第07章蛋白质的分离纯化与表征-物理与电子科学学院-楚雄师范学院课件.ppt

1、第七章第七章 蛋白质的分离、纯化与表征蛋白质的分离、纯化与表征一、蛋白质的酸碱性质一、蛋白质的酸碱性质二、蛋白质分子的大小与形状二、蛋白质分子的大小与形状三、蛋白质的胶体性质与蛋白质的沉淀三、蛋白质的胶体性质与蛋白质的沉淀六、蛋白质的含量测定与纯度鉴定六、蛋白质的含量测定与纯度鉴定四、蛋白质分离纯化的一般原则四、蛋白质分离纯化的一般原则五、蛋白质的分离纯化方法五、蛋白质的分离纯化方法一、蛋白质的酸碱性质一、蛋白质的酸碱性质蛋白质是一类两性电解质，能与酸或碱发生作用。在蛋白蛋白质是一类两性电解质，能与酸或碱发生作用。在蛋白质分子中，可解离基团主要是侧链基团，及少数质分子中，可解离基团主要是侧链基

2、团，及少数N N端端-NH-NH2 2和和C C端端-COOH-COOH。 天然球状蛋白质的可解离基团大部分可被滴定，而某些天天然球状蛋白质的可解离基团大部分可被滴定，而某些天然蛋白质中有一部分可解离基团由于埋藏在分子内部或参然蛋白质中有一部分可解离基团由于埋藏在分子内部或参与氢键形成而不能解离。与氢键形成而不能解离。 等电点：在某一等电点：在某一pHpH，它所带的正电荷与负电荷相等。蛋白，它所带的正电荷与负电荷相等。蛋白质的等电点和它所含的酸性氨基酸残基和碱性氨基酸残基质的等电点和它所含的酸性氨基酸残基和碱性氨基酸残基的比例有关。的比例有关。 等离子点：没有其它盐类干扰时，蛋白质质子供体解离

3、出等离子点：没有其它盐类干扰时，蛋白质质子供体解离出的质子数与质子受体结合的质子数相等时的的质子数与质子受体结合的质子数相等时的pHpH值称等离子值称等离子点，是每种蛋白质的特征常数。点，是每种蛋白质的特征常数。 二、蛋白质分子的大小与形状二、蛋白质分子的大小与形状（一）根据化学组成测定最低相对分子量（一）根据化学组成测定最低相对分子量如如MbMb含铁量为含铁量为0.335%0.335%，其最低相对分子质量为：，其最低相对分子质量为：MbMb最低相对分子质量最低相对分子质量铁的原子量铁的原子量铁的百分含量铁的百分含量10010055.8/0.33555.8/0.335 100100167001

4、6700HbHb最低相对分子质量最低相对分子质量16700167004 4牛血清白蛋白含牛血清白蛋白含Trp0.58%Trp0.58%最低最低MrMr=35200=35200，实际为，实际为6900069000，含，含2 2个个TrpTrp楚雄师范学院化学与生命科学系楚雄师范学院化学与生命科学系 范树国范树国（二）渗透压法测定相对分子量（二）渗透压法测定相对分子量用用半透膜半透膜将蛋白质溶液与纯水隔开，当将蛋白质溶液与纯水隔开，当渗透达平衡渗透达平衡时，测时，测定其渗透压，计算分子量：定其渗透压，计算分子量：M Mr rRTRTlimlimc cc c00C C：浓度（：浓度（g/mg/m3

5、3）R R：气体常数（：气体常数（8.314J/(K8.314J/(Kmol)mol)T T：绝对温度（：绝对温度（K K） ：以大气压表示的渗透压：以大气压表示的渗透压(N/m(N/m2 2) )（三）蛋白质的扩散和扩散系数（三）蛋白质的扩散和扩散系数扩散：由于浓度差引起的溶质分子的净迁移。扩散的热扩散：由于浓度差引起的溶质分子的净迁移。扩散的热力学驱动力是熵的增加。力学驱动力是熵的增加。扩散系数扩散系数D D：等于当浓度梯度为一个单位时，在一秒钟：等于当浓度梯度为一个单位时，在一秒钟内通过内通过1cm1cm2 2面积所扩散的溶质量。面积所扩散的溶质量。扩散系数随扩散系数随MrMr的增加而降

6、低，但对的增加而降低，但对MrMr的变化不敏感。对的变化不敏感。对球形的大分子来说，扩散系数与球形的大分子来说，扩散系数与MrMr的立方根成反比。的立方根成反比。楚雄师范学院化学与生命科学系楚雄师范学院化学与生命科学系 范树国范树国（四）沉降分析法测定相对分子量（四）沉降分析法测定相对分子量楚雄师范学院化学与生命科学系楚雄师范学院化学与生命科学系 范树国范树国1.1.沉降速率法沉降速率法楚雄师范学院化学与生命科学系楚雄师范学院化学与生命科学系 范树国范树国2.2.沉降平衡法沉降平衡法楚雄师范学院化学与生命科学系楚雄师范学院化学与生命科学系 范树国范树国（五）凝胶过滤法测定蛋白质相对分子量（五）

7、凝胶过滤法测定蛋白质相对分子量（六）（六）SDSSDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定相对分子量聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定相对分子量三、蛋白质的胶体性质与蛋白质的沉淀三、蛋白质的胶体性质与蛋白质的沉淀 （一）蛋白质的胶体性质（一）蛋白质的胶体性质蛋白质分子直径在蛋白质分子直径在1-100nm1-100nm之间，在水溶液中具有胶体溶液的之间，在水溶液中具有胶体溶液的通性（布朗运动，丁达尔现象，不能通过半透膜）。通性（布朗运动，丁达尔现象，不能通过半透膜）。透析：将含小分子杂质的蛋白质放入透析袋中，置水溶液中，透析：将含小分子杂质的蛋白质放入透析袋中，置水溶液中，小分子杂质不断从袋中出来，大分子蛋白质仍留在

8、袋中。小分子杂质不断从袋中出来，大分子蛋白质仍留在袋中。 蛋白质在水中溶解度依赖于多肽链氨基酸残基侧链基团的相对蛋白质在水中溶解度依赖于多肽链氨基酸残基侧链基团的相对极性，离子化基团数量越多，溶解度越大。极性，离子化基团数量越多，溶解度越大。稳定蛋白质胶体溶液的主要因素稳定蛋白质胶体溶液的主要因素蛋白质表面极性基团形成的蛋白质表面极性基团形成的水化膜水化膜将蛋白质颗粒彼此隔开，将蛋白质颗粒彼此隔开，不会互相碰撞凝聚而沉淀。不会互相碰撞凝聚而沉淀。两性电解质非等电状态时，两性电解质非等电状态时，带同种电荷带同种电荷，互相排斥不致聚集，互相排斥不致聚集而沉淀。而沉淀。一旦电荷被中和或水化膜被破坏，

9、蛋白质颗粒聚集，便从溶液一旦电荷被中和或水化膜被破坏，蛋白质颗粒聚集，便从溶液中析出沉淀。中析出沉淀。 楚雄师范学院化学与生命科学系楚雄师范学院化学与生命科学系 范树国范树国（二）蛋白质的沉淀（二）蛋白质的沉淀盐析法盐析法 向蛋白质溶液中加入大量的中性盐向蛋白质溶液中加入大量的中性盐 （NHNH4 4）2 2SOSO4 4、NaNa2 2SOSO4 4、NaClNaCl ，使蛋白质脱去水化层而聚集沉淀。，使蛋白质脱去水化层而聚集沉淀。 有机溶剂沉淀法有机溶剂沉淀法 破坏水化膜，降低介电常数。破坏水化膜，降低介电常数。重金属盐沉淀重金属盐沉淀 pHpH大于等电点时，蛋白质带负电荷，可与大于等电点

10、时，蛋白质带负电荷，可与重金属离子（重金属离子（HgHg2+2+. Pb. Pb2+2+. Cu. Cu2+2+ 等）结成不溶性沉淀等）结成不溶性沉淀生物碱试剂和某些酸类沉淀法生物碱试剂和某些酸类沉淀法 pHpH小于等电点时，蛋白质小于等电点时，蛋白质带正电荷，易与生物碱试剂和酸类的负离子生成不溶性沉淀。带正电荷，易与生物碱试剂和酸类的负离子生成不溶性沉淀。生物碱试剂：是指能引起生物碱沉淀的一类试剂，单宁酸、生物碱试剂：是指能引起生物碱沉淀的一类试剂，单宁酸、苦味酸、钨酸。酸苦味酸、钨酸。酸 类：三氯乙酸、磺基水杨酸。类：三氯乙酸、磺基水杨酸。加热变性沉淀加热变性沉淀 往往是不可逆的。往往是不

11、可逆的。 四、蛋白质分离纯化的一般原则四、蛋白质分离纯化的一般原则纯化的实质：增加制品纯化的实质：增加制品(preparation)(preparation)的纯度或比活性。的纯度或比活性。蛋白与非蛋白分开，蛋白与非蛋白分开，蛋白质之间分开蛋白质之间分开 一般程序：前处理、粗分级、细分级、浓缩与保存一般程序：前处理、粗分级、细分级、浓缩与保存楚雄师范学院化学与生命科学系楚雄师范学院化学与生命科学系 范树国范树国 电泳电泳 前前处处理理粗粗分分离离细细分分离离生物组织生物组织 无细胞提取液无细胞提取液破碎、溶破碎、溶 解、差速离心解、差速离心选择性沉淀法选择性沉淀法亲和亲和层析层析离子交离子交换

12、层析换层析精制后的蛋白质精制后的蛋白质凝胶凝胶过滤过滤疏水疏水层析层析吸附吸附层析层析1 1、前处理：、前处理：将组织和细胞破碎将组织和细胞破碎动物组织和细胞：电动捣碎机（动物组织和细胞：电动捣碎机（waringwaring blender) blender) 匀浆器（匀浆器（homogenizer)homogenizer) 超声波处理（超声波处理（ultrasonicationultrasonication) )植物组织和细胞：石英砂植物组织和细胞：石英砂+ +提取液，研磨提取液，研磨 纤维素酶处理纤维素酶处理细菌：细菌： 超声波震荡、与砂研磨、高压挤压、溶菌超声波震荡、与砂研磨、高压挤压、

13、溶菌 酶处理（分解肽聚糖）酶处理（分解肽聚糖）差速离心法收集细胞的某一组分（差速离心法收集细胞的某一组分（differential differential centrifugation) centrifugation)： 在不同离心力下沉降的细胞组分在不同离心力下沉降的细胞组分如果提取膜蛋白：如果提取膜蛋白：超声波或去污剂使膜解聚，然后用适当的介质提取。超声波或去污剂使膜解聚，然后用适当的介质提取。楚雄师范学院化学与生命科学系楚雄师范学院化学与生命科学系 范树国范树国2 2、粗分级（、粗分级（rough fractionation)rough fractionation)一般用选择性沉淀法。

14、一般用选择性沉淀法。（NHNH4 4）2 2SOSO4 4分级沉淀法（盐析）分级沉淀法（盐析）等电点选择性沉淀法等电点选择性沉淀法有机溶剂分级沉淀法有机溶剂分级沉淀法热处理选择性沉淀法热处理选择性沉淀法生物碱或三氯乙酸选择性沉淀法生物碱或三氯乙酸选择性沉淀法3 3、细分级（、细分级（fine fractionation)fine fractionation)透析除盐透析除盐sephdexsephdex G-25 G-25凝胶过滤除盐凝胶过滤除盐层析法：凝胶过滤层析、离子交换层析、吸附层析、亲和层层析法：凝胶过滤层析、离子交换层析、吸附层析、亲和层析、疏水层析（反相析、疏水层析（反相HPLCHP

15、LC）电泳法：自由界面电泳、区带电泳（凝胶电泳、滤纸和薄膜电泳法：自由界面电泳、区带电泳（凝胶电泳、滤纸和薄膜电泳、粉末电泳、细丝电泳等）、盘状电泳、等电聚焦、双向电泳、粉末电泳、细丝电泳等）、盘状电泳、等电聚焦、双向电泳电泳密度梯度离心密度梯度离心4 4、浓缩与保存、浓缩与保存浓缩方法：浓缩方法：保存方法：保存方法：晶体保存：晶体保存：结晶过程本身也伴随着一定程度的提纯。能否结晶不仅是纯结晶过程本身也伴随着一定程度的提纯。能否结晶不仅是纯度度 的一个指标，也是判断制品是否有活性的指标。纯度越高，的一个指标，也是判断制品是否有活性的指标。纯度越高，溶液越浓，越容易结晶。溶液越浓，越容易结晶。结

16、晶方法：使溶液略处于过饱和状态。降低温度、盐析、加结晶方法：使溶液略处于过饱和状态。降低温度、盐析、加有机溶剂、调节有机溶剂、调节pHpH、接入晶种。、接入晶种。冻干粉保存：冻干粉保存：溶液保存：溶液保存：加入抗冻剂（加入抗冻剂（50%50%甘油）后甘油）后-20-20-70-70保存。保存。五、蛋白质的分离纯化方法五、蛋白质的分离纯化方法（一）根据分子大小不同的纯化方法（一）根据分子大小不同的纯化方法1.1.透析和超滤透析和超滤透析：半透膜阻留蛋白质分子，而让小的溶质分子和水通透析：半透膜阻留蛋白质分子，而让小的溶质分子和水通过，以除去蛋白质溶液中小分子（盐、低分子酸等）。过，以除去蛋白质溶

17、液中小分子（盐、低分子酸等）。超滤：施以一定的压力超滤：施以一定的压力使小分子溶质通过半透使小分子溶质通过半透膜，而按半透膜的筛孔膜，而按半透膜的筛孔大小截留相应的蛋白质大小截留相应的蛋白质分子分子楚雄师范学院化学与生命科学系楚雄师范学院化学与生命科学系 范树国范树国沉降的速度与颗粒的重量、密度和形状有关。沉降的速度与颗粒的重量、密度和形状有关。离心后按其沉降离心后按其沉降的速度不同，彼此分开形成区带。再进行光学定位，针刺或冰的速度不同，彼此分开形成区带。再进行光学定位，针刺或冰冻切片采样分析。冻切片采样分析。2.2.密度梯度（区带）离心密度梯度（区带）离心蔗糖密度梯度蔗糖密度梯度聚蔗糖密度梯

18、度聚蔗糖密度梯度楚雄师范学院化学与生命科学系楚雄师范学院化学与生命科学系 范树国范树国3.3.凝胶过滤凝胶过滤交联葡聚糖（交联葡聚糖（Sephadex）;聚丙烯酰胺凝胶（聚丙烯酰胺凝胶（Bio-Gel P ）；琼脂糖凝胶（）；琼脂糖凝胶（Sepharose，Bio-Gel A）楚雄师范学院化学与生命科学系楚雄师范学院化学与生命科学系 范树国范树国交联葡聚糖（交联葡聚糖（Sephadex）楚雄师范学院化学与生命科学系楚雄师范学院化学与生命科学系 范树国范树国（二）利用溶解度差别的纯化方法（二）利用溶解度差别的纯化方法1.1.等电点沉淀和等电点沉淀和pHpH控制控制在等电点条件下，蛋白质的电导性、

19、溶解度最小，粘度最大。在在pIpI时，分子电荷为零，时，分子电荷为零，蛋白质分子间的静电排斥蛋白质分子间的静电排斥消失，从而蛋白质出现聚消失，从而蛋白质出现聚集沉淀。集沉淀。楚雄师范学院化学与生命科学系楚雄师范学院化学与生命科学系 范树国范树国2.2.蛋白质的盐溶和盐析蛋白质的盐溶和盐析盐溶：低盐浓度时，蛋白质溶盐溶：低盐浓度时，蛋白质溶解度增加。解度增加。盐析：高盐浓度时，使蛋白质盐析：高盐浓度时，使蛋白质溶解度降低析出。溶解度降低析出。盐析多用溶解度大的中性盐，盐析多用溶解度大的中性盐，如如(NH(NH4 4) )2 2SOSO4 4、NaClNaCl、MgClMgCl2 2、NHNH4

20、4ClCl、KClKCl等的饱和溶液。等的饱和溶液。楚雄师范学院化学与生命科学系楚雄师范学院化学与生命科学系 范树国范树国3.3.有机溶剂分级分离法有机溶剂分级分离法与水互溶的有机溶剂与水互溶的有机溶剂( (如甲醇、乙醇和丙酮等如甲醇、乙醇和丙酮等) )能使蛋白质在水中能使蛋白质在水中的溶解度显著降低。在室温下，这些有机溶剂不仅能引起蛋白质的溶解度显著降低。在室温下，这些有机溶剂不仅能引起蛋白质沉淀，而且伴随者变性。沉淀，而且伴随者变性。在一定温度、在一定温度、pHpH和离子强度条件下，引进蛋白质沉淀的有机溶剂和离子强度条件下，引进蛋白质沉淀的有机溶剂的浓度不同，因此控制有机溶剂浓度也可以分离

21、蛋白质。的浓度不同，因此控制有机溶剂浓度也可以分离蛋白质。有机溶剂引起蛋白质沉淀的主要原因之一是改变介质的介电常数；有机溶剂引起蛋白质沉淀的主要原因之一是改变介质的介电常数；另一重要方式可能与盐析相似，与蛋白质争夺水化水，致使蛋白另一重要方式可能与盐析相似，与蛋白质争夺水化水，致使蛋白质聚集体的形成并沉淀。质聚集体的形成并沉淀。水溶性非离子聚合物如聚乙二醇（水溶性非离子聚合物如聚乙二醇（PEGPEG）也能引起蛋白质沉淀。）也能引起蛋白质沉淀。聚乙二醇的主要作用可能是脱去蛋白质的水化层。聚乙二醇与蛋聚乙二醇的主要作用可能是脱去蛋白质的水化层。聚乙二醇与蛋白质亲水基团发生相互作用并在空间上阻碍蛋白

22、质与水相接近。白质亲水基团发生相互作用并在空间上阻碍蛋白质与水相接近。蛋白质在聚乙二酵中的溶解度明显地依赖于聚乙二醇的分子量。蛋白质在聚乙二酵中的溶解度明显地依赖于聚乙二醇的分子量。4.4.温度对蛋白质溶解度的影响温度对蛋白质溶解度的影响在一定的温度范围内，大部分球状蛋白质的溶解度随温度升在一定的温度范围内，大部分球状蛋白质的溶解度随温度升高而增加。高而增加。大多数蛋白质在低温下比较稳定，因此蛋白质的分级分离操大多数蛋白质在低温下比较稳定，因此蛋白质的分级分离操作一般都在作一般都在00或更低的温度下进行。或更低的温度下进行。楚雄师范学院化学与生命科学系楚雄师范学院化学与生命科学系 范树国范树国

23、（三）根据电荷不同的纯化方法（三）根据电荷不同的纯化方法1.1.电泳电泳在外电场的作用下，带电颗粒，例如不处于等电状态的蛋在外电场的作用下，带电颗粒，例如不处于等电状态的蛋白质分子，将向着与其电性相反的电极移动，这种现象称白质分子，将向着与其电性相反的电极移动，这种现象称电泳电泳(electrophoresis)(electrophoresis)或离子泳或离子泳(ionphoresis(ionphoresis) )。电泳不仅是分离蛋白质混合物和鉴定蛋白质纯度的重要于电泳不仅是分离蛋白质混合物和鉴定蛋白质纯度的重要于段，而且也是研究蛋白质性质很有用的一种物理化学方法。段，而且也是研究蛋白质性质很

24、有用的一种物理化学方法。楚雄师范学院化学与生命科学系楚雄师范学院化学与生命科学系 范树国范树国普通电泳、等电聚焦、普通电泳、等电聚焦、双向电泳、脉冲电泳、双向电泳、脉冲电泳、毛细管电泳毛细管电泳从电泳结果分：从电泳结果分：自由界自由界面电泳、区带电泳、盘面电泳、区带电泳、盘状电泳状电泳从装置上分：从装置上分： 圆盘电圆盘电泳（柱状）、水平板电泳（柱状）、水平板电泳、垂直板电泳。泳、垂直板电泳。从支持物分：从支持物分： 自由界自由界面电泳、纸电泳（或薄面电泳、纸电泳（或薄膜电泳）、凝胶电膜电泳）、凝胶电 泳（泳（PAGE PAGE ，琼脂糖胶，琼脂糖胶，淀粉胶等）淀粉胶等）楚雄师范学院化学与生命

25、科学系楚雄师范学院化学与生命科学系 范树国范树国2.2.聚丙烯酰胺凝胶电泳（聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGEPAGE）3.3.毛细管电泳毛细管电泳楚雄师范学院化学与生命科学系楚雄师范学院化学与生命科学系 范树国范树国4.4.等电聚焦电泳等电聚焦电泳等电聚焦电泳法测定蛋白质等电聚焦电泳法测定蛋白质pI5.SDS-PAGE5.SDS-PAGE6.6.离子交换层析离子交换层析离子交换纤维素：离子交换纤维素：离子交换交联葡聚糖：兼有分子筛效应离子交换交联葡聚糖：兼有分子筛效应离子交换交联琼脂糖：离子交换交联琼脂糖：楚雄师范学院化学与生命科学系楚雄师范学院化学与生命科学系 范树国范树国（四）利用选择性吸附的

26、纯化方法（四）利用选择性吸附的纯化方法极性：硅胶、氧化铝、岩藻土（离子吸引和氢键）极性：硅胶、氧化铝、岩藻土（离子吸引和氢键）非极性：活性炭（范德华力、疏水作用）非极性：活性炭（范德华力、疏水作用）最广泛最有效：羟基磷灰石（最广泛最有效：羟基磷灰石（hydroxyapatitehydroxyapatite) )，即结晶磷，即结晶磷酸钙酸钙CaCa1010（POPO4 4）6 6（OHOH）2 2 ，可分离蛋白质、核酸，与，可分离蛋白质、核酸，与DNADNA的亲和力最高的亲和力最高层析介质：苯基琼脂糖（层析介质：苯基琼脂糖（phenyl-sephadexphenyl-sephadex) ) 辛基

27、琼脂糖辛基琼脂糖(octa-sephadex(octa-sephadex) ) 洗脱：洗脱： 低盐高低盐高pHpH 非离子型去污剂（非离子型去污剂（triton x-100)triton x-100) 脂肪醇（丁醇、乙二醇）脂肪醇（丁醇、乙二醇）（五）利用对配体的特异生物学亲和力的纯（五）利用对配体的特异生物学亲和力的纯化方法化方法配基：配基：酶的底物、辅酶、抑制剂、酶的底物、辅酶、抑制剂、效应物及其结构类似物，效应物及其结构类似物，激素与受体蛋白，抗原与激素与受体蛋白，抗原与抗体，生物素与亲和素抗体，生物素与亲和素（抗亲和素蛋白），凝集（抗亲和素蛋白），凝集素。素。免疫亲和层析免疫亲和层析凝

28、集素亲和层析凝集素亲和层析金属螯和层析金属螯和层析染料配体层析染料配体层析楚雄师范学院化学与生命科学系楚雄师范学院化学与生命科学系 范树国范树国六、蛋白质的含量测定与纯度鉴定六、蛋白质的含量测定与纯度鉴定（一）蛋白质含量测定（一）蛋白质含量测定总蛋白含量分析：总蛋白含量分析：凯氏定氮法、凯氏定氮法、FolinFolin- -酚法（酚法（LowryLowry法）、双缩脲法、考马斯法）、双缩脲法、考马斯亮蓝法、紫外吸收法。亮蓝法、紫外吸收法。特定蛋白组分的含量分析：特定蛋白组分的含量分析：酶和激素等：酶活性或激素活性表示（比活性）酶和激素等：酶活性或激素活性表示（比活性）其它蛋白：抗原抗体反应其它

29、蛋白：抗原抗体反应(western blot)(western blot)楚雄师范学院化学与生命科学系楚雄师范学院化学与生命科学系 范树国范树国楚雄师范学院化学与生命科学系楚雄师范学院化学与生命科学系 范树国范树国楚雄师范学院化学与生命科学系楚雄师范学院化学与生命科学系 范树国范树国（二）纯度鉴定（均一性）（二）纯度鉴定（均一性）基本手段：基本手段：电泳分析：单条带。电泳分析：单条带。 N N端测定：端测定：1 1种种N N端氨基酸。端氨基酸。 选用手段：选用手段：沉降分析、溶解度分析、结晶分析（能结晶的一般沉降分析、溶解度分析、结晶分析（能结晶的一般比较纯，具有活性）比较纯，具有活性）其它鉴

30、定工作：其它鉴定工作：1.1.分子量的测定；分子量的测定；2.2.等电点测定；等电点测定；3.N-3.N-末端末端AAAA测定；测定；4.C-4.C-末端末端AAAA的测定（肼解法）；的测定（肼解法）；5.5.分子中糖链：分子中糖链：血球凝集反应；血球凝集反应；糖蛋白电泳（甲苯胺兰、糖蛋白电泳（甲苯胺兰、R R山兰、山兰、schiffschiff试剂）；试剂）；糖组分分析（层析、液相色谱）糖组分分析（层析、液相色谱）6.6.含脂成分：苏丹黑预染、电泳。含脂成分：苏丹黑预染、电泳。7.7.光吸收：全波长扫描。找出它的吸收峰位置和最大吸收值。光吸收：全波长扫描。找出它的吸收峰位置和最大吸收值。 8.AA8.AA组分分析。组分分析。