免疫学检测技术及在食品中的应用-ppt课件.ppt

1、o 利用免疫学技术可以检测细菌、真菌、病毒、利用免疫学技术可以检测细菌、真菌、病毒、寄生虫、各种毒素、蛋白寄生虫、各种毒素、蛋白o 还可检测激素、药物残留、抗生素及其他生还可检测激素、药物残留、抗生素及其他生理活性物质理活性物质1PPT课件1酶免疫技术酶免疫技术ELISA检测技术检测技术2PPT课件ELISAo 全称：酶联免疫吸附测定（酶联免疫吸附测定（enzyme-linked immuno sorbent assay） 3PPT课件p 将抗原抗体的特异性与酶反应的敏感性相结将抗原抗体的特异性与酶反应的敏感性相结合，使得食品在未经分离提取的前提下，即合，使得食品在未经分离提取的前提下，即能进

2、行定性或定量检测能进行定性或定量检测p 广泛用于细菌、真菌、病毒、寄生虫、各种广泛用于细菌、真菌、病毒、寄生虫、各种毒素等大分子蛋白，以及激素、农兽药残留、毒素等大分子蛋白，以及激素、农兽药残留、抗生素能小分子物质的检测抗生素能小分子物质的检测4PPT课件可检测标本类型广泛可检测标本类型广泛体液：体液：血清、血浆、胸腹水、灌洗液、脑脊液血清、血浆、胸腹水、灌洗液、脑脊液分泌物：分泌物：唾液唾液排泄物：排泄物：尿液、粪便等尿液、粪便等细胞培养上清细胞培养上清组织匀浆组织匀浆5PPT课件1.1 ELISA 的发展历程的发展历程o 免疫酶标记技术是继免疫荧光抗体技术和放射免疫分免疫酶标记技术是继免疫

3、荧光抗体技术和放射免疫分析之后发展起来的一大新型的血清学技术。析之后发展起来的一大新型的血清学技术。o 1966年，年，Nakane和和Avrameas等分别报道用酶等分别报道用酶代替荧光素标记抗体，建立了酶标抗体技术用于生物代替荧光素标记抗体，建立了酶标抗体技术用于生物组织中抗原的定位和鉴定。组织中抗原的定位和鉴定。o 1971年，年，Engvall ，Van Weemen 等报道了酶等报道了酶联免疫吸附试验，从而建立了酶标抗体的定量检测技联免疫吸附试验，从而建立了酶标抗体的定量检测技术术o 目前，免疫酶标记技术已成为免疫诊断、检测和分子目前，免疫酶标记技术已成为免疫诊断、检测和分子生物学研

4、究中应用最广泛的免疫学方法之一。生物学研究中应用最广泛的免疫学方法之一。6PPT课件ELISA板板酶标仪酶标仪测吸光度测吸光度7PPT课件ELISAELISA是一种是一种免疫免疫测定技术：基于抗原抗体反应测定技术：基于抗原抗体反应酶联酶联：抗原或抗体的：抗原或抗体的酶标记酶标记吸附吸附：抗原或抗体的：抗原或抗体的固相化固相化测定测定：加入酶反应的底物后，被酶催化成为加入酶反应的底物后，被酶催化成为有色产物有色产物，产物产物的量的量与标本中与标本中受检物质的量受检物质的量直接相关，采用酶标仪进行测定直接相关，采用酶标仪进行测定1.2 解释：酶联免疫吸附测定解释：酶联免疫吸附测定8PPT课件9PP

5、T课件间接法间接法夹心法夹心法竞争法竞争法捕获法捕获法1.3 类类 型型10PPT课件酶酶抗抗抗抗体体酶标记酶标记抗抗体抗抗体抗体抗体抗原抗原固相载体固相载体1.将抗原包被在固相载体上。将抗原包被在固相载体上。2.如样品中含有抗体，则结合如样品中含有抗体，则结合为抗原抗体复合物。为抗原抗体复合物。3.再加入酶标记抗抗体，则结再加入酶标记抗抗体，则结合为抗原合为抗原-抗体抗体-酶标记抗抗体酶标记抗抗体复合物。复合物。4.酶催化底物并显色。酶催化底物并显色。（1）间接法）间接法11PPT课件间接法间接法测抗体测抗体洗涤洗涤洗涤洗涤洗涤洗涤待测抗体待测抗体酶标抗抗体酶标抗抗体病原体病原体抗体抗体的检

6、测而进行传染病的诊断的检测而进行传染病的诊断12PPT课件（2）双抗体夹心法双抗体夹心法固相载体固相载体抗体抗体抗原抗原酶酶抗体抗体酶标记抗体酶标记抗体1.将抗体包被在固相载体上。将抗体包被在固相载体上。2.如样品中含有抗原，则结合如样品中含有抗原，则结合为抗原抗体复合物。为抗原抗体复合物。3.再加入酶标记抗体，则结合再加入酶标记抗体，则结合为抗体为抗体-抗原抗原-酶标记抗体复合酶标记抗体复合物。物。4.酶催化底物并显色。酶催化底物并显色。13PPT课件夹心法夹心法测抗原测抗原 洗洗涤涤洗洗涤涤洗洗涤涤待测抗原待测抗原在临床检验中，此法适用于检验各种在临床检验中，此法适用于检验各种蛋白质等大分

7、子抗原蛋白质等大分子抗原，例如例如HBsAgHBsAg、HBeAgHBeAg、AFPAFP、hCGhCG等等14PPT课件产品举例产品举例o 氟苯尼考（氟苯尼考（FF）ELISA快速检测试剂盒快速检测试剂盒 （Green Spring ）o 可用于动物组织（肌肉、肝脏）、尿液、血可用于动物组织（肌肉、肝脏）、尿液、血清、蜂蜜、肠衣、牛奶以及水产品等样品中清、蜂蜜、肠衣、牛奶以及水产品等样品中氟苯尼考药物残留的检测。氟苯尼考药物残留的检测。 o 人金黄色葡萄球菌肠毒素人金黄色葡萄球菌肠毒素(SE) ELISA 检检测试剂盒测试剂盒15PPT课件（3）酶标抗原竞争法）酶标抗原竞争法固相载体固相载体

8、抗体抗体抗原抗原酶酶酶标记抗原酶标记抗原1.将抗体包被在固相载体上。将抗体包被在固相载体上。2.如样品中含有抗原，则优先如样品中含有抗原，则优先竞争结合抗体，结合竞争结合抗体，结合为抗原抗体复合物。为抗原抗体复合物。3.同时加入酶标记抗原，抗原同时加入酶标记抗原，抗原没有结合的位点酶标记抗原没有结合的位点酶标记抗原去占据，则结合为酶标记抗去占据，则结合为酶标记抗原原-抗体复合物。抗体复合物。4.酶催化底物并显色。酶催化底物并显色。抗原抗原16PPT课件竞争法竞争法测小分子抗原测小分子抗原洗涤洗涤洗涤洗涤待测抗原待测抗原酶标抗原酶标抗原小分子激素、药物等小分子激素、药物等ELISAELISA测定

9、多用此法。测定多用此法。17PPT课件4 捕获法示意图捕获法示意图酶酶抗体抗体酶标记酶标记 抗体抗体抗原抗原抗抗体抗抗体固相载体固相载体抗体抗体1.将抗抗体包被在固相载体上。2.如样品中含有抗体，则结合为抗抗体-抗体复合物。3. 加入抗原及酶标记抗体，则结合为抗抗体-抗体-抗原-酶标记抗体复合物。4.酶催化底物并显色。18PPT课件固相抗固相抗IgM特异特异IgM非特异非特异IgM标本标本特异抗原特异抗原抗原特异酶标抗体抗原特异酶标抗体底物底物此法常用于病毒性感染的早期诊断。此法常用于病毒性感染的早期诊断。捕获法捕获法19PPT课件1.4 操作流程操作流程20PPT课件o 将抗原或抗体固定在固

10、相载体上的过程称为包将抗原或抗体固定在固相载体上的过程称为包被被(coating)(coating)。o 蛋白质与聚苯乙烯固相载体是通过蛋白质与聚苯乙烯固相载体是通过物理吸附物理吸附结结合的，靠的是蛋白质分子结构上的疏水基团与合的，靠的是蛋白质分子结构上的疏水基团与固相载体表面的疏水基团间的作用。固相载体表面的疏水基团间的作用。o 大分子蛋白质较小分子蛋白质通常含有更多的大分子蛋白质较小分子蛋白质通常含有更多的疏水基团，故更易吸附到固相载体表面。疏水基团，故更易吸附到固相载体表面。 （1 1） 包被包被21PPT课件包被的条件包被的条件 pH9.6 pH9.6碳酸盐缓冲液碳酸盐缓冲液 pH7.

11、2pH7.2的磷酸盐缓冲液的磷酸盐缓冲液 pH7-8pH7-8的的TrisTris-HCL-HCL缓冲液。缓冲液。o 加入包被液后，在加入包被液后，在4-84-8冰箱中放置过夜，冰箱中放置过夜，3737中保温中保温2 2小时。包被浓度随载体和包被物的小时。包被浓度随载体和包被物的性质可有很大的变化，性质可有很大的变化，每批材料需通过实验与酶每批材料需通过实验与酶结合物的浓度协调选定。结合物的浓度协调选定。一般蛋白质的包被浓度一般蛋白质的包被浓度为为10ng/ml-20ug/ml10ng/ml-20ug/ml。22PPT课件（2 2）封）封 闭闭o 封闭封闭(blocking)(blocking

12、)是继包被之后用高浓度的无关蛋是继包被之后用高浓度的无关蛋白质溶液再包被的过程。封闭就是让白质溶液再包被的过程。封闭就是让大量不相关大量不相关的蛋白质充填这些空隙，从而排斥的蛋白质充填这些空隙，从而排斥ELISAELISA后的步后的步骤中干扰物质的再吸附。骤中干扰物质的再吸附。o 常用封闭剂：常用封闭剂：0.05%-0.5%0.05%-0.5%的的BSA; 10%BSA; 10%的小牛血清的小牛血清或或1%1%明胶明胶; ;脱脂奶粉脱脂奶粉, ,比较价廉，可以高浓度使用比较价廉，可以高浓度使用（5%5%）。）。o 所有的所有的ELISAELISA固相均需封闭。固相均需封闭。23PPT课件（3

13、3）加样）加样o 在在ELISAELISA中一般有中一般有3 3次加样步聚次加样步聚o 即加样本，加酶结合物，加底物。即加样本，加酶结合物，加底物。o 加样时应将所加物加在加样时应将所加物加在LEISALEISA板孔的底部，避免板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可溅出，不可产生气加在孔壁上部，并注意不可溅出，不可产生气泡。泡。24PPT课件（4 4）保）保 温温o 抗原抗体完成反应的保温过程称为温育抗原抗体完成反应的保温过程称为温育o 应注意温育的温度和时间应按规定力求准确。应注意温育的温度和时间应按规定力求准确。为保证这一点，一个人操作时，一次不宜多为保证这一点，一个人操作时，一次不宜多

14、于两块板同时测定。于两块板同时测定。25PPT课件（5 5）洗涤）洗涤o 洗涤在洗涤在ELISAELISA过程中虽不是一个反应步骤，但却也决定过程中虽不是一个反应步骤，但却也决定着实验的成败。着实验的成败。o ELSIAELSIA洗涤：达到分离游离的和结合的酶标记物的目的。洗涤：达到分离游离的和结合的酶标记物的目的。o 清除残留在板孔中游离的物质，以及非特异性地吸附的清除残留在板孔中游离的物质，以及非特异性地吸附的干扰物质。聚苯乙烯等塑料对蛋白质的吸附是普遍性的，干扰物质。聚苯乙烯等塑料对蛋白质的吸附是普遍性的，而在洗涤时又应把这种非特异性吸附的干扰物质洗涤下而在洗涤时又应把这种非特异性吸附的

15、干扰物质洗涤下来。来。o 可以说在可以说在ELISAELISA操作中，洗涤是最主要的关键技术。操作中，洗涤是最主要的关键技术。26PPT课件(6)(6)显色显色o 显色是酶催化无色的底物生成有色产物的温显色是酶催化无色的底物生成有色产物的温育反应。反应的温度和时间仍是影响显色的育反应。反应的温度和时间仍是影响显色的因素。在一定时间内，阴性孔可保持无色，因素。在一定时间内，阴性孔可保持无色，而阳性孔则随时间的延长而呈色加强。适当而阳性孔则随时间的延长而呈色加强。适当提高温度有助于加速显色进行。提高温度有助于加速显色进行。27PPT课件 酶酶o 在在ELISAELISA中，可以采用的有中，可以采用

16、的有HRPHRP，APAP，葡萄糖，葡萄糖氧化酶，氧化酶，-D-D-半乳糖苷酶和脲酶等。半乳糖苷酶和脲酶等。o HRPHRP（辣根过氧化物酶）（辣根过氧化物酶）是一种糖蛋白，含糖是一种糖蛋白，含糖量约为量约为18%18%，分子量为，分子量为4400044000，是一种复合酶，是一种复合酶，由主酶（酶蛋白）和辅基（亚铁血红素）结由主酶（酶蛋白）和辅基（亚铁血红素）结合而成，是一种卟啉蛋白质。合而成，是一种卟啉蛋白质。28PPT课件底物底物o HRPHRP的底物的底物o DH2+ H2O2 D+ 2H2Oo DH2一般为无色化合物，经酶作用后成为有色一般为无色化合物，经酶作用后成为有色的产物。的产

17、物。o DH2如：邻苯二胺如：邻苯二胺(OPD)、四甲基联苯胺、四甲基联苯胺(TMB)等。等。29PPT课件o OPDOPD氧化后的产物呈氧化后的产物呈橙红色橙红色，用酸终止酶反，用酸终止酶反应后，在应后，在492nm492nm处有最高吸收峰，灵敏度高处有最高吸收峰，灵敏度高o TMBTMB经经HRPHRP作用后共产物显作用后共产物显蓝色蓝色。TMBTMB性质较性质较稳定，可配成溶液试剂，只需与稳定，可配成溶液试剂，只需与H H2 2O O2 2溶液溶液混和即成应用液。酶反应终止后，混和即成应用液。酶反应终止后，TMBTMB产物产物由蓝色呈黄色，可在比色计中定量，最适由蓝色呈黄色，可在比色计中

18、定量，最适吸收波长为吸收波长为450nm450nm。30PPT课件1.5ELISA 影响因素影响因素固相载体：固相载体：ELISA ELISA 中最常用的是聚苯乙烯或聚氯乙烯微量反应板。中最常用的是聚苯乙烯或聚氯乙烯微量反应板。抗原：可溶性、优质、稳定的制剂，纯度和免疫原性要高。抗原：可溶性、优质、稳定的制剂，纯度和免疫原性要高。试验样品：血清、血浆或其他体液，均可作为试验样品：血清、血浆或其他体液，均可作为 ELISA ELISA 的试验样品。的试验样品。结合物：酶结合物要求稳定，具有很高的酶活性，抗原或抗体的特异性，结合物：酶结合物要求稳定，具有很高的酶活性，抗原或抗体的特异性，产量高及成

19、本低。产量高及成本低。底物：各种酶都有对底物的底物：各种酶都有对底物的特异性特异性，不同种类的酶要求有不同的底物。，不同种类的酶要求有不同的底物。作用时间：加底物后终止时间？作用时间：加底物后终止时间？结果判断结果判断:ELISA :ELISA 的试验结果可用肉眼观察颜色反应的深浅作出判断，的试验结果可用肉眼观察颜色反应的深浅作出判断，也可用也可用分光光度计分光光度计作精确测定。作精确测定。试验的重复性（精确度）试验的重复性（精确度） ：通常用：通常用变异系数变异系数来表示。来表示。31PPT课件思考：如何研发商品化的思考：如何研发商品化的ELISA试剂盒？试剂盒？需要什么原料，得到哪些组分，

20、需要什么原料，得到哪些组分，摸清哪些条件，才能够进行组摸清哪些条件，才能够进行组装？装？32PPT课件2 2免疫胶体金技术免疫胶体金技术（胶体金试纸条检测技术、胶体金层析）（胶体金试纸条检测技术、胶体金层析）33PPT课件大肠杆菌大肠杆菌O157:H7快速检测快速检测试纸（胶体金）试纸（胶体金）34PPT课件2.1 2.1 简简 介介 胶体金试纸条诊断是采用胶体金免疫层胶体金试纸条诊断是采用胶体金免疫层析技术研制而成，该技术是析技术研制而成，该技术是9090年代初在免疫年代初在免疫渗滤技术的基础上建立的一种简易快速的免渗滤技术的基础上建立的一种简易快速的免疫学检测技术，最先用于人绒毛膜促性腺激

21、疫学检测技术，最先用于人绒毛膜促性腺激素（素（HCGHCG）的测定和乙型肝炎病毒表面抗原的测定和乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAgHBsAg）等检测。等检测。35PPT课件p胶体金胶体金（Colloidal goldColloidal gold）是氯金酸是氯金酸（HAuClHAuCl4 4）的水溶胶，氯金酸在还原剂的作的水溶胶，氯金酸在还原剂的作用下，聚合成特定大小的金颗粒，并由于静用下，聚合成特定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态。故称胶体电作用成为一种稳定的胶体状态。故称胶体金金36PPT课件用还原法可以方便地从氯金酸制备各种不同粒径、用还原法可以方便地从氯金酸制备各种不同粒

22、径、也就是不同颜色的胶体金颗粒也就是不同颜色的胶体金颗粒质量好的胶体金：溶液呈红色，胶体金颗粒为球质量好的胶体金：溶液呈红色，胶体金颗粒为球形，大小均一，无棱角。形，大小均一，无棱角。质量差的胶体金：溶液呈紫色，大小不一，形状质量差的胶体金：溶液呈紫色，大小不一，形状各异。各异。胶体金的质量判定标准胶体金的质量判定标准37PPT课件p胶体金标记的原理：胶体金标记的原理：p胶体金在碱性条件下带负电荷，与蛋白质分胶体金在碱性条件下带负电荷，与蛋白质分子的正电荷基团静电吸引而形成牢固结合。子的正电荷基团静电吸引而形成牢固结合。p胶体金标记，实质上是蛋白质等高分子被吸胶体金标记，实质上是蛋白质等高分子

23、被吸附到胶体金颗粒表面的包被过程。附到胶体金颗粒表面的包被过程。p标记物在相应的配体处大量聚集时，肉眼可见红色或粉红标记物在相应的配体处大量聚集时，肉眼可见红色或粉红色斑点，因而用于定性或半定量的快速免疫检测方法中色斑点，因而用于定性或半定量的快速免疫检测方法中 38PPT课件2.22.2胶体金试纸条诊断技术的原理胶体金试纸条诊断技术的原理 以硝酸纤维素膜为载体，利用了微孔膜以硝酸纤维素膜为载体，利用了微孔膜的毛细血管作用，滴加在膜条一端的液体慢的毛细血管作用，滴加在膜条一端的液体慢慢向另一端渗移，通过抗原抗体结合，并利慢向另一端渗移，通过抗原抗体结合，并利用胶体金呈现颜色（红色）反应，检测抗

24、原用胶体金呈现颜色（红色）反应，检测抗原/ /抗体。抗体。39PPT课件检测线检测线质控线质控线吸收垫吸收垫样品垫样品垫硝酸纤维素膜硝酸纤维素膜胶体金垫胶体金垫背衬背衬（底板）（底板）胶体金试纸条示意图胶体金试纸条示意图40PPT课件 2.3 分类分类o 间接法间接法-测抗体测抗体o 双抗夹心法双抗夹心法-测大分子抗原测大分子抗原-食品中沙门氏菌的检测食品中沙门氏菌的检测o 竞争法竞争法-测小分子抗原测小分子抗原-食品中瘦肉精、黄曲霉毒素的检测食品中瘦肉精、黄曲霉毒素的检测41PPT课件沙门氏菌单克隆抗体沙门氏菌单克隆抗体可能含有可能含有沙门氏菌沙门氏菌的样品的样品（1）双抗夹心法检测抗原）双

25、抗夹心法检测抗原测大分子抗原测大分子抗原沙门氏菌多沙门氏菌多克隆抗体克隆抗体抗抗体抗抗体42PPT课件43PPT课件（2）思考）思考o竞争法的原理？竞争法的原理？o检测线喷的是纯化的抗原，与待检测线喷的是纯化的抗原，与待检测抗原竞争检测抗原竞争o这种情况下的结果判定？这种情况下的结果判定？44PPT课件2.4 2.4 胶体金快速诊断技术的特点胶体金快速诊断技术的特点 p简捷快速：简捷快速：操作简单，一般只要操作简单，一般只要5 5-10min -10min 就会就会出结果，而其它方法如出结果，而其它方法如ELISAELISA需要需要1 1-2h-2h，PCR PCR 需要时间更长。需要时间更长

26、。p结果易于判定：结果易于判定：阴、阳性呈色很明显，肉眼很阴、阳性呈色很明显，肉眼很容易判断。容易判断。p特异性好：特异性好：因为该技术大多用单克隆抗体标记，因为该技术大多用单克隆抗体标记，这决定了它具有很好的特异性。这决定了它具有很好的特异性。45PPT课件2.5 技术分项技术分项 样品垫样品垫 吸水垫吸水垫 粘性底板粘性底板 NCNC膜膜 胶体金垫胶体金垫 干燥方法干燥方法 抗原抗体生物原料抗原抗体生物原料 胶体金制备胶体金制备 标记技术标记技术 溶液喷点溶液喷点 溶液体系分析溶液体系分析 装配装配 切条切条 包装包装46PPT课件（1）金标垫与样品垫的处理）金标垫与样品垫的处理o 1，金

27、标垫裁剪成长，金标垫裁剪成长10，宽，宽8长条长条o 2，样品垫裁剪成长，样品垫裁剪成长30，宽，宽2.5长条长条o 3，将裁剪好的金标垫与样品垫，分别用金标垫，将裁剪好的金标垫与样品垫，分别用金标垫处理液与样品垫处理液浸润，放入处理液与样品垫处理液浸润，放入37温箱中烘温箱中烘干储存在干燥器中置干储存在干燥器中置4冷库中备用。冷库中备用。47PPT课件抗体抗体 Antibody 来源差异来源差异: 鼠抗鼠抗,兔抗和羊抗兔抗和羊抗 种类差异种类差异: 单抗单抗,多抗多抗 腹水的处理腹水的处理: 饱和硫酸铵沉淀法饱和硫酸铵沉淀法 特异性特异性:亲和层析柱亲和层析柱 浓度浓度: 浓缩浓缩 溶解液溶

28、解液:不含盐不含盐,例如例如PB（2）抗原抗体生物原料）抗原抗体生物原料抗原抗原 Antigen 偶联抗原物质偶联抗原物质: BSA, OVA等等 毒品检测来源毒品检测来源: 合成抗原合成抗原48PPT课件（3）标记技术）标记技术 Conjugate 容器硅化处理容器硅化处理 金颗粒制备金颗粒制备 (负电负电) 颜色与颗粒的关系颜色与颗粒的关系.最佳标记颗粒大小最佳标记颗粒大小40nm. 蛋白质最适用量测定蛋白质最适用量测定:盐析法盐析法49PPT课件（4）胶体金制作流程 1，向硅化过的三角瓶中加入向硅化过的三角瓶中加入100ml去离子水，再加入去离子水，再加入1ml浓度浓度为为1%的氯金酸的

29、氯金酸 2,将三角瓶放入微波炉中加热，沸腾时取出，一次性迅速加将三角瓶放入微波炉中加热，沸腾时取出，一次性迅速加入入1850l浓度浓度1%柠檬酸三钠，摇动约柠檬酸三钠，摇动约20s（柠檬酸三钠经（柠檬酸三钠经0.22滤滤膜过滤）膜过滤） 3,再将三角瓶放入微波炉中大火再将三角瓶放入微波炉中大火1分钟，调中火继续加热五分分钟，调中火继续加热五分钟。钟。 4，拿出来冷却，待温度降至室温时用去离子水补足到，拿出来冷却，待温度降至室温时用去离子水补足到100ml,用用0.1M的碳酸钾调节的碳酸钾调节PH至略高于待标记蛋白的等电点，至略高于待标记蛋白的等电点，0.22过过滤转移至硅化过的平底蓝盖瓶中。滤

30、转移至硅化过的平底蓝盖瓶中。 50PPT课件5，蓝盖瓶中放入搅拌子，搅拌，向金溶液中加入蛋，蓝盖瓶中放入搅拌子，搅拌，向金溶液中加入蛋白白,标记量为标记量为2g/ml，缓慢加入标记蛋白。，缓慢加入标记蛋白。6,搅拌搅拌,半小时后加入浓度为半小时后加入浓度为10%的的BSA至终浓度为至终浓度为0.2%，继续搅拌一小时。，继续搅拌一小时。7，将标记好的溶液转至，将标记好的溶液转至50ml离心管中，离心管中，3500rpm/min，4离心离心30min.弃去沉淀，收集上弃去沉淀，收集上清。清。51PPT课件8，上清转入另外的，上清转入另外的50ml离心管中，离心管中，7500rpm/min，4离心离

31、心30min,弃上清收集沉淀。弃上清收集沉淀。9，用，用1/2原体积的洗涤液洗涤沉淀，原体积的洗涤液洗涤沉淀，7500rpm/min，4离心离心30min,弃上清收集沉淀。弃上清收集沉淀。10，用十分之一原体积的重悬缓冲液重悬沉淀。，用十分之一原体积的重悬缓冲液重悬沉淀。11，重悬后的胶体金转入硅化过的蓝盖瓶，重悬后的胶体金转入硅化过的蓝盖瓶。52PPT课件（5）溶液喷点）溶液喷点-喷点溶液喷点溶液 Dispensing(BIODOT XYZ系列喷点仪器系列喷点仪器)o CT线溶液前处理线溶液前处理:1.过滤过滤,0.2um孔径滤膜孔径滤膜2.离心离心1万转万转10分钟分钟o 喷点过程喷点过程

32、头尾去除头尾去除,喷点中的报废标志喷点中的报废标志o CT线喷点工艺线喷点工艺(BJQ3000喷头喷头)与与接触划点接触划点(FL1000XY喷头喷头)工艺比工艺比较较53PPT课件（6）装配）装配切条切条包装包装Laminationo 装配装配o 切条切条(演示演示:BIODOT CM4000切条机切条机)刀的维护与清洁刀的维护与清洁底板选择底板选择(胶的影响胶的影响)o 包装包装54PPT课件（7）灵敏度问题）灵敏度问题o 源头源头:抗原抗体免疫反应抗原抗体免疫反应o 材料问题材料问题NC膜膜o 附加物质的解决办法附加物质的解决办法o 假阳性的解决假阳性的解决o 批内批内批间差批间差55PPT课件（8）长期保存）长期保存o 试纸失活试纸失活o 加速稳定实验的设计与操作加速稳定实验的设计与操作56PPT课件（9）实验研究的时间安排）实验研究的时间安排o 上游上游 抗原抗体的制备抗原抗体的制备o 中游中游 材料选择比较材料选择比较(包括上游产品和其他原料包括上游产品和其他原料)o 下游下游 成品调试成品调试o 工作接口的设计工作接口的设计o Deadline的制定的制定o 关键步骤关键步骤:原料效价原料效价标记标记选膜选膜点样点样调试调试57PPT课件Developing发展方向发展方向58PPT课件