遗传病诊断课件.pptx

1、陈小义陈小义遗传病的诊断遗传病的诊断（diagnosis of hereditary diseasediagnosis of hereditary disease）指根据患者的临床症状、体征及辅助检查结果并结合指根据患者的临床症状、体征及辅助检查结果并结合遗传学分析，判定是否患有某种遗传病及遗传方式。遗传学分析，判定是否患有某种遗传病及遗传方式。概念概念方法方法临床上遗传学诊断方法包括：临床上遗传学诊断方法包括：临床诊断临床诊断、症状前诊断症状前诊断（presymptomatic diagnosispresymptomatic diagnosis）、）、产前诊断产前诊断和和植入前植入前诊断诊断

2、（preimplantation diagnosispreimplantation diagnosis）。）。陈小义陈小义陈小义陈小义一、临床诊断的概念一、临床诊断的概念 临床诊断临床诊断（symptomatic diagnosis）是指结合遗）是指结合遗传咨询对患者的病史、症状、体征和实验室检查传咨询对患者的病史、症状、体征和实验室检查结果进行综合分析，确定诊断并判断遗传方式。结果进行综合分析，确定诊断并判断遗传方式。陈小义陈小义二、临床诊断的内容二、临床诊断的内容1.病史病史 除应了解一般病史外，还应着重采集与遗传病家族聚集现除应了解一般病史外，还应着重采集与遗传病家族聚集现象有关的以下项

3、目：象有关的以下项目：家族史家族史：整个家系患同种疾病的病史，能充分反映患者：整个家系患同种疾病的病史，能充分反映患者父系和母系各家族成员发病情况。父系和母系各家族成员发病情况。婚姻史婚姻史：结婚的年龄、次数、配偶的健康状况及是否为：结婚的年龄、次数、配偶的健康状况及是否为近亲婚配。近亲婚配。生育史生育史：生育年龄、子女数及其健康状况，有无流产、：生育年龄、子女数及其健康状况，有无流产、死产、早产史、畸胎等。死产、早产史、畸胎等。陈小义陈小义二、临床诊断的内容二、临床诊断的内容2 2症状与体征：关注智力、五官、四肢发育、第二性征。症状与体征：关注智力、五官、四肢发育、第二性征。遗传病遗传病伴随

4、体征伴随体征DownDown综合征综合征 智力低下、特殊面容、耳低位、伸舌流涎智力低下、特殊面容、耳低位、伸舌流涎TurnerTurner综合征综合征原发闭经、身材矮小，女性性征发育不良原发闭经、身材矮小，女性性征发育不良KlinefelterKlinefelter综合征综合征乳房发育、身材瘦长、男性第二性征发育不良乳房发育、身材瘦长、男性第二性征发育不良5P-5P-综合征综合征智力低下、小头、发育障碍、婴儿期猫叫样哭声智力低下、小头、发育障碍、婴儿期猫叫样哭声苯丙酮尿症苯丙酮尿症智力障碍、发色变浅、腐臭尿味智力障碍、发色变浅、腐臭尿味白化病白化病眼畏光、全身白化、虹膜淡灰色眼畏光、全身白化、

5、虹膜淡灰色镰状细胞贫血镰状细胞贫血溶血性贫血、关节、组织疼痛甚至坏死溶血性贫血、关节、组织疼痛甚至坏死半乳糖血症半乳糖血症智力发育不全、白内障、肝硬化智力发育不全、白内障、肝硬化DuchenneDuchenne型肌营养不良型肌营养不良腓肠肌假性肥大、骨盆肌无力（腓肠肌假性肥大、骨盆肌无力（GowerGower征）、鸭步态征）、鸭步态鱼鳞癣鱼鳞癣四肢伸侧或背部皮肤角化呈鱼鳞状改变四肢伸侧或背部皮肤角化呈鱼鳞状改变红绿色盲红绿色盲红、绿色觉缺失红、绿色觉缺失血友病血友病皮下、肌肉、关节内反复出血、凝血障碍、关节畸形皮下、肌肉、关节内反复出血、凝血障碍、关节畸形抗维生素抗维生素D D佝偻病佝偻病骨骼

6、发育畸形、生长缓慢、骨骼发育畸形、生长缓慢、O O或或X X型腿型腿地中海贫血地中海贫血轻、中或重度溶血性贫血、贫血面容轻、中或重度溶血性贫血、贫血面容陈小义陈小义二、临床诊断的内容二、临床诊断的内容3.家系分析家系分析系谱分析是单基因遗传病不可或缺的遗传分析方式。系谱分析是单基因遗传病不可或缺的遗传分析方式。（1）系谱的系统性、完整性和可靠性。）系谱的系统性、完整性和可靠性。（2）部分显性遗传病具有延迟显性、外显不全和不规则）部分显性遗传病具有延迟显性、外显不全和不规则显性的特点。显性的特点。（3）新的基因突变、遗传异质性对系谱分析的影响。）新的基因突变、遗传异质性对系谱分析的影响。陈小义陈

7、小义陈小义陈小义核型分析：确诊染色体病的主要方法。确认更多核型分析：确诊染色体病的主要方法。确认更多的染色体数目和结构异常综合征。的染色体数目和结构异常综合征。 标本的来源：外周血、羊水中胎儿脱落细胞和标本的来源：外周血、羊水中胎儿脱落细胞和胎儿脐带血，以及受检者的各种病理组织等。胎儿脐带血，以及受检者的各种病理组织等。一、染色体检查一、染色体检查陈小义陈小义：l （1）明显智力发育不全者；）明显智力发育不全者；l （2）先天畸形、生长迟缓者；）先天畸形、生长迟缓者；l （3）夫妇之一有染色体异常，如平衡易位、嵌合体、结构）夫妇之一有染色体异常，如平衡易位、嵌合体、结构重排等携带者；重排等携带

8、者；l （4）有反复多次早期流产史的妇女及其丈夫；）有反复多次早期流产史的妇女及其丈夫；l （5）原发闭经和女性不孕症；）原发闭经和女性不孕症；l （6）两性内外生殖畸形者；）两性内外生殖畸形者；l （7）无精子症和男性不育症；）无精子症和男性不育症；l （8）家族中已有染色体异常或先天畸形的个体；）家族中已有染色体异常或先天畸形的个体；l （9）35岁以上高龄孕妇岁以上高龄孕妇陈小义陈小义二、性染色体检查二、性染色体检查1.X染色质检查染色质检查：X染色质数目染色质数目=X染色体数目染色体数目-1。2.Y染色质检查染色质检查：Y小体数目等于小体数目等于Y染色体数目，染色体数目， 取材：患者口

9、腔粘膜脱落上皮细胞；取材：患者口腔粘膜脱落上皮细胞； 产前诊断：取羊水中胎儿上皮细胞涂片。产前诊断：取羊水中胎儿上皮细胞涂片。陈小义陈小义 类型类型 X染色质数目染色质数目 Y染色质数目染色质数目正常男性（正常男性（XY） 0 1正常女性（正常女性（XX） 1 0Turn综合征综合征 （XO） 0 0Klinefelter综合征综合征 （XXY） 1 1XYY综合征综合征 0 2 XXX综合征综合征 2 0陈小义陈小义三、荧光原位杂交技术（三、荧光原位杂交技术（FISH）检查检查检测染色体微小结构异常：检测染色体微小结构异常： 缺失、插入、易位等和缺失、插入、易位等和DNA的基因定位。的基因定

10、位。 优点优点：快速、安全快速、安全灵敏度高灵敏度高特异性强。特异性强。不足不足：只能用已知的特异性探针检测染只能用已知的特异性探针检测染色体异常。对于一些复杂的、微色体异常。对于一些复杂的、微小的结构异常，需要结合常规细小的结构异常，需要结合常规细胞遗传学检查使诊断结果更加准胞遗传学检查使诊断结果更加准确。确。陈小义陈小义X染色体染色体Y染色体染色体13号染色体号染色体18号染色体号染色体21号染色体号染色体陈小义陈小义13号染色体号染色体21号染色体号染色体18三体综合征患者的三体综合征患者的FISH检测检测陈小义陈小义陈小义陈小义一、蛋白质和酶的检测一、蛋白质和酶的检测1. 常见遗传代谢

11、常见遗传代谢病的酶活性检测病的酶活性检测 疾病疾病遗传性缺陷酶遗传性缺陷酶采样组织采样组织苯丙酮尿症苯丙氨酸羟化酶肝白化病酪氨酸酶毛囊组氨酸血症组氨酸酶指（趾）甲屑高苯丙氨酸血症二氢蝶啶还原酶成纤维细胞酪氨酸血症对羟苯丙酮酸羟化酶肝、肾酪氨酸血症酪氨酸氨基转移酶肝半乳糖血症半乳糖-1-磷酸-尿苷转移酶红细胞枫糖尿症支链酮酸脱羧酶肝、白细胞、成纤维细胞黑矇性痴呆氨基己糖酶白细胞Duchenne型肌营养不良肌酸磷酸激酶血清糖原贮积病型葡萄糖-6-磷酸酶肠粘膜糖原贮积病型-1，4葡萄糖苷酶成纤维细胞糖原贮积病型红细胞脱支酶红细胞糖原贮积病型分支酶白细胞、成纤维细胞糖原贮积病型肝磷酸化酶白细胞陈小义陈

12、小义 假肥大型肌营养不良症（假肥大型肌营养不良症（DMD）患者血清：）患者血清：磷酸肌酸激酶活性升高。磷酸肌酸激酶活性升高。 一、蛋白质和酶的检测一、蛋白质和酶的检测血液血液特定的组织、细胞特定的组织、细胞2. 材料来源材料来源陈小义陈小义苯丙酮尿症苯丙酮尿症酶活性检查酶活性检查苯丙氨酸羟化酶苯丙氨酸羟化酶肝脏肝脏FeCl3显色反应显色反应苯丙酮酸苯丙酮酸绿色绿色血液滤片法血液滤片法枯草杆菌抑制试验枯草杆菌抑制试验苯丙酮尿症苯丙酮尿症（PKU）患者：）患者： 检测血清中苯丙氨酸或尿中苯丙酮酸、苯乙酸。检测血清中苯丙氨酸或尿中苯丙酮酸、苯乙酸。二、代谢产物的检测二、代谢产物的检测陈小义陈小义三、

13、生化检查在临床诊断中的应用三、生化检查在临床诊断中的应用1. 苯丙酮尿症苯丙酮尿症 典型典型PKU是由于患儿肝细胞缺乏是由于患儿肝细胞缺乏苯丙氨酸苯丙氨酸-4-羟化酶羟化酶（PAH），不），不能将苯丙氨酸转化为酪氨酸，在其合成和再生途径中必须经过能将苯丙氨酸转化为酪氨酸，在其合成和再生途径中必须经过鸟鸟苷三磷酸环化水合酶苷三磷酸环化水合酶（GTP-CH）、）、6-丙酮酰四氢蝶呤丙酮酰四氢蝶呤合成酶（合成酶（6-PTS）和）和二氢生物蝶呤还原酶二氢生物蝶呤还原酶（DHPR）的催化。）的催化。陈小义陈小义诊断方法诊断方法新生儿期筛查新生儿期筛查尿三氯化铁试验和尿三氯化铁试验和2，4一二硝基苯肼试验

14、一二硝基苯肼试验血浆游离氨基酸分析和尿液有机酸分析血浆游离氨基酸分析和尿液有机酸分析尿蝶呤分析：尿蝶呤分析：陈小义陈小义2. 型糖尿病发病（型糖尿病发病（IDDM）与遗传有一定关系。）与遗传有一定关系。3. 系统性红斑狼疮的发病原因，尚不完全清楚，一般认系统性红斑狼疮的发病原因，尚不完全清楚，一般认为是多基因遗传，可能与遗传、性激素、环境等多种因为是多基因遗传，可能与遗传、性激素、环境等多种因素相互作用造成机体免疫功能紊乱有关。素相互作用造成机体免疫功能紊乱有关。 陈小义陈小义陈小义陈小义产前诊断产前诊断（prenatal or antenatal diagnosis）又称出生）又称出生前诊断

15、，是对胚胎或胎儿在出生前是否患有某种遗前诊断，是对胚胎或胎儿在出生前是否患有某种遗传病或先天畸形作出诊断。传病或先天畸形作出诊断。 定义定义:产前诊断可以有效地预防遗传病患儿的出生，产前诊断可以有效地预防遗传病患儿的出生，降低遗传病的发病率。降低遗传病的发病率。陈小义陈小义一、产前诊断的对象一、产前诊断的对象1.孕龄在孕龄在35岁以上的高龄孕妇。岁以上的高龄孕妇。2.夫妇一方有染色体异常，特别是表型正常的染色体平衡易位携夫妇一方有染色体异常，特别是表型正常的染色体平衡易位携带者或生育过染色体异常患儿的孕妇。带者或生育过染色体异常患儿的孕妇。3.曾生育过神管缺陷或先天畸形患儿的孕妇。曾生育过神管

16、缺陷或先天畸形患儿的孕妇。4.夫妇之一患有先天性代谢病或生育过该病患儿的孕妇。夫妇之一患有先天性代谢病或生育过该病患儿的孕妇。5.X连锁隐性遗传致病基因携带者孕妇及常染色体显性遗传不完全连锁隐性遗传致病基因携带者孕妇及常染色体显性遗传不完全显性基因携带者孕妇。显性基因携带者孕妇。6.习惯性流产或有死胎、死产史的孕妇。习惯性流产或有死胎、死产史的孕妇。7.夫妇之一有明显致畸因素接触史或服用不当药物的孕妇。夫妇之一有明显致畸因素接触史或服用不当药物的孕妇。陈小义陈小义 超声波扫描 胎盘 羊水 注射器 二、产前诊断的方法二、产前诊断的方法1. 羊膜穿刺术（妊娠羊膜穿刺术（妊娠16-20周）周）适用于

17、诊断染色体病、先天性代谢病、神经管缺陷等适用于诊断染色体病、先天性代谢病、神经管缺陷等 陈小义陈小义2. 绒毛取样术（妊娠绒毛取样术（妊娠9-12周）周）该方法对母体和胎儿比较安全，而且诊断时间较早，有利选该方法对母体和胎儿比较安全，而且诊断时间较早，有利选择是否继续妊娠。择是否继续妊娠。陈小义陈小义3. 脐带穿刺术（妊娠脐带穿刺术（妊娠18周）周） 常用于血液系统疾病诊断、先天代谢疾病、染色体病等疾常用于血液系统疾病诊断、先天代谢疾病、染色体病等疾病的诊断。是绒毛和羊水检查可靠的补救措施。病的诊断。是绒毛和羊水检查可靠的补救措施。4. 超声波检查：超声波检查： 临床常用、首选的诊断方法。临床

18、常用、首选的诊断方法。常用于神经管缺陷、外在发育畸形、先天性心脏病等器官组织常用于神经管缺陷、外在发育畸形、先天性心脏病等器官组织发育畸形疾病的检测诊断。发育畸形疾病的检测诊断。亦可作为取样、穿刺及胎儿镜查的主要辅助手段。亦可作为取样、穿刺及胎儿镜查的主要辅助手段。5. 孕妇外周血分离胎儿细胞孕妇外周血分离胎儿细胞陈小义陈小义6. 胎儿镜检查胎儿镜检查 由于操作困难，产生并发症可能性大，故临床应用极由于操作困难，产生并发症可能性大，故临床应用极少。少。7. X线检查线检查对胎儿发育有明确的危害。对胎儿发育有明确的危害。8. 植入诊断植入诊断陈小义陈小义陈小义陈小义基因诊断基因诊断（gene d

19、iagnosis）是指利用）是指利用DNA分析技术分析技术直接从基因水平（直接从基因水平（DNA或或RNA）检测遗传的基因缺）检测遗传的基因缺陷，从而对疾病做出诊断。陷，从而对疾病做出诊断。传统的诊断：表现型传统的诊断：表现型基因型基因型 基基 因因 诊诊 断：基因型断：基因型表现型表现型 （ 逆向诊断）逆向诊断）陈小义陈小义u针对性强，特异性高针对性强，特异性高u检测灵敏度和精确性高检测灵敏度和精确性高u实用性强，诊断范围广实用性强，诊断范围广u不受材料来源影响不受材料来源影响u症状前诊断症状前诊断u产前诊断产前诊断陈小义陈小义一、基因诊断的基本方法一、基因诊断的基本方法 l 1. 核酸分子

20、杂交技术核酸分子杂交技术l 2. 聚合酶链反应聚合酶链反应 (PCR)l 3. 基因测序基因测序l 4. 基因芯片基因芯片陈小义陈小义1. 核酸分子杂交技术核酸分子杂交技术（1）Southern 印迹杂交印迹杂交： 直接检测致病基因内部的突变，如缺失、插入、倒位以直接检测致病基因内部的突变，如缺失、插入、倒位以及限制性内切酶酶切位点的改变。及限制性内切酶酶切位点的改变。限制性片段长度多态性（限制性片段长度多态性（RFLP）连锁分析）连锁分析： 进行致病基因遗传标记连锁分析，需结合家系图谱进行进行致病基因遗传标记连锁分析，需结合家系图谱进行连锁分析，判断基因型。连锁分析，判断基因型。 （2）斑点

21、印迹杂交：）斑点印迹杂交：检测样品中核酸量的高低。检测样品中核酸量的高低。陈小义陈小义（4）等位基因特异性寡核苷酸（等位基因特异性寡核苷酸（ASO）杂交法）杂交法: 主要是根据已知基因突变位点、设计、制备与野生型或突变主要是根据已知基因突变位点、设计、制备与野生型或突变型基因序列互补的基因探针，经过杂交结果分析是否存在基因型基因序列互补的基因探针，经过杂交结果分析是否存在基因突变，判断基因类型。突变，判断基因类型。 （3）荧光原位杂交（荧光原位杂交（FISH）技术：技术： 用于检测染色体异常和染色体基因定位，可直接在细胞核中用于检测染色体异常和染色体基因定位，可直接在细胞核中或染色体上确定或染

22、色体上确定DNA顺序，广泛应用于肿瘤、遗传病的基因诊顺序，广泛应用于肿瘤、遗传病的基因诊断。断。 陈小义陈小义2. 聚合酶链反应（聚合酶链反应（PCR）技术）技术 （1）PCR-RFLP：将聚合酶链反应（：将聚合酶链反应（PCR）与限制性片段长度多）与限制性片段长度多态性（态性（RFLP）分析方法相结合的一种检测技术。）分析方法相结合的一种检测技术。 在相应酶切位点两侧设计在相应酶切位点两侧设计PCR引物，扩增目标引物，扩增目标DNA； 酶切酶切PCR产物，检测产物中是否含有酶切位点；产物，检测产物中是否含有酶切位点； 电泳分离酶切后电泳分离酶切后PCR产物，根据电泳图谱结合家系图谱进行分析判

23、断。产物，根据电泳图谱结合家系图谱进行分析判断。 （2）PCR-SSCP：单链构象多态性（：单链构象多态性（single -strand conformation polymorphism，SSCP）是一种检测核酸序列中点突变的技术。）是一种检测核酸序列中点突变的技术。 基本原理是提取含有突变位点的基本原理是提取含有突变位点的DNA片段，当双链片段，当双链DNA变变性为两条单链后，会在中性条件下形成不同空间构象，导致电性为两条单链后，会在中性条件下形成不同空间构象，导致电泳的泳动速度不同，从而鉴定有无基因突变。泳的泳动速度不同，从而鉴定有无基因突变。陈小义陈小义（3）PCR-ASO：将扩增：将

24、扩增DNA片段分别与野生型和突变型探针杂交，片段分别与野生型和突变型探针杂交，根据检测标本与两种探针杂交信号的区别，确定是否存在基因突根据检测标本与两种探针杂交信号的区别，确定是否存在基因突变，分析受检者的基因型。变，分析受检者的基因型。 （4）RT-PCR：主要用于基因表达水平的检测和分析。：主要用于基因表达水平的检测和分析。 陈小义陈小义3. DNA 测序方法测序方法优点：快速、准确、微量、分辨率高、重复性好。优点：快速、准确、微量、分辨率高、重复性好。4. 基因芯片技术基因芯片技术优点：微量化、高通量、并行化和高度自动化，可适用于优点：微量化、高通量、并行化和高度自动化，可适用于多个基因

25、、多个位点的同时检测。多个基因、多个位点的同时检测。基因突变、基因的多态性，组织细胞的基因表达情况。基因突变、基因的多态性，组织细胞的基因表达情况。陈小义陈小义二、基因诊断的主要途径二、基因诊断的主要途径1. 直接诊断直接诊断通常使用基因本身或侧翼序列的通常使用基因本身或侧翼序列的DNA作为探针直接探查基因有作为探针直接探查基因有无突变、缺失、重复等异常，是否存在表达的改变。无突变、缺失、重复等异常，是否存在表达的改变。主要适用于已知基因异常疾病的诊断。主要适用于已知基因异常疾病的诊断。陈小义陈小义2. 间接诊断间接诊断DNA 多态多态标记系统是否和致病基因具有高度相关性，是标记系统是否和致病

26、基因具有高度相关性，是是否采用此方法进行相关基因诊断的依据。是否采用此方法进行相关基因诊断的依据。 遗传标记遗传标记相关基因相关基因表型分析表型分析陈小义陈小义基因异常基因异常方法方法 探针、引物或限制酶探针、引物或限制酶基因缺失基因缺失基因组基因组DNADNA印迹杂交印迹杂交 缺失基因的探针缺失基因的探针PCRPCR扩增扩增 引物包括缺失或在缺失部位内引物包括缺失或在缺失部位内点突变点突变RFLPRFLP分析分析 突变导致其切点消失的限制酶突变导致其切点消失的限制酶ASOASO杂交杂交 正常和异常的正常和异常的ASOASO探针探针PCRPCR产物的多态性分析（产物的多态性分析（RFLPRFL

27、P、SSCPSSCP、DGGFDGGF） 引物包括突变部位引物包括突变部位基因已知但基因已知但异常不明异常不明基因内或旁侧序列多态性（基因内或旁侧序列多态性（RFLPRFLP、AML-FLPAML-FLP，SSCPSSCP）连锁分析）连锁分析 基因内或旁侧序列探针或引物基因内或旁侧序列探针或引物基因未知基因未知与疾病连锁的多态性，如与疾病连锁的多态性，如SSCPSSCP、AML-AML-FLPFLP连锁分析、连锁分析、RFLPRFLP位点单体型连锁分位点单体型连锁分析析 与疾病连锁的多态位点探针或引物与疾病连锁的多态位点探针或引物遗传病的基因诊断方法遗传病的基因诊断方法 陈小义陈小义三、基因诊

28、断技术的应用三、基因诊断技术的应用1. PCR技术诊断遗传病技术诊断遗传病 途径：途径：基因突变位点的直接检出基因突变位点的直接检出筛查与遗传病有关的点突变筛查与遗传病有关的点突变遗传多态性标记连锁分析间接诊断遗传多态性标记连锁分析间接诊断利用利用mRNA逆转录为逆转录为cDNA进行分析或直接分析进行分析或直接分析mRNA 进行进行PCR检测，除了具备酶，底物及其它基本因素外，检测，除了具备酶，底物及其它基本因素外，遗传病的基因结构必须部分或全部清楚。遗传病的基因结构必须部分或全部清楚。 陈小义陈小义(1) PCR技术直接诊断遗传病技术直接诊断遗传病 基因缺失突变基因缺失突变 基因的重排基因的

29、重排 突变位点不清楚或突变位点多变的基因突变位点不清楚或突变位点多变的基因 基因点突变影响到限制内性切酶切点基因点突变影响到限制内性切酶切点 陈小义陈小义(2) 利用连锁分析间接诊断遗传病利用连锁分析间接诊断遗传病 PCR-RFLP PCR扩增后用相应的内切酶进行切割相应的扩增产物，通过扩增后用相应的内切酶进行切割相应的扩增产物，通过用琼脂糖凝胶或聚丙烯胺凝胶电泳技术进行电泳，分析酶切用琼脂糖凝胶或聚丙烯胺凝胶电泳技术进行电泳，分析酶切位点多态性，在家庭间进行连锁分析。位点多态性，在家庭间进行连锁分析。 陈小义陈小义正常个体正常个体杂合子杂合子纯合子纯合子分子杂交法检测分子杂交法检测RFLP示

30、意图示意图 陈小义陈小义 Amp-FLP VNTR(数目可变的串联重复序列数目可变的串联重复序列STR(短的串联重复序列短的串联重复序列) 目前已广泛应用多种遗传病的连锁分析如目前已广泛应用多种遗传病的连锁分析如DMD/BMD，PKU等。等。 选择合适的特异性诊断探针和诊断方法是遗传病基因诊断成选择合适的特异性诊断探针和诊断方法是遗传病基因诊断成败的关键。败的关键。 陈小义陈小义2. 基因芯片技术在遗传病诊断中的应用基因芯片技术在遗传病诊断中的应用(1) 基因芯片的工作原理基因芯片的工作原理(2)基因芯片的应用基因芯片的应用 P53基因芯片基因芯片 卵巢癌中基因表达谱卵巢癌中基因表达谱 乳腺癌

31、基因乳腺癌基因BRCA1的的exon11 (3.45 kb)中所有可能的碱基置换、中所有可能的碱基置换、插入和缺失插入和缺失(15 bp)突变突变 基因表达图谱基因表达图谱 基因多态位点及基因突变的检测基因多态位点及基因突变的检测芯片杂交测序技术芯片杂交测序技术 陈小义陈小义四、遗传病基因诊断举例四、遗传病基因诊断举例1甲型血友病的分子遗传学研究甲型血友病的分子遗传学研究 由凝血由凝血因子缺乏所引起的出血性疾病，呈因子缺乏所引起的出血性疾病，呈X连锁隐性遗传。连锁隐性遗传。基因长约基因长约180kb，位于，位于Xq28，含有，含有26个外显子。成熟蛋白质个外显子。成熟蛋白质包含包含2332个氨

32、基酸，分子量约个氨基酸，分子量约265kDa。因子的生理作用是作为因子的生理作用是作为X因子的辅助因子，被活化的因子的辅助因子，被活化的因子因子(Fa)激活，从而将血液凝固的信号放大许多倍。激活，从而将血液凝固的信号放大许多倍。 陈小义陈小义（1）甲型血友病的基因突变类型）甲型血友病的基因突变类型基因重排基因重排单碱基置换单碱基置换缺失缺失插入插入（2）突变检测）突变检测直接检测突变直接检测突变内含子内含子22基因重排的检测基因重排的检测应用应用DNA多态性进行遗传学分析多态性进行遗传学分析限制性内切酶片段长度多态性限制性内切酶片段长度多态性短串联重复顺序短串联重复顺序(STR)可变数目的串联

33、重复顺序可变数目的串联重复顺序(VNTR) 陈小义陈小义2. DMDBMD基因诊断的研究基因诊断的研究类型：杜兴氏肌营养不良类型：杜兴氏肌营养不良(DMD ) 贝克氏肌营养不良贝克氏肌营养不良(BMD) X连锁隐性遗传连锁隐性遗传(1) DMDBMD基因的分子生物学特点基因的分子生物学特点 DMD 基因定位于基因定位于Xp21.2 基因组基因组DNA全长全长2.4Mb，包含，包含79个外显子和个外显子和78个内含子个内含子 陈小义陈小义(2) DMDBMD基因诊断方法基因诊断方法 缺失型突变检测方法缺失型突变检测方法 多重多重PCR 非缺失型突变检测方法非缺失型突变检测方法STR-PCR 可检测缺失型男性患者可检测缺失型男性患者可检测女性携带者及非缺失型突变患者可检测女性携带者及非缺失型突变患者 其他检测方法其他检测方法 探针连接多重扩增探针连接多重扩增(MLPA)技术技术 变性高效液相色谱变性高效液相色谱(DHPLC)分析分析 陈小义陈小义