HIV实验室检测课件.pptx

1、HIVHIV实验室检测实验室检测实习生：叶贝2017/4/28HIV病原学及流行病学特点HIV实验室检测方法罗氏第四代HIV检测试剂特点目录HIV病原学HIV人类免疫缺陷病毒，由包膜及核心组成，为RNA病毒HIV核心部分包括两条单股RNA链，核心结构蛋白及复制所需酶类（蛋白酶、逆转录酶、整合酶）HIV病毒逆转录酶无校对功能，故病毒变异性强，导致检测结果假阴性HIV病原学病毒识别易感细胞膜表面受体，在逆转录酶作用下由RNA逆转录为DNA经DNA转录及翻译后形成蛋白外壳，将病毒RNA包裹其中，生成新的HIV主要侵入T淋巴细胞及神经细胞，导致细胞免疫功能缺陷，增加机会性感染HIV流行病学全国呈低流行

2、态势，部分地区疫情严重HIV主要分为两种HIV-1和HIV-2两型；HIV-1类为全球主要流行类型，分为M、 O、N三个亚型组 HIV传播途径1、传染源：病人及无症状携带者血液、精子、子宫和阴道分泌物、唾液、眼泪和乳汁等传播2、传播途径性传播：同行、异性、双性性接触母婴传播：经胎盘、分娩及哺乳时传播血液制品传播：共用针具静脉注射毒品，介入性医疗操作，纹身，耳洞等 HIV感染自然史急性期艾滋病期无症状期初次感染HIV 2-4周，传染性最强主要以发热、关节痛、淋巴结肿大为特征可检出HIV及p24抗原，CD4+/CD8+倒置可持续6-8年，HIV在感染者体内不断复制，具有传染性可检测HIV及抗体，C

3、D4+ T淋巴续保逐渐下降HIV感染最终阶段，HIV血浆病毒载量明显升高，CD4+T淋巴细胞200个/ul主要表现为各种机会性感染及肿瘤血清学检测备注HIV抗体筛查试验：ELISA, CIA, ECLIA确证试验：WB, RIBA仅测抗体HIV p24抗原早期灵敏度更高HIV抗原+抗体HIV Ag/Ab combi PT: ELISA, ECLIA, CIA核酸检测备注HIV RNA 定性辅助确证试验Taqman荧光实时PCR试剂HIV RNA 定量辅助确证试验，监测治疗效果与疾病进展靶核酸扩增试剂淋巴细胞检测备注CD4+和CD8+ HIV感染分期，抗病毒治疗指针CD4+/CD8+比值下降HI

4、V实验室指标初筛试验+确证试验HIV检测流程全国艾滋病检测技术规范-2015年修订版检测流程初筛试验筛查复检HIV检测流程全国艾滋病检测技术规范-2015年修订版检测流程 确证试验确证仅能检测HIV-1，不能检测HIV-2和HIV Ag，灵敏度有限，窗口期长，易错过早期感染样本 试剂成本高，操作繁琐，结果判定主观HIV检测流程初始反应必须使用抗原和抗体联合检测的第四代免疫学方法，这类方法可以同时检测HIV-1抗体、HIV-2抗体和HIV p24抗原，检测出HIV-1、HIV-2感染和急性HIV-1感染，初始检测无反应性则无需进行进一步检测初始反应阳性标本需经过FDA批准的抗体鉴别试剂进行HIV

5、-1和HIV-2抗体鉴别试验，结果以HIV-1抗体阳性、HIV-2抗体阳性、HIV抗体阳性或无法鉴别来解释初始检测有反应，抗体鉴别检测无反应性或不明确标本须经HIV-1核酸检测，HIV-1 NAT有反应性而抗体鉴别无反应性为急性HIV-1感染；HIV-1 NAT有反应性而抗体鉴别试验不明确为HIV-1感染；HIV-1 NAT无反应性而抗体鉴别不明确为假阳性结果联合试验鉴别试验核酸试验美国CDC推荐HIV检测流程 2014修订版HIV检测HIV感染后首先检测到HIV RNA第四代HIV检测试剂检测到HIV p24抗原，为抗原抗体联合检测第三代及其以前的试剂均为只检测HIV抗体HIV-1/2/O抗

6、体HIV-1/2/O抗体+HIV p24抗原3rd 代抗体检测核酸检测方法4th 代抗原抗体检测周年24356789101 2435 6017 8 9p24 抗原检测p24 抗原检测从初始感染后的时间 无症状期急性期第一个血清转换窗口期核酸检测方法第四代HIV抗原抗体联合检测法 Elecsys HIV combi PT 罗氏HIV试剂艾滋病期缩短检测窗口期，早期诊断2nd 代抗体检测SeroconversionpanelElecsys HIVcombi PTElecsys HIVcombiADVIA Centaur HIVAg/Ab comboARCHITECT HIVAg/Ab comboV

7、IRONOSTIKA HIV Univ-Form II plus OZhuhai Livzon anti-HIV Serodia HIV1/2PRB 9300440888PRB 9588NANA8NANANANabi 07590000NA48Nabi 143600NA0999Nabi 40090NA003NANANabi 900366NA610610Nabi 251650000NA44第四代HIV抗原抗体联合检测法 Elecsys HIV combi PT 罗氏HIV试剂缩短检测窗口期，早期诊断Elecsys HIV Combi PT阳转时间较PCR 方法平均晚2天，早于或等于其它方法与三种第

8、三代检测方法相比， Elecsys Combi PT 是 1.2 days ，优于Elecsys HIV combi (2.0 days), Zhuhai Livzon anti-HIV(6.2 days) and Serodia HIV1/2 (7.8 days).与ADVIA Centaur相比, the Elecsys HIV combi PTs 的检出时间是 0 days ， ADVIA Centarurs (1.0 days).与VIRONOSTIKA HIV Univ-Form II plus O相比，Elecsys HIV combi PTs 是 1.5 days ，VIRONO

9、STIKA HIV Univ-Form II plus Os (7.5 days).罗氏HIV试剂第四代HIV抗原抗体联合检测法 Elecsys HIV combi PT 缩短检测窗口期，早期诊断5.478 days(Roche, data on file)罗氏HIV试剂第四代HIV抗原抗体联合检测法 Elecsys HIV combi PT = = 诊断相关蛋白诊断相关蛋白p24gp120gp41/gp36p17（基质蛋白）RT(逆转录酶)RNAP24 抗原是HIV病毒的核心蛋白HIV-Ag的检测HIV-Ab的检测膜蛋白罗氏HIV试剂第四代HIV抗原抗体联合检测法 Elecsys HIV c

10、ombi PT 包含检测物功能抗原检测p24 module 1p24 Ag早期检测HIV感染及终末期感染p24 module 2p24 Ag检测O亚型以及HIV-2抗体检测gp41 module 1HIV-1 IgM and IgG 确保 HIV-1的检测高灵敏gp36 module 1HIV-2 IgM and IgG确保HIV-2的检测高灵敏HIV-1 RTHIV-1 IgG确保检测所有HIV亚型的安全性HIV-2 RTHIV-2 IgG检测所有HIV亚型的安全性gp41 module 2HIV-1 subtype O确保检测O亚型的灵敏度gp36 module 2 HIV-2 IgG 确

11、保检测HIV-2的备份缓冲液添加抗干扰物质避免干扰 可识别所有亚型罗氏HIV试剂可识别所有亚型第四代HIV抗原抗体联合检测法 Elecsys HIV combi PT 6198472罗氏HIV试剂第四代HIV抗原抗体联合检测法 Elecsys HIV combi PT 9 min9 min9 min9 min9 min9 min预处理裂解出p24抗原Ag-Ab复合物磁珠加入共27min孵育,测量池检测夹心法形成免疫复合物罗氏HIV试剂第四代HIV抗原抗体联合检测法 Elecsys HIV combi PT 早期感染血清转换期的检测不同时期HIV感染病人的检测高灵敏度不同亚型的检测Elecsys

12、 HIV combi PTARCHITECT HIV Ag/Ab comboADVIA Centaur HIV Ag/Ab comboElecsys HIV combiZhuhai Lizhu anti-HIV EIAVIRONOSTIKA HIV Univ-Form II plus OTotal number 4,4652,7511,039675675703IR (1 s/co)51505102Confirmed positive45440002Number of false positives*665100Specificity (IR, 1 s/co)99.86%99.78%99.52%

13、99.85%100.00%100.00%95% confidence limit (IR, 1 s/co)99.7199.9599.5299.9298.8899.8499.18100.0099.45100.0099.48100.00罗氏HIV试剂第四代HIV抗原抗体联合检测法 Elecsys HIV combi PT 高特异性罗氏HIV试剂排除类风湿因子、自身抗体、单克隆丙种球蛋白、EB病毒抗体、巨细胞病毒抗体、单纯疱疹病毒抗体、流感疫苗等非特异性干扰、抗干扰能力强高特异性Case分享REN XX Men29 YDays since first bleedHIV Combi PT (COI)H

14、IV Combi (COI)ELISA (S/CO)HIV RNA（高精分析）WB0102011/08/01/4.41/4.05 (POS)0.04(NEG)/P24 (不确定)021342011/12/12/4.49(POS)0.01(NEG)HIV RNA(NEG)P24 (不确定)罗氏HIV Combi 试剂2次均出现阳性结果，P24抗原也均出现条带，但HIV-RNA分析病毒为阴性，最终报告为阴性，该患者实为淋巴瘤，分析时注意干扰因素淋巴瘤患者、孕妇、肿瘤病人、透析患者4种病人都可能出现HIV初筛阳性，需特别对待华西案例分析 CASE 1Case分享华西案例分析 CASE 2WUXXMe

15、n30 YDays since first bleedHIV Combi PT (COI)HIV Combi (COI)ELISA (S/CO)HIV RNA（高精分析）WB010 2012/02/1051.15 (POS) 2.59 (POS)0.04 (NEG)/P24(不确定)021052012/05/25302.7(POS)/11.09 (POS)1.8X105(POS)p24,p31，p51, p66,gp120，gp160该患者第1次检测罗氏HIV Combi PT和HIV Combi均为阳性、 ELISA为阴性、 HIV-Ag检测阳性，患者不同意做确证实验，在105天后第2次采血，罗氏HIV Combi PT 和国产ELISA法检出阳性，WB分析检出较多抗原亚类，实验室作HIV- RNA高精分析证实病毒阳性，最终报告为阳性