电化学发光.课件.pptx

1、职业教育医学检验技术专业教学资源库生物化学检验永州职业技术学院 欧陵斌电化学发光酶促化学发光： 辣根过氧化物酶系统 碱性磷酸酶系统 黄嘌呤氧化酶系统非酶促化学发光： 吖啶酯系统 草酸酯系统 三价铁-鲁米诺系统根据示踪物检测的不同而分为： 荧光免疫测定 电化学发光免疫测定 化学发光免疫-再根据标记物的不同又分： -化学发光免疫分析 -微粒子化学发光免疫分析 -电化学发光免疫分析 -化学发光酶免疫分析 -生物发光免疫分析 临床以前三者较为常用。根据发光反应检测方式的不同可分为 1液相法 反应在液相中进行，经离心或分离措施后，再进行测定发光强度 2固相法 将抗原抗体复合物结合在固相载体(如聚苯乙烯管

2、)或分离介质上(如磁性微粒球等)，再进行测定发光强度 3均相法 同均相酶免疫法，不需要经过离心或分离步骤，即可直接进行发光强度检测（最低检测限）（95%可信度）： S0+2SD在该曲线上所对应的浓度值。测定误差（变异）20%的最低可检测浓度。功能灵敏度-变异20%的最高检测浓度。0.99的曲线范围 采用化学发光技术和磁性微粒子分离技术相结合的免疫分析系统1仪器测定原理 该类分析技术有两种方法：-竞争法 测定小分子抗原物质-夹心法 测定大分子抗原物质（最低检测限）（95%可信度）： S0-2SD在该曲线上所对应的浓度值。（变异）20%的最低可检测浓度。功能灵敏度-变异20%的最高检测浓度。0.9

3、9的曲线范围。一般由主机和微机两部分组成：一般由主机和微机两部分组成：（1 1）主机部分：包括）主机部分：包括 原材料配备部分：原材料配备部分：反应杯、样品盘、试剂盘、纯净水、反应杯、样品盘、试剂盘、纯净水、清洗液、废水在机器上的贮存和处理装置。清洗液、废水在机器上的贮存和处理装置。 液路部分：液路部分：过滤器、密封圈、真空泵、管道、样过滤器、密封圈、真空泵、管道、样 品及品及试剂探针。试剂探针。 机械传动部分：机械传动部分：传感器、运输轨道。传感器、运输轨道。 光路检测部分：光路检测部分：光电倍增管和线路控制板。光电倍增管和线路控制板。2仪器组成全自动化学发光全自动化学发光免疫分析系统免疫分

4、析系统66IMMUNOLOGY2仪器组成（2）微机系统 程控操作 指示判定 数据处理 故障诊断 自动监视（ 采用微粒子化学发光技术对人体内的微量物质以及药采用微粒子化学发光技术对人体内的微量物质以及药物浓度进行定量测定物浓度进行定量测定 具有高度的特异性、高度的敏感性和高度的稳定性等具有高度的特异性、高度的敏感性和高度的稳定性等特点特点 1.分析方法 采用磁性微粒作为固相载体，以碱性磷酸酶作为发光剂，扩大测定的范围。 以免疫测定方法为基础： -竞争法 -夹心法 -抗体检测等 （二)全自动微粒子化学发光免疫分析系统2.分析过程 抗原抗体结合； 加入碱性磷酸酶标记的抗体； 形成固相包被复合物； 在

5、电磁场中进行23次洗涤分离； 加入底物； 通过光量子阅读系统记录发光强度； 在标准曲线上计算出待测抗原的浓度。3.仪器组成 微电脑控制 样品处理系统 实验运行系统 中心供给和控制系统电化学发光免疫分析技术在新一代实验室免疫检测技术中电化学发光免疫分析技术在新一代实验室免疫检测技术中很有特点，它在很有特点，它在2020世纪如年代一问世就引起广泛的关注世纪如年代一问世就引起广泛的关注德国公司在链酶亲和素德国公司在链酶亲和素生物素包被技术基础上，引用电生物素包被技术基础上，引用电化学发光免疫分析技术并开发出相应的全自动电化学发光化学发光免疫分析技术并开发出相应的全自动电化学发光免疫检测系统免疫检测系

6、统 1.测定原理及过程待测标本与包被了抗体的顺磁性微粒和发光剂标待测标本与包被了抗体的顺磁性微粒和发光剂标记的抗体共同温育（形成磁性微珠包被抗体记的抗体共同温育（形成磁性微珠包被抗体抗抗原原发光剂标记抗体复合物）发光剂标记抗体复合物） 吸人流动室，缓冲液冲洗吸人流动室，缓冲液冲洗 磁性微粒流经电极表面时，被电极下的磁铁吸引，磁性微粒流经电极表面时，被电极下的磁铁吸引，而游离的发光剂标记抗体被冲洗走而游离的发光剂标记抗体被冲洗走 同时在电极加电压，启动电化学发光反应，使发同时在电极加电压，启动电化学发光反应，使发光试剂标记物三氯联吡啶钉光试剂标记物三氯联吡啶钉Ru(bpy)32+TPARu(bp

7、y)32+TPA在电在电极表面进行电子转移，产生电化学发光极表面进行电子转移，产生电化学发光光的强度与待测抗原的浓度成正光的强度与待测抗原的浓度成正比比(三)全自动电化学发光免疫分析仪(三)全自动电化学发光免疫分析仪2.仪器组成及特点由样品盘、试剂盒、温育反应盘、电化学检测系统及计算由样品盘、试剂盒、温育反应盘、电化学检测系统及计算机控制系统组成机控制系统组成应用三种抗原抗体反应方法：应用三种抗原抗体反应方法： - -抑制免疫法抑制免疫法 检测小分子量蛋白抗原检测小分子量蛋白抗原 - -夹心免疫法夹心免疫法 检测大分子量物质检测大分子量物质 - -桥联免疫法桥联免疫法 检测抗体如检测抗体如IgGIgG、IgMIgM 另：钉标记用于另：钉标记用于DNADNARNARNA探针分析探针分析（四）发光免疫分析仪的临床应用主要应用于以下几方面检测：主要应用于以下几方面检测：1 1甲状腺系统甲状腺系统2 2性腺系统性腺系统3 3血液系统血液系统 4 4肿瘤标记物肿瘤标记物 5 5心血管系统心血管系统 6 6血药浓度血药浓度 7 7感染性疾病感染性疾病8 8其他检测其他检测 （IgIg、血清皮质醇、尿皮质醇、尿游离脱、血清皮质醇、尿皮质醇、尿游离脱氧吡啶等）氧吡啶等）