分子生物学常用技术课件.pptx

1、第二十一章第二十一章The Popular Technology in The Popular Technology in Molecular BiologyMolecular Biology6/3/20221第第2节节 PCR技术技术第第3节节 转基因技术与基因剔除技术转基因技术与基因剔除技术第第1节节 分子印迹与杂交技术分子印迹与杂交技术第第6节节 蛋白质与核酸相互作用研究技术蛋白质与核酸相互作用研究技术第第4节节 生物芯片技术生物芯片技术第第5节节 蛋白质相互作用研究技术蛋白质相互作用研究技术6/3/20222Molecular Blotting & Hybridization Tech

2、nology6/3/202236/3/20224(heteroduplex)6/3/20225与被测序列互补与被测序列互补经过特殊标记经过特殊标记r-32P ATPa-32P dATP6/3/20226HdATP*6/3/20227dUTPDig-dUTPBiotin-dUTPDig-DNA探针杂交探针杂交化学发光信号检测原理化学发光信号检测原理 Luminol化学发光原理化学发光原理 Biotin-DNA探针杂交探针杂交化学发光信号检测原理化学发光信号检测原理 Luminol化学发光原理化学发光原理 Biotin6/3/2022106/3/202211支持物支持物转转移移缓缓冲冲液液What

3、manWhatman滤纸滤纸凝胶凝胶WhatmanWhatman滤纸滤纸纸纸巾巾玻璃板玻璃板重物重物500gNCNC膜或尼龙膜膜或尼龙膜6/3/2022136/3/202214 电泳电泳, ,转膜，转膜，紫外交联固定紫外交联固定D DD D6/3/202215底物在HRP催化下,反应发光SASAHRPHRP底物底物B BB BHRP标记的链亲和素与探针上的生物素结合6/3/2022161.1.曝光：曝光：用滤纸吸去杂交膜上多余底物，作好标记，用滤纸吸去杂交膜上多余底物，作好标记， 保鲜膜包裹，放在暗夹里，放上保鲜膜包裹，放在暗夹里，放上X X光片，曝光光片，曝光1-51-5 分钟；分钟；2.2

4、.显影：显影：取出取出X X光片，按使用说明书显影和定影。光片，按使用说明书显影和定影。后继的化学发光检测后继的化学发光检测 Luminol化学发光原理化学发光原理 6/3/202217 将变性的将变性的DNADNA或或RNARNA直接点样于直接点样于NCNC膜或尼龙膜上，膜或尼龙膜上，故称为斑点印迹。简便、快速，可以在同一张膜上故称为斑点印迹。简便、快速，可以在同一张膜上进行多个样品的检测。进行多个样品的检测。 是指是指直接用组织切片或细胞涂片进行杂交的方直接用组织切片或细胞涂片进行杂交的方法，可用于检测组织切片或细胞内某些特异性核苷法，可用于检测组织切片或细胞内某些特异性核苷酸或核酸片段。

5、酸或核酸片段。6/3/202218 用用Western blotting检测样品中存在特异蛋白质检测样品中存在特异蛋白质 用于细胞中特异蛋白质的定量分析用于细胞中特异蛋白质的定量分析 用于蛋白质分子的相互作用研究用于蛋白质分子的相互作用研究6/3/2022196/3/2022206/3/2022216/3/2022226/3/2022236/3/202224 三种印迹技术的比较三种印迹技术的比较 Southern blotting Northern blotting Western blotting样品样品限制性内限制性内切酶消化切酶消化电泳电泳变性变性转移膜转移膜紫外交联紫外交联仪等固定仪等

6、固定杂交标记物杂交标记物DNARNA蛋白质蛋白质需要需要 不需要不需要 不需要不需要 琼脂糖凝琼脂糖凝胶电泳胶电泳琼脂糖凝琼脂糖凝胶电泳胶电泳SDS-PAGE电泳电泳碱变性碱变性甲醛或戊甲醛或戊二醛变性二醛变性高温变性高温变性NC膜或膜或尼龙膜尼龙膜NC膜或膜或尼龙膜尼龙膜NC膜或膜或PVDF膜膜需要需要 需要需要 不需要不需要标记探针标记探针 标记探针标记探针 (标记标记)抗体抗体6/3/202225PCR Polymerase Chain Reaction6/3/2022265 Primer 15 Primer 2Cycle 2Cycle 15 5 5 5 5 5 Template DNA

7、5 5 5 5 5 5 5 5 一、一、PCRPCR技术的基本原理技术的基本原理6/3/202227Cycle 35 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 2530 次循环后，模板次循环后，模板DNA的的含量可以扩大含量可以扩大100万倍以上。万倍以上。6/3/202228 模板模板DNA 特异性引物特异性引物 耐热耐热DNA聚合酶聚合酶 (Taq DNA聚合酶聚合酶) dNTPs Mg2+n PCR体系基本组成成分体系基本组成成分6/3/202229 一、一、PCRPCR技术的基本原理技术的基本原理PCR反反应应循循环环变性变性95C左右左右延伸延伸酶最适温度酶最适温度

8、7272退火退火Tm-5C5555 经过经过30个左右的循环后，个左右的循环后，PCR的扩增倍的扩增倍数为数为(1+x)n, x=75%, n为循环数为循环数. 二、二、PCRPCR技术的主要特点技术的主要特点1.1.特异性强特异性强 2. 2.灵敏度高灵敏度高 3. 3.简便快速简便快速 4.4.对标本的纯度要求低对标本的纯度要求低 6/3/2022316/3/202232 （三）基因突变分析（三）基因突变分析 PCR PCR与其他技术的结合可以大大提高与其他技术的结合可以大大提高 基因突变检测的敏感性。基因突变检测的敏感性。 （四）（四） DNADNA和和RNARNA的微量分析的微量分析

9、（五）（五） DNADNA序列测定序列测定 （二）基因的体外定点突变二）基因的体外定点突变- （一）目的基因的扩增与克隆（一）目的基因的扩增与克隆 2. 2. 利用利用特异性引物特异性引物以以cDNAcDNA或基因组或基因组DNADNA为模板获得为模板获得已知目的基因片段。已知目的基因片段。 3. 3. 利用利用简并引物简并引物从从cDNAcDNA文库或基因组文库中获得文库或基因组文库中获得具有一定同源性的基因片段。具有一定同源性的基因片段。 4. 4. 利用利用随机引物随机引物从从cDNAcDNA文库或基因组文库中随机文库或基因组文库中随机克隆基因。克隆基因。 1. 1.与与反转录反应反转录

10、反应相结合，直接从组织和细胞的相结合，直接从组织和细胞的mRNAmRNA获得目的基因片段。获得目的基因片段。6/3/202233 （一）目的基因的扩增与克隆（一）目的基因的扩增与克隆（二）基因的体外定点突变（二）基因的体外定点突变-The Nobel Prize in Chemistry 1993for contributions to the developments of methods within DNA-based chemistry Michael Smith1944 -1932 - 2000La Jolla, CA, USA Kary B. Mullis University o

11、f British Columbia Vancouver, Canada for his invention of the polymerase chain reaction (PCR) methodfor his fundamental contributions to the establishment of oligonucleotide-based, site-directed mutagenesis and its development for protein studies6/3/202235电泳电泳负极负极正极正极 测序反应测序反应 GATC（五）（五）末端合成终止法测定末端合

12、成终止法测定DNADNA序列的原理序列的原理*2，3双脱氧核苷酸双脱氧核苷酸*用用4种不同荧光标记种不同荧光标记 DNADNA样品、引物样品、引物 DNA DNA聚合酶、聚合酶、dNTPdNTPddGddAddTddC5 3 CCGATTCTTGCACCTGAGGCTAAAAACGTGGACTGGCTAAAddAAddAGGCTAAAAAddCGGCTAAAAACddGGGCTAAAAACGddTGGCTAAAAACGTddGGGCTAAAAACGTGddGGGCTAAAAACGTGGddAGGCTAAAAACGTGGAddCGGCTAAAAACGTGGACddTGGCTAAADNA自动测序结

13、果自动测序结果6/3/202237The Nobel Prize in Chemistry 1980for his fundamental studies of the biochemistry of nucleic acids, with particular regard to recombinant-DNAfor their contributions concerning the determination of base sequences in nucleic acidsPaul Berg1/2 of the prizeStanford University Stanford, C

14、A, USA1926 - Walter Gilbert Frederick Sanger1/4 of the prize 1/4 of the prize Harvard University, Biological Laboratories Cambridge, MA, USAMRC Laboratory of Molecular Biology Cambridge, United Kingdom1932 - 1918 - 弥补了弥补了PCRPCR技术和原位杂交技术的不足，是将技术和原位杂交技术的不足，是将目的基因的扩增与定位相结合的一种最佳方法。目的基因的扩增与定位相结合的一种最佳方法。

15、通过动态监测反应过程中的产物量，消除了产通过动态监测反应过程中的产物量，消除了产物堆积对定量分析的干扰，亦被称为定量物堆积对定量分析的干扰，亦被称为定量PCRPCR。 6/3/202239 是目前从组织或细胞中获得目的基因以及对已是目前从组织或细胞中获得目的基因以及对已知序列的知序列的RNARNA进行定性及半定量分析的最有效方法进行定性及半定量分析的最有效方法 P C RP C R 扩 增 时 ，扩 增 时 ，TaqTaq酶的酶的5- 35- 3外外切酶活性切酶活性将探针酶将探针酶切降解，使切降解，使和和分离，从而使分离，从而使荧光监测系统可接荧光监测系统可接收到荧光信号；收到荧光信号； 每扩

16、增一条每扩增一条DNADNA链就有一个荧光分链就有一个荧光分子形成，实现了荧子形成，实现了荧光信号的累积与光信号的累积与PCRPCR产物形成完全同步。产物形成完全同步。6/3/202240Transgenic Technology & GeneKnockout Technology6/3/202241 是指将是指将外源基因整合到动物或植物细胞的基因外源基因整合到动物或植物细胞的基因组中，组中，并使外源基因在动物细胞或植物细胞中稳定并使外源基因在动物细胞或植物细胞中稳定地遗传和表达的技术。地遗传和表达的技术。 基因的导入方式主要：基因的导入方式主要： 显微注射法显微注射法( (最常用最常用) )

17、 胚胎干细胞法胚胎干细胞法 逆转录病毒感染法逆转录病毒感染法 6/3/202242 一、转基因技术一、转基因技术转基因小鼠转基因小鼠正常小鼠正常小鼠1982年哈佛年哈佛R.D.Palmiter“制造制造”的的“超级小鼠超级小鼠”基本原理基本原理 是采用是采用显微注射等方法，显微注射等方法，将目的基因导入将目的基因导入受受精卵精卵或或着床前的胚胎干细胞核内，着床前的胚胎干细胞核内，并经并经整合到的基因组整合到的基因组DNADNA中，然后将细胞置中，然后将细胞置入受体动物入受体动物子宫子宫，使之发育成个体。，使之发育成个体。 被导入的目的基因被导入的目的基因：目的基因的受体动物目的基因的受体动物u

18、乳腺生物反应器的诞生乳腺生物反应器的诞生 1987年年Gordon等将等将与小鼠与小鼠构成重组基因，培育出了构成重组基因，培育出了37。动物动物多肽药物多肽药物用途用途绵羊绵羊a1抗胰蛋白酶蛋白抗胰蛋白酶蛋白治疗气肿治疗气肿绵羊绵羊CFTR治疗治疗 囊肿性纤维化囊肿性纤维化绵羊绵羊组织型纤溶酶原活化因子组织型纤溶酶原活化因子治疗血栓治疗血栓绵羊绵羊凝血凝血VIII因子、因子、IX因子因子治疗血友病治疗血友病绵羊绵羊纤维蛋白原纤维蛋白原伤口愈合伤口愈合猪猪组织型纤溶酶原活化因子组织型纤溶酶原活化因子治疗血栓治疗血栓猪猪凝血凝血VIII因子、因子、IX因子因子治疗血友病治疗血友病山羊山羊人蛋白质人

19、蛋白质 C治疗血栓治疗血栓山羊山羊抗血栓因子抗血栓因子 3治疗血栓治疗血栓山羊山羊谷氨酸脱羧酶谷氨酸脱羧酶治疗治疗I型糖尿病型糖尿病山羊山羊Pro542治疗爱滋治疗爱滋 病病牛牛a-乳清白蛋白乳清白蛋白抗炎症抗炎症牛牛凝血凝血VIII因子因子治疗血友病治疗血友病牛牛纤维蛋白原纤维蛋白原伤口愈合伤口愈合牛牛胶原蛋白胶原蛋白 I, II组织修复组织修复, 治疗风湿性关节炎治疗风湿性关节炎牛牛乳铁蛋白乳铁蛋白治疗肠道感染治疗肠道感染, 感染性关节炎感染性关节炎牛牛人血清白蛋白人血清白蛋白维护血液体积维护血液体积鸡鸡, 牛牛, 山羊山羊单克隆抗体单克隆抗体用于疫苗生产用于疫苗生产是用显微操作、电融合等

20、方法，将供体动物是用显微操作、电融合等方法，将供体动物全部导入另一动物个体的全部导入另一动物个体的，然后将其置然后将其置入受体动物子宫入受体动物子宫，使之发育成为动使之发育成为动物个体的技术员。物个体的技术员。6/3/202246 二、核转移技术二、核转移技术-即即 核转移技术产生的个体所携带的遗传物质，与核转移技术产生的个体所携带的遗传物质，与细胞核供体的遗传物质完全一样，细胞核供体的遗传物质完全一样，即，即克隆克隆(clone)。1997年年2月月27日日Nature杂志报道：科学家杂志报道：科学家维尔维尔穆特穆特( (WilmutWilmut) )和和坎贝尔坎贝尔( (Campbell)

21、Campbell)，利用，利用克隆克隆技术，培育出一只小母技术，培育出一只小母羊羊“多利多利” 。克隆克隆技术技术被被科学科学评为评为1997年世界十大科年世界十大科技进步之首。技进步之首。 “多利多利”诞生标志着诞生标志着生物技术新时代的来临生物技术新时代的来临1.1.用于动物克隆用于动物克隆转移的核末经修饰转移的核末经修饰核转移技术的基本原理核转移技术的基本原理1. 将供者细胞核注将供者细胞核注入到去核卵细胞内入到去核卵细胞内2. 用电转移法将供者细胞核注射到去核卵细胞内u1997年年6月月维尔穆特维尔穆特( (WilmutWilmut) )报道：用基因改造过报道：用基因改造过的胎儿成纤维

22、细胞为核供体，获得了表达人凝血因子的胎儿成纤维细胞为核供体，获得了表达人凝血因子IX的转基因克隆绵羊的转基因克隆绵羊“波莉波莉”。克隆出携带有人凝血因子克隆出携带有人凝血因子X基因的绵羊早期胚胎基因的绵羊早期胚胎 成纤维细胞。成纤维细胞。以该细胞系为核供体移植到去核卵母细胞中，经过以该细胞系为核供体移植到去核卵母细胞中，经过 处理后将卵母细胞植入假孕绵羊体内发育。处理后将卵母细胞植入假孕绵羊体内发育。获得获得3只能高水平表达人凝血因子只能高水平表达人凝血因子X（125g/ml） 的绵羊。的绵羊。2.2.用于转基因动物生物反应器的制备用于转基因动物生物反应器的制备 转移经过修饰的核转移经过修饰的

23、核 通过通过DNADNA，使动物胚胎干细，使动物胚胎干细胞胞(ES(ES细胞细胞) )的某特定内的某特定内源基因被破坏而造成其源基因被破坏而造成其功能丧失。功能丧失。6/3/202250基本过程包括：基本过程包括： 用同源基因片段用同源基因片段构建含有失活目的基因的载体构建含有失活目的基因的载体；显微注射法将含有失活目的基因的载体导入显微注射法将含有失活目的基因的载体导入ES细细胞，胞，与与ES细胞染色体的相应基因发生细胞染色体的相应基因发生同源重组同源重组，替，替代代(剔除剔除)掉掉ES细胞中原有的正常细胞中原有的正常/异常基因；异常基因；将含有基因剔除的将含有基因剔除的ES细胞的细胞的囊胚

24、移植到假孕小鼠囊胚移植到假孕小鼠的子宫的子宫中，使之发育成一种既含基因剔除细胞又含中，使之发育成一种既含基因剔除细胞又含正常细胞的正常细胞的；将嵌合体小鼠与正常小鼠交配将嵌合体小鼠与正常小鼠交配，最终筛选出基因，最终筛选出基因剔除的剔除的。将将注入动物的注入动物的囊胚中，使其与囊胚中，使其与共同组成共同组成；四、基因转移和基因剔除在医学中的应用四、基因转移和基因剔除在医学中的应用 （一）建立疾病动物模型（一）建立疾病动物模型 （二）生物制药（二）生物制药 （三）治疗性克隆和生产可用于人体器官移植的（三）治疗性克隆和生产可用于人体器官移植的 动物器官动物器官6/3/202252 建立人类疾病的各

25、种动物模型，研究基因在动建立人类疾病的各种动物模型，研究基因在动物体内的表达调控规律及其产物与疾病的关系。物体内的表达调控规律及其产物与疾病的关系。 转基因动植物作为医用或食用蛋白的生物反应转基因动植物作为医用或食用蛋白的生物反应器，器，用于生产出具有医药价值的多肽或蛋白质、抗用于生产出具有医药价值的多肽或蛋白质、抗体、疫苗等。体、疫苗等。Biochip Technology6/3/202253生物芯片生物芯片: : 生物芯片包括生物芯片包括基因芯片基因芯片、蛋白质芯片蛋白质芯片、细胞芯细胞芯片片和和组织芯片组织芯片等。等。6/3/202254 是指采用微电子和微加工技术，将大量是指采用微电子

26、和微加工技术，将大量已知序已知序列的核酸或蛋白质片段列的核酸或蛋白质片段等，有序地组合在约等，有序地组合在约1cm1cm2 2大大小的固相介质表面而构成的集成分析系统。小的固相介质表面而构成的集成分析系统。 将其与将其与标记样品中的标记样品中的特异特异核酸或蛋白分子杂交、核酸或蛋白分子杂交、结合，通过对结合，通过对“标记标记”的的测定即可实现对核酸测定即可实现对核酸或或蛋蛋白质组分的快速、高效的分析处理。白质组分的快速、高效的分析处理。 DNA DNA芯片芯片(DNA chip)(DNA chip)、DNADNA阵列阵列(DNA array) (DNA array) 或或cDNAcDNA芯片芯

27、片(cDNA chip)(cDNA chip) 一、基因芯片一、基因芯片(gene chip)(gene chip)6/3/202255 指以原位合成或显微打印的方式，指以原位合成或显微打印的方式，将大量将大量特定的特定的DNADNA片段或片段或cDNAcDNA片段作为探针片段作为探针，有规律，有规律地紧密排列、固化在地紧密排列、固化在约约1cm1cm2 2的支持物上。的支持物上。 使用时与使用时与标记的样品标记的样品杂交，通过对杂交信杂交，通过对杂交信号的检测分析从而得出样品的遗传信息。号的检测分析从而得出样品的遗传信息。6/3/202256玻片型玻片型这种芯片的点阵是通过原位合成技术这种芯

28、片的点阵是通过原位合成技术制作的，制作的，10104040 万点阵万点阵/cm/cm2 2，必须借助于特殊的仪，必须借助于特殊的仪器对测定结果进行解读和分析。器对测定结果进行解读和分析。(Affimetrix公司公司)。22022202芯片点样仪芯片点样仪* * 红色表示上调；红色表示上调； 黄色表示不变；黄色表示不变；绿色表示下调。绿色表示下调。是将蛋白分子作为探针，高度密集排列、固定是将蛋白分子作为探针，高度密集排列、固定在固相支持物上的点阵。在固相支持物上的点阵。加入待测蛋白样品反应时，可捕获样品中的靶加入待测蛋白样品反应时，可捕获样品中的靶蛋白，再经检测系统对靶蛋白进行定性和定量分析蛋

29、白，再经检测系统对靶蛋白进行定性和定量分析的一种技术。的一种技术。6/3/202259 基本原理：基本原理：蛋白质与蛋白质分子之间在空间构象蛋白质与蛋白质分子之间在空间构象上能特异性的相互识别和相互结合。上能特异性的相互识别和相互结合。 最常用的探针：抗体最常用的探针：抗体 检测方法：标记检测法、直接检测法检测方法：标记检测法、直接检测法 Protein-Protein Interaction Technology6/3/202260 该系统的建立是基于对该系统的建立是基于对分子的研究。分子的研究。GAL4（一）基本原理（一）基本原理DNA结构域结构域(BD)(DNA binding doma

30、in) N端端转录激活域转录激活域(AD)(activation domain) C端端6/3/202261nBDBD能识别位于能识别位于Gal4Gal4效应基因的上游激活序列效应基因的上游激活序列(UAS)(UAS)；GAL4的的DNA-BD和和DNA-AD结构域：结构域：6/3/202262nADAD可与其他成分结合而启动可与其他成分结合而启动UASUAS下游的基因转录。下游的基因转录。nBDBD和和ADAD两两结构域结构域单独存在时无转录激活功能；单独存在时无转录激活功能；n只有两者连接而形成的空间结构才具有转录激活功能。只有两者连接而形成的空间结构才具有转录激活功能。BDBDADAD激

31、活激活序列序列 (UAS)Gal4效应基因效应基因6/3/202263 将将BDBD基因基因与与已知蛋白基因已知蛋白基因X X融合后融合后，插入表达载插入表达载体中构建体中构建BD-XBD-X重组载体重组载体； 将将ADAD基因基因与与未知蛋白群基因未知蛋白群基因Y Y( (或未知蛋白或未知蛋白群群cDNAcDNA文库文库) )融合后，融合后，插入表达载体插入表达载体构建构建AD-YAD-Y重组载体群重组载体群。 ，如如 - -半半乳糖苷酶编码基因，乳糖苷酶编码基因，。BDBDADAD激活激活序列序列 (UAS)Gal4效应基因效应基因BDBDX XADADY YY = Y1, Y2, Y3,

32、 . , Yn - -半乳糖苷酶半乳糖苷酶YmYmX X - -半乳糖苷酶半乳糖苷酶Ym+iYm+iX X （二）酵母双杂交系统的应用（二）酵母双杂交系统的应用1. 1. 分析已知蛋白质之间的相互作用分析已知蛋白质之间的相互作用2. 2. 筛选和发现新的相关蛋白质筛选和发现新的相关蛋白质 3 3. . 筛选药物的作用位点及药物对蛋白质之筛选药物的作用位点及药物对蛋白质之 间相互作用的影响间相互作用的影响 4 4. . 绘制蛋白相互作用系统图谱绘制蛋白相互作用系统图谱6/3/202265 二、噬菌体展示技术二、噬菌体展示技术 是将外源蛋白或多肽，与噬菌体表面蛋是将外源蛋白或多肽，与噬菌体表面蛋白

33、融合表达，并呈现在噬菌体表面的技术。白融合表达，并呈现在噬菌体表面的技术。 通过与特定的通过与特定的标记抗体标记抗体( (或受体、配基等或受体、配基等) )结合，结合，可把展示有特定蛋白的噬菌体，从表达有各种外源可把展示有特定蛋白的噬菌体，从表达有各种外源性蛋白的噬菌体肽库中性蛋白的噬菌体肽库中筛选筛选出来；出来； 感染大肠杆菌感染大肠杆菌扩增扩增选出的噬菌体，分离出融合选出的噬菌体，分离出融合基因并基因并测序测序，可获得相应的结构与功能的信息。，可获得相应的结构与功能的信息。 三、蛋白质工程中的定点诱变技术三、蛋白质工程中的定点诱变技术 是在编码蛋白质基因的特定位置引入碱基替代、是在编码蛋白

34、质基因的特定位置引入碱基替代、产生碱基缺失或插入，使其编码的蛋白质的一级结产生碱基缺失或插入，使其编码的蛋白质的一级结构发生改变。构发生改变。 在合成在合成PCRPCR引物时，除了在定点诱变的位置引引物时，除了在定点诱变的位置引入相应的突变（点突变、小片段插入或缺失）外，入相应的突变（点突变、小片段插入或缺失）外，其余序列与模板完全配对其余序列与模板完全配对 PCR扩增后，产物中就引入特定的突变；将扩增后，产物中就引入特定的突变；将PCR产物克隆表达，可获得定点突变的蛋白质。产物克隆表达，可获得定点突变的蛋白质。PCR诱变：诱变：6/3/202267 Protein-Nucleic Acid

35、Interaction Protein-Nucleic Acid Interaction TechnologyTechnology6/3/202268（electrophoretic mobility shift assay, EMSAelectrophoretic mobility shift assay, EMSA） 又称凝胶阻滞分析又称凝胶阻滞分析(gel retardation assay)(gel retardation assay) 与游离与游离DNADNA相比，相比，蛋蛋白白- -DNADNA复合物的迁移率复合物的迁移率将降将降低，因此，与游离低，因此，与游离DNADNA相对应，

36、人们将观察相对应，人们将观察到带中的到带中的“阻滞阻滞”。6/3/202269 是将纯化的蛋白或细胞粗提液，与是将纯化的蛋白或细胞粗提液，与3232P P放射性核放射性核素标记的素标记的DNADNA或或RNARNA探针一起保温后，在探针一起保温后，在非变性聚丙烯非变性聚丙烯酰胺凝胶上电泳分离酰胺凝胶上电泳分离。 (1) (1)将含将含和和。6/3/202270 - -半乳糖苷酶基因半乳糖苷酶基因 (2)(2)将将ADAD基因基因与与未知蛋白基因群未知蛋白基因群( (或未知或未知蛋白蛋白cDNAcDNA文库文库) )融合后，融合后，插入表达载体中插入表达载体中构构建建AD-AD-未知蛋白重组载体群未知蛋白重组载体群。6/3/202271ASepharose（ChromotinChromotin ImmunoprecipitationImmunoprecipitation Assay Assay，ChiPChiP） 三、染色体免疫沉淀技术三、染色体免疫沉淀技术6/3/2022726/3/202273