1、14343例正常人群例正常人群NKNK细胞上细胞上FcRIIIaFcRIIIa基因多态性分析基因多态性分析 屈钰华 黎阳 吴燕峰 方建培 郭海霞 周敦华 黄科内容 背景背景 目的目的 方法方法 结果结果 讨论讨论 结论结论背景 肿瘤是严重危害人类生命健康的一类疾病，攻克肿瘤一直是我们迫切希望解决的问题。 肿瘤特异性单克隆抗体出现给肿瘤治疗带来了新的希望背景 抗体依赖细胞介导的细胞毒性 (antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity，ADCC)被证明是单克隆抗体临床治疗肿瘤的重要机制和手段。 IgG型抗体首先通过抗原结合部位与靶细胞（肿瘤细胞）结合，
2、再由效应细胞上的FcR识别其Fc段，介导ADCC作用背景 FcR分为三类：FcRI (CD64) 、FcRII(CD32) 以及FcRIII (CD16) 。 FcRIII又分为两类： FcRa是一种跨膜糖蛋白，表达于单核细胞、吞噬细胞、NK细胞及选择性T细胞上； FcRb是一种糖肌醇磷脂蛋白(GPI-锚蛋白)，只表达于中性粒细胞和IFN诱导的嗜酸性粒细胞上背景 Ravetch等最先报道在FcRIIIa近膜Ig样区核苷酸位点559处存在多态性位点。 在核苷酸位点559处核苷酸发生鸟嘌呤(G)一胸腺嘧啶(T)点突变后，由其转录合成的受体蛋白内第158位缬氨酸(valine，V)被苯丙氨酸(phe
3、nylalanine，F)所取代。 这导致FcRIIIa有三种基因型：FcRIIIla-158F/F，FcRIIIa-158V/V及FcRIIIa-158V/F背景 诸多文献报道FcRIIIa基因多态性与肿瘤病人预后相关。 于单克隆抗体治疗的肿瘤病人中，FcRIIIa-158V/V的病人预后较V/F及F/F基因型病人好。 这可能与其跟治疗性单克隆抗体的Fc段结合相关，由不同的亲和力导致 治疗性单克隆抗体介导的ADCC强度不同。目的 确定FcRIIIa的基因多态性在正常及肿瘤人群中的分布，以了解人群对肿瘤特异性单抗可能疗效反应的分布规律。方法 标本来源 正常健康人群外周血：用含肝素抗凝管收集健康
4、志愿者外周血，标本量为23ml，共43份。方法 技术路线方法1.按说明书提取外周血基因组DNA。2. nest-PCR外侧反应经35个PCR循环(95 45S,64 45S,72 30S)，扩增产物长度248 bp； 内侧反应经35个PCR循环(95 45S,65 45S,72 30S)，扩增产物长度94 bp。3.Nla内切酶酶切 8ul PCR产物于37酶切过夜。酶切产物经15PAGE电泳分离，银染显色。结果结果结果讨论 本研究检测结果显示在健康人群中FcRIIIa的基因多态性以V/F型最多，而V/V型次之，F/F型最少，这与国内文献报道（47例健康者中V/F型38例，V/V型7例，F/F
5、型2例）一致。 本研究中未检测出F/F型，可能与样本量较少有关。讨论 但本研究与国外报道的基因型分布（以V/F型及F/F型较多，而V/V型最少）有差异，这可能与地域及种族差异，遗传环境等因素有关。讨论 FcRIIIa三种基因型的NK细胞与IgG的亲和力顺序为V/VV/FF/F。 治疗性单克隆抗体介导的不同基因型的NK细胞的ADCC强度不同，对肿瘤细胞的杀伤存在差异，从而取得不同的预后。 我国以FcRIIIa-158F/F分布最少，可推测出大部分人对单抗治疗的预后较好。结论 FcRIIIa基因多态性在中国健康人群中的分布以FcRIIIa-158V/F最多，FcRIIIa-158V/V次之，FcRIIIa-158F/F最少。
