10真菌与其他病原体的分子生物学检验PPT课件.ppt

1、1真菌与其他病原体的分子生物学真菌与其他病原体的分子生物学检验检验真菌的分子生物学检验真菌的分子生物学检验衣原体的分子生物学检验衣原体的分子生物学检验支原体的分子生物学检验支原体的分子生物学检验梅毒螺旋体的分子生物学检验梅毒螺旋体的分子生物学检验原虫的分子生物学检验原虫的分子生物学检验一、真菌的分子生物学检验一、真菌的分子生物学检验 白假丝酵母菌的分子生物学检验白假丝酵母菌的分子生物学检验 新型隐球菌的分子生物学检验新型隐球菌的分子生物学检验真菌真菌 fungus 广泛存在于自然界的广泛存在于自然界的真核细胞生物真核细胞生物，具细胞核和细胞器，具细胞核和细胞器 不含叶绿素和其他光合作用的色素，

2、以不含叶绿素和其他光合作用的色素，以寄生和腐生寄生和腐生方式方式获取营养获取营养 有性繁殖，无性繁殖有性繁殖，无性繁殖 全世界有全世界有150万种，绝大多数对人类无害，少量万种，绝大多数对人类无害，少量(约约300种种)与人类疾病有关与人类疾病有关 近年感染机会增加：近年感染机会增加：光谱抗生素、激素、免疫抑制剂、抗癌药物使用光谱抗生素、激素、免疫抑制剂、抗癌药物使用器官移植，导管、插管技术开展器官移植，导管、插管技术开展艾滋病患者增多艾滋病患者增多1、白假丝酵母菌的分子生物学、白假丝酵母菌的分子生物学检验检验基因组结构特征基因组结构特征分子生物学检验技术分子生物学检验技术临床意义临床意义白假

3、丝酵母菌白假丝酵母菌 candida albican，又称白色念珠菌；一种条件致病菌，又称白色念珠菌；一种条件致病菌 广泛存在于自然界，也存在于正常人口腔、上呼吸道、广泛存在于自然界，也存在于正常人口腔、上呼吸道、肠道、阴道，一般在正常机体中数量少，不引起疾病肠道、阴道，一般在正常机体中数量少，不引起疾病 免疫功能低下的人群可引起相关疾病：免疫功能低下的人群可引起相关疾病：皮肤念珠菌病，好发于皮肤皱褶处皮肤念珠菌病，好发于皮肤皱褶处粘膜念珠菌病，以鹅口疮、口角炎、阴道炎最多见粘膜念珠菌病，以鹅口疮、口角炎、阴道炎最多见内脏及中枢神经念珠菌病，有肺炎、肠胃炎、心内膜炎、内脏及中枢神经念珠菌病，有

4、肺炎、肠胃炎、心内膜炎、脑膜炎、脑炎等，偶发败血症脑膜炎、脑炎等，偶发败血症 传统检验方法传统检验方法：血培养耗时长，阳性率低血培养耗时长，阳性率低组织活检：缺乏典型改变，影响诊断组织活检：缺乏典型改变，影响诊断白假丝酵母菌的基因组结构特征白假丝酵母菌的基因组结构特征 二倍体二倍体，单倍体基因组长，单倍体基因组长16Mb，8对染色体对染色体 可产生可产生染色体长度多态性染色体长度多态性现象现象染色体重排、易位、缺失染色体重排、易位、缺失个别染个别染色体三倍体色体三倍体 基因组中碱基转换基因组中碱基转换/颠换的频率高达颠换的频率高达1/273，使菌体很好适，使菌体很好适应环境应环境 6419个个

5、ORF，其中，其中5918个编码蛋白质个编码蛋白质 功能基因功能基因包括：结构基因、形态相关基因、代谢相关基包括：结构基因、形态相关基因、代谢相关基因、基因信息传递基因、因、基因信息传递基因、致病基因致病基因、耐药基因、耐药基因编码：黏附素、生物膜、编码：黏附素、生物膜、 菌丝体的基因菌丝体的基因分子生物学检验技术分子生物学检验技术PCRPCR-斑点杂交斑点杂交DNA指纹技术：指纹技术：RFLP, RAPD, 电泳核型电泳核型分析，分析，AP-PCR测序测序芯片芯片临床意义临床意义分子生物学检验技术分子生物学检验技术简便，快速，灵敏，特异性高简便，快速，灵敏，特异性高利于早期诊断利于早期诊断用

6、于菌株分类、分型，耐药基因检测用于菌株分类、分型，耐药基因检测2、新型隐球菌的分子生物学检、新型隐球菌的分子生物学检验验基因组结构特征基因组结构特征分子生物学检验技术分子生物学检验技术临床意义临床意义新型隐球菌新型隐球菌 cryptococcus，环境腐生菌，广泛存在于土壤、蔬菜、牛，环境腐生菌，广泛存在于土壤、蔬菜、牛奶、草地、蜂巢、鸽粪中；奶、草地、蜂巢、鸽粪中；人、动物主要传染源人、动物主要传染源 呈圆形或卵圆形，外裹由细胞壁和荚膜组成的被膜呈圆形或卵圆形，外裹由细胞壁和荚膜组成的被膜 多由多由呼吸道吸入，另有经皮肤黏膜、消化道传染。呼吸道吸入，另有经皮肤黏膜、消化道传染。可产生可产生一

7、种胞外磷脂酶一种胞外磷脂酶B破坏肺泡中的表面活性物质，进而改变破坏肺泡中的表面活性物质，进而改变肺组织的物理特性，使菌体较易在肺内形成病灶，数月内肺组织的物理特性，使菌体较易在肺内形成病灶，数月内经血行播散至脑或脑膜，引起炎症反应经血行播散至脑或脑膜，引起炎症反应 长期大量应用广谱抗生素、免疫抑制药、抗癌药物，接受长期大量应用广谱抗生素、免疫抑制药、抗癌药物，接受器官移植术，白血病器官移植术，白血病AIDS、淋巴肉瘤、系统性红斑狼疮、淋巴肉瘤、系统性红斑狼疮、结核病、糖尿病等患者为主要易感人群结核病、糖尿病等患者为主要易感人群 隐球菌性隐球菌性脑膜炎、脑膜脑炎脑膜炎、脑膜脑炎 新型隐球菌新型隐

8、球菌分为两种：分为两种：新生隐球菌：新生隐球菌：3个变种个变种新生变种，格鲁比变种，新生变种，格鲁比变种，2者的杂合者的杂合体体格特隐球菌格特隐球菌根据细胞外荚膜多糖的抗原性差根据细胞外荚膜多糖的抗原性差异，分为异，分为 5种血清型：种血清型：A、B、C、D、AD传统检测方法传统检测方法墨汁染色法墨汁染色法真菌培养：真菌培养：“金标准金标准”，阳性率不高，阳性率不高血清学血清学新型隐球菌的基因组结构特征新型隐球菌的基因组结构特征 单倍体单倍体，基因组约，基因组约20Mb，14条染色体条染色体 编码编码6574个基因个基因 2008年，陈江汉等人用年，陈江汉等人用PCR指纹技术，将指纹技术，将1

9、29株新株新型隐球菌分为型隐球菌分为8个基因型个基因型VN I, VN II, - 血清型血清型AVN III - 血清型血清型ADVN IV - 血清型血清型DVG I, VG II, VG III - 血清型血清型BVG IV - 血清型血清型C分子生物学检验技术分子生物学检验技术PCR：多扩增：多扩增rDNA复合体复合体斑点杂交斑点杂交PCR-RFLP：区分个体，确定个体：区分个体，确定个体间的遗传关系间的遗传关系临床意义：临床意义：特异性检测出新型隐球菌特异性检测出新型隐球菌区别变种，不受治疗影响区别变种，不受治疗影响敏感性更高，可用于痰液、支气管和肺敏感性更高，可用于痰液、支气管和肺

10、泡灌洗液的检测泡灌洗液的检测二、衣原体的分子生物学检验二、衣原体的分子生物学检验 沙眼衣原体的分子生物学检验沙眼衣原体的分子生物学检验 肺炎衣原体的分子生物学检验肺炎衣原体的分子生物学检验衣原体衣原体chlamydia，原核细胞型原核细胞型微生物，微生物，自然界自然界广泛分布广泛分布，专性活细胞内寄专性活细胞内寄生，广泛寄生于人、哺乳动物、禽生，广泛寄生于人、哺乳动物、禽类，仅少数致病类，仅少数致病能能通过通过0.2m的滤器的滤器，无肽聚糖，无肽聚糖，对对- -干扰素敏感，基因组小，发育干扰素敏感，基因组小，发育周期独特周期独特1、沙眼衣原体、沙眼衣原体 chlamydia trachomat

11、is(CT) 人体内长期生存并人体内长期生存并广泛传播广泛传播，不耐热不耐热 主要寄生在黏膜细胞主要寄生在黏膜细胞 根据主要外膜蛋白的抗原分为根据主要外膜蛋白的抗原分为18中血清型中血清型 常规实验室检测常规实验室检测分离培养分离培养或或镜检镜检衣原体包涵体，敏感可靠，但易受取衣原体包涵体，敏感可靠，但易受取材、培养条件、操作者经验影响材、培养条件、操作者经验影响血清学试验血清学试验：简便，快速，但特异性差，易与金葡菌、：简便，快速，但特异性差，易与金葡菌、链球菌、淋球菌等发生交叉反应链球菌、淋球菌等发生交叉反应沙眼衣原体的基因组结构特征沙眼衣原体的基因组结构特征 同时含同时含DNA和和RNA

12、 具很强的具很强的DNA修复和重组系统，基因组与其他细菌修复和重组系统，基因组与其他细菌及宿主细胞有广泛的遗传交换及宿主细胞有广泛的遗传交换 血清型血清型D基因组约基因组约1.04Mb894个编码基因，其中个编码基因，其中4%编码基因与其他细菌有同源编码基因与其他细菌有同源序列序列有有1个个7493bp隐蔽性质粒，与其他生物无同源序列隐蔽性质粒，与其他生物无同源序列分子生物学检验技术分子生物学检验技术 PCR：多扩增主要外膜蛋白基因、隐蔽性质粒多扩增主要外膜蛋白基因、隐蔽性质粒DNA、16S rRNA基因基因 LCR（连接酶链反应）技术（连接酶链反应）技术 DNA序列分析序列分析基因突变：基因

13、突变：质粒质粒tetM基因基因(四环素耐药四环素耐药)23S rRNA基因基因(大环内酯类药物大环内酯类药物)核糖体蛋白基因核糖体蛋白基因L4gyrA基因（氟喹诺酮耐药）基因（氟喹诺酮耐药） 分子生物学检验的临床意义：分子生物学检验的临床意义：方法简便、快速、敏感、特异方法简便、快速、敏感、特异适用于：无症状携带者检测、早期诊断、流行病学调查、适用于：无症状携带者检测、早期诊断、流行病学调查、基因分析、耐药检测基因分析、耐药检测2、肺炎衣原体、肺炎衣原体 chlamydia pneumoniae (CP) 1989年确定，重要的人兽共患病原体年确定，重要的人兽共患病原体 人类感染很普遍，血清学

14、证实人类感染很普遍，血清学证实5090%的成年人的成年人CP抗体抗体(+) 呼吸道病原体，主要引起人非典型性肺炎，艾滋呼吸道病原体，主要引起人非典型性肺炎，艾滋病、白血病等继发感染的重要病原菌之一病、白血病等继发感染的重要病原菌之一 常规实验室检验方法：常规实验室检验方法：病原体分离培养病原体分离培养：方法负责，耗时，敏感性不高：方法负责，耗时，敏感性不高血清学检测血清学检测：具良好的特异性、灵敏度，但机体产：具良好的特异性、灵敏度，但机体产生抗体需几周时间，生抗体需几周时间，不适合早期诊断不适合早期诊断肺炎衣原体的基因组结构特征肺炎衣原体的基因组结构特征 肺炎衣原体肺炎衣原体CWL-029株

15、基因组株基因组双链环状双链环状DNA，1230kb，不含质粒，不含质粒，推测有推测有1122个基因，编码基因个基因，编码基因1052个，结构个，结构RNA基因基因33个；个；186个基因个基因在在GenBank中未发现同源基因中未发现同源基因肺炎衣原体的分子生物学检验肺炎衣原体的分子生物学检验多用多用PCR技术检测肺炎衣原体，技术检测肺炎衣原体，以种特异性抗原以种特异性抗原MOMP基因基因为靶为靶序列序列普通普通PCRReal-time PCR巢式巢式PCR竞争性竞争性PCR临床意义：临床意义：早期诊断，流行病学调查，耐药性早期诊断，流行病学调查，耐药性分析分析三、支原体的分子生物学检验三、支

16、原体的分子生物学检验 肺炎支原体的分子生物学检验肺炎支原体的分子生物学检验 解脲支原体的分子生物学检验解脲支原体的分子生物学检验支原体支原体 mycoplasma，目前所知的能独立生活、，目前所知的能独立生活、 自行繁殖的最小自行繁殖的最小原核细胞原核细胞微生物，不同于微生物，不同于 细胞，也不同于病毒细胞，也不同于病毒 种类繁多、分布广泛、造成危害大，涉及人、动物、植种类繁多、分布广泛、造成危害大，涉及人、动物、植物及昆虫等，给物及昆虫等，给人类健康和科研人类健康和科研工作带来不利影响工作带来不利影响 0.20.3m大小，大小，没有细胞壁没有细胞壁，具可塑性、可过滤性、，具可塑性、可过滤性、

17、易溶解性；高度多形性易溶解性；高度多形性 基因组小，结构简单，生物合成、代谢能力有限，可在基因组小，结构简单，生物合成、代谢能力有限，可在固体培养基上形成固体培养基上形成“荷包蛋荷包蛋”样菌落样菌落 对人致病：肺炎支原体（肺炎），人型支原体，解脲支对人致病：肺炎支原体（肺炎），人型支原体，解脲支原体，生殖器支原体（泌尿生殖道感染）原体，生殖器支原体（泌尿生殖道感染）1、肺炎支原体、肺炎支原体 mycoplasma pulmonis (MP)，原，原发性发性非典型性肺炎非典型性肺炎（肺炎支原体肺（肺炎支原体肺炎炎 ）的病原体）的病原体 主要经飞沫传染，潜伏期主要经飞沫传染，潜伏期23周，周，发病

18、率以青少年最高。临床症状较发病率以青少年最高。临床症状较轻，或无症状，有个别死亡报道。轻，或无症状，有个别死亡报道。一年四季均可发生，秋冬居多。一年四季均可发生，秋冬居多。MP的基因组结构特征的基因组结构特征 MP基因组含能量代谢基因，基因组含能量代谢基因，DNA复制、转录、翻复制、转录、翻译必须的基因；译必须的基因； 维生素、核酸前体、脂肪酸合成的基因较少维生素、核酸前体、脂肪酸合成的基因较少 合成细胞壁、氨基酸的基因缺失合成细胞壁、氨基酸的基因缺失 肺炎支原体肺炎支原体M129株株单一环状单一环状ds DNA，816394bp677个个ORF，39个个RNA编码基因；编码基因；75.9%O

19、RF与其他生物有相似性与其他生物有相似性肺炎支原体肺炎肺炎支原体肺炎 临床表现：临床表现： 影像学检查：影像学检查：胸片阴影显著，病变可很轻微，也可胸片阴影显著，病变可很轻微，也可很广泛很广泛 临床表现和胸部临床表现和胸部X线检查并不具特征性，要明确诊线检查并不具特征性，要明确诊断，断，需要进行病原体的检测需要进行病原体的检测肺炎支原体肺炎支原体病原学诊断病原学诊断支原体培养支原体培养：标本：可为鼻咽拭子或吸液、痰、胸膜积液、标本：可为鼻咽拭子或吸液、痰、胸膜积液、支气管肺泡灌洗物、气管吸液和肺组织等支气管肺泡灌洗物、气管吸液和肺组织等培养：培养：SP-4和改良的和改良的Hayflick肉汤和

20、琼脂平肉汤和琼脂平板。一般在接种过后板。一般在接种过后420天出现菌落天出现菌落缺点：肺炎支原体培养较为困难，需要特殊缺点：肺炎支原体培养较为困难，需要特殊营养培养基，且生长速度较一般细菌慢许多，营养培养基，且生长速度较一般细菌慢许多， 临床标本含量低，易污染，阳性率很低临床标本含量低，易污染，阳性率很低肺炎支原体肺炎支原体病原学诊断病原学诊断免疫学检测免疫学检测：直接免疫荧光、免疫印迹、双单抗夹心酶免疫直接免疫荧光、免疫印迹、双单抗夹心酶免疫抗原捕获法抗原捕获法MP与其他支原体有共同抗原，免疫学检测假阳与其他支原体有共同抗原，免疫学检测假阳性率高性率高血清学检测血清学检测：目前仍为国际上通用

21、的诊断标准，急性感染血目前仍为国际上通用的诊断标准，急性感染血清学诊断应包括清学诊断应包括IgG和和IgM抗体。在成人患者，抗体。在成人患者，IgM抗体阳性是急性感染的指标，但阴性不能排抗体阳性是急性感染的指标，但阴性不能排除支原体感染，此时除支原体感染，此时IgM抗体可能缺失抗体可能缺失IgG抗体可用于回顾性诊断，对于肺炎支原体肺抗体可用于回顾性诊断，对于肺炎支原体肺炎的早期诊断价值不大炎的早期诊断价值不大肺炎支原体肺炎支原体分子生物学检测方法分子生物学检测方法PCR, qPCR：几乎能检测所有已知的人类致病支原体，靶几乎能检测所有已知的人类致病支原体，靶序列：序列：16S rRNA基因可变

22、区、保守区，基因可变区、保守区，P1蛋白基因区蛋白基因区具有很高的敏感性和特异性，且检测方法快具有很高的敏感性和特异性，且检测方法快速、便捷速、便捷但感染后肺炎支原体的持续存在、无症状的但感染后肺炎支原体的持续存在、无症状的支原体携带都可能造成假阳性，其临床价值支原体携带都可能造成假阳性，其临床价值尚未完全确立尚未完全确立其它：核酸杂交，其它：核酸杂交，PCR-RFLP，等，等临床意义：早期诊断，流行病学调查，耐药基因分析临床意义：早期诊断，流行病学调查，耐药基因分析2、解脲支原体、解脲支原体 ureaplasma urealyticum (UU)，脲原体属中唯一的脲原体属中唯一的1个种，个种

23、，因生长需要因生长需要尿素尿素而得名而得名 一类一类原核细胞微生物原核细胞微生物，体积介于细菌与病毒之间，是人类泌，体积介于细菌与病毒之间，是人类泌尿生殖道的常见病原体，与许多尿生殖道的常见病原体，与许多泌尿生殖道感染症、围产期泌尿生殖道感染症、围产期感染和不育症感染和不育症等都有关系，等都有关系，性传播疾病性传播疾病的病原体之一。的病原体之一。UU后，后，患者大多无明显症状，很难被患者觉察，也易造成漏诊患者大多无明显症状，很难被患者觉察，也易造成漏诊 菌落微小，直径仅菌落微小，直径仅1525m，须在低倍显微镜下观察，故旧，须在低倍显微镜下观察，故旧称称T株株 (tiny strain)。菌落

24、表面有粗糙颗粒，在合适条件下可。菌落表面有粗糙颗粒，在合适条件下可转成典型的荷包蛋样菌落转成典型的荷包蛋样菌落 生长需要胆固醇和尿素，分解尿素为其代谢特征，产生氨氮，生长需要胆固醇和尿素，分解尿素为其代谢特征，产生氨氮，使培养基使培养基pH上升，患者小便往往带有臊腥味上升，患者小便往往带有臊腥味 解脲支原体基因组解脲支原体基因组 环状环状dsDNA, 751719bp， GC含量低含量低 613个编码蛋白质的基因，个编码蛋白质的基因，39个编码个编码RNA的基因；的基因；53%蛋白编码基因具生物学共，蛋白编码基因具生物学共，28%为假基因为假基因 编码编码UU抗原的基因长约抗原的基因长约120

25、0bp，N端端1/3为保守区，为保守区，包含群特异的抗原决定簇，包含群特异的抗原决定簇，C端端2/3是由重复序列组是由重复序列组成的可变区，包含型特异的抗原决定簇成的可变区，包含型特异的抗原决定簇解脲支原体实验室检测解脲支原体实验室检测 形态学检查形态学检查：Giemsa染色法将其染成染色法将其染成淡紫色淡紫色 支原体培养支原体培养：“金标准金标准”，但，但UU培养较难，用时长、操培养较难，用时长、操作复杂、敏感性低、特异性不高作复杂、敏感性低、特异性不高 抗原检测抗原检测： UU抗原是解脲支原体感染时被识别的主要外抗原是解脲支原体感染时被识别的主要外膜抗原，具有种特异性。报道方法有：用酶联免

26、疫吸附试膜抗原，具有种特异性。报道方法有：用酶联免疫吸附试验、荧光标记抗体、肺炎支原体膜蛋白单克隆抗体、反向验、荧光标记抗体、肺炎支原体膜蛋白单克隆抗体、反向间接血凝法，直接检测分泌物和体液中支原体抗原，具有间接血凝法，直接检测分泌物和体液中支原体抗原，具有很高的特异度和灵敏度很高的特异度和灵敏度 血清学方法血清学方法：有支原体特异性血清学检测、支原体的非特：有支原体特异性血清学检测、支原体的非特异血清学方法，对支原体肺炎能起辅助诊断的作用，但检异血清学方法，对支原体肺炎能起辅助诊断的作用，但检测特异性抗体的方法尚不能达到早期快速诊断的目的测特异性抗体的方法尚不能达到早期快速诊断的目的解脲衣原

27、体解脲衣原体Giemsa染色染色 解脲支原体解脲支原体分子生物学检测方法分子生物学检测方法PCR：简单、快速、特异、准确：简单、快速、特异、准确早期诊断早期诊断鉴别诊断多种病原体的混合感染鉴别诊断多种病原体的混合感染分型，耐药基因检测，流行病学研究分型，耐药基因检测，流行病学研究核酸杂交，测序核酸杂交，测序四、梅毒螺旋体分子生物学检验四、梅毒螺旋体分子生物学检验 梅毒螺旋体的基因组结构特征梅毒螺旋体的基因组结构特征 梅毒螺旋体的分子生物学检验梅毒螺旋体的分子生物学检验 临床意义临床意义梅毒螺旋体梅毒螺旋体 是梅毒的病原体，因其透明，不易着色，故是梅毒的病原体，因其透明，不易着色，故 又称又称苍

28、白螺旋体苍白螺旋体 梅毒是一种广泛流行的性病。梅毒螺旋体梅毒是一种广泛流行的性病。梅毒螺旋体只感染人类只感染人类，通，通过性接触传染，或由胎盘传给胎儿，在胎儿内脏及组织中过性接触传染，或由胎盘传给胎儿，在胎儿内脏及组织中大量繁殖，可引起胎儿死亡或流产。大量繁殖，可引起胎儿死亡或流产。 单细胞原核生物单细胞原核生物，形态细长，形态细长，5-150.1-0.2m，弯曲成螺，弯曲成螺旋状旋状 电镜下显示其结构复杂，从外向内分为：电镜下显示其结构复杂，从外向内分为：外膜外膜（主要由蛋（主要由蛋白质、糖及类脂组成）、白质、糖及类脂组成）、轴丝轴丝（主要由蛋白质组成）、（主要由蛋白质组成）、圆圆柱形菌体柱

29、形菌体（包括细胞壁、细胞膜及胞浆内容物）（包括细胞壁、细胞膜及胞浆内容物） 实验检查实验检查 形态学形态学：暗视野或墨汁显影，见运动活泼的密螺旋体即可：暗视野或墨汁显影，见运动活泼的密螺旋体即可诊断。方法简便，但重复性差。诊断。方法简便，但重复性差。 血清学检查血清学检查非螺旋体抗原试验：用正常牛心肌的心类脂为抗原，检测病非螺旋体抗原试验：用正常牛心肌的心类脂为抗原，检测病人血清中的反应素。反应素在第一期梅毒病变出现后人血清中的反应素。反应素在第一期梅毒病变出现后1-2周周就可测出，第二期阳性率几乎达就可测出，第二期阳性率几乎达100%，第三期阳性率较低。，第三期阳性率较低。本试验所用抗原是非

30、特异的，检测的抗体时应排除假阳性反本试验所用抗原是非特异的，检测的抗体时应排除假阳性反应，结合病史，临床表现及多次的试验结果进行分析。应，结合病史，临床表现及多次的试验结果进行分析。螺旋体抗原试验：抗原为梅毒旋体，以检测血清中的特异性螺旋体抗原试验：抗原为梅毒旋体，以检测血清中的特异性抗体，该试验特异性高。抗体，该试验特异性高。 分子生物学检验分子生物学检验：特异，敏感：特异，敏感五、原虫的分子生物学检验五、原虫的分子生物学检验 弓形虫的分子生物学检验弓形虫的分子生物学检验 疟原虫的分子生物学检验疟原虫的分子生物学检验 溶组织内阿米巴的分子生物学检验溶组织内阿米巴的分子生物学检验原虫原虫 单细

31、胞真核生物单细胞真核生物，整个虫体由一个细胞构成，具有生，整个虫体由一个细胞构成，具有生命活动的全部功能。命活动的全部功能。 体积微小，基本结构包括：体积微小，基本结构包括：胞膜、胞质及胞核胞膜、胞质及胞核。胞核。胞核内有染色质、核仁，富含内有染色质、核仁，富含DNA和和RNA 自然界分别广泛，医学原虫包括寄生在人体的腔道、自然界分别广泛，医学原虫包括寄生在人体的腔道、体液、组织或细胞内的致病及非致病性原虫，约有体液、组织或细胞内的致病及非致病性原虫，约有40余种。有些原虫，如余种。有些原虫，如弓形虫、疟原虫、利什曼原虫、弓形虫、疟原虫、利什曼原虫、锥虫、溶组织内阿米巴，可对人体可造成严重危害

32、锥虫、溶组织内阿米巴，可对人体可造成严重危害。疟原虫疟原虫 疟原虫：人疟疾的病原体疟原虫：人疟疾的病原体 疟疾是一种严重危害人体健康的寄生虫病，全世界约疟疾是一种严重危害人体健康的寄生虫病，全世界约1/2人口人口受威胁。疟原虫寄生于人及多种哺乳动物，少数寄生于鸟类受威胁。疟原虫寄生于人及多种哺乳动物，少数寄生于鸟类和爬行类动物，已知有和爬行类动物，已知有130余种；有严格的宿主选择性。余种；有严格的宿主选择性。 疟原虫的基本结构：包括疟原虫的基本结构：包括核、胞质和胞膜核、胞质和胞膜，环状体以后各期，环状体以后各期尚有消化分解血红蛋白后的最终产物尚有消化分解血红蛋白后的最终产物疟色素。血片经疟

33、色素。血片经姬氏姬氏或瑞氏染液或瑞氏染液染色后，核呈紫红色，胞质为天蓝至深蓝色，疟染色后，核呈紫红色，胞质为天蓝至深蓝色，疟色素呈棕黄色、棕褐色或黑褐色。色素呈棕黄色、棕褐色或黑褐色。 除了疟原虫本身的形态特征不同之外，被寄生的红细胞在形除了疟原虫本身的形态特征不同之外，被寄生的红细胞在形态上也可发生变化。态上也可发生变化。被寄生红细胞的形态有无变化以及变化被寄生红细胞的形态有无变化以及变化的特点，对鉴别疟原虫种类很有帮助。的特点，对鉴别疟原虫种类很有帮助。 疟原虫的实验诊断疟原虫的实验诊断1病原学诊断病原学诊断 厚、薄血膜染色镜检是目前最常用的方法。从外周血液中检出疟厚、薄血膜染色镜检是目前

34、最常用的方法。从外周血液中检出疟原虫是确诊的最可靠依据（经姬氏或瑞氏染液染色）原虫是确诊的最可靠依据（经姬氏或瑞氏染液染色）2免疫学诊断免疫学诊断 循环抗体检测：常用间接荧光抗体试验、间接血凝试验和酶联免循环抗体检测：常用间接荧光抗体试验、间接血凝试验和酶联免疫吸附试验等。抗体在患者治愈后仍能持续一段时间，且广泛存疫吸附试验等。抗体在患者治愈后仍能持续一段时间，且广泛存在个体差异，检测抗体主要用于流行病学调查、防治效果评估及在个体差异，检测抗体主要用于流行病学调查、防治效果评估及输血对象的筛选，在临床上仅作辅助诊断用。输血对象的筛选，在临床上仅作辅助诊断用。 循环抗原检测：用血清学方法检测疟原

35、虫的循环抗原能更好地说循环抗原检测：用血清学方法检测疟原虫的循环抗原能更好地说明受检对象是否有活动感染。常用放射免疫试验、抑制法酶联免明受检对象是否有活动感染。常用放射免疫试验、抑制法酶联免疫吸附试验、夹心法酶联免疫吸附试验和快速免疫色谱测试卡等。疫吸附试验、夹心法酶联免疫吸附试验和快速免疫色谱测试卡等。疟原虫的实验诊断疟原虫的实验诊断3分子生物学技术分子生物学技术 PCR和核酸探针已用于疟疾的诊断，分子生物学检测和核酸探针已用于疟疾的诊断，分子生物学检测技术的最突出的优点是对技术的最突出的优点是对低原虫血症检出率较高低原虫血症检出率较高。 用核酸探针检测恶性疟原虫，其敏感性可达感染红细用核酸

36、探针检测恶性疟原虫，其敏感性可达感染红细胞内胞内0.0001%的原虫密度。的原虫密度。 国内学者采用套式国内学者采用套式PCR技术扩增间日疟原虫技术扩增间日疟原虫 SSU rRNA基因基因120bp的特定片段，其敏感性达的特定片段，其敏感性达0.1原虫原虫/l血。血。本章小结本章小结真菌真菌的分子生物学检验的分子生物学检验白假丝酵母菌，新型隐球菌白假丝酵母菌，新型隐球菌衣原体衣原体的分子生物学检验的分子生物学检验沙眼衣原体，肺炎衣原体沙眼衣原体，肺炎衣原体支原体支原体的分子生物学检验的分子生物学检验肺炎支原体，解脲支原体肺炎支原体，解脲支原体梅毒螺旋体梅毒螺旋体的分子生物学检验的分子生物学检验

37、原虫原虫的分子生物学检验的分子生物学检验弓形虫，疟原虫，溶组织内阿米巴弓形虫，疟原虫，溶组织内阿米巴解脲支原体解脲支原体 人体感染肺炎支原体后，能产生特异性人体感染肺炎支原体后，能产生特异性IgM和和IgG类抗体。类抗体。IgM类抗体出现早，一般在感染后类抗体出现早，一般在感染后1周出现，周出现，34周达高峰，以后周达高峰，以后逐渐降低。由于肺炎支原体感染的潜伏期为逐渐降低。由于肺炎支原体感染的潜伏期为23周，当患者出周，当患者出现症状而就诊时，现症状而就诊时，IgM抗体已达到相当高的水平，因此抗体已达到相当高的水平，因此IgM抗抗体阳性可作为急性期感染的诊断指标。如体阳性可作为急性期感染的诊

38、断指标。如IgM抗体阴性，则不抗体阴性，则不能否定肺炎支原体感染，能否定肺炎支原体感染， 需检测需检测IgG抗体抗体。IgG较较IgM出现晚，出现晚，需动态观察，如显著升高提示近期感染，显著降低说明处于感需动态观察，如显著升高提示近期感染，显著降低说明处于感染后期。染后期。p 经常不断地学习,你就什么都知道。你知道得越多,你就越有力量p Study Constantly, And You Will Know Everything. The More You Know, The More Powerful You Will Be写在最后感谢聆听不足之处请大家批评指导Please Criticize And Guide The Shortcomings结束语讲师：XXXXXX XX年XX月XX日