兽药残留检测技术课件.pptx

1、使用兽药的目的使用兽药的目的l防治食品动物疾病防治食品动物疾病l促进生长促进生长l提高饲料利用率提高饲料利用率兽药的使用情况兽药的使用情况l据据19661974年统计年统计,美国大约已有美国大约已有78%80%的食的食品动物品动物,在其一生中或多或少服用过药物。在其一生中或多或少服用过药物。兽药的残留兽药的残留l兽药残留兽药残留是指动物性产品的任何可食部分含有兽是指动物性产品的任何可食部分含有兽药母化合物或其代谢物。药母化合物或其代谢物。l兽药最高残留限量兽药最高残留限量（MRL）：是指某种兽药而）：是指某种兽药而在食物中或食物表面产生的的最高允许兽药残留在食物中或食物表面产生的的最高允许兽药

2、残留量（单位量（单位g/kg, 以鲜重计）。以鲜重计）。l兽药残留主要是由于各种正常用药和药物滥用造兽药残留主要是由于各种正常用药和药物滥用造成的成的,另外另外,休药期过短休药期过短, 是造成动物性食品兽药残是造成动物性食品兽药残留过量的另一个重要原因。留过量的另一个重要原因。l休药期休药期：是指自末次给药到动物允许屠宰或其动：是指自末次给药到动物允许屠宰或其动物性产品（乳、蛋等）获准上市的间隔时间。物性产品（乳、蛋等）获准上市的间隔时间。兽药的危害兽药的危害l引起引起过敏、致畸、致突变过敏、致畸、致突变及及致癌致癌等不良反等不良反应。应。立法立法l为防止动物性食品中可能出现的药物残留损害人体

3、健为防止动物性食品中可能出现的药物残留损害人体健康康,1984年在年在CAC的倡导下由联合国粮农组织的倡导下由联合国粮农组织(FAO)和世和世界卫生组织界卫生组织(WHO)联合发起组织了联合发起组织了食品中兽药残留立法食品中兽药残留立法委员会委员会(CCRVDF)。lCCRVDF的主要宗旨是的主要宗旨是:为控制食品中的兽药残留为控制食品中的兽药残留,筛选筛选并建立适用于全球的兽药及其他化学物残留的分析方法并建立适用于全球的兽药及其他化学物残留的分析方法和取样方法和取样方法;对兽药残留进行毒理学评价对兽药残留进行毒理学评价;按制订世界或按制订世界或地区性法规标准地区性法规标准 (Codex St

4、andart)的的8个步骤个步骤,制定动物制定动物组织及产品中组织及产品中兽药最高残留限量兽药最高残留限量(MRL)法规及休药期法法规及休药期法规规。一、常见兽药一、常见兽药按用途分类按用途分类抗微生物药抗微生物药抗寄生虫药抗寄生虫药激素类药物激素类药物生长促进剂生长促进剂抗菌药：抗菌药：磺胺药、呋喃类药、喹诺酮类磺胺药、呋喃类药、喹诺酮类抗病毒药：抗病毒药：干扰素干扰素抗蠕虫药抗蠕虫药抗原虫药抗原虫药杀虫药杀虫药抗生素：抗生素：青霉素、链霉素、氯霉素青霉素、链霉素、氯霉素1 1、抗微生物药、抗微生物药l抗微生物药是指对病原微生物抗微生物药是指对病原微生物(细菌、真细菌、真菌、支原体、病毒等菌

5、、支原体、病毒等)具抑制或杀灭作用具抑制或杀灭作用,主要有用于全身感染的抗生素、磺胺药及主要有用于全身感染的抗生素、磺胺药及其他化学合成抗菌药。其他化学合成抗菌药。根据化学结构可分类为根据化学结构可分类为: :l(1)氨基糖苷类：氨基糖苷类： 链霉素、庆大霉素、卡那霉素、新霉链霉素、庆大霉素、卡那霉素、新霉素、大观霉素、安普霉素等。素、大观霉素、安普霉素等。l(2) -内酰胺类：内酰胺类： 青霉素、头孢菌素等。青霉素、头孢菌素等。l(3)四环素类：四环素类： 土霉素、金霉素、多西环素等。土霉素、金霉素、多西环素等。l(4)氯霉素类：氯霉素类： 氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考等。氯霉素、甲砜霉素、氟

6、苯尼考等。 l(5)大环内酯类：大环内酯类： 红霉素、吉他霉素、泰乐菌素等。红霉素、吉他霉素、泰乐菌素等。l(6)林可胺类：林可胺类： 林可霉素、克林霉素。林可霉素、克林霉素。l(7)多肽类：多肽类： 杆菌肽、黏菌素等。杆菌肽、黏菌素等。l(8)多烯类：两性霉素、制霉菌素等。多烯类：两性霉素、制霉菌素等。l(9)磺胺类及抗菌增效剂：磺胺类及抗菌增效剂： 磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺异唑、磺胺甲基异唑、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺对甲磺胺异唑、磺胺甲基异唑、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺对甲氧嘧啶等。氧嘧啶等。l(10)硝基呋喃类：呋喃西林、呋喃他酮、呋喃要因、呋硝基呋喃类：呋喃西林、呋喃

7、他酮、呋喃要因、呋喃唑酮等。喃唑酮等。l(11)喹诺酮类：萘啶酸、吡哌酸、嗯喹酸、诺氟沙星、喹诺酮类：萘啶酸、吡哌酸、嗯喹酸、诺氟沙星、环丙沙星、奥比沙星、沙拉沙星、马波沙星等。环丙沙星、奥比沙星、沙拉沙星、马波沙星等。2 2、抗寄生虫药、抗寄生虫药l抗寄生虫药是指能杀灭或驱除动物体内外寄生虫的药物。抗寄生虫药是指能杀灭或驱除动物体内外寄生虫的药物。l畜禽寄生虫病的危害性极大畜禽寄生虫病的危害性极大, ,会给国民经济造成无法估会给国民经济造成无法估量的巨大经济损失。量的巨大经济损失。l寄生虫病不仅引起大批畜禽死亡寄生虫病不仅引起大批畜禽死亡, ,而且严重影响动物生而且严重影响动物生长率长率,

8、,使乳、肉、蛋、毛、革等畜产品质量下降使乳、肉、蛋、毛、革等畜产品质量下降, ,数量减数量减少。少。l某些人畜共患寄生虫病某些人畜共患寄生虫病, ,还能直接威胁人类的健康和生还能直接威胁人类的健康和生命安全。命安全。根据药物作用的特点，抗寄生虫药可分为根据药物作用的特点，抗寄生虫药可分为: :l(1)抗蠕虫药：抗蠕虫药： 苯并咪唑类、咪唑并噻唑类、有机磷苯并咪唑类、咪唑并噻唑类、有机磷酸酯类、四氢嘧啶类、水杨酰苯胺类、阿维菌素类、哌酸酯类、四氢嘧啶类、水杨酰苯胺类、阿维菌素类、哌嗪衍生物等。嗪衍生物等。l(2)抗原虫药：抗原虫药： 聚醚类离子载体抗生素、三嗪类、二聚醚类离子载体抗生素、三嗪类、

9、二硝基类、氯羟吡啶。硝基类、氯羟吡啶。l(3)杀虫药：杀虫药： 有机磷化合物、拟除虫菊酯类化合物等。有机磷化合物、拟除虫菊酯类化合物等。3 3、激素与其他生长促进剂、激素与其他生长促进剂(1)性激素性激素l动物生产中使用的性激素动物生产中使用的性激素,包括雌性激素包括雌性激素(如如:雌二醇、己雌二醇、己烯雌酚烯雌酚(己烷雌酚、甲地孕酮、雌烯酮等己烷雌酚、甲地孕酮、雌烯酮等)和雄性激素和雄性激素(如如:甲基睾丸酮、丙酸睾酮、氯睾酮甲基睾丸酮、丙酸睾酮、氯睾酮)。(2)生长激素生长激素 l是由动物脑垂体分泌的天然蛋白质激素是由动物脑垂体分泌的天然蛋白质激素,主要通过促进主要通过促进蛋白质合成和脂肪

10、分解来促进动物生长蛋白质合成和脂肪分解来促进动物生长,增加瘦肉率增加瘦肉率,提提高饲料转化率。目前在畜牧业生产中使用的主要有牛生高饲料转化率。目前在畜牧业生产中使用的主要有牛生长激素长激素(BST)和猪生长激素和猪生长激素(PST)。(3)甲状腺素甲状腺素,类甲状腺素及抗甲状腺素。类甲状腺素及抗甲状腺素。(4)人工合成的蛋白质同化激素人工合成的蛋白质同化激素 l人工合成的蛋白质同化激素可促进动物脑下垂体生长激人工合成的蛋白质同化激素可促进动物脑下垂体生长激素的分泌。与抗生素一样素的分泌。与抗生素一样,伴随着激素活性物质在畜禽伴随着激素活性物质在畜禽生产中的使用种类和数量的不断增加生产中的使用种

11、类和数量的不断增加,反对使用的呼声反对使用的呼声也越来越高。也越来越高。(5)镇静剂和镇静剂和-肾上腺素阻断剂肾上腺素阻断剂 l为了控制被运输及等待屠宰的动物的紧张为了控制被运输及等待屠宰的动物的紧张,有些畜牧业有些畜牧业会非法使用镇静剂和肾上腺素阻滞剂。因为猪对于它们会非法使用镇静剂和肾上腺素阻滞剂。因为猪对于它们所处环境的突然变化特别敏感所处环境的突然变化特别敏感,随之产生的新陈代谢和随之产生的新陈代谢和紧张会影响肉的质量。紧张会影响肉的质量。二、常见兽药残留的种类与危害二、常见兽药残留的种类与危害 1. 1. 抗生素类药物抗生素类药物l多为天然发酵产物多为天然发酵产物, 是临床应用最多的

12、一是临床应用最多的一类抗菌药物类抗菌药物, 如青霉素类、氨基糖苷类、如青霉素类、氨基糖苷类、大环内酯类、四环素类、螺旋霉素、链霉大环内酯类、四环素类、螺旋霉素、链霉素、土霉素、金霉素等。素、土霉素、金霉素等。2. 2. 磺胺类药物磺胺类药物l主用于抗菌消炎主用于抗菌消炎, 如磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧如磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶啶, 磺胺眯磺胺眯, 菌得清、新诺明等。菌得清、新诺明等。l近年来近年来, 磺胺类药物在动物性食品中的残留磺胺类药物在动物性食品中的残留超标现象超标现象, 在所有兽药当中是最严重的。在所有兽药当中是最严重的。3. 3. 硝基呋喃类药物硝基呋喃类药物l主用于抗菌消炎主用于抗菌消炎,

13、 如呋喃唑酮、呋喃西林、呋喃妥因等。如呋喃唑酮、呋喃西林、呋喃妥因等。4. 4. 抗寄生虫类药物抗寄生虫类药物l主要用于驱虫或杀虫主要用于驱虫或杀虫, 如苯并咪唑、左旋咪如苯并咪唑、左旋咪唑、克球酚、吡喹酮等。唑、克球酚、吡喹酮等。l而常用的苯并咪唑类抗寄生虫药物有丙硫而常用的苯并咪唑类抗寄生虫药物有丙硫苯咪唑、丙氧咪唑、噻苯咪唑、甲苯咪唑、苯咪唑、丙氧咪唑、噻苯咪唑、甲苯咪唑、丁苯咪唑等。丁苯咪唑等。5. 5. 激素类药物激素类药物l主要用于提高动物的繁殖和加快生长发育主要用于提高动物的繁殖和加快生长发育速度速度, 使用于动物的激素有性激素和皮质激使用于动物的激素有性激素和皮质激素。而以性激

14、素素。而以性激素(包括多种内源性性激素、包括多种内源性性激素、人工合成的类似性激素的类固醇化合物、人工合成的类似性激素的类固醇化合物、人工合成的具有性激素某些特性的非类固人工合成的具有性激素某些特性的非类固醇化合物醇化合物) 最常用最常用, 如孕酮、睾酮、雌二醇、如孕酮、睾酮、雌二醇、甲基睾酮甲基睾酮, 丙酸睾酮、苯甲酸雌二醇、己烯丙酸睾酮、苯甲酸雌二醇、己烯孕酮等。孕酮等。二、食物中兽药残留二、食物中兽药残留(1)兽药残留兽药残留l兽药残留兽药残留是指是指动物产品的任何食用部分所动物产品的任何食用部分所含兽药的母体化合物及其代谢物，以及与含兽药的母体化合物及其代谢物，以及与兽药有关的杂质的残

15、留兽药有关的杂质的残留。(2)兽药残留的来源兽药残留的来源l在食品动物体内或动物性食品中发现的违章残在食品动物体内或动物性食品中发现的违章残留留,大都是由用药错误造成的大都是由用药错误造成的,其原因主要有其原因主要有:不正确地应用药物不正确地应用药物,如用药剂量、给药途径、用如用药剂量、给药途径、用药部位和用药动物的种类等不符合用药指示药部位和用药动物的种类等不符合用药指示,这这些因素有可能延长药物残留在体内的时间些因素有可能延长药物残留在体内的时间,从而从而需要增加休药的天数需要增加休药的天数;在休药期结束前屠宰动物在休药期结束前屠宰动物;屠宰前用药掩饰临床症状屠宰前用药掩饰临床症状,以逃避

16、屠宰前检查以逃避屠宰前检查; 以未经批准药物作为添加剂饲喂动物以未经批准药物作为添加剂饲喂动物;药物标签上的用法指示不当药物标签上的用法指示不当,造成违章残留物造成违章残留物;饲料粉碎设备受污染饲料粉碎设备受污染或将盛过抗菌药物的容器或将盛过抗菌药物的容器用于贮藏饲料用于贮藏饲料;接触接触厩舍粪尿池中含有抗生素等药物的厩舍粪尿池中含有抗生素等药物的废水和废水和排放的污水排放的污水(如猪经常摄入这种污水如猪经常摄入这种污水);任意以抗生素药渣喂猪或其他食品动物等滥用任意以抗生素药渣喂猪或其他食品动物等滥用抗生素抗生素,是出现抗生素残留的主要原因。是出现抗生素残留的主要原因。(3)兽药残留的种类兽

17、药残留的种类(形式形式)l第一类是以第一类是以游离或结合形式存在的原药及其主要代谢物游离或结合形式存在的原药及其主要代谢物(除高亲脂性化合物外除高亲脂性化合物外),因代谢和排泄迅速因代谢和排泄迅速,不会在动物体不会在动物体内蓄积。但这些物质可能具有毒性作用内蓄积。但这些物质可能具有毒性作用,而且被人摄入而且被人摄入后在体内可生成高度活化的中间产物后在体内可生成高度活化的中间产物(亲电子基团、自亲电子基团、自由基等由基等),因而对消费者具有潜在的危害性。因而对消费者具有潜在的危害性。l第二类是第二类是共价结合代谢物共价结合代谢物,因其从机体排出相对较慢因其从机体排出相对较慢,它它们的存在对于靶动

18、物有潜在的毒性作用们的存在对于靶动物有潜在的毒性作用,而对于消费者而对于消费者,由于结合残留在人体内不可能再活化由于结合残留在人体内不可能再活化,其生物利用率和其生物利用率和含量均低含量均低,可能只显示很低的毒性。可能只显示很低的毒性。l残留毒理学意义较大的兽药按其用途分类主要包括残留毒理学意义较大的兽药按其用途分类主要包括:l抗生素类、合成抗菌素类、抗寄生虫类药、生长促进剂抗生素类、合成抗菌素类、抗寄生虫类药、生长促进剂和杀虫剂等。和杀虫剂等。l抗生素和抗菌素统称抗微生物药物抗生素和抗菌素统称抗微生物药物,是最主要的兽药添是最主要的兽药添加剂和兽药残留加剂和兽药残留,约占药物添加剂的约占药物

19、添加剂的60%。(4)影响食品动物组织中药物残留的因素影响食品动物组织中药物残留的因素l经内服或注射给药的动物经内服或注射给药的动物,其组织中存在的药物及其代其组织中存在的药物及其代谢物或降解产物的残留。谢物或降解产物的残留。l组织中药物残留随药物种类、剂量、给药途径、药物及组织中药物残留随药物种类、剂量、给药途径、药物及其代谢物特性的不同而异。其代谢物特性的不同而异。l在有些情况下在有些情况下,饲料也会影响动物组织中的药物残留饲料也会影响动物组织中的药物残留,但但药物休药期的执行情况药物休药期的执行情况是影响组织残留的最重要因素。是影响组织残留的最重要因素。l屠宰后胴体加工过程也是影响药物残

20、留检出率的因素之屠宰后胴体加工过程也是影响药物残留检出率的因素之一。一。l烹调和贮藏温度亦影响残留药物在组织中的稳定性。烹调和贮藏温度亦影响残留药物在组织中的稳定性。l对于大多数抗微生物药来说对于大多数抗微生物药来说,药物从动物体内消除属一药物从动物体内消除属一级动力学级动力学,而大多数组织中药物残留抗微生物活性的丧而大多数组织中药物残留抗微生物活性的丧失是一个零级动力学过程。这表示药物残留量越多失是一个零级动力学过程。这表示药物残留量越多,它它们从食用组织中消除所需的时间就越长。们从食用组织中消除所需的时间就越长。l如果药物添加剂是亲脂性的如果药物添加剂是亲脂性的,那么它们会蓄积在脂肪组那么

21、它们会蓄积在脂肪组织中织中,而且其消除速度明显比亲水性药物慢。而且其消除速度明显比亲水性药物慢。l实际上实际上,存在于家禽食用组织、牛肉、羊肉、乳和蛋中存在于家禽食用组织、牛肉、羊肉、乳和蛋中的药物残留的种类和发生率差异较大。的药物残留的种类和发生率差异较大。这是动物屠宰前这是动物屠宰前或其乳和蛋上市前停止用药时间长短的一种反映。或其乳和蛋上市前停止用药时间长短的一种反映。四、兽药残留的现状与法规四、兽药残留的现状与法规l兽药残留主要是由于兽药残留主要是由于不合理使用药物治疗动物疾病不合理使用药物治疗动物疾病和作和作为为饲料药物添加剂饲料药物添加剂而引起的。而引起的。l1990年出口日本的年出

22、口日本的1万吨肉鸡万吨肉鸡,由于检测出抗球虫药氯羟由于检测出抗球虫药氯羟吡啶的残留量超标吡啶的残留量超标,要求我国政府销毁所有产品要求我国政府销毁所有产品,给我国造给我国造成很大经济损失。成很大经济损失。l出口到德国的蜂蜜由于农药出口到德国的蜂蜜由于农药“杀虫脒杀虫脒”残留超标而被退残留超标而被退货货,接着欧共体、美国、日本也相继拒绝进口我国蜂蜜接着欧共体、美国、日本也相继拒绝进口我国蜂蜜,使使我国蜂蜜在世界市场上的销售发生严重因难。我国蜂蜜在世界市场上的销售发生严重因难。l1998年年4月月,从内地出口到香港的生猪从内地出口到香港的生猪,其内脏食后导致其内脏食后导致17人中毒。其原因是内脏中

23、含有违禁药人中毒。其原因是内脏中含有违禁药“盐酸克仑特罗盐酸克仑特罗”。l此外此外,我国出口的畜禽产品还多次出现安眠酮类、雌性激我国出口的畜禽产品还多次出现安眠酮类、雌性激素、抗生素等药物残留超标而被取消出口的事件。素、抗生素等药物残留超标而被取消出口的事件。l1995年、年、1996年年,欧盟兽医委员会派员对我国进行了考欧盟兽医委员会派员对我国进行了考察和评估察和评估,认为我国的兽医卫生状况达不到欧盟的要求认为我国的兽医卫生状况达不到欧盟的要求,于是做出了从于是做出了从1996年年8月月1日起日起,禁止从我国进口禽肉的禁止从我国进口禽肉的决定。决定。l1997年、年、1998年欧盟又派员来华

24、考察年欧盟又派员来华考察,结果仍达不到其结果仍达不到其要求。目前要求。目前,我国肉、蛋、奶的出口形势仍相当严峻。我国肉、蛋、奶的出口形势仍相当严峻。l我国已开始重视动物性食品中的兽药残留问题我国已开始重视动物性食品中的兽药残留问题,制订了制订了各种兽药残留的法律和法规各种兽药残留的法律和法规,修订了修订了动物性食品中兽动物性食品中兽药残留最高限量标准药残留最高限量标准,并开始建立了全国范围的兽药并开始建立了全国范围的兽药残留监控体系。残留监控体系。第六章 兽药残留检测技术第二节第二节 样品前处理样品前处理l样品前处理样品前处理是指样品的是指样品的制备制备和对样品中的待测组分进行和对样品中的待测

25、组分进行提取、净化、浓缩提取、净化、浓缩的过程。的过程。l样品前处理的样品前处理的目的目的是消除基质干扰、保护仪器、提高检是消除基质干扰、保护仪器、提高检测方法的灵敏度、选择性、准确度、精密度。测方法的灵敏度、选择性、准确度、精密度。l不同样品前处理方法的选择，需要根据样品中危害残留不同样品前处理方法的选择，需要根据样品中危害残留物质的特点。物质的特点。l残留分析中的样品主要是各种食用组织残留分析中的样品主要是各种食用组织(肌肉、脂肪、肌肉、脂肪、肝、肾、皮、血液、蛋、奶及其加工食品肝、肾、皮、血液、蛋、奶及其加工食品)。l活体检测中一般采集血浆、尿液和粪便活体检测中一般采集血浆、尿液和粪便;

26、l屠宰场主要采集某种药物的靶组织及其他高浓度的样本屠宰场主要采集某种药物的靶组织及其他高浓度的样本,如肝、肾、胆汁、注射部位的组织等。如肝、肾、胆汁、注射部位的组织等。一、生物样品的类型一、生物样品的类型l兽药残留分析中兽药残留分析中,最常用的生物样品是最常用的生物样品是组织样品组织样品,其次是其次是奶、奶、血液和尿液样品血液和尿液样品。(1)动物组织动物组织 l肌肉肌肉(除去可见的脂肪除去可见的脂肪)中水分约占中水分约占75%,蛋白质蛋白质(肌浆蛋白、肌浆蛋白、肌原蛋白、胶原蛋白和弹性蛋白肌原蛋白、胶原蛋白和弹性蛋白)占占19.0%、脂肪、脂肪(中性脂中性脂肪、脂肪酸和磷脂肪、脂肪酸和磷脂)

27、占占2.5%、糖类、糖类1.2%,以及一些无机盐、以及一些无机盐、维生素和酶类。维生素和酶类。l肌浆蛋白肌浆蛋白(肌红蛋白、糖解酶肌红蛋白、糖解酶)可溶于水可溶于水,肌原蛋白肌原蛋白(肌球蛋肌球蛋白、肌动蛋白白、肌动蛋白)溶于浓盐水溶于浓盐水,胶原蛋白和弹性蛋白胶原蛋白和弹性蛋白(结缔组织结缔组织)在上述溶剂中均不溶。在上述溶剂中均不溶。l不同种类动物的食物构成和肌肉的成分不同种类动物的食物构成和肌肉的成分,如家禽和牛的如家禽和牛的肌红蛋白和脂肪含量存在差异肌红蛋白和脂肪含量存在差异,这些变化会影响这些变化会影响分析方分析方法法的的回收率回收率或或干扰检测干扰检测,因此因此一种动物组织的残留分

28、析一种动物组织的残留分析方法对其他动物组织样品不一定适用方法对其他动物组织样品不一定适用。l例如例如,用水提取鸡肉和牛肉组织中呋喃唑酮用水提取鸡肉和牛肉组织中呋喃唑酮,回收率在回收率在75%以上以上;同样的方法提取猪肌肉样品同样的方法提取猪肌肉样品,回收率仅为回收率仅为10%,改用改用25%乙腈提取时回收率明显提高乙腈提取时回收率明显提高,推测呋喃唑酮与推测呋喃唑酮与猪肉中某种蛋白质结合较强。猪肉中某种蛋白质结合较强。l肝或肾肝或肾组织为代谢或排泄器官组织为代谢或排泄器官,残留物浓度高残留物浓度高,消除缓慢消除缓慢,因此因此常被作为残留检测的靶组织常被作为残留检测的靶组织。(2)尿样尿样l尿液

29、的主要成分是水、尿素及盐类。它是一种良好的细尿液的主要成分是水、尿素及盐类。它是一种良好的细菌培养基菌培养基,因而需立即因而需立即冷藏冷藏或或防腐防腐处理。处理。l冷藏条件一般可置冷藏条件一般可置4 冰箱内。冰箱内。l若欲在室温下保存若欲在室温下保存,应在收集尿样后应在收集尿样后,立即加入防腐剂。立即加入防腐剂。常用的常用的防腐剂防腐剂有甲苯、氯仿或改变尿液的酸碱性有甲苯、氯仿或改变尿液的酸碱性,以抑以抑制细菌的繁殖。制细菌的繁殖。l加入的防腐剂是否干扰测定或与被测组分发生化学反应加入的防腐剂是否干扰测定或与被测组分发生化学反应,应由实验验证应由实验验证,以便选取合适的防腐措施。以便选取合适的

30、防腐措施。l在所有体液样品中在所有体液样品中,尿样最容易获得尿样最容易获得,并且样品量多并且样品量多,内含内含药物药物(母体药物及代谢物母体药物及代谢物)浓度高浓度高;正常尿液中仅含微量蛋正常尿液中仅含微量蛋白质白质,不需去蛋白不需去蛋白处理。处理。l尿中药物大多呈尿中药物大多呈结合状态结合状态,主要以主要以葡萄苷酸葡萄苷酸和和硫酸酯硫酸酯结结合物存在合物存在,因此无论直接测定或萃取分离之前因此无论直接测定或萃取分离之前,都必须将都必须将结合态的药物水解结合态的药物水解,使药物游离出来。使药物游离出来。l尿样尿样pH变化范围大变化范围大,分析前需分析前需调节调节到一致的到一致的pH值值。(3)

31、血样血样l血液采集好之后血液采集好之后,由于激活了一系列凝血因子由于激活了一系列凝血因子,血血中的中的纤维蛋白原纤维蛋白原形成形成纤维蛋白纤维蛋白,血液逐渐凝固血液逐渐凝固,上上层析出澄清的黄色液体称为层析出澄清的黄色液体称为血清血清(serum)。l分离血清时分离血清时,可将凝结后的血液置离心机中离心可将凝结后的血液置离心机中离心,将上层血清转入另外容器中保存将上层血清转入另外容器中保存,得到的血清得到的血清,一一般可占全血量的般可占全血量的40%左右。左右。l若采血后立即将血液转入有抗凝剂若采血后立即将血液转入有抗凝剂(常用常用肝素肝素)的的容器中容器中,并轻轻摇匀并轻轻摇匀,则血液不再凝

32、结则血液不再凝结,放置后血细放置后血细胞会缓缓沉降胞会缓缓沉降,12h沉降完全沉降完全,上层的黄色液体称上层的黄色液体称为为血浆血浆(plasma)。l离心使上层血浆与下层血细胞充分分离离心使上层血浆与下层血细胞充分分离,将血浆将血浆转移至另一容器内供分析。转移至另一容器内供分析。l血液通过抗凝获得的血浆量血液通过抗凝获得的血浆量,一般比血清稍多一般比血清稍多,接接近全血量的近全血量的50%。l若抗凝血不离心若抗凝血不离心,保持血浆和血细胞混合在一起保持血浆和血细胞混合在一起,则称为则称为全全血血(whole blood)。l全血样品可冷冻贮存或直接供分析。全血样品可冷冻贮存或直接供分析。l全

33、血样品放置或自贮存处取出解冻之后全血样品放置或自贮存处取出解冻之后,可明显分为上、可明显分为上、下两层下两层,上层上层为为血浆血浆,下层下层为为血细胞血细胞,但轻微摇动即可混匀。但轻微摇动即可混匀。l血浆和血清的化学成分与组织液相近血浆和血清的化学成分与组织液相近,测定血浆或血清中测定血浆或血清中药物浓度药物浓度,比全血更能反映作用部位药浓的变化比全血更能反映作用部位药浓的变化,测定方法测定方法一般也可互相通用。因为从抗凝血制备血浆的速度较快一般也可互相通用。因为从抗凝血制备血浆的速度较快,并且分离出的血浆量比血清多并且分离出的血浆量比血清多,所以应用血浆比较方便所以应用血浆比较方便;若若血浆

34、中含有抗凝剂对测定有影响血浆中含有抗凝剂对测定有影响,则应使用血清样品。则应使用血清样品。l通常通常药物药物在血浆中均与血浆蛋白在血浆中均与血浆蛋白(白蛋白、球蛋白、糖白蛋白、球蛋白、糖蛋白、脂蛋白蛋白、脂蛋白)发生一定程度的发生一定程度的结合结合,一些药物甚至蛋白一些药物甚至蛋白结合率可达结合率可达90%以上。因此以上。因此在萃取之前在萃取之前,必须将结合态必须将结合态的药物游离出来的药物游离出来。(4)奶样奶样l牛奶的含水量约牛奶的含水量约87%,蛋白质蛋白质(以酪蛋白为主以酪蛋白为主)为为3.3%,脂脂肪肪(甘油三酯甘油三酯)为为3.7%,糖类糖类(乳糖乳糖)为为4.7%,以及一些无机以

35、及一些无机盐、维生素和酶类盐、维生素和酶类(过氧化物酶、脂肪酶等过氧化物酶、脂肪酶等)。l奶是一种复杂的非均相体系。奶是一种复杂的非均相体系。l乳脂球的主要成分为乳脂乳脂球的主要成分为乳脂,表面包以由酪蛋白、类脂、表面包以由酪蛋白、类脂、酶、无机盐和水分构成膜酶、无机盐和水分构成膜,使乳球能稳定地悬浮在奶中使乳球能稳定地悬浮在奶中并保护内部的乳脂免遭脂肪酶的水解并保护内部的乳脂免遭脂肪酶的水解,当剧烈振荡时球当剧烈振荡时球膜被破坏膜被破坏,脂肪球即相互黏合析出。脂肪球即相互黏合析出。l奶中还含有大量由酪蛋白或脂蛋白构成的胶束体系奶中还含有大量由酪蛋白或脂蛋白构成的胶束体系,当当酸化或加热时酸化

36、或加热时,胶束结构解体胶束结构解体,蛋白质沉淀析出。蛋白质沉淀析出。l非解离性的或极性较低的药物非解离性的或极性较低的药物易由血浆向奶中扩散易由血浆向奶中扩散,导导致奶中残留。致奶中残留。l与血浆样品类似与血浆样品类似,奶中的药物可与蛋白质结合奶中的药物可与蛋白质结合。l因此在萃取之前因此在萃取之前,必须必须将结合态的药物游离出来将结合态的药物游离出来。(5)蛋蛋l禽蛋包括蛋黄和蛋清。禽蛋包括蛋黄和蛋清。l蛋黄的含水量约蛋黄的含水量约50%、蛋白质、蛋白质16.5%、脂肪、脂肪33%、糖类、糖类0.2%,以及一些无机盐、维生素和酶类以及一些无机盐、维生素和酶类(淀粉酶、脂肪酶、淀粉酶、脂肪酶、

37、磷酸酶、肽酶和过氧化氢酶磷酸酶、肽酶和过氧化氢酶)l蛋清含水量达蛋清含水量达88%,蛋白质蛋白质10.5%和极少量的碳水化合物和极少量的碳水化合物和脂肪。和脂肪。l与蛋清相比较与蛋清相比较,蛋黄基本上为疏水性环境蛋黄基本上为疏水性环境,低极性药物的低极性药物的残留较多残留较多。l如果需要分别测定蛋黄和蛋清中的残留如果需要分别测定蛋黄和蛋清中的残留,最好将刚产出最好将刚产出后的蛋分离蛋黄和蛋清后的蛋分离蛋黄和蛋清,避免药物由蛋黄向蛋清扩散。避免药物由蛋黄向蛋清扩散。l与尿液类似与尿液类似,蛋成分的蛋成分的pH变化范围大变化范围大,分析前需分析前需调节调节pH值值。二、样品制备和贮存二、样品制备和

38、贮存l样品的制备方法，依据样品的制备方法，依据法规要求法规要求的不的不同和同和食品本身特性食品本身特性的差异而不同。的差异而不同。l有的要以全样计有的要以全样计,有的以脂肪计。一般有的以脂肪计。一般来说是取来说是取可食部分可食部分制备样品制备样品(除非有其除非有其他要求他要求)。l如对于肉类有的国家法枧规定要如对于肉类有的国家法枧规定要以脂以脂肪计算肪计算食品安全危害物的量食品安全危害物的量,有的要求有的要求以以全样全样来计算。来计算。l为保证取样的准确性、减少污染和便于保存为保证取样的准确性、减少污染和便于保存,对对组织样组织样品品宜分取一个宜分取一个完整解剖部分完整解剖部分,如一个肝叶或一

39、侧完整的如一个肝叶或一侧完整的肾肾,小动物小动物应摘取应摘取完整的脏器完整的脏器,并立即密封。样品被绞碎并立即密封。样品被绞碎或匀浆后进行缩分。或匀浆后进行缩分。l生物样品采样后除立即分析外生物样品采样后除立即分析外,都需要在适当条件下保都需要在适当条件下保存存,目的是避免被测组分发生分解或产生其他化学变化。目的是避免被测组分发生分解或产生其他化学变化。贮存贮存l冷冻保存冷冻保存是最常用的方法是最常用的方法,一般冷冻温一般冷冻温度为度为-20,此时生物样品如血浆、尿液此时生物样品如血浆、尿液和组织样品均被冻凝和组织样品均被冻凝,可以终止样品中可以终止样品中酶的活性酶的活性,又可以贮存样品。又可

40、以贮存样品。l在某些情况下若收集的样品来不及冷在某些情况下若收集的样品来不及冷冻处理冻处理,可先将其可先将其置冰屑置冰屑中中,然后再行然后再行冷冷冻冻贮存贮存,临用前再临用前再融化融化并放至室温后供并放至室温后供测定。测定。l对于一些对于一些易代谢的药物易代谢的药物,如磺胺类、聚醚类、同化激素如磺胺类、聚醚类、同化激素,它们的它们的肝和肾脏样品不宜长期存放肝和肾脏样品不宜长期存放,理想的冷冻温度理想的冷冻温度应应为为-40-80 。l为防止含酶样品中被测组分进一步代谢为防止含酶样品中被测组分进一步代谢,采样后必须立采样后必须立即即终止酶的活性终止酶的活性。常采用的。常采用的方法方法有有:液氮中

41、快速冷冻液氮中快速冷冻、微波照射微波照射、匀浆及沉淀匀浆及沉淀、加入酶活性阻断剂加入酶活性阻断剂(通常加入通常加入氟化钠氟化钠)等。等。l某些生物样品中的药物易被空气某些生物样品中的药物易被空气氧化氧化,如儿茶酚类中的如儿茶酚类中的阿朴吗啡阿朴吗啡,具有具有邻苯二酚邻苯二酚结构结构,易被空气氧化产生易被空气氧化产生醌类醌类杂杂质质,若收集的血浆样品若收集的血浆样品不加抗氧剂不加抗氧剂直接在直接在-15 冷藏冷藏,仅能仅能稳定稳定4周周;但加入但加入抗坏血酸抗坏血酸后后,则可稳定则可稳定10周。周。l冷冻时冷冻时,若使用若使用玻璃容器玻璃容器贮存样品贮存样品,需注意防止温度骤降需注意防止温度骤降

42、使容器使容器破裂破裂,造成样品损失或污染。而造成样品损失或污染。而塑料容器塑料容器常含有常含有高沸点的增塑剂高沸点的增塑剂,可能释放到样品中造成可能释放到样品中造成污染污染,而且还会而且还会吸留吸留某些药物某些药物,引起分析误差。引起分析误差。l某些药物特别是某些药物特别是碱性药物碱性药物还会还会被玻璃容器表面吸附被玻璃容器表面吸附,影影响样品中药物的定量回收响样品中药物的定量回收,因此因此,必要时应将玻璃容器进必要时应将玻璃容器进行行硅烷化硅烷化处理。处理。三、样品均匀化三、样品均匀化l对于血浆、奶、尿液样品对于血浆、奶、尿液样品,可置可置涡旋混合器涡旋混合器上混匀上混匀,以免以免造成测定误

43、差。造成测定误差。l对于肌肉、组织、粪便等对于肌肉、组织、粪便等半固体样品半固体样品都存在均匀化这一都存在均匀化这一问题。问题。l其中肌肉和组织样品可置其中肌肉和组织样品可置匀浆机匀浆机中均质中均质,粪便样品可加粪便样品可加入少量甲醇或其他液体搅匀。入少量甲醇或其他液体搅匀。l同时还应注意同时还应注意取样取样的的代表性代表性问题。问题。四、去蛋白处理四、去蛋白处理l生物样品如肝脏、肾脏、血浆等含有大量的蛋白质生物样品如肝脏、肾脏、血浆等含有大量的蛋白质,它们能它们能结合药物结合药物,因此对于某些药物的测定因此对于某些药物的测定,必须先将与蛋白结合的必须先将与蛋白结合的药物游离之后再作进一步处理

44、。药物游离之后再作进一步处理。为什么要除去蛋白？为什么要除去蛋白？l因为生物样品含有大量的蛋白质因为生物样品含有大量的蛋白质,蛋白质在测定过程中会形蛋白质在测定过程中会形成成泡沫泡沫、浑浊浑浊或出现或出现沉淀沉淀而干扰测定。蛋白质还会而干扰测定。蛋白质还会污染仪污染仪器器或或恶化测定条件恶化测定条件,如直接进样用液相色谱分析含蛋白质的如直接进样用液相色谱分析含蛋白质的体液样品时体液样品时,蛋白质会沉积在色谱柱上蛋白质会沉积在色谱柱上,这不仅影响柱效这不仅影响柱效,而而且大大缩短色谱柱的使用寿命。且大大缩短色谱柱的使用寿命。l目前已有很多去蛋白方法可供使用目前已有很多去蛋白方法可供使用,但使用各

45、种方法之前应但使用各种方法之前应了解该方法是否会导致生物样品中的了解该方法是否会导致生物样品中的药物发生分解药物发生分解或或影响影响药物的提取药物的提取等。等。注意方法选择注意方法选择l通常去蛋白过程是将通常去蛋白过程是将蛋白质变性处理蛋白质变性处理后后,把与蛋白结合把与蛋白结合的药物解离出来的药物解离出来,离心分离离心分离以除去蛋白。以除去蛋白。l通常除蛋白的方法是在含蛋白样品中加入适当的通常除蛋白的方法是在含蛋白样品中加入适当的沉淀剂沉淀剂或或变性剂变性剂,使使蛋白质脱水蛋白质脱水而沉淀而沉淀(如有机溶剂、中性盐如有机溶剂、中性盐),有有的是由于蛋白质形成的是由于蛋白质形成不溶性盐不溶性盐

46、而析出而析出(如一些酸类如一些酸类:三氯三氯醋酸、高氯酸、磷酸、苦味酸醋酸、高氯酸、磷酸、苦味酸),离心后取上清液用于分离心后取上清液用于分析。析。1、有机溶剂沉淀、有机溶剂沉淀l甲醇、乙腈、丙酮和乙醇是沉淀蛋白常用的有机溶剂甲醇、乙腈、丙酮和乙醇是沉淀蛋白常用的有机溶剂,尤以尤以甲醇甲醇和和乙腈乙腈为最常用。为最常用。l甲醇与蛋白形成甲醇与蛋白形成絮状沉淀絮状沉淀易于离心分离易于离心分离,得到澄清的上得到澄清的上清液清液;l乙腈与蛋白形成乙腈与蛋白形成致密沉淀致密沉淀,易离心除去易离心除去,沉淀效率较甲醇沉淀效率较甲醇高。高。l使用时应加入足量的沉淀剂使用时应加入足量的沉淀剂,通常加入量为样

47、品体积的通常加入量为样品体积的1.52倍倍。2、酸性沉淀、酸性沉淀l常用的酸性沉淀剂有常用的酸性沉淀剂有三氯醋酸和高氯酸三氯醋酸和高氯酸,其他还有钨其他还有钨酸、钼酸、磷钨酸、磷钼酸和苦味酸等。酸、钼酸、磷钨酸、磷钼酸和苦味酸等。l酸性沉淀剂能同蛋白质的阳离子形成不溶盐而沉淀酸性沉淀剂能同蛋白质的阳离子形成不溶盐而沉淀,必要条件必要条件是是溶液的溶液的pH要低于蛋白的等电点要低于蛋白的等电点。l加入沉淀剂之后立即形成白色沉淀加入沉淀剂之后立即形成白色沉淀(必要时可加热使必要时可加热使沉淀完全沉淀完全),离心后可得到澄明的上清液。离心后可得到澄明的上清液。l三氯醋酸三氯醋酸(常用常用10%溶液溶

48、液)沉淀蛋白的作用很强沉淀蛋白的作用很强,因此因此最常使用最常使用,但应注意试剂中含有的杂质但应注意试剂中含有的杂质,将它们引入将它们引入离心后的上清液中离心后的上清液中,可能会干扰药物的分析。可能会干扰药物的分析。l其次应注意其次应注意,当上清液再用乙醚等有机溶剂萃取时当上清液再用乙醚等有机溶剂萃取时,三氯醋酸则连同溶入其内的杂质会进入有机相三氯醋酸则连同溶入其内的杂质会进入有机相,也可也可能干扰药物的分析。能干扰药物的分析。l采用采用高氯酸高氯酸作为蛋白沉淀剂时作为蛋白沉淀剂时,其其优点优点是残留在上清是残留在上清液中的液中的ClO4-可加入钾盐除去。可加入钾盐除去。3、无机盐沉淀、无机盐

49、沉淀l一些无机盐如硫酸铵、硫酸钠和氯化钠等一些无机盐如硫酸铵、硫酸钠和氯化钠等,能使蛋白质胶体能使蛋白质胶体脱水并中和其电荷脱水并中和其电荷,使蛋白质失去胶体性质而沉淀下来。使蛋白质失去胶体性质而沉淀下来。l无机盐中以无机盐中以硫酸铵硫酸铵最常用。最常用。l常用的常用的重金属盐类重金属盐类有汞盐、铜盐和锌盐等有汞盐、铜盐和锌盐等,它们能与蛋白质它们能与蛋白质形成不溶盐而沉淀析出。形成不溶盐而沉淀析出。l如可用如可用HgCl2作为蛋白沉淀剂处理血浆样品作为蛋白沉淀剂处理血浆样品,离心后用比色离心后用比色法测定上清液中的水杨酸浓度。法测定上清液中的水杨酸浓度。l采用蛋白沉淀剂采用蛋白沉淀剂,只要加

50、入足量只要加入足量,一般可除去一般可除去98%以上以上的蛋的蛋白。蛋白沉淀后是否与之相结合的药物能游离释出白。蛋白沉淀后是否与之相结合的药物能游离释出,目前尚目前尚缺乏系统的研究资料缺乏系统的研究资料,仅观察到少数现象。仅观察到少数现象。4、透析法、透析法l透析法与超滤法也是除去样品中蛋白的方法。透析法与超滤法也是除去样品中蛋白的方法。l透析法很透析法很费时费时,溶质透过膜的程度与被测物的性质、溶质透过膜的程度与被测物的性质、温度有关温度有关,膜需常常膜需常常更新更新,很难自动化很难自动化,因此透析法一因此透析法一般不用于常规分析般不用于常规分析,而用于药物在生物样品中蛋白结而用于药物在生物样