第二章天然药物化学成分提取分离和鉴定的方法与技术课件.ppt

1、提取分离的方法与技术提取分离的方法与技术 根据天然药物中各种化学成分的溶解性能，选根据天然药物中各种化学成分的溶解性能，选择对有效成分溶解度大而对其他成分溶解度小的溶择对有效成分溶解度大而对其他成分溶解度小的溶剂，用适当的方法将所需化学成分尽可能完全的从剂，用适当的方法将所需化学成分尽可能完全的从药材组织中溶解提出的方法。药材组织中溶解提出的方法。 （1）粉碎）粉碎 （2）苷类）苷类 防止酶的水解防止酶的水解 是在渗透扩散作用下，溶剂渗入药材组织细胞是在渗透扩散作用下，溶剂渗入药材组织细胞内部，溶解可溶性物质，造成细胞内外溶质的浓度内部，溶解可溶性物质，造成细胞内外溶质的浓度差，从而带动溶质做

2、不断往返的运动，直至细胞内差，从而带动溶质做不断往返的运动，直至细胞内外溶液中被溶解的化学成分的浓度达到平衡，提出外溶液中被溶解的化学成分的浓度达到平衡，提出所需的化学成分。所需的化学成分。 溶剂提取法的关键：选择合适溶剂的溶剂。溶剂提取法的关键：选择合适溶剂的溶剂。溶剂名称溶剂名称介电常数介电常数溶剂名称溶剂名称介电常数介电常数石油醚石油醚1.8正丁醇正丁醇(n-BuOH)17.5苯（苯（C6H6）2.3丙酮丙酮(Me2CO)21.5乙醚乙醚（无水，（无水，Et2O）4.3乙醇乙醇(EtOH)26.0三氯甲烷三氯甲烷CHCl35.2甲醇甲醇(MeOH)31.2乙酸乙酯乙酸乙酯EOAc6.1水

3、水(H2O)80.0提取溶剂提取溶剂 性能特点性能特点 适宜提取成分适宜提取成分 提取方法提取方法强极性溶剂 溶解范围广（酸水、碱水） 生物碱盐 穿透能力强 苷类 浸渍法 价廉易得、安全 鞣质 煎煮法 糖类 渗漉法 水 有些脂溶性成分溶解不完全 氨基酸 （酸水） 有些苷类成分的酶解 蛋白质 水提液易发霉、变质 水溶性杂质多，过滤困难 沸点高，浓缩困难提取溶剂提取溶剂 性能特点性能特点 适宜提取成分适宜提取成分 提取方法提取方法 除去多糖、 溶解范围广（不同浓度乙醇）蛋白质外 渗漉法（稀醇） 水溶性杂质溶出少 的大多数 浸渍法 乙醇 可抑制酶的活性 化学成分 回流法 提取液不易发霉、变质 均可

4、连续回流法 大部分可回收利用 但有挥发性、易燃烧 甲醇 溶解特点与乙醇相似，但有毒 丙酮 溶解性能同乙醇，但沸点低、易挥发，作为提取溶剂不常用； 但对色素溶解性能好，在分离、精制时常用。 亲水性有机溶剂（和水可任意混溶） 提取溶剂提取溶剂 性能特点性能特点 适宜提取成分适宜提取成分 提取方法提取方法 对化合物溶解选择性较强;水溶性杂质少、易纯化 ; 游离生物碱 回流法挥发性大、易燃烧、有毒 ; 苷元 连续回流法价格昂贵，对提取设备要求高; 某些苷类穿透力较弱，提取时间长;作为提取溶剂不常用。 如:乙醚 极易燃 氯仿 不易燃，毒性大,对生物碱溶解性好 苯 毒性大 石油醚 沸程 3060、6090

5、、90120 脱脂、脱色常用 与甲醇、乙醇不能任意混溶。亲脂亲脂性有性有机溶剂机溶剂操作技术操作技术 冷浸法冷浸法 室温室温 温浸法温浸法 4060适用范围适用范围 适用于有效成分遇热易破坏及含淀粉、适用于有效成分遇热易破坏及含淀粉、果胶、黏液质、树胶等多糖物质较多的天然药物。果胶、黏液质、树胶等多糖物质较多的天然药物。特点特点 方便、简单，时间长，效率低，易霉变方便、简单，时间长，效率低，易霉变提示提示 加防腐剂：甲苯、甲醛、三氯甲烷加防腐剂：甲苯、甲醛、三氯甲烷操作技术操作技术 粉碎粉碎浸润浸润装筒装筒排气排气浸渍浸渍渗漉渗漉收集渗漉液收集渗漉液适用范围适用范围 适用于提取遇热易破坏适用于

6、提取遇热易破坏的成的成分。分。特点特点 因能保持良好的浓度差，效率高。因能保持良好的浓度差，效率高。 溶剂消耗多，时间长溶剂消耗多，时间长 提示提示 常温进行，常温进行，溶剂为水、酸液、碱液及不同浓溶剂为水、酸液、碱液及不同浓度的乙醇度的乙醇操作技术操作技术适用范围适用范围 l特点特点 操作简单、效率高。操作简单、效率高。l提示提示 不宜用于提取含挥发油成分、遇热易不宜用于提取含挥发油成分、遇热易 破坏、含糖类丰富的天然药物。破坏、含糖类丰富的天然药物。 含义含义 适用范围适用范围 操作技术操作技术l特点特点 效率高、溶剂消耗效率高、溶剂消耗大，操作较麻烦。大，操作较麻烦。l提示提示 不宜用于

7、对热不稳不宜用于对热不稳定的成分的提取。定的成分的提取。 含义含义 操作技术操作技术 常用索氏提取器常用索氏提取器适用范围适用范围 l特点特点 效率高、溶剂用量少，不适用于对热不效率高、溶剂用量少，不适用于对热不稳定的成分的提取。稳定的成分的提取。l提示提示 更换溶剂。更换溶剂。操作技术操作技术适用范围适用范围 l特点特点 时间短、效率高、时间短、效率高、 无需加热无需加热 。l提示提示 要求高。要求高。l 【知识链接知识链接】l二、其他提取方法二、其他提取方法操作技术操作技术适用范围适用范围 l特点特点 简单、方便、实用，宜推广简单、方便、实用，宜推广l提示提示 保温、与大气压相通后，关热源

8、。保温、与大气压相通后，关热源。l 可再蒸馏可再蒸馏含义含义 是利用某些固体物质具有在低于其熔点是利用某些固体物质具有在低于其熔点的温度下受热后，不经熔融就直接转化为蒸气，的温度下受热后，不经熔融就直接转化为蒸气，遇冷后又凝固为原来的固体的性质，使之从天遇冷后又凝固为原来的固体的性质，使之从天然药物中提出的方法。然药物中提出的方法。操作操作技术技术适用范围适用范围 l特点特点 时间长、损失大，易炭化、分解。时间长、损失大，易炭化、分解。l提示提示 水浴、油浴加热水浴、油浴加热（三）超临界流体萃取技术（三）超临界流体萃取技术 超临界流体萃取（超临界流体萃取（Supercritical Fluid

9、 Extraction, SFE）是一种利用某物质在超临界区域形成流体，对天）是一种利用某物质在超临界区域形成流体，对天然药物中有效成分进行萃取分离的新型技术，集提取和然药物中有效成分进行萃取分离的新型技术，集提取和分离于一体。分离于一体。超临界流体超临界流体：某物质处于临界温度（：某物质处于临界温度（Tc）和临界压力）和临界压力(Pc)以上时，形成一种既非液体又非气体的特殊相态。以上时，形成一种既非液体又非气体的特殊相态。常用的超临界流体物质常用的超临界流体物质：二氧化碳、氧化亚氮、乙烷、：二氧化碳、氧化亚氮、乙烷、乙烯和甲苯等。乙烯和甲苯等。1、概念、概念性质性质气体气体超临界流体超临界流

10、体液体液体密度（密度（g/ml）10-30.20.91.0黏度（黏度（g/ . s）10-410-4 10-310-2扩散系数（扩散系数（cm2/s）10-110-4 10-3KB)3、萃取溶剂的选择、萃取溶剂的选择从水提液中萃取亲脂性成分：从水提液中萃取亲脂性成分： 一般选用苯、三氯甲烷或乙醚一般选用苯、三氯甲烷或乙醚萃取偏亲水性成分：需用乙酸乙酯、丁醇等萃取偏亲水性成分：需用乙酸乙酯、丁醇等对于碱性、酸性、两性成分的萃取分离：对于碱性、酸性、两性成分的萃取分离： 常用常用PHPH梯度萃取法梯度萃取法 即利用混合物中各成分的酸（或碱）性强弱不同，即利用混合物中各成分的酸（或碱）性强弱不同，相

11、应改变溶剂相应改变溶剂PHPH值使之相继成盐或游离，改变成分在溶剂值使之相继成盐或游离，改变成分在溶剂系统中的分配系数而与其他成分分离的一种方法。系统中的分配系数而与其他成分分离的一种方法。（一）简单萃取法（一）简单萃取法提示提示1、水体液的浓度最好在相对密度、水体液的浓度最好在相对密度1.1-1.2之间。之间。2、选用的萃取溶剂第一次用量一般为水提液的、选用的萃取溶剂第一次用量一般为水提液的1/2-1/3， 以后的用量可适当减少为水提液的以后的用量可适当减少为水提液的1/4-1/6。3、一般萃取、一般萃取3-4次即可。次即可。4、若用氯仿萃取，易产生乳化现象。、若用氯仿萃取，易产生乳化现象。

12、5、形成乳化，破乳。、形成乳化，破乳。【适用范围适用范围】分配系数差异较大的成分的分离分配系数差异较大的成分的分离（二）逆流连续萃取法（二）逆流连续萃取法含义含义 利用两相互不相溶的溶剂相对密度的不同，使相利用两相互不相溶的溶剂相对密度的不同，使相对密度小的相液作为移动相（或分散相），逆流连续对密度小的相液作为移动相（或分散相），逆流连续穿过相对密度大的作为固定相（或连续相）的相液，穿过相对密度大的作为固定相（或连续相）的相液，借以交换溶质而达到分离的一种连续萃取技术。借以交换溶质而达到分离的一种连续萃取技术。【适用范围适用范围】 适用于各种密度的萃取溶剂适用于各种密度的萃取溶剂（三）逆流分溶

13、法（三）逆流分溶法（四）液滴逆流分配法（四）液滴逆流分配法【适用范围适用范围】 适用于分离中等极性、分离因子较小及不稳定适用于分离中等极性、分离因子较小及不稳定的物质。的物质。【适用范围适用范围】 适用于皂苷类化学成分的分离。适用于皂苷类化学成分的分离。破坏乳化现象的方法破坏乳化现象的方法放置较长时间放置较长时间其他破坏乳化的物质如乙醇、黄化蓖麻油等其他破坏乳化的物质如乙醇、黄化蓖麻油等搅动搅动乳化层抽滤乳化层抽滤将乳化层加热或冷冻将乳化层加热或冷冻分出乳化层，再用新溶剂萃取分出乳化层，再用新溶剂萃取加入少量电解质（如氯化钠）加入少量电解质（如氯化钠）滴加数滴醇类如戊醇改变表面张力，破坏乳状液

14、滴加数滴醇类如戊醇改变表面张力，破坏乳状液三、沉淀法三、沉淀法含义含义 是指在天然药物的提取液中加入某些试剂，使产生沉是指在天然药物的提取液中加入某些试剂，使产生沉淀或降低溶解性而从溶液中析出，从而获得有效成分或去淀或降低溶解性而从溶液中析出，从而获得有效成分或去除杂质的方法。除杂质的方法。分类分类（一）酸碱沉淀法（一）酸碱沉淀法 是利用某些成分能在酸（或碱）中溶解，继而又在是利用某些成分能在酸（或碱）中溶解，继而又在碱（或酸）中生成沉淀的性质达到分离的办法。碱（或酸）中生成沉淀的性质达到分离的办法。l1、操作技术、操作技术l2、适用范围、适用范围 l 酸性、碱性或两性化合物的分离。酸性、碱性

15、或两性化合物的分离。l3、特点、特点 沉淀反应可逆沉淀反应可逆l4、提示、提示 分离生物碱、分离生物碱、l 内酯结构化合物内酯结构化合物 l 具酸性的化合物具酸性的化合物 （二）试剂沉淀法（二）试剂沉淀法含义含义 利用一些成分能与某些试剂产生沉淀的性质，或利用利用一些成分能与某些试剂产生沉淀的性质，或利用某些成分在不同溶剂中溶解度的差异，通过加入特定试剂某些成分在不同溶剂中溶解度的差异，通过加入特定试剂或溶液，使生成沉淀，与其他成分分离。或溶液，使生成沉淀，与其他成分分离。l1、操作技术、操作技术l2、适用范围、适用范围 l 适用于能与某些试剂产生沉淀或在不同溶适用于能与某些试剂产生沉淀或在不

16、同溶剂中溶解度有差异的化学成分的分离剂中溶解度有差异的化学成分的分离l3、特点、特点 沉淀反应可逆或不可逆沉淀反应可逆或不可逆四、结晶与重结晶法四、结晶与重结晶法含义含义 利用混合物中各成分在溶剂中溶解度的差别，使所需利用混合物中各成分在溶剂中溶解度的差别，使所需成分以结晶状态析出，达到分离精制的目的分离方法。成分以结晶状态析出，达到分离精制的目的分离方法。结晶结晶 将物质由非结晶状通过处理得到结晶状物的过程。将物质由非结晶状通过处理得到结晶状物的过程。重结晶重结晶 将粗结晶用适当的溶剂处理纯化为较纯的结晶将粗结晶用适当的溶剂处理纯化为较纯的结晶状物质。状物质。1、结晶溶剂的选择、结晶溶剂的选

17、择选择合适的溶剂是结晶法的关键。选择合适的溶剂是结晶法的关键。溶剂具备条件溶剂具备条件1）不与结晶物质发生化学物质）不与结晶物质发生化学物质2）对结晶物质的溶解度随温度不同有显著差异）对结晶物质的溶解度随温度不同有显著差异 热时溶解度大，冷时溶解度小热时溶解度大，冷时溶解度小3）对杂质溶解度非常大或非常小）对杂质溶解度非常大或非常小4）沸点适中）沸点适中5）能给出较好的结晶）能给出较好的结晶 结晶法常用的溶剂有水、冰醋酸、甲醇、乙醇、丙结晶法常用的溶剂有水、冰醋酸、甲醇、乙醇、丙酮、醋酸乙酯、氯仿等。酮、醋酸乙酯、氯仿等。 当不能选择一种合适的试剂时，通常选用两种以上当不能选择一种合适的试剂时

18、，通常选用两种以上溶剂组成的混合溶剂。溶剂组成的混合溶剂。 以两种能以任意比例互溶的溶剂组成，要求低沸点以两种能以任意比例互溶的溶剂组成，要求低沸点溶剂对被提纯物质的溶解度大，而高沸点溶剂对被提纯溶剂对被提纯物质的溶解度大，而高沸点溶剂对被提纯物的溶解度小。物的溶解度小。3、结晶的条件、结晶的条件 杂质的去除杂质的去除 有效成分的含量有效成分的含量 溶液的浓度溶液的浓度 合适的温度、时间合适的温度、时间3、结晶纯度的判断、结晶纯度的判断1）晶形和色泽）晶形和色泽2）熔点和熔距）熔点和熔距3）纸色谱或薄层色谱技术）纸色谱或薄层色谱技术4）高效薄层色谱、气相色谱、高效液相色谱）高效薄层色谱、气相色

19、谱、高效液相色谱4、操作技术、操作技术1）制备结晶溶液。）制备结晶溶液。2）趁热过滤，除去不溶性杂质。）趁热过滤，除去不溶性杂质。3）将滤液放冷，使析出结晶。）将滤液放冷，使析出结晶。4）抽气滤过，将结晶从母液中分出。）抽气滤过，将结晶从母液中分出。5）重结晶）重结晶6）晶体的干燥）晶体的干燥 红外灯烘干红外灯烘干 真空恒温干燥器干燥真空恒温干燥器干燥l5、适用范围、适用范围 l 适用于分离纯化固体化学成分适用于分离纯化固体化学成分l6、特点、特点l 分离纯化固体成分的重要方法之一。分离纯化固体成分的重要方法之一。l7、提示、提示 选择合适的溶剂选择合适的溶剂l 注意结晶条件注意结晶条件 五、

20、透析法五、透析法含义含义 利用提取液中小分子物质可通过透析膜，而大分利用提取液中小分子物质可通过透析膜，而大分子物质不能通过透析膜的性质使分子量差异较大的子物质不能通过透析膜的性质使分子量差异较大的物质达到分离的方法。物质达到分离的方法。l1、操作技术、操作技术l2、适用范围、适用范围 l 适用于分离纯化天然药物化学成分中的大分子物质适用于分离纯化天然药物化学成分中的大分子物质l3、特点、特点l 操作简单、分离较完全操作简单、分离较完全l4、提示、提示 关键是膜孔的选择关键是膜孔的选择六、分馏法六、分馏法含义含义 利用各沸点不同的化合物组成混合物，在利用各沸点不同的化合物组成混合物，在分馏过程

21、中产生高低不同的蒸气压，从而收集到分馏过程中产生高低不同的蒸气压，从而收集到不同沸点温度的馏分，达到分离的目的的方法。不同沸点温度的馏分，达到分离的目的的方法。l1、操作技术、操作技术l2、适用范围、适用范围 l 适用于分离纯化天然药物中沸点相差较小的适用于分离纯化天然药物中沸点相差较小的液体混合物。液体混合物。l3、特点、特点l 操作简单、加热可破坏某些成分操作简单、加热可破坏某些成分l4、提示、提示 保持柱内适当的温度梯度，严保持柱内适当的温度梯度，严格控制热源的温度。格控制热源的温度。 七、色谱法七、色谱法基本原理基本原理 利用混合物中各成分在固定相和移动相中吸附、分配及利用混合物中各成

22、分在固定相和移动相中吸附、分配及其亲和力的差异而达到分离。其亲和力的差异而达到分离。分类分类按固定相和支持剂种类按固定相和支持剂种类:氧化铝色谱、硅胶色谱、氧化铝色谱、硅胶色谱、 聚酰胺色谱、凝胶色谱等。聚酰胺色谱、凝胶色谱等。按移动相种类：按移动相种类：气相色谱、液相色谱。气相色谱、液相色谱。按操作方式：按操作方式：柱色谱、纸色谱和薄层色谱。柱色谱、纸色谱和薄层色谱。按色谱原理：按色谱原理：吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱、吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱、 凝胶色谱等。凝胶色谱等。被分离化合物被分离化合物可选用色谱可选用色谱 一般生物碱一般生物碱硅胶、氧化铝色谱硅胶、氧化铝色谱生物碱类生物

23、碱类 极性较大的生物碱极性较大的生物碱分配色谱分配色谱 季铵型水溶性生物碱季铵型水溶性生物碱分配色谱、离子交换色谱分配色谱、离子交换色谱皂苷类、强心苷类皂苷类、强心苷类分配色谱、硅胶吸附色谱分配色谱、硅胶吸附色谱挥发油、甾体、萜类挥发油、甾体、萜类硅胶、氧化铝色谱硅胶、氧化铝色谱黄酮类、鞣质黄酮类、鞣质聚酰胺吸附色谱聚酰胺吸附色谱有机酸、氨基酸有机酸、氨基酸离子交换色谱、分配色谱、活性炭离子交换色谱、分配色谱、活性炭吸附色谱吸附色谱蛋白质、多肽、多糖类蛋白质、多肽、多糖类凝胶滤过色谱凝胶滤过色谱1、吸附柱色谱法、吸附柱色谱法 利用作为固定相的吸附剂对混合物中各成分吸附能利用作为固定相的吸附剂对

24、混合物中各成分吸附能力的大小不同，使各成分得到相互分离的方法。力的大小不同，使各成分得到相互分离的方法。（1）基本原理：）基本原理： 相似者易于吸附相似者易于吸附（2）吸附剂：）吸附剂： 硅胶：是一种微呈酸性的多孔性物质。常用硅胶：是一种微呈酸性的多孔性物质。常用SiOSiO2 2xHxH2 2O O表示。能与许多化合物形成氢键而产生吸附作用。表示。能与许多化合物形成氢键而产生吸附作用。 适用于分离中性或酸性亲脂性成分的分离。适用于分离中性或酸性亲脂性成分的分离。氧化铝：是一种吸附性很强的亲水性吸附剂，有酸性、氧化铝：是一种吸附性很强的亲水性吸附剂，有酸性、碱性、中性三种规格。碱性、中性三种规

25、格。 适用于分离碱性或中性的亲脂性成分。适用于分离碱性或中性的亲脂性成分。聚酰胺：聚酰胺：是由酰胺聚合而成的一类高分子化合物。是由酰胺聚合而成的一类高分子化合物。基本原理基本原理 聚酰胺分子内存在的许多酰胺基能与酚类的羟基、聚酰胺分子内存在的许多酰胺基能与酚类的羟基、酸类的羧基及醌类的醌基形成氢键而产生吸附。酸类的羧基及醌类的醌基形成氢键而产生吸附。CH3CH2CH2CH2CH2CH2CNCH3HOn OHOCH3CH3CH3CH3OCH2CH2CH2CH2CH2CNCH2HONCH2HOCH2CH2CH2CH2CH2CNCH2HONCH2HO固定相固定相移动相移动相 聚酰胺聚酰胺对化合物吸附

26、里的强弱取决于形成氢键的能对化合物吸附里的强弱取决于形成氢键的能力，影响形成氢键能力的因素：力，影响形成氢键能力的因素： 溶剂的种类：溶剂的种类：聚酰胺形成氢键的能力在水中最强，聚酰胺形成氢键的能力在水中最强，在有机溶剂中较弱，在碱性溶剂中最弱。在有机溶剂中较弱，在碱性溶剂中最弱。 常用溶剂的洗脱能力顺序：常用溶剂的洗脱能力顺序： 水水 甲醇或乙醇甲醇或乙醇 丙酮丙酮 稀氢氧化钠或稀氨溶液稀氢氧化钠或稀氨溶液 甲酰甲酰胺或二甲基甲酰胺胺或二甲基甲酰胺 尿素水溶液尿素水溶液 化合物分子结构：化合物分子结构： A A 化合物分子能形成氢键的基团数目越多，被聚酰化合物分子能形成氢键的基团数目越多，被

27、聚酰胺吸附越强。胺吸附越强。 B B 成键基团所处的位置不同，被吸附的强弱也不同。成键基团所处的位置不同，被吸附的强弱也不同。 C C 分子中芳香核、共轭双键多者被吸附强度大，少分子中芳香核、共轭双键多者被吸附强度大，少者则被吸附强度小。者则被吸附强度小。 D D 能形成分子内氢键者被吸附强度减小。能形成分子内氢键者被吸附强度减小。 适用于化合物的制备性分离、除鞣质。适用于化合物的制备性分离、除鞣质。 活性炭：是一种非极性吸附剂活性炭：是一种非极性吸附剂 影响吸附能力的因素：影响吸附能力的因素： A A 在水溶液中吸附力最强，在有机溶剂中较弱。在水溶液中吸附力最强，在有机溶剂中较弱。 B B

28、对极性基团多的化合物的吸附力大于极性基团对极性基团多的化合物的吸附力大于极性基团少的化合物。少的化合物。 C C 对芳香族化合物的吸附力大于脂肪族化合物。对芳香族化合物的吸附力大于脂肪族化合物。 D D 对分子量大的化合物的吸附力大于分子量小的对分子量大的化合物的吸附力大于分子量小的化合物。化合物。 适用于分离亲水性成分（大量制备性分离）。适用于分离亲水性成分（大量制备性分离）。 3 3、移动相移动相 4 4、被分离物质被分离物质 RHRH（烷烃（烷烃 烯烃烯烃 芳烃）芳烃）RXRX卤烃卤烃-OCH-OCH3 3-COOR-C=O-COOR-C=O -CHO-SH-NH -CHO-SH-NH2

29、 2-OHAr-OH-COOH-OHAr-OH-COOH 溶剂和吸附剂的选择：溶剂和吸附剂的选择： 若被分离物质的极性较大，可选用活度较低的吸附剂，若被分离物质的极性较大，可选用活度较低的吸附剂，而移动相的极性较大；若被分离物质的极性较小，可选用而移动相的极性较大；若被分离物质的极性较小，可选用活度较高的吸附剂，而移动相的极性较小。活度较高的吸附剂，而移动相的极性较小。 常见官能团极性大小顺序：常见官能团极性大小顺序：l1）选择色谱柱）选择色谱柱l内径与柱长之比内径与柱长之比 l 1151 20l2）装柱）装柱 吸附剂粒度吸附剂粒度l 均匀均匀 100目目 用量用量 试样试样 吸附剂吸附剂 1

30、30 160l 110012005）操作技术）操作技术柱色谱装置柱色谱装置l干法干法l湿法湿法l湿法上样湿法上样：易溶性的试样用洗脱剂溶解加样：易溶性的试样用洗脱剂溶解加样l干法上样干法上样：难溶性的试样加低沸点的极性有机：难溶性的试样加低沸点的极性有机溶剂再与吸附剂拌匀，挥干溶剂加样溶剂再与吸附剂拌匀，挥干溶剂加样l 梯度洗脱，等份收集梯度洗脱，等份收集l（6）特点）特点l（7）适用范围）适用范围l（8）提示）提示l 聚酰胺吸附剂与试样用量聚酰胺吸附剂与试样用量l 110 120 l 洗脱剂为含水溶剂系统：以水装柱，用水、乙洗脱剂为含水溶剂系统：以水装柱，用水、乙醇（从低到高）依次洗脱醇（从

31、低到高）依次洗脱l洗脱剂为非极性溶剂系统：以系统中极性较低洗脱剂为非极性溶剂系统：以系统中极性较低的溶剂装柱。的溶剂装柱。2、分配色谱法、分配色谱法 利用混合物中各成分在互不相溶的两相溶剂中分配系利用混合物中各成分在互不相溶的两相溶剂中分配系数的不同，来达到分离的色谱分离方法。数的不同，来达到分离的色谱分离方法。（1）基本原理）基本原理 分配系数的不同，达到分离分配系数的不同，达到分离分类分类正相分配色谱正相分配色谱反相分配色谱反相分配色谱固定相固定相极性大的溶剂极性大的溶剂极性小的溶剂极性小的溶剂移动相移动相极性小的溶剂极性小的溶剂极性大的溶剂极性大的溶剂适用范围适用范围分离极性较大的成分分

32、离极性较大的成分分离极性小的成分分离极性小的成分 （2）支持剂）支持剂 硅胶、硅藻土、纤维素粉、滤纸。硅胶、硅藻土、纤维素粉、滤纸。 反相分配色谱：反相分配色谱：-C18H37 ， -C8H17 ， -C2H5键合硅胶键合硅胶正相分配色谱：硅胶表面键合氨基或腈基正相分配色谱：硅胶表面键合氨基或腈基（3） 溶剂系统溶剂系统 复合两相溶剂系统复合两相溶剂系统 ； 纸色谱摸索；纸色谱摸索； （4） 被分离物质被分离物质 正相分配色谱正相分配色谱 极性较小的成分移动速度快；极性较小的成分移动速度快； 反反相分配色谱相分配色谱 极性较大的成分移动速度快；极性较大的成分移动速度快；l （5）操作方式）操作

33、方式l 装吸着固定相的支持剂装入柱内；装吸着固定相的支持剂装入柱内；l 用适量固定相溶解试样；用适量固定相溶解试样；l 固定相饱和后的移动相洗脱；固定相饱和后的移动相洗脱；l1）装柱装柱 固定相与支持剂用量固定相与支持剂用量0.5111l2）加样加样 支持剂用量为试样量的支持剂用量为试样量的1001000倍倍l3）洗脱洗脱l （8）提示）提示 必须固定相与移动相预饱和必须固定相与移动相预饱和l 温度恒定温度恒定l 合理控制上样量合理控制上样量 3.离子交换柱色谱法离子交换柱色谱法 含义含义 是利用离子交换树脂上的功能基在水溶液中与溶是利用离子交换树脂上的功能基在水溶液中与溶液的其他离子进行可逆

34、性交换的性质，以离子交换树脂作液的其他离子进行可逆性交换的性质，以离子交换树脂作为固定相，使混合成分中离子型与非离子型物质或具有不为固定相，使混合成分中离子型与非离子型物质或具有不同解离度的离子化合物得到分离的一种色谱法。同解离度的离子化合物得到分离的一种色谱法。（1）基本原理）基本原理阳离子交换树脂阳离子交换树脂ClHNaRSOClNaHRSO33ClHNaRSO3ClNaHRSO3ClHNaRSO3ClNaHRSO3阴离子交换树脂阴离子交换树脂OHNaClRNClNaOHRN （2）离子交换树脂的选择）离子交换树脂的选择 电荷种类、解离能力、分子大小与数量电荷种类、解离能力、分子大小与数量

35、 交换容量、颗粒大小交换容量、颗粒大小（3）操作方式：）操作方式： 1）树脂的预处理）树脂的预处理阳离子交换树脂：阳离子交换树脂： 按酸按酸-碱碱-酸的步骤酸的步骤 阴离子交换树脂：阴离子交换树脂： 按碱按碱-酸酸-碱的步骤碱的步骤 （4）特点）特点 （5）适用范围）适用范围 具有解离能力的化合物具有解离能力的化合物 （6）提示）提示 试样用量试样用量 交换容量决定交换容量决定 2）装柱）装柱 3）上样）上样 4）洗脱）洗脱 5）再生）再生4、凝胶滤过柱色谱法、凝胶滤过柱色谱法含义含义 是以凝胶为固定相，选择适当的溶剂进行洗脱，是以凝胶为固定相，选择适当的溶剂进行洗脱，使混合物中分子量大小不同

36、的化合物得到分离的方法。使混合物中分子量大小不同的化合物得到分离的方法。 （ 1）基本原理基本原理代表凝胶颗粒 代表大分子物质 代表小分子物质 代表凝胶颗粒 代表大分子物质 代表小分子物质 （ 2）凝胶的种类及性能凝胶的种类及性能 1）葡聚糖凝胶）葡聚糖凝胶 2）葡聚糖凝胶）葡聚糖凝胶LH-20 3）聚丙烯酰胺凝胶）聚丙烯酰胺凝胶4）琼脂糖凝胶）琼脂糖凝胶 （ 3）操作方式操作方式 1）凝胶的选择）凝胶的选择 2）浸泡溶胀）浸泡溶胀 3） 装柱装柱4）加样）加样 5）洗脱）洗脱 6）再生）再生（4）特点特点（5）适用范围适用范围 大小分子化合物的分离大小分子化合物的分离（6）提示提示 大孔吸附

37、色谱法大孔吸附色谱法 不含交换基团，具有大孔结构的有机高聚物吸附不含交换基团，具有大孔结构的有机高聚物吸附剂。剂。 1、基本原理基本原理 吸附性能及分子筛作用。吸附性能及分子筛作用。 2、影响分离的因素影响分离的因素 （1）树脂本身的化学结构）树脂本身的化学结构 （2）被分离成分的性质）被分离成分的性质 （3）溶剂的影响）溶剂的影响 （二）薄层色谱法（二）薄层色谱法 具体操作：具体操作： 制板、活化：制板、活化： 点样：点样： 展开：展开：上行、下行、近水平、环形、单向二次、双向二上行、下行、近水平、环形、单向二次、双向二次次 显色：显色：紫外线照射法、喷雾显色法、碘蒸气紫外线照射法、喷雾显色

38、法、碘蒸气显色法显色法 测定比移值。测定比移值。R Rf f值值= =原点至色谱斑点中心的原点至色谱斑点中心的距离距离/ /原点至溶剂前沿的距离原点至溶剂前沿的距离 （三）纸色谱法（三）纸色谱法 是以滤纸为支持剂是以滤纸为支持剂 ，滤纸上吸着的水为固定相，滤纸上吸着的水为固定相，用一定的溶剂系统为移动相进行展开，而使试样中各用一定的溶剂系统为移动相进行展开，而使试样中各组分达到分离的一种分配色谱法。组分达到分离的一种分配色谱法。 具体操作：点样、展开、显色、计算比移值具体操作：点样、展开、显色、计算比移值 （四）高效液相色谱法（四）高效液相色谱法高效液相色谱法（高效液相色谱法（HPLC）又称高

39、压液相色谱、高速液相色谱法）又称高压液相色谱、高速液相色谱法（1）基本原理）基本原理 根据被分离物质中各组分在固定相及流动相中的吸附能力、根据被分离物质中各组分在固定相及流动相中的吸附能力、分配系数、离子交换作用或分子量大小的差异而获得分离。分配系数、离子交换作用或分子量大小的差异而获得分离。（2）操作技术）操作技术（3）特点：高压、高速、高分离效能、高灵敏度、操作自动化、）特点：高压、高速、高分离效能、高灵敏度、操作自动化、检测范围广。检测范围广。（4）适用范围）适用范围 广泛广泛（5）提示）提示 色谱纯度色谱纯度（五）气相色谱法（五）气相色谱法气相色谱法是一种以气体作为流动相的色谱分离方法。气相色谱法是一种以气体作为流动相的色谱分离方法。（1）基本原理）基本原理 利用混合物中各组分在气体与固定相之间吸附能力的利用混合物中各组分在气体与固定相之间吸附能力的不同或分配系数的差异而获得分离。不同或分配系数的差异而获得分离。（2）操作技术）操作技术（3）特点：效率高、分析速度快、试样用量少、选择性好、）特点：效率高、分析速度快、试样用量少、选择性好、应用范围广应用范围广（4）适用范围）适用范围 适用于具有沸点低、易挥发特性的挥发油成适用于具有沸点低、易挥发特性的挥发油成分的分离、鉴定和定量分析。分的分离、鉴定和定量分析。（5）提示）提示 色谱纯度色谱纯度