土壤中分解尿素的细菌的分离与计数课件.ppt

1、硝化细菌、固氮菌、根瘤菌：硝化细菌、固氮菌、根瘤菌：硝化细菌硝化细菌固氮菌固氮菌根瘤菌根瘤菌代谢方式代谢方式自养需氧型自养需氧型异养需氧型异养需氧型异养需氧型异养需氧型能量来源能量来源NH3有机物有机物豆科植物的有机物豆科植物的有机物转换过程转换过程将将NH3转变成转变成NO2-、 NO3-固氮酶催化机理总反应式固氮酶催化机理总反应式为：为： N2+8 e-+8 H+16 MgATP+16 H2O2 NH3+H2+16MgADP + 16 Pi在固氮酶的作用下，在固氮酶的作用下，根瘤中的菌体将分根瘤中的菌体将分子态氮转化为氨态子态氮转化为氨态氮（同左）氮（同左）思考思考2该培养基对微生物该培养

2、基对微生物 （具（具有，不具有）选择作用。如果具有，其有，不具有）选择作用。如果具有，其选择机制是选择机制是 。具有具有只有能够以尿素作为氮源的微生只有能够以尿素作为氮源的微生物才能在该培养基上生长物才能在该培养基上生长 当样品的稀释度足够高时，培养基表当样品的稀释度足够高时，培养基表 面生长的一个菌落，来源于样品稀释面生长的一个菌落，来源于样品稀释 液中的一个活菌，通过统计平板上的液中的一个活菌，通过统计平板上的 菌落数，就能推测出样品中大约含有菌落数，就能推测出样品中大约含有 多少活菌。多少活菌。如何从平板上的菌落数推测出每克如何从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数？样品中的菌落数？教

3、材教材P22实例分析实例分析P22 你认为哪个同学的结果更接近真实你认为哪个同学的结果更接近真实值？值？ 你认为这两位同学的实验需要改进你认为这两位同学的实验需要改进吗？如果需要，如何改进？吗？如果需要，如何改进？实例分析实例分析P22 第一同学只涂布了一个平板，第一同学只涂布了一个平板，没有设置没有设置重复组，因此结果不具有说服力。重复组，因此结果不具有说服力。 第二位同学考虑到设置重复组的问题，第二位同学考虑到设置重复组的问题，涂布了三个平板，但是涂布了三个平板，但是其中其中1个平板的计个平板的计数结果与数结果与2个相差太远，说明在操作过程个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，因此，

4、不能简单地中可能出现了错误，因此，不能简单地将将3个平板的计数值用来求平均值个平板的计数值用来求平均值。菌落计数菌落计数配制土壤配制土壤溶液溶液系列稀释系列稀释涂布平板涂布平板与培养与培养根据图示根据图示27填写以下实验流程：填写以下实验流程：实验设计：实验设计： 从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土土3cm3cm左右，再取样（左右，再取样（3-8cm3-8cm），将样品装入事），将样品装入事先准备好的信封中。先准备好的信封中。 制备以制备以的选择培养基。的选择培养基。 准备准备牛肉膏蛋白胨培养基牛肉膏蛋白胨培养基和和选择培养基选择培养基将菌将菌液稀释相同

5、的倍数，在牛肉膏蛋白胨培养基上生液稀释相同的倍数，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显多于选择培养基上的数目，长的菌落数目应明显多于选择培养基上的数目，因此，因此，可以作为可以作为，。由于初次。由于初次实验，对于稀释的范围没有把握，因此选择了一实验，对于稀释的范围没有把握，因此选择了一个较为宽泛的范围：稀释倍数为个较为宽泛的范围：稀释倍数为10103 310107 7。每个。每个稀释度下需要稀释度下需要3 3个个选择培养基，选择培养基，1 1个牛肉膏蛋白胨个牛肉膏蛋白胨培养基，因此共需要培养基，因此共需要1515个选择培养基，个选择培养基，5 5个牛肉个牛肉膏蛋白胨培养基。此外，还需要准

6、备膏蛋白胨培养基。此外，还需要准备8 8个个灭菌的试灭菌的试管和管和1 1个个灭菌的移液管。灭菌的移液管。实验时要实验时要对对培养皿作培养皿作好标记好标记。注。注明培养基类明培养基类型、培养时型、培养时间、稀释度、间、稀释度、培养物等。培养物等。 当菌落数目稳定时，选取菌落数在当菌落数目稳定时，选取菌落数在3030300300的平板进行计数。在同一稀释度下，的平板进行计数。在同一稀释度下，至少对至少对3 3个平板进行重复计数，然后求出个平板进行重复计数，然后求出平均值平均值，并根据平板所对应的稀释度计，并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。算出样品中细菌的数目。 （六）鉴定（六）鉴定

7、：筛选后必鉴定：筛选后必鉴定 鉴别培养基鉴别培养基：加入某种指示剂或化加入某种指示剂或化学药品，不影响微生物的生存学药品，不影响微生物的生存鉴定分解尿素的细菌。鉴定分解尿素的细菌。原理：脲酶催化尿素分解成氨原理：脲酶催化尿素分解成氨培培养基碱性增强养基碱性增强 酚红变红酚红变红脲酶阳脲酶阳性性课题成果与评价课题成果与评价 （一）培养物中是否有杂菌污染以（一）培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选出菌落及选择培养基是否筛选出菌落 ，说明培养基没有被杂菌污染。，说明培养基没有被杂菌污染。，说，说明选择培养基已筛选出一些菌落。明选择培养基已筛选出一些菌落。如果学生选取的是同一种土样，统计的结如

8、果学生选取的是同一种土样，统计的结果应该接近。如果结果相差太远，需要进一步果应该接近。如果结果相差太远，需要进一步分析产生差异的原因。分析产生差异的原因。（二）样品的稀释操作是否成功（二）样品的稀释操作是否成功 如果得到了如果得到了2 2个或个或2 2个以上菌落数目在个以上菌落数目在3030300300的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数。进行菌落的计数。 （三）重复组的结果是否一致（三）重复组的结果是否一致相关连接：相关连接：相关连接：相关连接：1.1.对细菌群体生长规律测定的正确的表述是（对细菌群体生长规律测定的正确的表述是（ ） A.

9、A.在液体培养基上进行在液体培养基上进行 B.B.至少接种一种细菌至少接种一种细菌 C.C.接种一个细菌接种一个细菌 D.D.及时补充消耗的营养物质及时补充消耗的营养物质 2.2.使用选择培养基的目的是（使用选择培养基的目的是（ ） A.A.培养细菌培养细菌 B.B.培养真菌培养真菌 C.C.使需要的微生物大量繁殖使需要的微生物大量繁殖 D.D.表现某微生物的特定性状与其他微生物加以区别表现某微生物的特定性状与其他微生物加以区别3.3.能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分别是能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分别是( )( ) A.CO A.CO2 2和和N N2 2 B. B.葡萄糖和葡

10、萄糖和NHNH3 3 C.COC.CO2 2和尿素和尿素 D.D.葡萄糖和尿素葡萄糖和尿素A AC CD D4.4.下列说法不正确的是（下列说法不正确的是（ ） A.A.科学家从科学家从70708080度热泉中分离到耐高温的度热泉中分离到耐高温的TaqDNATaqDNA聚聚合酶合酶 B.B.统计某一稀释度的统计某一稀释度的5 5个平板的菌落数依次为个平板的菌落数依次为M1M1、M2M2、M3M3、M4M4、M5M5，以，以M3M3作为该样品菌落数的估计值作为该样品菌落数的估计值 C.C.设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，

11、提高实验结果的可信度素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度 D.D.同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大，同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大，种类最多。种类最多。5.5.为培养和分离出酵母菌并淘汰杂菌，常在培养基中为培养和分离出酵母菌并淘汰杂菌，常在培养基中加入（）加入（） A.A.较多的氮源物质较多的氮源物质 B.B.较多的碳源物质较多的碳源物质 C.C.青霉素类药物青霉素类药物 D.D.高浓度食盐高浓度食盐B BC C（09，宁夏，宁夏，15分）分）（1）在大肠杆菌培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑）在大肠杆菌培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑_、_和渗透压等条件。

12、由于该细菌具有体积小、结构简单、变异类型容和渗透压等条件。由于该细菌具有体积小、结构简单、变异类型容易选择、易选择、_、_等优点，因此常作为遗传学研究的实验材料。等优点，因此常作为遗传学研究的实验材料。 （2）在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养皿）在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养皿进行进行_（消毒、灭菌）；操作者的双手需要进行清洗和（消毒、灭菌）；操作者的双手需要进行清洗和_；静止空气中的细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫外线能使蛋白质变性，还能静止空气中的细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫外线能使蛋白质变性，还能_。 （3）若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌

13、活菌的个数，要想使所得估计值）若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计值更接近实际值，除应严格操作、多次重复外，还应保证待测样品稀释的更接近实际值，除应严格操作、多次重复外，还应保证待测样品稀释的_。 （4）通常，对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对）通常，对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的细菌进行初步的_。 （5）培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体）培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是培养基应采用的检测方法是_。 （6）若用大肠杆菌进行实验，使用过的培养基及其培养物必须经过）若用大肠杆菌进行实验，使用过的培养基及其培养物必须经过_处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。答案答案:（1）温度）温度 酸碱度酸碱度 易培养易培养 生活周期短生活周期短 （2）灭菌）灭菌 消毒消毒 损伤损伤DNA的结构的结构 （3）比例合适）比例合适 （4）鉴定）鉴定(或分类或分类)（5）将未接种的培养基在适宜的温度下放置）将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间适宜的时间,观察培养基上是否有菌落产生观察培养基上是否有菌落产生.（6）灭菌）灭菌