步有价值病情信息。获取最佳治疗效果。v 对检测的阳性结果必须做到具体情况具体分析。当受检者的检测结果中有几项值比参考值高出一倍以上时,应仔细分析是否与某肿瘤有关，也可根据经验建议受检者作进一步检查证实或排除。因为多肿瘤蛋白芯片检测技术同其他的影像学、免疫学检测方法一样，单独诊断肿瘤具有一定的局限性。v 肿瘤的发生、发展是十分复杂的过程，而且人与人存在很大的个体差异。目前临床上还没有任何一种肿瘤标志物为某一种肿瘤所专有，

36、使检测灵敏度达到100%。因此会发生有些人某种肿瘤标志物含量很高，经各种检查并未发现体内有肿瘤存在、生长。v 而有些人虽然已患有肿瘤,但往往肿瘤标志物的浓度却很低甚至正常。从科学统计研究的角度出发，一般人体中肿瘤标志物含量与肿瘤的发生存在一定的相关性，但并非绝对关系。肿瘤标志物检测严格来说，对临床是一种辅助诊断方法。v 实验研究上划分正常、异常是统计学界限，与临床实际结果并不一定完全符合。同样多肿瘤标志物阳性者，必须结合病人临床表现及其他检查资料综合分析，进一步确定诊断。这样才能经表象透视实质，一些干扰因素经多种临床信息综合分析得以排除。v 如AFP指标增高提示肝癌，但还应依靠B超、CT、磁共

37、振甚至肝动脉血管造影等辅助检查进一步确定肿瘤的具体部位、大小及转移情况。v另外又如单独CEA则在吸烟的人群中也有近20%的阳性率。因此临床上强调综合诊断和具体分析，是一种科学的、实事求是的态度。多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统的特多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统的特性：性：高准确性、高灵敏度：高准确性、高灵敏度：v 由于能对各种肿瘤的特异性表达物和辅助表达物进行综合判断，因此具有较高的阳性率和准确率。灵敏度可达纳克级水平。高通量：高通量：v 芯片上集成了成千上万密集排列的分子微阵列，能够在短时间内分析大量的生物分子和多种生物信号并进行检测（12种肿瘤标志物同时检测），使人们快速准确获取样品中的生物信息

38、（动态监测患者病情和进行疗效观察，为临床提供更多、更有价值的参考依据），效率是传统检测手段的成百上千倍。v 另外微型化、自动化。患者依从性较好，取样方便、样品用量少、操作相对简单、检测结果周期较短。v 价格相对较低，患者负担较轻也是其特点。多肿瘤标志物蛋白芯片的应用范围多肿瘤标志物蛋白芯片的应用范围临床应用临床应用: :原发肿瘤的辅助诊断；良、恶性肿瘤的监别诊断；肿瘤治疗效果的观察和评价；肿瘤病人随访，预后评估，定期检查；肿瘤进展度（负荷、复发、转移）判断。筛筛查应用查应用v 用于肿瘤普查体检；无症状人群 的大规模、快速筛查，包括： 临床可疑症状者； 肿瘤家族史者； 肿瘤高危人群、易发地区。科

39、学研究应用科学研究应用 肿瘤分子流行病学研究； 肿瘤标志物生物学特性的研究； 肿瘤相关抗原、抗体的筛选研究； 蛋白质组学和蛋白质相互作用研究； 新药开发和毒物新靶点及其作用机制研究。在肿瘤实验室诊断中的应用在肿瘤实验室诊断中的应用 为临床提供更多检测指标，提高辅助诊断准确率； 积累更加祥实临床实验室检测数据，提供适合不同人群、不同个体的肿瘤标志物图谱。 记录特殊健康个体体内标志物的浓度，建立个体档案。v 我院从20032003年年7 7月月引进多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统，到目前已分析约12000例临床样品，其中约40例健康对照样品。其分析数据与推存正常参考值相比p0.05。计算其假阳性率为：

40、 4040例健康对照组中各肿瘤标志物假阳性率例健康对照组中各肿瘤标志物假阳性率CA19-9 NSE CEA CA242 Ferritin -HCG + % + % + % + % + % + % 2 5.0 3 7.5 4 10 2 5 3 7.5 0 0AFP f-PSA PSA CA-125 HGH CA153+ % + % + % + % + % + %3 7.5 0 0 0 0 1 2.5 0 0 0 0v 我们对送检标本分类统计，选取几种主要的病种，按实验诊断主要评判指标（灵敏度、特异度、准确率）认识多肿瘤标志物蛋白芯片的临床应用情况。肺癌肺癌胃癌胃癌肠癌肠癌食管癌食管癌胰腺癌胰腺癌

41、前列腺癌前列腺癌卵巢癌卵巢癌宫颈癌宫颈癌健康组健康组肝癌肝癌166166例例336336例例248248例例177177例例4040例例2121例例3636例例5353例例4040例例263263例例灵敏度（灵敏度（SensitivitySensitivity）: :v 是指一项实验应用于已知病人组中所获得真阳性结果真阳性结果的发生率。用来衡量与表达该实验能正确识别确实患有某病者的能力。灵敏度愈高，则用于临床诊断时病人漏诊机会愈小。（真阳性数/被检病人总数） 灵敏度灵敏度050100CA199CA199NSENSECEACEACA242CA242FerritinFerritin-HCG-HCG

42、AFPAFPf-PSAf-PSAPSAPSACA125CA125HGHHGHCA153CA153肝癌肝癌肺癌肺癌胃癌胃癌 灵敏度050100CA199CA199NSENSECEACEACA242CA242FerritinFerritin-HCG-HCGAFPAFPf-PSAf-PSAPSAPSACA125CA125HGHHGHCA153CA153前列腺癌卵巢癌宫颈癌特异度（特异度（Specificity）：）：v 特异度也称真阴性率或阴性率。指在无病者中，此实验测得真阴性结果发生率，用来衡量与表达该实验能正确识别确实无病的能力。特异度越高的实验用于临床诊断时病人发生误诊的机会就越小。（真阴性数

43、/真阴性数+假阳性数）特异度8090100110CA199NSECEACA242Ferritin-HCGAFPf-PSAPSACA125HGHCA153特异度准确率（有效诊断率）：准确率（有效诊断率）：v 它是一个判定实验应用的重要指标，指在全部测定人群中真阳性真阳性与真阴真阴性性之和和所占的比率。（真阳性数+真阴性数/被检病人数+对照组数）准确率准确率050100CA199NSECEACA242Ferritin-HCGAFPf-PSAPSACA125HGHCA153肠癌胰腺癌食管癌准确率准确率050100CA199NSECEACA242Ferritin-HCGAFPf-PSAPSACA125

44、HGHCA153前列腺癌卵巢癌宫颈癌多肿瘤标志物蛋白芯片在肿瘤临床应多肿瘤标志物蛋白芯片在肿瘤临床应用中存在的问题和不足：用中存在的问题和不足：v 多肿瘤标志物蛋白芯片技术的应用为肿瘤实验室诊断提供了全新的高科技手段，弥补单指标辅助诊断带来的缺点，提高了检测的灵敏度和特异性。但在应用过程中其还存在一些缺陷：v 还不能单独依据肿瘤标志物对人体肿瘤做出正确诊断。这是由于肿瘤细胞生物学的复杂性、多态性，肿瘤发生的多步骤性所决定的。肿瘤标志物既存在于恶性肿瘤中，也存在于良性肿瘤、胚胎组织甚至正常组织中，只不过恶性肿瘤患者中其含量明显增多。所以一直以来肿瘤的诊断必须结合临床，依靠综合手段，以病理诊断确诊

45、为主。v 按照临床医师的诊治需要，申请检测项目不同，现有的多肿瘤蛋白芯片固定的检测项目和固定的样品数还不能满足临床随时、随意选择的需要。有些肿瘤标志物还没有包括在其中,如: CA50、CA72-4、脂类唾液酸、甲状腺球蛋白、胰癌胚抗原（POA）等等。v在检测中干扰因素还不能消除，给正确分析结果造成一定困难，干扰肿瘤标志物结果的因素： 类风湿因子； 异噬性抗体； 医源性诱导的各种抗体； 标本中其他成分（血脂过高、胆红素、血红蛋白、血粘度过大、乳糜血等）；结束语：结束语： 总之,肿瘤的发生发展是一个非常复杂的过程, 尽管当前还未找到独立理想的肿瘤实验检测指标和方法。但我们有理由相信，随着蛋白芯片技术的启用、完善和发展，将促进人类加快认识基因组与人类健康之间错综复杂的关系和规律。 蛋白芯片作为一种简便、快捷的高新技术，会对各类疾病尤其对恶性肿瘤的早期诊断和治疗监测产生巨大的作用，同时也将推动肿瘤基础研究工作的深入和发展。