Chapter7定量及系统适应性1课件.ppt

1、定量与系统适应性 准度与精度 外标法定量 内标法定量 标准加入法定量 括号式程序 系统适应性重现性好的定量重现性好的色谱方法重现性好的样品制备 误差 E = O - T O 观测到的值 T 真值 色谱方法是相对定量方法,如不考虑损失及杂质干扰等因素,其结果同“标样”的准确程度密切相关 相关系数 其中X及Y分别代表不同方法的实验值及平均值 22)()()(YYXXYYXXriiii好的精度不好的精度 测量的精密度)100(%12)(XX CVNXiXNiX变异系数变异系数标准偏差标准偏差平均值平均值 测量精密度的计算 配置一系列已知浓度的标准样储备标样储备标样外标法校正曲线标样的配制外标法校正曲

2、线标样的配制05010015020025001,0002,0003,0004,0005,000样品浓度响应值峰面积()标准曲线标准曲线0.000.050.100.150.200.250.300.000.501.001.502.002.503.003.504.004.505.005.506.006.507.00Minutes0.000.050.100.150.200.250.300.000.501.001.502.002.503.003.504.004.505.005.506.006.507.00Minutes0.000.050.100.150.200.250.300.000.501.001.5

3、02.002.503.003.504.004.505.005.506.006.507.00Minutes外标法校正曲线外标法校正曲线iXiiiXARFCXRXCRFii样品响应值样品响应值未知组分的浓度未知组分的浓度标样响应值标样响应值标样浓度标样浓度校正因子校正因子 )()()()( 计算公式 特点无需各组份都被检出、洗脱需要标样标样及样品测定的条件要一致进样体积要准确 配制一系列浓度的标样，其中加有内标样储备标样储备内标样工作溶液0.000.200.400.600.801.001.201.401.601.802.002.503.003.504.004.505.005.506.00volts

4、MinutesM ethylParabenEthylParabenPropylParabenButylParaben05010015020025001020304050样品浓度样品浓度标样峰面积标样峰面积内标样峰面积内标样峰面积标准曲线标准曲线 计算公式 特点无需各组份都被检出、洗脱需要标样，需要内标物结果与进样体积无关.)()()()().(siiXiiiXAARFCXCXRSIRRFii内内标标峰峰面面积积样样品品峰峰面面积积未未知知组组分分的的浓浓度度标标样样浓浓度度标标样样响响应应值值内内标标样样响响应应值值校校正正因因子子 对内标物的要求化学结构与待测组分相似(同系物、异构体)在样品

5、中不存在不与样品中组份发生任何化学反应保留值与待测组分接近浓度（响应值）与待测组分相当其色谱峰与其它色谱峰分离好全部平均全部平均平均平均不平均不平均不平均不平均不平均不平均平均平均2平均平均1平均平均1平均平均2最低浓度标样最高浓度标样所希望的检测范围线性问题灵敏度问题检测器响应样品浓度 校正曲线只有在建立这条曲线的浓度范围内有效，高或低于这些点都可能引起计算错误定义可接受的范围限度定义可接受的范围限度浓度理想的实际的背景吸收吸收值21010 HPLC 数据的精度与准度来自于一个性能良好的色谱系统。 系统适应性试验意味着检查整个系统是在可接受的限度内工作的。 仪器、电子的、分析上的操作，以及样

6、品组成了一个完整的系统，可以作为一个整体进行评估。系统适应性试验即是建立在这一概念上的。 United States Pharmacopeia / National Formulary美国药美国药典典/国家处方集（简称USP/NF）。最新版为USP31-NF26。 European Pharmacopoeia (Ph. Eur.) ，现已经出版到EP6.5。 日本药局方日本药局方（The Japanese Pharmacopoeia）由日本药局方日本药局方编集委员会编篡，由厚生省颁布执行。日本药典日本药典最新版是2001年出版的第十四改正版。 容量因子，k=（tr-t0）/t0 重现性 相对保

7、留， =k2/k1 分离度，Rs=(tr2-tr1)/(1/2)(w2+W1) 拖尾因子，T=Wx/2f 理论塔板数，N=16(tr/w)2参数参数推荐值推荐值容量因子（k）目标峰应当与其他峰以及死体积很好地分开。通常k2.0重复性理想的RSD1.0（n5） 相对保留如果保留时间是稳定的则不是必须的分离度（Rs）目标峰与相邻的干扰物质洗脱峰（杂质、辅料、降解产物或内标物）之间的Rs应该2或者=2.拖尾因子（T）T2理论塔板数（N）通常理论塔板数应当2000 当需要确保结果的重现性以及色谱系统的性能指标时，进行系统适应性试验 在分析未知物之前或之后 在色谱条件改变之后 协助验证系统（整体验证）

8、系统的故障排除 分离 为了确保系统在指标内，记录分离标准的趋势，例如分离度，拖尾因子，理论塔板数 重现性 标样分析的总结，确保系统在特定的重现性指标内工作 系统适应性样品 主要物质以及副产物的混合物，用于测定系统适应性。 标准物质 已知浓度的样品 控制样 已知浓度的样品，被当做未知物进行测定，用于计算测定结果与实际值之间的偏差 系统适应性样品应该至少在一系列的样品测定前后运行 控制样应该贯穿整个样品序列，按照一定的间隔运行 如果使用一个含有以下内容的报告方法报告结果： RSD 棒图 需要监测的参数的综合统计表 使用RSD棒状图和综合统计表监测系统性能后，可以使您对系统精度和准度的可接受程度，以

9、及系统是适用于运行未知样的这些内容非常有信心 设置时需小心 不要比仪器的指标设置得更窄 误差下限（Lower error limit, LCL） 误差上限（Upper error limit, UCL） 目标值 警告下限（Lower warning limit） 警告上限（Upper warning limit） 综合图中的限制可以标记出不能接受的值全局RSD棒状图 系统适应性软件允许通过查看峰的信息对系统进行故障排除： 保留时间 分离度（Rs），美国药典分离度 容量因子（k） 分离因子（选择性，） 柱效（理论塔板数，N） 拖尾或对称因子 基线噪音与漂移溶剂瓶泵进样器检测器保留时间拖尾RSD%面积理论塔板数噪音与漂移线性分离度质量控制图 定量是基于色谱峰响应与待测物浓度存在一定关系的基础上的 不同的定量方式包括 外标法 内标法 标准加入法 括号式程序 系统适应性是为了确保色谱系统适用于分析。 使用内标的目的是什么？ 内标物是加到： 所有标准溶液中的 所有样品溶液（未知物）中的 所有的标准与样品溶液中