病理实验技术课件.ppt

1、吴长德吴长德沈阳农业大学畜牧兽医学院沈阳农业大学畜牧兽医学院病理学的发展与使用的工具和方法的更新密切相关。病理学的发展与使用的工具和方法的更新密切相关。l用解剖刀剪进行尸体检查，开展了器用解剖刀剪进行尸体检查，开展了器官病理学；官病理学；l免疫组织化学促进了免疫病理学的形成；免疫组织化学促进了免疫病理学的形成；分子生物学带动分子病理学的兴起分子生物学带动分子病理学的兴起l因此，病理学经历了大体器官病理学、因此，病理学经历了大体器官病理学、细胞病理学、超微病理学、免疫病理学细胞病理学、超微病理学、免疫病理学和分子病理学的发展阶段，正在向和分子病理学的发展阶段，正在向21世世纪的信息病理学前进。纪

2、的信息病理学前进。l “技术是病理学之母技术是病理学之母”;l“病理学的理论和技术被视为一辆车的两病理学的理论和技术被视为一辆车的两个车轮个车轮.缺一不可缺一不可,互为依存互为依存,互相促进互相促进,两两者的结合决定着病理学的发展者的结合决定着病理学的发展 .”(第三军医大学第三军医大学程天民院士程天民院士)l验证临床诊断的正确性及治疗效果验证临床诊断的正确性及治疗效果l发现临床诊断和治疗上存在的问题，实发现临床诊断和治疗上存在的问题，实现病理和临床的交流与统一。现病理和临床的交流与统一。l病理组织的取材病理组织的取材l病理组织的固定病理组织的固定l病理组织切片技术病理组织切片技术l病理标本的

3、检查应包括大体和显微镜下病理标本的检查应包括大体和显微镜下观察两个方面，而正确的诊断往往取决观察两个方面，而正确的诊断往往取决于准确的显微镜下观察，因此制片质量于准确的显微镜下观察，因此制片质量的好坏将直接影响诊断结果的的好坏将直接影响诊断结果的准确性准确性，甚至会带来甚至会带来错误错误的结果。的结果。l一张好的切片与一张好的切片与取材取材和和固定固定都有密切都有密切的关系。对于免疫组织化学方法所需材的关系。对于免疫组织化学方法所需材料的取材，不仅要求组织细胞的料的取材，不仅要求组织细胞的形态形态完整完整保存，而且要最大程度的保存组织保存，而且要最大程度的保存组织或细胞成分的或细胞成分的抗原性

4、抗原性。l确定取材的部位和块数确定取材的部位和块数l编号或标记编号或标记l固定固定l摄影，并编号存档摄影，并编号存档l1.注意防止人为因素的影响注意防止人为因素的影响 l2.标本大小标本大小 l3.取材时间取材时间 l4.注意包埋方向注意包埋方向 l5.边缘标记边缘标记 l6.小标本的处理方法小标本的处理方法 l7注意特殊情况注意特殊情况 l8.取材数量取材数量 l9.清除多余成分清除多余成分 l10.重复取材重复取材 l11.核对核对 l12.组织存放组织存放 l应取应取2块或更多组织块，如有特殊包埋面，应块或更多组织块，如有特殊包埋面，应向技术人员说明向技术人员说明l取材后应立即用液氮速冻

5、，取材后应立即用液氮速冻，70或或40低低温冰箱保存。温冰箱保存。l制作冰冻切片的同一块组织（制作冰冻切片的同一块组织（“冰对冰对”）及其）及其剩余组织（剩余组织（“冰剩冰剩”，“冰余冰余”）须进一步做）须进一步做常规石蜡切片进行对照，尤以常规石蜡切片进行对照，尤以“冰对冰对”为重要，为重要，一方面可能因为病灶小，可能全部取在冰冻组一方面可能因为病灶小，可能全部取在冰冻组织块中，另一方面有利于病理医师对照阅片，织块中，另一方面有利于病理医师对照阅片，不断提高观察冰冻切片的能力不断提高观察冰冻切片的能力 l多用于临床肿瘤组织，除前面讲到的各多用于临床肿瘤组织，除前面讲到的各点注意事项外，还应注意

6、肿瘤的点注意事项外，还应注意肿瘤的部位、部位、形状、大小、颜色形状、大小、颜色以及与周围组织的关以及与周围组织的关系，系，包膜包膜是否完整肿瘤的体积（长、是否完整肿瘤的体积（长、宽、高），甚至重量。宽、高），甚至重量。l对肝肾穿刺的标本，潮湿对肝肾穿刺的标本，潮湿 的纱布、青霉的纱布、青霉素小瓶、固定液等素小瓶、固定液等l细胞标本取材和制片方法一般有细胞标本取材和制片方法一般有 1 印片法印片法 2 穿刺法穿刺法 3 沉淀法沉淀法 4 活细胞标本的制备活细胞标本的制备l常用于活检和手术标本，新鲜标本沿病常用于活检和手术标本，新鲜标本沿病灶中心剖开，将病灶区轻压于载片上，灶中心剖开，将病灶区轻压

7、于载片上，吹干后将其立即浸人固定液内吹干后将其立即浸人固定液内510min，取出自然干燥，低温储存取出自然干燥，低温储存。 l常用于淋巴结、软组织、肝、肾和肺等，常用于淋巴结、软组织、肝、肾和肺等，穿刺液少，可直接涂在载片上，细胞尽穿刺液少，可直接涂在载片上，细胞尽量涂均匀量涂均匀。 l主要用于胸水、腹水、尿液和脑脊液等主要用于胸水、腹水、尿液和脑脊液等体液多而细胞少的标本。体液多而细胞少的标本。 多用于科研，用于常规病理诊断的较少。多用于科研，用于常规病理诊断的较少。 标本主要来源于建株的标本主要来源于建株的培养细胞、短期培养细培养细胞、短期培养细胞和外周血胞和外周血等。等。 细胞可直接培养

8、在盖玻片上，固定后即可进行细胞可直接培养在盖玻片上，固定后即可进行染色观察或进行免疫组织化学染色或扫描电镜染色观察或进行免疫组织化学染色或扫描电镜标本制备。也可培养于培养瓶或培养板内，制标本制备。也可培养于培养瓶或培养板内，制成细胞悬液，收集一定的细胞还可进行涂片。成细胞悬液，收集一定的细胞还可进行涂片。可以经离心后，进行透射电镜标本制备。可以经离心后，进行透射电镜标本制备。 l固定的意义固定的意义 ： 保持细胞与生活时的形态相似，防止保持细胞与生活时的形态相似，防止自溶与腐败。自溶与腐败。 保持细胞内特殊的成分与生活状态时相保持细胞内特殊的成分与生活状态时相仿：经过固定，细胞内的一些蛋白质等

9、仿：经过固定，细胞内的一些蛋白质等可沉淀或凝固，使其定位在细胞内的原可沉淀或凝固，使其定位在细胞内的原有部位，有利于其后物质的确切定位。有部位，有利于其后物质的确切定位。对于不同的物质应选用不同的固定剂和对于不同的物质应选用不同的固定剂和固定方法固定方法便于区别不同组织成分：组织细胞内的便于区别不同组织成分：组织细胞内的不同物质经固定后产生不同的不同物质经固定后产生不同的折光率折光率，对染料产生不同的亲和力，经染色后容对染料产生不同的亲和力，经染色后容易区别。易区别。有利于切片：固定剂有硬化作用，使组有利于切片：固定剂有硬化作用，使组织硬度增加，便于制片织硬度增加，便于制片l甲醛；甲醛；40%

10、甲醛：水甲醛：水=1：9l4%的甲醛：的甲醛：10福尔马林福尔马林l渗透力强，固定均匀，对组织收缩小，渗透力强，固定均匀，对组织收缩小，具有硬化和防腐的作用，但破坏血红素，具有硬化和防腐的作用，但破坏血红素，使之失去原有颜色。使之失去原有颜色。l重铬酸钾水溶液（重铬酸钾水溶液（1-3%）；）；l苦味酸苦味酸(饱和水溶液饱和水溶液)；l升汞（升汞（5-7%）；）；l醋酸水溶液（醋酸水溶液（0.3-5%）；）；l铬酸水溶液（铬酸水溶液（0.5-1%）；）；l锇酸水溶液（锇酸水溶液（1-2%）；）；l丙酮、三氯醋酸、酒精（丙酮、三氯醋酸、酒精（80-95%）等。）等。l混合固定液（如混合固定液（如A

11、ltmamn液；液；B-5固定液；固定液；Carmoy液。液。l固定液的量：固定液的量：4-5到到15-20倍倍l固定时间：固定时间：24小时以上小时以上l组织块大小：组织块大小：3-4毫米厚毫米厚l固定温度：常温固定温度：常温25度，低温度，低温4度度l组织速冻的方法组织速冻的方法液氮法液氮法干冰丙酮法干冰丙酮法 异戊烷液氮法异戊烷液氮法 常用方法为液氮和干冰丙酮法。常用方法为液氮和干冰丙酮法。液氮速冻时，标本盒不能直接浸入液氮，液氮速冻时，标本盒不能直接浸入液氮，以免组织膨胀破碎；以免组织膨胀破碎；速冻的包埋剂应适量；速冻的包埋剂应适量；新鲜组织不能放入新鲜组织不能放入10冰箱内缓慢冷冰箱

12、内缓慢冷却，否则组织内水分可逐渐析出形成冰却，否则组织内水分可逐渐析出形成冰晶，造成组织结构破坏；晶，造成组织结构破坏；冷冻后的组织块应密封保存，防止失水；冷冻后的组织块应密封保存，防止失水；在组织块复温时，应在在组织块复温时，应在37加温速融，加温速融，自然复温将造成组织结构破坏。自然复温将造成组织结构破坏。l组织的脱水组织的脱水l透明透明l浸蜡浸蜡l包埋包埋l切片切片l切片脱蜡切片脱蜡l染色染色l脱水脱水l封片封片l组织固定组织固定24小时小时l流水冲洗流水冲洗12小时小时l脱水：脱水：80%、90%酒精各酒精各1小时，小时，95%酒酒精精2次，每次次，每次2小时，无水酒精小时，无水酒精1

13、小时小时l透明：投入二甲苯透明：投入二甲苯15-30分钟分钟l浸蜡：软蜡、硬蜡各浸蜡：软蜡、硬蜡各1小时小时l包埋：石蜡包埋：石蜡l冷凝：冷水浸泡冷凝：冷水浸泡l切片：切片：4-6ml烤片：烤片： 60 ，1-3小时小时l脱蜡：烤片冷凝后浸入二甲苯脱蜡：烤片冷凝后浸入二甲苯2次，每次次，每次10分钟；无水、分钟；无水、95%酒精各酒精各2分钟，分钟，90%、 80%、70%酒精各酒精各1/2-1分钟；分钟；l冲洗：自来水冲洗冲洗：自来水冲洗5-10分钟分钟l染色：苏木素染色染色：苏木素染色10-15分，水洗分，水洗1分；分；l分化：盐酸酒精分化分化：盐酸酒精分化1-5秒，流水冲洗秒，流水冲洗5-10分钟；分钟；l复染：伊红染色复染：伊红染色2-4分，水洗分，水洗1-3分；分；l脱水：脱水：70-80-95%各各1分钟，分钟，100%2次，次，每次各每次各2分钟；分钟；l透明：浸入二甲苯透明：浸入二甲苯2次，每次次，每次2-3分；分；l封片：中性树胶。封片：中性树胶。l染色结果染色结果： 胞核呈蓝色，胞浆淡红色，结缔组织鲜胞核呈蓝色，胞浆淡红色，结缔组织鲜红色，肌纤维深红色，红细胞橙红色，红色，肌纤维深红色，红细胞橙红色，软骨组织深蓝色。软骨组织深蓝色。