1、一、教学目标：一、教学目标：1.简述简述DNA重组技术所需三种基本工具的作用。重组技术所需三种基本工具的作用。2.认同基因工程的诞生和发展离不开理论研究和认同基因工程的诞生和发展离不开理论研究和技术创新。技术创新。二、教学重点：二、教学重点：DNA重组技术所需的三种基本工具的作用。重组技术所需的三种基本工具的作用。三、教学难点：三、教学难点：基因工程载体需要具备的条件。基因工程载体需要具备的条件。转基因鲤鱼和普通鲤鱼能发红色荧光的转基因斑马鱼能在黑夜发光的转基因天使鱼DNA重组技术的基本工具重组技术的基本工具准确切割准确切割DNA的工具（的工具（“分子手术刀分子手术刀”）DNA片段的连接工具（
2、片段的连接工具（“分子缝合针分子缝合针”）基因转移工具（基因转移工具（“分子运输车分子运输车”）基因的大小以纳米计算，要对它进行剪切、基因的大小以纳米计算，要对它进行剪切、拼接等操作，没有非常精细的工具是不行的。进拼接等操作，没有非常精细的工具是不行的。进行基因操作最少需要以下三种工具：行基因操作最少需要以下三种工具：思考思考 在自然界中有一些生物的在自然界中有一些生物的DNA可能进入另一可能进入另一种生物的细胞中。我们有没有学过相关的实种生物的细胞中。我们有没有学过相关的实例？例？ 现今存在的生物为什么没有在长期的进化过现今存在的生物为什么没有在长期的进化过程中被外源程中被外源DNA的入侵而
3、灭绝，仍能保持一的入侵而灭绝，仍能保持一种稳定状态？种稳定状态？ 怎样才能使外来的怎样才能使外来的DNA失效从而保护自身？失效从而保护自身？黏性末端黏性末端平末端平末端 T磷磷酸酸二二酯酯键键 A 限制酶切割限制酶切割DNA后形成的末端后形成的末端黏性末黏性末端是如何形成的？端是如何形成的？ 限制酶切割限制酶切割DNA后形成的末端后形成的末端平末端平末端是如何形成的？是如何形成的？二、二、“分子缝合针分子缝合针”DNA”DNA连接酶连接酶切断的切断的DNA片段要与受体细胞的片段要与受体细胞的DNA连连接，你觉得可以用什么酶？接，你觉得可以用什么酶？DNA聚合酶和聚合酶和DNA连接酶有何相同点和
4、连接酶有何相同点和不同点？不同点？DNA连接酶连接酶DNA聚合酶聚合酶连接DNA链连接部位二、二、“分子缝合针分子缝合针”DNA”DNA连接酶连接酶DNA聚合酶和聚合酶和DNA连接酶的区别连接酶的区别双链单链在两DNA片段之间形成磷酸二酯键将单个核苷酸加到已存在的核酸片段的3末端的羟基上，形成磷酸二酯键 限制酶切割后有两种不同的结果，一种限制酶切割后有两种不同的结果，一种产生黏性末端，一种产生平末端。那么恢产生黏性末端，一种产生平末端。那么恢复它们的连接时，所用复它们的连接时，所用DNA连接酶是否可连接酶是否可以不加选择？以不加选择？E.coliDNAE.coliDNA连接酶：连接黏性末端连接
5、酶：连接黏性末端T T4 4DNADNA连接酶：连接黏性末端和平末端连接酶：连接黏性末端和平末端二、二、“分子缝合针分子缝合针”DNA”DNA连接酶连接酶 要让一个从甲生物细胞内取出来的要让一个从甲生物细胞内取出来的基因在乙生物体内进行表达，首先得将基因在乙生物体内进行表达，首先得将这个基因送到乙生物的细胞内去！能将这个基因送到乙生物的细胞内去！能将外源基因送入细胞的工具就是载体。外源基因送入细胞的工具就是载体。假如目的基因导入受体细胞后不能复制假如目的基因导入受体细胞后不能复制将怎样？将怎样？作为载体没有切割位点将怎样？作为载体没有切割位点将怎样？目的基因是否进入受体细胞，你如何察目的基因是
6、否进入受体细胞，你如何察觉？觉？如果载体对受体细胞有害将怎样？如果载体对受体细胞有害将怎样？三、三、“分子运输车分子运输车”载体载体1.作为载体的必要条件作为载体的必要条件 能自我复制能自我复制 有切割位点有切割位点 能进入受体生物细胞并在受体生物细胞内复制并能进入受体生物细胞并在受体生物细胞内复制并表达；表达； 有标记基因有标记基因 对受体细胞无害对受体细胞无害三、三、“分子运输车分子运输车”载体载体2.载体的种类：载体的种类：质粒质粒、噬菌体的衍生物噬菌体的衍生物、某些动植物病毒某些动植物病毒能复制并带着插能复制并带着插入的目的基因一入的目的基因一起复制起复制有切割位点有切割位点有标记基因
7、的存有标记基因的存在，将来可用含在，将来可用含青霉素的培养基青霉素的培养基鉴别。鉴别。三、三、“分子运输车分子运输车”载体载体1下列关于限制酶的说法不正确的是下列关于限制酶的说法不正确的是 （ ） A限制酶广泛存在于各种生物中，微生物限制酶广泛存在于各种生物中，微生物中很少分布中很少分布 B限制酶的可以用来提取目的基因限制酶的可以用来提取目的基因C不同的限制酶切割不同的限制酶切割DNA的切点不同的切点不同 D一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列序列A2.下列黏性末端属于同一种限制性内切下列黏性末端属于同一种限制性内切酶切割的是（酶切割的是（ ）A B C D C
