中药制剂的理化鉴别技术课件.ppt

1、其中色谱法尤其是薄层色谱法得到广泛的应用，这主要是由于色谱法具有分离分析双重功能从而大大提高了鉴别工作的灵敏度和专属性，并成为今后中药制剂鉴别的发展方向。 （六）挥发性成分 香草醛浓硫酸反应：呈红、红紫色。 应用品种主要有： 万应锭（冰片） 牛黄解毒片（冰片） 养心定悸膏（桂枝、生姜）等o蛋白质氨基酸6.安胃片7.天王补心丹8.牙痛一粒丸9.中风回春片 实例实例 牛黄解毒片中大黄、黄芩的牛黄解毒片中大黄、黄芩的 定性鉴别反应定性鉴别反应 取本品6片(去包衣)，研细，加乙醇10ml，温热10分钟，过滤，滤液作如下反应： (1)取滤液5ml，加镁粉少量与盐酸0.5ml，加热，即显红色。（黄芩中有大

2、量黄酮） (2)另取滤液4ml，加氢氧化钠试液，显红色，再加30过氧化氢溶液，加热，红色不消失，加酸或酸性时，红色变为黄色。（大黄中含有羟基蒽醌）六味地黄丸中冰片升华物六味地黄丸中冰片升华物显微镜下观六味地黄丸中冰片升华物香草醛浓硫酸显色 升华时应缓缓加热，温度过高，易使药粉焦化，在载玻片上产生焦油状物，影响对升华物的观察或检识。温度的控制可通过调整酒精灯火焰与石棉板的间距来实现。 样品粉末用量一般约0.5g，过少不易产生足够量的升华物。 可在载玻片上滴加少量水降温，促使升华物凝集析出。 无金属片，可用载玻片代替。区分 取中成药的提取液点加于滤纸上或加入蒸发皿中，置紫外光灯（365nm）下约1

3、0cm处观察所产生的荧光。必要时可在供试品上加酸、碱或其它试剂，再观察荧光及其变化。 荧光强度较弱，故一般需在暗室中观察荧光。 供试液一般用毛细管吸取，少量多次点加在滤纸上，使斑点集中且具有一定浓度。 紫外光对人的眼睛和皮肤有损伤，操作者应避免与紫外光较长时间接触。 （一）简便、快速、易普及，具有分离和分析双重功能，且采用共薄层对照分析法，故专属性较强。 （二）系统适用性试验 (05版药典新增) 1.检测灵敏度 2.分离度 3.重复性 分离度（R）的计算公式为： R=2(d2-d1)/(W1+W2） 式中 d1为相邻两峰中后一峰与原点的距离； d2为相邻两峰中前一峰与原点的距离； W1 及W2

4、为相邻两峰各自的峰宽；ABW1W2d1d23.3.重复性重复性 主要用于含量测定。即同一供试品溶液在同一块薄层板上平行点样的待测成分的峰面积测量值的相对标准偏差相对标准偏差(RSD)(RSD)应不大于不大于3.0%3.0%；需显色后测量的相对标准偏差应不大于5.0%。相对标准偏差相对标准偏差(RSD)标准偏标准偏差：差：相对标准偏差相对标准偏差(RSD)RSD=Sx100% 供试液的净化程度 吸附剂的性能和薄层板的质量 点样（原点）的质量 展开剂的组成和饱和情况 对照品的纯度 展开的距离 相对湿度和温度普通薄层板高效薄层板硅胶薄层板硅胶GF254薄层板聚酰胺薄层板氧化铝薄层板市售薄层板常用2.

5、2.自制薄层板自制薄层板 除另有规定外，玻板可用10cm10cm、10cm15cm、20cm10cm、20cm20cm不同规格的，最常用的固定相有硅胶G、硅胶GF254、硅胶H、硅胶HF2 5 4等。其颗粒大小，一般要求直径为1040m。 G：表示熟石膏（CaSO4） F：表示荧光 H：表示不含粘合剂（二）点样器材（二）点样器材 为了增强药品定性鉴别的可比性，中国药典规定采用定量点样。 最常用的是微升毛细管（定容毛细管），为了提高点样效率和质量，还可用点样辅助设备，如点样支架、半自动或自动点样器。全自动点样仪微升毛细管手动点样仪手动点样仪（四）显色（检视）装置展开后的薄层板，一般需采用相应的显

6、色（检视）方法使板上的被检成分斑点显色。喷雾显色应使用玻璃喷雾瓶或专用喷雾器，要求用压缩气体使显色剂呈均匀雾状喷出；浸渍显色可用专用玻璃器皿或适宜的展开缸做为浸渍槽；蒸气熏蒸显色可在双槽展开缸或大小适宜的干燥器中进行；荧光检视装置为装有可见光、254nm及365nm紫外光源和相应滤光片的暗箱，可附加摄像设备供拍照图像用，暗箱内光源应有足够的光照度。荧光显色 一般操作步骤：薄层板制备（制板）点样展开显色与检视（一）薄层板制备（一）薄层板制备 1. 1.市售薄层板市售薄层板 临用前一般应在活化分钟。 聚酰胺薄膜不需活化。 110活化，放干燥器中备用。（二）点样（二）点样 1.供试品溶液的制备 2.

7、原点的点加（三）展开（三）展开 1、一般采用上行一次展开上行一次展开。 2、展开剂液面距原点5mm5mm为宜 3、一般上行展开展开815cm815cm 4 4、 （四）显色与检视（四）显色与检视 1、颜色较深：日光下检视 2、无色或浅色：多用喷雾法或浸渍法显色剂显色 3、荧光物质：紫外灯（365nm） 4、蒸气熏蒸（如碘蒸气、氨蒸气）显色 5、无色有紫外吸收且不产生荧光的成分：可用荧荧光淬灭法光淬灭法显色。 即在含有荧光剂的硅胶板（如硅胶GF254板），在紫外光灯（254nm）下观察板面上该成分形成的荧光淬灭色谱。 薄层色谱图象可采用摄像设备拍照，以光学照片或电子图象的形式保存。也可以用扫描仪

8、记录相应的色谱图。薄层色谱数码相机成像系统（一）六味地黄丸中牡丹皮的鉴别1.丹皮酚 25.六味地黄丸实例实例-首乌丸薄层色谱鉴别首乌丸薄层色谱鉴别提取方法：甲醇提取薄层板：硅胶G+0.5%NaOH展开剂：甲苯-乙酸乙酯-甲酸（15:2:1）检测波长：365nm1 大黄素2 大黄素甲醚3-4 何首乌对照药材5-6 首乌丸 1 2 3 4 5 6第六节第六节 紫外紫外- -可见光谱鉴别法可见光谱鉴别法( UV )( UV ) 某些中药或中成药经适当处理后，所得紫外吸收光谱是由其各组分的特征吸收叠加而成的。若将中药制剂作为一个特定的整体，在一定测试条件下，只要各药味及其成分的组成与含量相对稳定，则其

9、紫外吸收光谱具有一定的特征性和重现性，可以用于定性鉴别。 两组分的加和紫外吸收光谱分光光度鉴别法简便、灵敏、易普及。但由于紫外光谱分辨率较低，图谱简单，某些不同的样品可能给出极其相似的光谱图，使其在实际工作中受到一定的限制。如果对样品进行前处理，除去干扰成分，则可有效地提高该法的专属性。中国药典仅有少数中成药品种收载了分光光度鉴别法，例如，木香槟榔丸等。中国药典规定以最大吸收波长（max）做为鉴别参数。样品吸收峰波长应在该品种项下规定的波长2nm以内。复方丹参片紫外谱线组图 将供试品最大吸收波长和药品标准的规定进行比较，二者如果一致，则判定为符合规定。木香槟榔丸 处方：木香、槟榔、枳壳、陈皮、

10、青皮（醋炒）、香附（醋制 ）、三棱（醋制）、莪术（醋制）取本品粉末4g，置蒸馏瓶中，加水10ml，使供试品湿润后，水蒸汽蒸馏，收集馏液约100ml，照紫外分光光度法（中国药典附录V A）测定，在253nm波长处有最大吸收。（检出挥发性成分） 第七节第七节 气相色谱鉴别法气相色谱鉴别法(Gas Chromatography GC) 在一定的色谱条件下，相同的物质应具有相同的色谱特性（分配系数）和色谱行为（保留值）。因此，在同一色谱条件下，将供试品溶液和对照品溶液分别注入气相色谱仪，对二者的气相色谱图进行比对，根据供试品是否给出与对照品保留时间相同的色谱峰，从而对样品作出定性分析。这种方法可称为保

11、留时间比较法，中国药典即采用此法对某些中成药进行真伪鉴别。保留时间（tR）系指从进样开始，到该组分色谱峰顶点的时间间隔。 气相色谱法具有高分辨率，高灵敏度、快速、准确等特点，尤其适合分析制剂中的挥发性成分，如麝香酮、薄荷醇、冰片、水杨酸甲酯等。一般情况下气相色谱不适合分析蒸汽压较低的也即挥发性较小的成分，因此该法在实际工作中具有一定的局限性。 气 相 色 谱 仪-麝香酮安宫牛黄丸第八节第八节 高效液相色谱鉴别法高效液相色谱鉴别法（High Performance Liquid Chromatography HPLC) 高效液相色谱法鉴别在原理和操作上与气相色谱鉴别法有许多相似之处。中国药典采用

12、保留时间比较法，即在相同的色谱条件下，比较样品和对照品的色谱峰的保留时间（tR）是否一致，从而对被检成分（药味）的存在情况做出判断。例如，六味地黄丸中芍药苷和四君子丸中甘草酸的鉴别。 六味地黄丸中芍药苷的高效液相色谱图(a.芍药苷) A.芍药苷对 照品 B.六味地黄丸供试品标准品 高效液相色谱法不受样品挥发性的限制，固定相、流动相的选择范围较宽，检测手段多样，加之高效快速，微量，自动化程度高等特点，所以在药物分析工作中比气相色谱法应用更为广泛，在中药制剂鉴别中的应用也日益增多。不过，目前在中药制剂质量标准中，一般很少单独使用该法做鉴别，而是多与含量测定结合进行。 （一）龙牡壮骨颗粒中维生素D2

13、鉴别（P82） （二）百令胶囊的鉴别（05版新增内容） 本品系由发酵虫草菌粉（CS-C-Q80）制成。采用高效液相色谱法鉴别其中的核苷类成分。 核苷类成分的鉴别：核苷类成分的鉴别： 样品先用乙醚脱脂，再用0.5磷酸溶液超声波提取制成核苷供试液。用反相高效液相色谱法测定，以乙腈为流动相A，以0.04mol/L磷酸二氢钾溶液为流动相B，梯度洗脱，供试品色谱应呈现与对照药材色谱保留时间相同的六个主色谱峰，与腺苷、尿苷对照品保留时间相同的色谱峰。 时间（分钟） 流动相A（） 流动相B（） 015 0 100 1545 015 10085腺苷尿苷25214356对照药材样品40高效液相高效液相色谱鉴别法色谱鉴别法 气相气相色谱鉴别法色谱鉴别法