平板菌落计数法水中微生物的检测课件.ppt

1、.水中细菌总数往往同水中有机物污染的程度呈水中细菌总数往往同水中有机物污染的程度呈正相关，它是评价水质污染程度重要指标之一正相关，它是评价水质污染程度重要指标之一细菌总数：细菌总数：指水样在一定条件下培养后，指水样在一定条件下培养后，1mL1mL水样所水样所含菌落的总数。含菌落的总数。我国生活饮用水标准（我国生活饮用水标准（GB5749-85GB5749-85）规定，细菌）规定，细菌总数不得超过总数不得超过100100个个/ml/ml含细菌含细菌10-10010-100个个/ml/ml的水体为的水体为极清洁极清洁含细菌含细菌100-1000100-1000个个/ml/ml的水体为的水体为清洁清

2、洁含细菌含细菌1000-100001000-10000个个/ml/ml的水体为的水体为不太清洁不太清洁含细菌含细菌1 1万万-10-10万个万个/ml/ml的水体为的水体为不清洁不清洁含细菌多于含细菌多于1010万个万个/ml/ml的水体为的水体为极不清洁极不清洁.二、基本原理二、基本原理 1 1、本试验采用、本试验采用平板菌落计数法平板菌落计数法对水样中的细菌计数，对水样中的细菌计数，这是一种测定水中这是一种测定水中好氧和兼性厌氧细菌好氧和兼性厌氧细菌密度的方法，密度的方法，由于细菌在水体中，能以单个、成对、链状、成簇由于细菌在水体中，能以单个、成对、链状、成簇或成团的方式存在，另外，没有单

3、独的一种培养基或成团的方式存在，另外，没有单独的一种培养基或某一环境条件能满足一个水样中所有细菌的生理或某一环境条件能满足一个水样中所有细菌的生理要求，所以由此法得到的菌落数，实际上要要求，所以由此法得到的菌落数，实际上要低于低于被被测水样中真正存在的活菌数。测水样中真正存在的活菌数。.2、平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释、平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，分散成单个细胞，取一定量的稀释液接种到平板上上，经培取一定量的稀释液接种到平板上上，经培养，由养，由每个单细胞每个单细胞生长繁殖形成肉眼可见生长繁殖形成肉眼可见的的菌落菌落，

4、即，即一个单菌落代表样品中一个单一个单菌落代表样品中一个单细胞细胞二、基本原理二、基本原理.三、实验准备三、实验准备器皿：无菌采样瓶、培养皿、移液管、试管等。器皿：无菌采样瓶、培养皿、移液管、试管等。仪器：干热灭菌箱、高压蒸汽灭菌锅、恒温培仪器：干热灭菌箱、高压蒸汽灭菌锅、恒温培养箱等。养箱等。试剂：牛肉膏蛋白胨培养基、无菌水试剂：牛肉膏蛋白胨培养基、无菌水环境条件：营养琼脂平板在工作台上暴露环境条件：营养琼脂平板在工作台上暴露15分分钟，每个平板上生长得到的菌落不超过钟，每个平板上生长得到的菌落不超过15个个无菌室无菌室.四、实验步骤四、实验步骤1 1）自来水：先将自来水龙头用酒精灯火焰灼）

5、自来水：先将自来水龙头用酒精灯火焰灼烧灭菌，再开水龙头使水流烧灭菌，再开水龙头使水流5min5min，以灭菌，以灭菌采样瓶接取水样备用。采样瓶接取水样备用。(2)(2)池水、河水或湖水等地面水源水：在距岸边池水、河水或湖水等地面水源水：在距岸边5 5米处，米处，取距水面取距水面1015cm1015cm的水样，先将灭菌的带塞的采样瓶，的水样，先将灭菌的带塞的采样瓶，瓶口向下浸入水层中，然后翻转过来，除去玻璃塞，水瓶口向下浸入水层中，然后翻转过来，除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛满后，将平塞盖好，从水中取出，若不即流入瓶中，盛满后，将平塞盖好，从水中取出，若不能在能在2h2h内检测的，需放入内检测的，

6、需放入44冰箱中保存。冰箱中保存。1 1、采样：、采样：代表性：多采几个部位，液体样品需经过震摇，以代表性：多采几个部位，液体样品需经过震摇，以获得均匀稀释液。获得均匀稀释液。.2 2 水样的水样的1010倍稀释倍稀释第一步第一步 稀稀释水样释水样第二步：第二步：接种平板接种平板注意：稀释注意：稀释度的选择度的选择.平板混合分离法：平板混合分离法： 将菌液分离样品摇匀，用无菌移液管取将菌液分离样品摇匀，用无菌移液管取1 ml1 ml的菌液移至无菌培养皿中，然后将融化，凉至的菌液移至无菌培养皿中，然后将融化，凉至4545左右的培养基，在每个培养皿内各倒入约左右的培养基，在每个培养皿内各倒入约15

7、 15 mlml，摇匀，凝固，制成平板。，摇匀，凝固，制成平板。 混合倒平板操作法示意图混合倒平板操作法示意图.2 2 水样的水样的1010倍稀释倍稀释第一步第一步 稀稀释水样释水样第二步：第二步：接种平板接种平板第三步：第三步：培养培养稀释度过低，菌稀释度过低，菌落密集无法计数落密集无法计数可以计数，但数量可以计数，但数量过多，费时费力过多，费时费力数量合适，统计数量合适，统计计算，作为结果计算，作为结果数量太少，误差数量太少，误差大，不作计数大，不作计数注意：稀释注意：稀释度的选择度的选择10-3 10-4 10-5 10-6 .第四步第四步 计计 数数细菌数量细菌数量= =？细菌数量细菌

8、数量= =同一稀释度的平均菌落数同一稀释度的平均菌落数稀释倍数稀释倍数例如：例如： 10-510-5 的平均菌落数是的平均菌落数是125125个个细菌数量细菌数量= =125125 105 =1.25 105 =1.25 107 107个个/ml/ml注意注意: :作空白及取平行样作空白及取平行样(2-3(2-3组组) )通常细菌、放线菌选择平均菌落数在通常细菌、放线菌选择平均菌落数在3030030300之间之间者进行计算者进行计算 ，霉菌选平均菌落数在，霉菌选平均菌落数在1010010100之间。之间。.3 菌落计数及报告方法菌落计数及报告方法(实例实例)不同稀释度的平均菌落数不同稀释度的平

9、均菌落数两稀释度菌两稀释度菌落数落数 之比之比菌落总菌落总数数报告方式报告方式10-1 10-1 10-2 10-2 10-3 10-3 1 11365 1365 164 164 20 20 -2 22760276029529546461.61.63 32890289027127160602.22.24 4无法计数无法计数46504650513513_5 5272711115 5_6 6无法计数无法计数3053051212_7 7无法计数无法计数无法计数无法计数 无法计数无法计数_164001.6104377503.8104271002.71045130005.11052702.7102305

10、003.110410-3 无法计数无法计数. 1）若只有一个稀释度的平均菌落数在）若只有一个稀释度的平均菌落数在30-300范围范围时，则将该菌落数乘以稀释倍数报告之。时，则将该菌落数乘以稀释倍数报告之。 . 2）若有两个稀释度，其生长的菌落数均在）若有两个稀释度，其生长的菌落数均在30300之间，则视二者之比值来决定，若之间，则视二者之比值来决定，若其比值小于其比值小于2应报告两者的平均数。若大于应报告两者的平均数。若大于或等于或等于2则报告其中较小的菌落总数。则报告其中较小的菌落总数。.3）若所有稀释度的平均菌落数均大于）若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘

11、以稀释则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之倍数报告之 . 4）若所有稀释度的平均菌落数均小于）若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应以按稀释度最低的平均菌落数乘以稀则应以按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之释倍数报告之 .5）若所有稀释度的平均菌落数均不在）若所有稀释度的平均菌落数均不在30300之间，则应以最接近之间，则应以最接近30或或300的平的平均菌落数乘以稀释倍数报告之均菌落数乘以稀释倍数报告之 .6 6）平板出现大片菌苔不采用，菌苔小于平）平板出现大片菌苔不采用，菌苔小于平板的一半，若另一半菌落分布均匀，则菌落板的一半，若另一半菌落分布均匀，则菌落数数 2. 2.

12、 .注意事项注意事项:1、样品充分混匀，稀释时一个稀释度要换一支无样品充分混匀，稀释时一个稀释度要换一支无菌移液管（放菌液时吸管尖不要碰到液面菌移液管（放菌液时吸管尖不要碰到液面2、由于细菌易吸附玻璃器皿表面，菌液加入后应、由于细菌易吸附玻璃器皿表面，菌液加入后应尽快倒培养基，立即摇匀；尽快倒培养基，立即摇匀； 3、倾注平板时的培养基温度冷却至、倾注平板时的培养基温度冷却至45左右。左右。 4、计数时，、计数时，30300个菌落的稀释度计算每毫升个菌落的稀释度计算每毫升的菌数最为合适的菌数最为合适 5、同一稀释度的三个重复的菌数不能相差很悬殊、同一稀释度的三个重复的菌数不能相差很悬殊.平板菌落

13、计数法的平板菌落计数法的优点优点： 是能测出样品中的活菌数。此法常用是能测出样品中的活菌数。此法常用于某些成品和生物制品检定以及食品、水于某些成品和生物制品检定以及食品、水源的污染程度的检定等。源的污染程度的检定等。 缺点缺点： 手续较繁，而且测定值常受各种因素手续较繁，而且测定值常受各种因素的影响。的影响。 .空气微生物的检测空气微生物的检测1m3空气中细菌的总数：空气中细菌的总数：C=C=1000100050N50N At AtC1m3C1m3空气中细菌的总数空气中细菌的总数NN平皿中平均菌落数平皿中平均菌落数AA平皿的底面积平皿的底面积cm2cm2tt平皿在空气中暴露的时间（平皿在空气中暴露的时间（minmin）.作业对自己喜欢的某一食品进行微生物检验设计。对自己喜欢的某一食品进行微生物检验设计。要点：要点：食品相关记录食品相关记录(名称、厂家、商店等名称、厂家、商店等)所用物品清单所用物品清单工作计划（人员安排、进度安排等）工作计划（人员安排、进度安排等）报告格式（表格设计及报告书等）报告格式（表格设计及报告书等）.