PCR技术及其应用ppt课件.ppt

1、ppt课件.1ppt课件.2PCR技术的建立ppt课件.3ppt课件.4XXppt课件.5ppt课件.6()40 50 60 70 80 90 100100 80 60 40 20ppt课件.7ppt课件.8 ppt课件.9ppt课件.10一、PCR的基本原理ppt课件.11ppt课件.12PCR Cycle - Step 1 - Denaturation Template DNA by Heat (95oC)Target SequenceTarget SequencePCR原理示意图原理示意图模板模板DNA的变性：模板的变性：模板DNA经加热至经加热至93左右一定时间后，左右一定时间后，使模

2、板使模板DNA双链或经双链或经PCR扩增形成的双链扩增形成的双链DNA解离，使之成解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；ppt课件.13PCR Cycle - Step 2 Temperature is lowered (Tm ) and primers anneal to target sequencesTarget SequenceTarget SequencePrimer 1Primer 253553533模板模板DNA与引物的退火与引物的退火(复性复性)：模板：模板DNA经加热变性成单链后，经加热变性成单链后，温度降至温度降

3、至55左右，引物与模板左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；单链的互补序列配对结合；ppt课件.14PCR Cycle - Step 3 - At 72 o C Taq DNA polymerase catalyses primer extension as complementary nucleotides are incorporatedTarget SequenceTarget SequencePrimer 1Primer 253553533Taq DNAPolymerase引物的延伸：引物的延伸：DNA模板模板-引物引物结合物在结合物在TaqDNA聚合酶聚合酶的作用下，以的作用

4、下，以dNTP为反应原为反应原料，靶序列为模料，靶序列为模板，按碱基配对板，按碱基配对与半保留复制原与半保留复制原理，合成一条新理，合成一条新的与模板的与模板DNA 链。链。ppt课件.15End of the 1st PCR Cycle Results in two copies of target sequenceTarget SequenceTarget Sequence每完成一每完成一个循环需个循环需24分钟，分钟， 23小时小时就能将待就能将待扩目的基扩目的基因扩增放因扩增放大几百万大几百万倍。倍。ppt课件.16PCR的基本原理重复30轮后230=1,073,741,824模板DN

5、A第1轮扩增第2轮扩增第3轮扩增第4轮扩增第5轮扩增第6轮扩增理想拷贝数=2n n 循环次数实际拷贝数=(1+x)n X 平均效率,约为0.85 n 循环次数 ppt课件.17Target AmplificationNo. ofNo. Amplicon CyclesCopies of Target122438416532664201,048,576301,073,741,8241 cycle = 2 Amplicon2 cycle = 4 Amplicon3 cycle = 8 Amplicon4 cycle = 16 Amplicon5 cycle = 32 Amplicon6 cycle

6、= 64 Amplicon7 cycle = 128 Ampliconppt课件.181234522557294时间（min）温度（）PCR反应适温延伸3高温变性1低温退火2重复13步2530轮目的DNA片段扩增100万倍以上DNA双螺旋DNA单链与引物复性DNA变性形成2条单链子链延伸DNA加倍ppt课件.19二、PCR反应体系ppt课件.201. 缓冲液ppt课件.21Mg2+ppt课件.222. dNTPppt课件.233. 引物ppt课件.24引物设计原则ppt课件.25ppt课件.26ppt课件.27ppt课件.28ppt课件.29ppt课件.30ppt课件.314. 模板ppt课件

7、.325. DNA聚合酶ppt课件.33ppt课件.34ppt课件.35ppt课件.36ppt课件.37三、PCR反应程序ppt课件.38ppt课件.39PCR反应中的注意事项ppt课件.40ppt课件.41一、在PCR 产物两端添加限制性酶切位点ppt课件.42二、A/T克隆法ppt课件.43ppt课件.44ppt课件.45ppt课件.46三、平末端DNA片段的克隆ppt课件.47ppt课件.48四、长片段DNA的PCR扩增ppt课件.49ppt课件.50ppt课件.51ppt课件.52一、反向PCRppt课件.53ppt课件.54二、利用接头的PCRppt课件.55三、热不对称交错PCRp

8、pt课件.56ppt课件.57原理ppt课件.58步骤ppt课件.59ppt课件.60ppt课件.61ppt课件.62应用ppt课件.63ppt课件.64ppt课件.65一、cDNA末端的快速扩增ppt课件.665-RACEppt课件.67巢式PCRppt课件.68二、差异显示PCRppt课件.69ppt课件.70ppt课件.71一、多重PCRppt课件.72ppt课件.73多重PCR检测DMD基因缺失ppt课件.74二、二、RAPD标记标记ppt课件.751. RAPD的基本概念和原理ppt课件.760.2kb0.5kb0.3kb0.2kb0.5kb0.3kb0.2kb0.3kb0.5kb品

9、系品系1 品系品系2ppt课件.772. RAPD的基本实验程序ppt课件.783. RAPD结果ppt课件.794. RAPD的优点ppt课件.805. RAPD的缺点ppt课件.81三、三、RFLP标记标记ppt课件.821. RFLP原理ppt课件.83ppt课件.84ppt课件.850.1kb0.2kb0.4kb0.5kb0.3kb0.4kb0.5kb(1)(2)0.2kb0.3kb0.5kb品系品系1 品系品系20.4kb0.1kb+ppt课件.862. RFLP的方法与步骤ppt课件.873. RFLP的优点ppt课件.884. RFLP的缺点ppt课件.89四、四、AFLP标记标

10、记ppt课件.901. AFLP的基本原理ppt课件.91如：如：EcoRI引物和引物和MseI引物引物ppt课件.922. AFLP的优缺点ppt课件.93五、SSR标记ppt课件.94六、ISSR标记ppt课件.95ppt课件.96ISSR的优点ppt课件.97ppt课件.98ppt课件.99一、实时荧光定量PCR的定量方式ppt课件.100ppt课件.101ppt课件.102ppt课件.103ppt课件.104二、荧光标记方式ppt课件.1051. 内掺式染料SYBR-GREEN I5353SGExcitationSGSGSGSGEmission ppt课件.1065353SGSGSGS

11、GSGExcitationEmission ppt课件.1072. 序列特异性探针Oligo 1: FluoresceinOligo 2: LC Red 640ExcitationEmissionTransferppt课件.108（1）Taqman探针ppt课件.109ppt课件.110RQ53535353ExcitationRQ QRQRExcitation双标记探针（双标记探针（Taqman Probe）ppt课件.111RQExcitationRQQRExcitationEmissionppt课件.112ppt课件.113535353533RQ5RQRQ35QRRREmissionExcitationQR引物特异性探针（引物特异性探针（Amplifluor Probe）ppt课件.114ppt课件.115全新全新4通道实时荧光定量通道实时荧光定量PCR仪仪 普通梯度普通梯度PCR仪仪ppt课件.116重点ppt课件.117此课件下载可自行编辑修改，供参考！感谢您的支持，我们努力做得更好！