金银花药材指纹图谱研究-课件.ppt

1、11中药整体质量控制的方法研究和趋势 上海市食品药品检验所上海市食品药品检验所季季 申申2013.04 Address:1500 Zhang Heng Road,Shanghai 201203,China Email:2报告内容u整体控制中药质量的必要性整体控制中药质量的必要性u应用一测多评等技术的问题和解决方案应用一测多评等技术的问题和解决方案u整体控制中药质量的展望整体控制中药质量的展望3中药整体质量控制的必要性中药的特点值得肯定的是：值得肯定的是：企业对产品的安全性的重视，大部分中药有一定企业对产品的安全性的重视，大部分中药有一定的有效性和安全性，积累了很多的临床和实践经验。的有效性和安

2、全性，积累了很多的临床和实践经验。中药如何寻求平衡？中药的前景？如何研究的思路？中药如何寻求平衡？中药的前景？如何研究的思路？u中药成分复杂难以全面控制全部成分中药成分复杂难以全面控制全部成分u同品种不同生产企业的生产设备难以完全一致同品种不同生产企业的生产设备难以完全一致u药材是天然产品，难以保证质量完全一致药材是天然产品，难以保证质量完全一致 思考：思考：4中药整体质量控制的必要性中药质量控制的发展历程及趋势中药质量控制的发展历程及趋势发展历程发展历程u缺乏专属性控制指标缺乏专属性控制指标u单一成分到多成分的控制单一成分到多成分的控制u指标成分到有效成分的控制指标成分到有效成分的控制面临的

3、问题面临的问题u中药成分的复杂性中药成分的复杂性u方法的专属、可控、实用和经济方法的专属、可控、实用和经济u有效性与安全性指标的合理设置有效性与安全性指标的合理设置 发展趋势发展趋势u从局部控制到整体控制从局部控制到整体控制u多成分定量结合指纹图谱的全多成分定量结合指纹图谱的全方位中药质控新模式方位中药质控新模式解决方案解决方案u物质基础的深入研究物质基础的深入研究u实现合理全面的质量控制实现合理全面的质量控制中药整体质量控制能够反映中药内在质量的整体变化情况和质量的均一中药整体质量控制能够反映中药内在质量的整体变化情况和质量的均一程度，确保中药质量的均一稳定。程度，确保中药质量的均一稳定。中

4、药质量控制面临的问题及解决方案中药质量控制面临的问题及解决方案5物质基础研究必要性物质基础研究必要性应用一测多评等技术的问题和解决方案u制约中药发展的瓶颈制约中药发展的瓶颈-易导致药效作用机理易导致药效作用机理,不良反应发生等机不良反应发生等机制阐述不清制阐述不清u建立全面可控的质量标准的基础建立全面可控的质量标准的基础-建立更科学、合理、有效的质建立更科学、合理、有效的质量控制标准量控制标准u中药技术提升的关键中药技术提升的关键-更好地阐明中药作用机制等问题，促进中更好地阐明中药作用机制等问题，促进中医药理论创新及新药的研发医药理论创新及新药的研发6中药注射液质量控制的模式中药注射液质量控制

5、的模式(案例案例1）阐明注射液总固体中的成分阐明注射液总固体中的成分 黄芩黄芩金银花金银花 方法学认证方法学认证提取物质量标准提取物质量标准注射剂质量标准注射剂质量标准药材质量标准药材质量标准明确注射液总固体含有的大类成分明确注射液总固体含有的大类成分和单体成分和单体成分山羊角山羊角 建立专属性的分析方法建立专属性的分析方法熊胆粉熊胆粉连翘连翘 保证中药注射剂的安全性、稳定性、有效性保证中药注射剂的安全性、稳定性、有效性明确明确5 5味提取物的物味提取物的物质基础质基础有效地控制中药注射液内在的质量，运用高效液相色谱法、质谱法有效地控制中药注射液内在的质量，运用高效液相色谱法、质谱法等技术手段

6、，将阐明的化学成分纳入质量控制体系等技术手段，将阐明的化学成分纳入质量控制体系!7u 明确了明确了8个成分个成分u 建立了建立了5种成分含量的专属种成分含量的专属 性性测定测定方法方法u 5种成分含量约为干燥提取种成分含量约为干燥提取物的物的98%研究方法研究方法 研究成果研究成果u HPLC法法u 柱层析分离柱层析分离u Q-TOF液质液质u NMR等手段等手段 黄芩提取物黄芩提取物8 明确了黄芩提取物中的明确了黄芩提取物中的8个成分个成分 12345 6 78OO35678234561野黄芩苷野黄芩苷5,6,4-OH；7-O-Glucuronic acid2黄芩苷黄芩苷5,6-OH；7-O

7、-Glucuronic acid3千层纸素千层纸素-7-O-葡萄糖醛酸苷葡萄糖醛酸苷5-OH；6-OCH3；7-O-Glucuronic acid4白杨素白杨素-7-O-葡萄糖醛酸苷葡萄糖醛酸苷5-OH；7-O-Glucuronic acid5汉黄芩苷汉黄芩苷5-OH；8-OCH3；7-O-Glucuronic acid6黄芩素黄芩素5,6,7-OH7汉黄芩素汉黄芩素5,7-OH；8-OCH38千层纸素千层纸素A5,7-OH；6-OCH3黄芩提取物中约黄芩提取物中约9898成分已明确结构成分已明确结构,基本阐明了黄芩提取物的物质基础。基本阐明了黄芩提取物的物质基础。黄芩提取物的物质基础的研究黄

8、芩提取物的物质基础的研究9u 分离得到分离得到4个已知化合物个已知化合物u 明确了明确了11个化合物结构个化合物结构u 有机酸类成分约为干燥提取有机酸类成分约为干燥提取物的物的28%-39%研究方法研究方法 研究成果研究成果u HPLC（UV)u HPLC-氨基柱氨基柱u 高效液相色谱高效液相色谱串联质谱串联质谱HPLC 金银花提取物金银花提取物10 金银花提取物质谱总离子流图金银花提取物质谱总离子流图8 910 11 121 2 3 4 5 6 7 1、新绿原酸、新绿原酸2、绿原酸、绿原酸3、隐绿原酸、隐绿原酸4、未指认、未指认5、咖啡酸、咖啡酸6、獐牙菜苷、獐牙菜苷7、裂环马钱氧苷、裂环马

9、钱氧苷8、木樨草苷、木樨草苷9、3,4-二咖啡酰奎尼酸二咖啡酰奎尼酸10、3,5-二咖啡酰奎尼酸二咖啡酰奎尼酸11、4,5-二咖啡酸奎尼酸二咖啡酸奎尼酸12、咖啡酸乙酯、咖啡酸乙酯金银花提取物物质基础的研究金银花提取物物质基础的研究金银花提取物中有机酸类成分占金银花提取物中有机酸类成分占28-39。明确了金银花提取物中的明确了金银花提取物中的11个成分个成分11u 分离得到分离得到2个已知化合物个已知化合物u 建立建立12种成分含量测定方法种成分含量测定方法u 小分子成分约占提取物小分子成分约占提取物10%u 黄酮类成分约占提取物黄酮类成分约占提取物44%研究方法研究方法 研究成果研究成果u

10、HPLC DAD 多波长多波长u HPLC 蒸发光检测器蒸发光检测器u HPLC 离子阱质谱离子阱质谱u HPLC QTOF质谱质谱u HPLC 示差检测器示差检测器u UV 连翘提取物连翘提取物12 明确了连翘提取物中的明确了连翘提取物中的12个成分个成分1、连翘酯苷连翘酯苷E2、连翘酯苷、连翘酯苷D3、咖啡酸咖啡酸4、组峰（连翘酯苷组峰（连翘酯苷C及其同分异构体）及其同分异构体）5、连翘酚、连翘酚1（连翘酯苷（连翘酯苷A 的同分异构体）的同分异构体）6、芦丁、芦丁7、异连翘酯苷、异连翘酯苷A（连翘酯苷（连翘酯苷A 的同分异构体）的同分异构体）8、连翘酯苷、连翘酯苷A9、suspensasi

11、de A的同分异构体的同分异构体10、suspensaside A的同分异构体的同分异构体11、suspensaside A12、连翘苷、连翘苷 连翘提取物物质基础的研究连翘提取物物质基础的研究小分子成分总量约占干燥提取物近小分子成分总量约占干燥提取物近10%10%。13连翘苷（C27H34O11）芦丁(C27H30O16)连翘酯苷C及其同分异构体（C29H36O16）suspensaside A及其同分异构体（C29H34O15）连翘酚1（C29H36O15）在蓝圈处咖啡酰基取代位置发在蓝圈处咖啡酰基取代位置发生互换，或空间上立体构型发生互换，或空间上立体构型发生变化，都会产生异构体。生变化

12、，都会产生异构体。14u得到得到31种氨基酸种氨基酸u 建立建立12种氨基酸的检测方法种氨基酸的检测方法u 蛋白氨基酸约为干燥提取物蛋白氨基酸约为干燥提取物的的70%u存在焦谷氨酸存在焦谷氨酸研究方法研究方法 研究成果研究成果u 高效液相色谱法高效液相色谱法u 高效液相色谱柱前衍生法高效液相色谱柱前衍生法u 液质联用同位素内标法液质联用同位素内标法u 高分辨率质谱高分辨率质谱 山羊角提取物山羊角提取物15山羊角提取物物质基础的研究山羊角提取物物质基础的研究 1 1、天冬氨酸、天冬氨酸 2 2、谷氨酸、谷氨酸 3 3、丝氨酸、丝氨酸 4 4、甘氨酸、甘氨酸 5 5、苏氨酸、苏氨酸 6 6、丙氨酸

13、、丙氨酸7 7、缬氨酸、缬氨酸 8 8、苯丙氨酸、苯丙氨酸 9 9、异亮氨酸、异亮氨酸 10 10、亮氨酸、亮氨酸 1111、脯氨酸、脯氨酸 1111种蛋白氨基酸和焦谷氨酸的总量约占注射液总固体量的种蛋白氨基酸和焦谷氨酸的总量约占注射液总固体量的15%15%。焦谷氨酸焦谷氨酸明确了山羊角提取物中的明确了山羊角提取物中的11个成分个成分16u 主要成分为主要成分为熊去氧胆熊去氧胆酸酸与与鹅去氧胆酸鹅去氧胆酸u 上述两种成分总量占上述两种成分总量占干燥提取物干燥提取物90以上以上研究方法研究方法 研究成果研究成果u 红外红外u 核磁核磁u 制备薄层制备薄层u 高分辨率质谱高分辨率质谱u HPLC（

14、UV和和 ELSD）熊胆粉提取物熊胆粉提取物17熊胆粉提取物熊胆粉提取物熊胆粉提取物物质基础的研究熊胆粉提取物物质基础的研究注射液注射液注射液与熊胆粉提取物共有成分为熊去氧胆酸和鹅去氧胆酸注射液与熊胆粉提取物共有成分为熊去氧胆酸和鹅去氧胆酸,两者总量约占注射液总固体量的两者总量约占注射液总固体量的33%33%。熊去氧胆酸熊去氧胆酸鹅去氧胆酸鹅去氧胆酸熊去氧胆酸熊去氧胆酸鹅去氧胆酸鹅去氧胆酸18国食药监注国食药监注2007743号文件号文件关于印发中药、天然药物注射关于印发中药、天然药物注射剂基本技术要求的通知剂基本技术要求的通知u总固体的总固体的80成分可测成分可测u总固体的总固体的60成分明

15、确结构并采用专属性方法可测成分明确结构并采用专属性方法可测u明确结构成分中的明确结构成分中的90在指纹图谱中可指认在指纹图谱中可指认技术要求19注射液物质基础研究结果注射液物质基础研究结果A：总固体中可测成分：总固体中可测成分B：总固体中明确结构：总固体中明确结构并采用专属性方法并采用专属性方法可测成分可测成分C：明确结构并可在指：明确结构并可在指纹图谱中指认成分纹图谱中指认成分阐明的物质基础和质量控制已满足国家的有关技术要求阐明的物质基础和质量控制已满足国家的有关技术要求20注射液指纹图谱注射液指纹图谱指纹图谱指纹图谱1 1指纹图谱指纹图谱2 21、新绿原酸；、新绿原酸；2、绿原酸；、绿原酸

16、；3、隐绿原酸；、隐绿原酸；4、咖啡酸；、咖啡酸；5、3，4二咖啡酸酰奎尼酸二咖啡酸酰奎尼酸6、3，5二咖啡酸酰奎尼酸二咖啡酸酰奎尼酸7、4，5二咖啡酸酰奎尼酸；二咖啡酸酰奎尼酸；8、连翘酯苷、连翘酯苷D；9、野黄芩苷、野黄芩苷 1、野黄芩苷；、野黄芩苷；2、黄芩苷；、黄芩苷；3、千层纸素、千层纸素-7-O-葡萄糖醛酸苷葡萄糖醛酸苷 4、白杨素、白杨素-7-O-葡萄糖醛酸苷葡萄糖醛酸苷21注射液指纹图谱注射液指纹图谱指纹图谱指纹图谱4 41、天冬氨酸；、天冬氨酸；2、谷氨酸；、谷氨酸；3、丝氨酸；、丝氨酸；4、甘氨酸；、甘氨酸；5、苏氨酸；、苏氨酸；6、丙氨酸；、丙氨酸；7、缬氨酸；缬氨酸；8

17、、苯丙氨酸；苯丙氨酸；9、异亮氨酸；异亮氨酸；10、亮氨酸；亮氨酸；11、脯氨酸脯氨酸熊去氧胆酸熊去氧胆酸鹅去氧胆酸鹅去氧胆酸可指认成分达到可指认成分达到明确结构成分的明确结构成分的9393指纹图谱指纹图谱3 322u在多指标在多指标(s(s，a a，b b，)质量评价时，以某一典型有效成分质量评价时，以某一典型有效成分作为内参物作为内参物(s)(s)，建立内参物与其它待测成分，建立内参物与其它待测成分(a(a，b b，）间的相对校正因子间的相对校正因子(RCF(RCF，fsafsa，fsbfsb)u通过相对校正因子达到测定一个成分通过相对校正因子达到测定一个成分(对照品可得到者对照品可得到者

18、)的同的同时时 ,可计算出其它待测有效成分的含量可计算出其它待测有效成分的含量什么是什么是“一测多评一测多评”（QAMS）？）？一测多评技术在中药质量控制中的应用一测多评技术在中药质量控制中的应用23采用采用“一测多评一测多评”的理由：的理由：物质基础研究表明：物质基础研究表明：具有具有7 7种有机酸类种有机酸类：金银花提取物中含绿原酸、咖啡酸、隐绿原酸、新绿：金银花提取物中含绿原酸、咖啡酸、隐绿原酸、新绿原酸、原酸、4 4，5 5二咖啡酸酰奎尼酸、二咖啡酸酰奎尼酸、3 3，4 4二咖啡酸酰奎尼酸、二咖啡酸酰奎尼酸、3 3，5 5二咖二咖啡酸酰奎尼酸共啡酸酰奎尼酸共7 7种有机酸种有机酸标准品

19、的缺乏标准品的缺乏：除咖啡酸和绿原酸具有标准品外，其余：除咖啡酸和绿原酸具有标准品外，其余标准品缺乏标准品缺乏具有绿原酸的母核：具有绿原酸的母核：除咖啡酸外，其余除咖啡酸外，其余6 6种有机酸种有机酸结构类似结构类似，均具有绿原，均具有绿原酸的母核酸的母核含量范围相近含量范围相近：含量范围为含量范围为0.020.020.07mg/ml0.07mg/ml金银花提取物中总有机酸含量的主要方法学研究（案例金银花提取物中总有机酸含量的主要方法学研究（案例2）u内参物的选择依据：具有相同母核内参物的选择依据：具有相同母核的有机酸的有机酸-绿原酸绿原酸24波长的选择（金银花中的有机酸类最大吸收波长均在波长

20、的选择（金银花中的有机酸类最大吸收波长均在325nm 325nm）流动相组成的考察流动相组成的考察流动相梯度的考察流动相梯度的考察柱温及流速的考察柱温及流速的考察不同色谱柱的考察不同色谱柱的考察不同仪器的考察不同仪器的考察时间时间（分钟）（分钟）流动相流动相A A（）（）乙腈乙腈流动相流动相B B（）（）0.10.1甲酸甲酸流速流速（ml/ml/分钟）分钟）0 020205 51010959590900.80.820203030101090900.80.83030353510101818909082820.80.81.01.035356060181882821.01.0u方法中明确了色谱柱等可

21、能影响相对保留时间的因素u方法允许流动相比例可以调节，并保证分离效果，以适应中药材批次间的合理差异HPLC HPLC 分析方法的研究分析方法的研究25金银花提取物高效液相色谱图金银花提取物高效液相色谱图新绿原酸新绿原酸绿原酸绿原酸隐绿原酸隐绿原酸咖啡酸咖啡酸3，4二咖啡酸酰奎尼酸二咖啡酸酰奎尼酸 3，5二咖啡酸酰奎尼酸二咖啡酸酰奎尼酸 4.5二咖啡酸酰奎尼酸二咖啡酸酰奎尼酸金银花提取物色谱峰指认金银花提取物色谱峰指认金银花提取物中有机酸类成分占金银花提取物中有机酸类成分占2828-39-3926相对校正因子的确定相对校正因子的确定新绿原酸新绿原酸隐绿原酸隐绿原酸3，4二咖二咖啡酸酰啡酸酰奎尼酸

22、奎尼酸3，5二咖二咖啡酸酰啡酸酰奎尼酸奎尼酸4，5二咖二咖啡酸酰啡酸酰奎尼酸奎尼酸标曲标曲10.9727050.9766621.2109660.9895621.1099810.9698580.9806941.2146590.9916081.1084420.9748060.9799671.2165150.9918881.0898560.9784630.9825191.21240.9885881.0724720.9807240.9826981.2092520.9857581.0622480.9850660.9838051.2026370.9748121.0490781.0031180.975104

23、1.1441510.9246481.000802标曲标曲30.9386770.9788211.2275980.9407281.0595970.9472880.9841691.2347610.9373371.0388460.9517521.0015441.2233930.9353621.0265170.9530440.9791941.2140850.929381.0248540.9514530.9954561.2119170.924081.013441标曲标曲20.914631.1144141.1999061.0046481.1266980.9356931.1210861.2084410.993

24、4841.1208120.9903391.0826141.2108350.9578291.132940.9822031.0695261.1941410.9456441.1280010.9939011.0763681.1862830.9335241.110371平均平均0.971.021.210.961.07u相对校正因子的确相对校正因子的确定需要大量，全面的定需要大量，全面的数据考察数据考察不同浓度范围不同浓度范围不同来源或批号的标不同来源或批号的标准品考察准品考察不同仪器的考察不同仪器的考察以以1717个相对校正因子的个相对校正因子的平均值作为各有机酸成平均值作为各有机酸成分的相对校正因子分

25、的相对校正因子27 指纹图谱指纹图谱含量测定图谱含量测定图谱1 1、新绿原酸、新绿原酸 2 2、连翘酯苷、连翘酯苷D D3 3、绿原酸、绿原酸 4 4、隐绿原酸、隐绿原酸 5 5、咖啡酸、咖啡酸6 6、野黄芩苷、野黄芩苷7 7、3 3，4 4二咖啡酸酰奎尼酸二咖啡酸酰奎尼酸 8 8、3 3，5 5二咖啡酸酰奎尼酸二咖啡酸酰奎尼酸 9 9、4 4，5 5二咖啡酸酰奎尼酸二咖啡酸酰奎尼酸避免不同批次样品中除目标色谱峰外杂质峰的影响避免不同批次样品中除目标色谱峰外杂质峰的影响避免目标色谱峰的相对保留时间漂出标准规定的范围（避免目标色谱峰的相对保留时间漂出标准规定的范围（5 5）采用指纹图谱指认峰的方

26、法实现目标峰的确认（峰采用指纹图谱指认峰的方法实现目标峰的确认（峰1 1、3 3、4 4、5 5、7 7、8 8、9 9）u考察不同色谱柱，不同仪器的影响考察不同色谱柱，不同仪器的影响u结合结合DADDAD光谱、指纹图谱（特征图谱）等多种方式对待测目标色谱峰以相光谱、指纹图谱（特征图谱）等多种方式对待测目标色谱峰以相对保留时间进行指认对保留时间进行指认待测目标色谱峰的定位（保证待测目标色谱峰的定位（保证QAMSQAMS法应用的前提）法应用的前提）28一测多评计算结果与实测结果表（单位：一测多评计算结果与实测结果表（单位：mg/mlmg/ml）编号编号实际测得实际测得总量总量一测多评一测多评计算

27、结果计算结果相对偏差相对偏差（%）编号编号实际测得实际测得总量总量一测多评一测多评计算总量计算总量相对偏差相对偏差（%）1-11-10.238724 0.238724 0.239490 0.239490 0.16 0.16 8 81 10.235502 0.235502 0.236156 0.236156 0.14 0.14 1-21-20.237339 0.237339 0.238098 0.238098 0.16 0.16 8 82 20.234404 0.234404 0.235058 0.235058 0.14 0.14 2-12-10.208924 0.208924 0.209694

28、 0.209694 0.18 0.18 9 91 10.230670 0.230670 0.233377 0.233377 0.58 0.58 2-22-20.211470 0.211470 0.212247 0.212247 0.18 0.18 9 92 20.236778 0.236778 0.237503 0.237503 0.15 0.15 3-13-10.221436 0.221436 0.222297 0.222297 0.19 0.19 10101 10.240573 0.240573 0.241209 0.241209 0.13 0.13 3-23-20.221760 0.22

29、1760 0.222625 0.222625 0.19 0.19 10102 20.239085 0.239085 0.239723 0.239723 0.13 0.13 4-14-10.239432 0.239432 0.240241 0.240241 0.17 0.17 11111 10.256419 0.256419 0.257009 0.257009 0.12 0.12 4-24-20.236437 0.236437 0.237233 0.237233 0.17 0.17 11112 20.254789 0.254789 0.255352 0.255352 0.11 0.11 5-15

30、-10.236721 0.236721 0.237321 0.237321 0.13 0.13 12121 10.252333 0.252333 0.253086 0.253086 0.15 0.15 5-25-20.236987 0.236987 0.237591 0.237591 0.13 0.13 12122 20.252409 0.252409 0.253187 0.253187 0.15 0.15 6 61 10.204348 0.204348 0.201665 0.201665 0.66 0.66 13131 10.237117 0.237117 0.237748 0.237748

31、 0.13 0.13 6 62 20.203957 0.203957 0.200797 0.200797 0.78 0.78 13132 20.233743 0.233743 0.234369 0.234369 0.13 0.13 7 71 10.230410 0.230410 0.223348 0.223348 1.56 1.56 14141 10.197985 0.197985 0.198670 0.198670 0.17 0.17 7 72 20.232755 0.232755 0.233557 0.233557 0.17 0.17 14142 20.197713 0.197713 0.

32、198398 0.198398 0.17 0.17 u采用一测多评测得的结果与实际测得结果基本一致，表明建立的方法：采用一测多评测得的结果与实际测得结果基本一致，表明建立的方法：相对校正因子准确，方法可行。相对校正因子准确，方法可行。准确度、精密度、专属性、定量限、检测限、线性范围、耐用性等，外标法和一准确度、精密度、专属性、定量限、检测限、线性范围、耐用性等，外标法和一测多评法结果的比较。测多评法结果的比较。其他方法学考察其他方法学考察29研究背景研究背景 u处方中的大黄含有大黄素、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素甲醚，大黄处方中的大黄含有大黄素、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素甲醚，大黄酸等蒽醌类物质

33、，化学结构相似酸等蒽醌类物质，化学结构相似u拟采用一测多评的方法进行蒽醌类物质的含量测定拟采用一测多评的方法进行蒽醌类物质的含量测定制剂中蒽醌类物质的含量测定（案例制剂中蒽醌类物质的含量测定（案例3）化合物化合物相对保留时间（以大黄素为参照）相对保留时间（以大黄素为参照）仪器仪器A A仪器仪器B B芦荟大黄素芦荟大黄素0.600.600.710.71大黄酸大黄酸0.680.680.800.80大黄素大黄素1.001.001.001.00大黄酚大黄酚1.181.181.161.16大黄素甲醚大黄素甲醚1.261.261.221.22遇到的问题：遇到的问题：不同分析仪器会造成相对保留时间的差异不同

34、分析仪器会造成相对保留时间的差异缺乏合理的内参物同时指认目标色谱峰缺乏合理的内参物同时指认目标色谱峰u以大黄素为内参物，采用不同仪器以大黄素为内参物，采用不同仪器所得芦荟大黄素和大黄酸的相对保所得芦荟大黄素和大黄酸的相对保留时间偏差较大（大于留时间偏差较大（大于1515）30解决方案解决方案：分别选择合理的内参物分别选择合理的内参物u芦荟大黄素以大黄酸为内参物芦荟大黄素以大黄酸为内参物u大黄酚、大黄酸和大黄素甲醚以大黄素为内参物大黄酚、大黄酸和大黄素甲醚以大黄素为内参物 相对保留时间相对保留时间芦荟大黄素以大黄酸为参照，芦荟大黄素以大黄酸为参照，其余分别以大黄素为参照其余分别以大黄素为参照仪器

35、仪器A仪器仪器B B芦荟大黄素芦荟大黄素0.890.89大黄酸大黄酸1.001.00大黄素大黄素1.001.00大黄酚大黄酚1.181.16大黄素甲醚大黄素甲醚1.251.22 大黄酸大黄酸大黄素大黄素相对保留时间相对保留时间供试品色谱图供试品色谱图相关系数达到了预期的效果相关系数达到了预期的效果31 丹参药材供试品溶液色谱图丹参药材供试品溶液色谱图 “丹参丹参”中丹参酮类物质的含量测定（案例中丹参酮类物质的含量测定（案例4）研究背景研究背景 ：收入美国药典的复核收入美国药典的复核u丹参中含有丹参酮丹参中含有丹参酮IIAIIA、隐丹参酮、丹参酮、隐丹参酮、丹参酮I I等化合物，结构类似，符等化

36、合物，结构类似，符合一测多评的要求合一测多评的要求u以丹参酮以丹参酮IIAIIA作为内参物，测定隐丹参酮、丹参酮作为内参物，测定隐丹参酮、丹参酮I I的含量的含量丹参酮类相同母核丹参酮类相同母核32u复核中发现复核中发现检测波长的带宽检测波长的带宽也会也会影响相对校正因子，提影响相对校正因子，提醒实验室在进行相对校正因醒实验室在进行相对校正因子的考察时应予以考虑波长子的考察时应予以考虑波长的带宽！的带宽！因素因素隐丹参酮隐丹参酮丹参酮丹参酮I I实验室实验室A A1.181.181.311.31实验室实验室B B1.151.151.231.23带宽为带宽为16161.111.111.171.1

37、7带宽为带宽为4 41.151.151.231.23发现的问题：发现的问题：u不同品牌色谱柱会引起相对保不同品牌色谱柱会引起相对保留时间的改变，甚至出现出峰留时间的改变，甚至出现出峰顺序颠倒顺序颠倒解决方案：解决方案：u质量标准中质量标准中明确色谱柱类型明确色谱柱类型min0510152025mAU0100200300400500600700 13.770-DST-1 14.341-YDST 18.144-DST-2色谱柱色谱柱A A色谱柱色谱柱B B33适用于结构类似的同系物适用于结构类似的同系物同系物紫外光谱图相似度高，在相同波长处的吸收度相差小，即校同系物紫外光谱图相似度高，在相同波长处

38、的吸收度相差小，即校正因子相差小正因子相差小同系物相对校正因子不会因为流动相的比例微调而发生变化同系物相对校正因子不会因为流动相的比例微调而发生变化目标色谱峰定位是关键目标色谱峰定位是关键全面的考察各种可能影响色谱峰相对保留时间的因素，全面的考察各种可能影响色谱峰相对保留时间的因素，不同品种可不同品种可能的影响因素有差异，能的影响因素有差异，应在质量标准中分别予以明确规定应在质量标准中分别予以明确规定需以相对保留时间结合需以相对保留时间结合DADDAD光谱、指纹图谱（特征图谱）等多种方光谱、指纹图谱（特征图谱）等多种方式对待测目标色谱峰进行指认式对待测目标色谱峰进行指认相对校正因子的确定需要大

39、量的考察相对校正因子的确定需要大量的考察全面的数据考察基于工艺稳定的产品，避免由于不同批次的不稳定全面的数据考察基于工艺稳定的产品，避免由于不同批次的不稳定带来的系数变化带来的系数变化 “一测多评一测多评”技术应用中应注意的问题技术应用中应注意的问题 34制剂中由于有其他药味的干扰，可能会影响目标色谱峰的分离制剂中由于有其他药味的干扰，可能会影响目标色谱峰的分离调整分离效果时，会出现目标色谱峰相对保留时间发生偏差的现象调整分离效果时，会出现目标色谱峰相对保留时间发生偏差的现象相邻色谱峰在定位时会引起混淆相邻色谱峰在定位时会引起混淆 提取物图谱提取物图谱干扰峰少干扰峰少制剂图谱制剂图谱可能存在相

40、邻色谱峰的干扰可能存在相邻色谱峰的干扰建议解决方案：建议解决方案：u配合指纹图谱或者特征图谱进行色谱峰确认，避免有关问题。配合指纹图谱或者特征图谱进行色谱峰确认，避免有关问题。制剂中应用一测多评技术的主要问题制剂中应用一测多评技术的主要问题35传统鉴别传统鉴别基于单一指标成基于单一指标成分的质量标准分的质量标准基于有效性和安全性的基于有效性和安全性的整体质量控制整体质量控制性状、性状、显微、显微、理化鉴别理化鉴别主观性强、主观性强、缺乏专属性缺乏专属性引入薄层、液引入薄层、液相、气相等现相、气相等现代分析技术定代分析技术定性、定量性、定量采用质谱等技采用质谱等技术，研究阐明术，研究阐明物质基础，确物质基础，确定有效成分定有效成分指标单一，与指标单一，与内在质量关联内在质量关联性仍欠缺性仍欠缺指纹图谱、一指纹图谱、一测多评等多个测多评等多个有效成分质控有效成分质控性状、性状、显微显微评估确定评估确定安全性检安全性检测指标测指标系统专业系统专业的安全性的安全性检测检测基源确证基源确证整体质量控制的展望36Thank you for your attention!Your suggestion is welcomed!