免疫学免疫血清学技术课件.ppt

1、第第1节节 免疫血清学技术概述免疫血清学技术概述 免疫血清学技术类型免疫血清学技术类型：凝集试验、沉淀试：凝集试验、沉淀试验、标记抗体技术（免疫荧光抗体技术、验、标记抗体技术（免疫荧光抗体技术、免疫酶标记技术、放射免疫测定）、中和免疫酶标记技术、放射免疫测定）、中和试验等试验等血清学反应的一般特点血清学反应的一般特点 特异性和交叉性特异性和交叉性 抗原与抗体结合机理抗原与抗体结合机理 血清学反应的影响因素：电解质、温度、血清学反应的影响因素：电解质、温度、酸碱度酸碱度 带现象：前带带现象：前带 后带后带第第2节节 细胞免疫检测技术细胞免疫检测技术 检测机体血液中的检测机体血液中的T细胞数量细胞

2、数量 E玫瑰花环试验玫瑰花环试验 T细胞酸性细胞酸性醋酸萘酯酶测定醋酸萘酯酶测定 检测机体血液中检测机体血液中T细胞转化功能细胞转化功能 淋巴细胞转化试验淋巴细胞转化试验 巨噬细胞移动抑制试验巨噬细胞移动抑制试验 T细胞活化试验细胞活化试验第第3节节 血清学技术的应用及发展血清学技术的应用及发展趋势趋势 疫病诊断疫病诊断 动植物生理活性物质研究动植物生理活性物质研究 物种及微生物鉴定物种及微生物鉴定 动植物形状的免疫标记动植物形状的免疫标记 生物制品研究生物制品研究 致病机理研究致病机理研究 分子生物学研究分子生物学研究 发展趋势发展趋势第第14章章 凝聚性试验凝聚性试验 第第1节节 凝集试验

3、凝集试验 直接凝集试验：颗粒性抗原直接凝集试验：颗粒性抗原 间接凝集试验：间接血凝实验、乳胶凝集间接凝集试验：间接血凝实验、乳胶凝集试验、炭素凝集试验试验、炭素凝集试验 直接凝集试验直接凝集试验：颗粒性抗原：颗粒性抗原基本原理：基本原理： 电解质电解质颗粒性抗原颗粒性抗原 + 相应抗血清相应抗血清 抗原颗粒凝集抗原颗粒凝集(细菌、红细胞细菌、红细胞) 比例适合比例适合 凝集原凝集原 凝集素凝集素 过多过多 前带现象前带现象 （稀释血清）（稀释血清） 方法：玻片法、试管法、微量法方法：玻片法、试管法、微量法间接凝集试验间接凝集试验：基本原理：基本原理 可溶性抗原（或抗体）可溶性抗原（或抗体）+惰

4、性载体（聚苯乙惰性载体（聚苯乙烯乳胶微粒、炭粒、绵羊红细胞等）烯乳胶微粒、炭粒、绵羊红细胞等） 抗抗原（或抗体）致敏载体原（或抗体）致敏载体 抗原（抗体）致敏载体抗原（抗体）致敏载体+相应抗体（或抗原相应抗体（或抗原） 被动载体凝集（间接乳胶凝集、间接炭被动载体凝集（间接乳胶凝集、间接炭素凝集、间接红细胞凝集等素凝集、间接红细胞凝集等 ）第第2节节 沉淀实验沉淀实验 电解质电解质可溶性抗原可溶性抗原 +免疫血清免疫血清 出现沉淀现象出现沉淀现象(血清蛋白、病毒血清蛋白、病毒) （抗体）（抗体） 比例适合比例适合 沉淀原沉淀原 沉淀素沉淀素 比例不适合比例不适合 不出现沉淀现象不出现沉淀现象 容

5、易过多容易过多 后带现象后带现象（稀释）（稀释） 环状沉淀试验环状沉淀试验 双向单扩散（辐射扩散）双向单扩散（辐射扩散） 双向双扩散双向双扩散 免疫电泳免疫电泳 对流免疫电泳对流免疫电泳 火箭免疫电泳火箭免疫电泳环状沉淀试验环状沉淀试验原理：小试管内，下层沉原理：小试管内，下层沉 淀素与上层沉淀原淀素与上层沉淀原 在界面应，形成白在界面应，形成白 色沉淀环。色沉淀环。用途：检测皮毛中的炭疽用途：检测皮毛中的炭疽 杆菌抗原（杆菌抗原（Ascoli试验）试验）免疫荧光抗体技术免疫荧光抗体技术 原理：原理： 异硫氰酸荧光素（异硫氰酸荧光素（FITC）原理：荧光素（原理：荧光素（F）+ Ab AbF(

6、FITC) AbF + Ag Ag- AbF 紫外光紫外光 Ag- AbF 标记抗体的制备：抗原标记抗体的制备：抗原免疫动物免疫动物 抗抗体体提取提取IgG标记标记标记抗体的提纯标记抗体的提纯标记抗体的鉴定标记抗体的鉴定 荧光抗体染色：标本制备荧光抗体染色：标本制备染色（直接染色（直接法、间接发）法、间接发） 应用：用应用：用AbF检测抗原检测抗原 （定性、定位）（定性、定位） 特点：敏感，需荧光显微镜特点：敏感，需荧光显微镜免疫酶标记技术免疫酶标记技术 原理：原理： 常用标记酶：辣根过氧化物酶（常用标记酶：辣根过氧化物酶（HRP） 酶标抗体的制备：抗原酶标抗体的制备：抗原免疫动物免疫动物 抗

7、体抗体提取提取IgG标记（戊二醛法、过碘酸钠法）标记（戊二醛法、过碘酸钠法）标记抗体标记抗体的提纯的提纯标记抗体的鉴定标记抗体的鉴定 常用免疫酶技术：免疫酶组织化学染色技术、酶常用免疫酶技术：免疫酶组织化学染色技术、酶联免疫吸附试验（联免疫吸附试验（ELISA）、）、斑点酶联免疫吸附试斑点酶联免疫吸附试验（验（Dot-ELISA） 应用：应用：放射免疫分析放射免疫分析 原理：竞争性原理：竞争性RIA 固相夹心固相夹心RIAAg*(F)+Ab Ag*-Ab(B) + Ag Ag-Ab标记用同位素：标记用同位素：3H、125I、32P、35S常用方法：液相放射免疫测定、固相非竞争放射常用方法：液相

8、放射免疫测定、固相非竞争放射免疫测定免疫测定应用：应用：用于药物、激素、酶、肿瘤抗原等测定用于药物、激素、酶、肿瘤抗原等测定 中和试验（病毒、毒素中和试验）中和试验（病毒、毒素中和试验）原理：病毒与抗血清中抗体特异结合后失去感原理：病毒与抗血清中抗体特异结合后失去感 染易感动物、鸡或鸭胚、细胞活性染易感动物、鸡或鸭胚、细胞活性例例1 -NDV 911d鸡胚鸡胚 2448h鸡胚死亡鸡胚死亡 -NDV+抗血清抗血清 911d鸡胚鸡胚 鸡胚不死亡鸡胚不死亡例2 口蹄疫病毒(FMDV) 47d乳鼠 乳鼠死亡 FMDV+抗血清 47d乳鼠 乳鼠不死亡例3 FMDV 仔猪肾传代细胞(IB-RS-2)单层细

9、胞 细胞病变(CPU)：变圆、成串、空泡、变形、脱落、裂解FMDV+抗血清 IB-RS-2单层细胞 细胞无病变CPU用途：用途：1.用已知血清鉴定病毒用已知血清鉴定病毒诊断病毒病诊断病毒病2.用已知病毒检测血清抗体用已知病毒检测血清抗体诊断病毒感诊断病毒感染，测定病毒免疫血清效价（中和价）染，测定病毒免疫血清效价（中和价）免疫检测新技术免疫检测新技术 SPA免疫检测技术免疫检测技术 免疫胶体金检测技术：免疫胶体金光镜染免疫胶体金检测技术：免疫胶体金光镜染色法、免疫胶体金电镜染色法、胶体金免色法、免疫胶体金电镜染色法、胶体金免疫层析法等疫层析法等 免疫转印技术免疫转印技术 免疫核酸探针技术免疫核

10、酸探针技术细胞免疫技术细胞免疫技术一一E玫瑰花环试验玫瑰花环试验原理：人、猪、牛、羊等的原理：人、猪、牛、羊等的T细胞膜上的细胞膜上的CD2是绵羊红细胞受体，马、猪的是绵羊红细胞受体，马、猪的T细胞膜上的细胞膜上的CD2是豚鼠红细胞的受体。是豚鼠红细胞的受体。28 T细胞的E玫瑰花环试验E花环花环 二二. 酸性酸性醋酸萘酯酶测定醋酸萘酯酶测定 原理：酸性原理：酸性醋酸萘酯酶醋酸萘酯酶 醋酸萘酯醋酸萘酯 萘酚萘酚+醋酸离子醋酸离子 + 六偶氮副品红六偶氮副品红 红色反应物红色反应物 + 甲基绿甲基绿 红黑色颗粒红黑色颗粒 用途：用途：1.鉴别鉴别T、B细胞；细胞；2.血液中血液中T细胞计数细胞计

11、数 三淋巴细胞转化试验三淋巴细胞转化试验（一）形态学试验法（一）形态学试验法原理：原理：PHA+T细胞（有细胞（有PHA受体）受体） 转化转化 大的淋巴母细胞大的淋巴母细胞 显微镜观察计算转化率显微镜观察计算转化率 转化率转化率=(过渡型细胞过渡型细胞+母细胞母细胞)/200个淋巴细胞个淋巴细胞100%特点：简便，准确性较差特点：简便，准确性较差 30T细胞受PHA作用转化后的形态示意图 （二）（二）3H胸腺嘧啶核苷（胸腺嘧啶核苷（3H-T）掺入法掺入法原理：原理： 试验管试验管 对照管对照管 PHA+T细胞细胞+3H-TdR PHA+T细胞细胞 转化转化 转化转化 淋巴母细胞淋巴母细胞 淋巴母细胞淋巴母细胞 （掺入（掺入3H-TdR） （无无3H-TdR掺入）掺入） 液体闪烁仪测掺入液体闪烁仪测掺入 测测CPM 3H-T的脉冲数的脉冲数CPM 计算转化刺激指数计算转化刺激指数SI=试验管试验管CPM/对照管对照管CPM特点：准确，需昂贵的闪烁仪特点：准确，需昂贵的闪烁仪