梅毒血清学检测的操作规范课件.ppt

1、梅毒传播途径性传播性接触是主要传染途径n未经治疗的患者在感染后1年内具有传染性n随着病期的延长，传染性越来越小n感染后2年，通过性接触一般无传染性梅毒传播途径母婴传播n妊娠7周时，梅毒螺旋体即可通过胎盘传播n未经治疗者，虽已无性传播（病期2年），但妊娠时仍可传染胎儿，病期越长，传染性越小梅毒传播途径其他途径n输血传播n接触传播n 接触部位附有梅毒螺旋体n日常用品、接吻、哺乳、医疗器械等途径梅毒的分期n一期梅毒n硬下疳和/或腹股沟淋巴结肿大n二期梅毒n病期在2年内有多形性皮疹等n三期梅毒n病期在2年以上，可有皮肤黏膜损害等n隐性（潜伏）梅毒n胎传（先天）梅毒梅毒的诊断n病史n症状n实验室检查n梅

2、毒的实验室检查对诊断有重要意义梅毒实验室检测技术n病原学检测n血清学检测梅毒实验室检测的特点梅毒实验室检测的特点 临床表现临床表现 取材部位取材部位 检查方法检查方法一期梅毒一期梅毒 溃疡溃疡 淋巴结淋巴结 病原学检查病原学检查 血液血液 血清学检查血清学检查二期梅毒二期梅毒 皮损皮损 淋巴结淋巴结 病原学检查病原学检查 血液血液 血清学检查血清学检查 潜伏梅毒潜伏梅毒 血液血液 血清学检查血清学检查三期梅毒三期梅毒 血液血液 血清学检查血清学检查 神经梅毒神经梅毒 血液血液 血清学检查血清学检查 脑脊液脑脊液 细胞、蛋白量检查细胞、蛋白量检查VDRL等等梅毒的病原学检测-显微镜检测法显微镜检

3、测法n暗视野显微镜检查n镀银染色检查 暗视野显微镜检查n标本类型：梅毒硬下疳、扁平湿疣、黏膜斑等标本类型：梅毒硬下疳、扁平湿疣、黏膜斑等皮损的渗出液、淋巴结穿刺液皮损的渗出液、淋巴结穿刺液镀银染色检查n基本原理：梅毒螺旋体具有亲银性，可被银溶液染色，从而可以在镜下观察到梅毒螺旋体n结果：棕褐色的梅毒螺旋体n非梅毒螺旋体抗原血清学检测n（非特异性梅毒抗体）n梅毒螺旋体抗原血清学检测n（特异性梅毒抗体）梅毒血清学检测分类非梅毒螺旋体抗原血清学检测n原理n人感染梅毒螺旋体后，组织受到破坏释放一种类脂成分，与梅毒螺旋体结合形成完全抗原，刺激机体在34周时产生类脂质抗体（反应素）。n抗体的作用n治疗监测

4、和疗效监测n无保护作用nVDRL(性病研究实验室试验)nUSR（不加热血清反应素试验）nRPR(加速血浆反应素环状卡片试验)nTRUST(甲苯胺红不加热血清试验)非梅毒螺旋体抗原血清学检测方法n抗原基本成分为心磷脂、卵磷脂和胆固醇n抗原抗体集合形成复合物，凝集成网状肉眼可见的沉淀颗粒n试验方法敏感性和特异性基本相似n操作简单，价格便宜n可定量检测非梅毒螺旋体抗原血清学试验VDRLVDRLUSRUSRRPRRPRTRUSTTRUST抗原成分抗原成分心磷脂、卵磷脂、心磷脂、卵磷脂、胆固醇胆固醇同前同前+EDTA+EDTA+氯化氯化胆碱胆碱同前同前+EDTA+EDTA+氯化氯化胆碱胆碱+活性炭活性炭

5、同前同前+EDTA+EDTA+氯化胆氯化胆碱碱+甲苯胺红甲苯胺红抗原稳定性抗原稳定性不稳定不稳定,1,1天天稳定稳定4 4 8 8 保存保存1212个月个月稳定稳定4 4 8 8 保存保存1212个月个月稳定稳定4 4 8 8 保存保存1212个月个月血清试验前处理血清试验前处理需灭活需灭活不需灭活不需灭活不需灭活不需灭活不需灭活不需灭活反应板及结果判反应板及结果判断断玻片，肉眼或显玻片，肉眼或显微镜微镜玻片，肉眼或显玻片，肉眼或显微镜微镜纸卡片，肉眼纸卡片，肉眼纸卡片，肉眼纸卡片，肉眼注释注释唯一用于检查脑脊唯一用于检查脑脊液的试验，诊断神液的试验，诊断神经梅毒经梅毒结果容易判断结果容易判断

6、结果容易判断结果容易判断四种非特异性试验方法比较四种非特异性试验方法比较非梅毒螺旋体抗原血清试验nRPR/TRUSTn基本原理：在心磷脂、卵磷脂和胆固醇等组成的抗原中加入活性炭/甲苯胺红，与待检血清中的反应素结合，形成肉眼可见的红色絮状物。试验所需仪器测速要求：1002转/分钟试验操作定性检测(1)加样：吸取50L血清/浆放在卡片圈中，并均匀地涂布在整个圈中(2)加抗原：将抗原轻轻摇匀，用9号针头加1滴抗原（16.7ul）(3)反应：将卡片置水平旋转仪旋转8分钟，立即在亮光下观察结果结果判读RPRTRUSTTRUST凝集反应强度分级+：抗原颗粒呈粗大团块，凝结+：抗原颗粒中等团块、凝结+：颗粒

7、凝结，与清亮液体呈明显反差+：抗原颗粒凝结、均匀肉眼可见：抗原颗粒细小凝结，肉眼可辨：圆圈内仅见红色集中于中央一点或均匀分散。试验操作定量检测 （1）稀释液准备：在圈内加入50L生理盐水（根据需要确定稀释度），勿将盐水涂开。（2）加样：吸取50L血清与各圈中生理盐水做系列稀释，并涂布整个圈内。（3）余同定性试验中。孔孔 号号 1 2 3 4 5 6 7 81 2 3 4 5 6 7 8 稀释倍数稀释倍数 原倍原倍 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 阳性阳性K K 阴性阴性K K生理盐水生理盐水(ul)(ul)-50.0 50.0 50.0

8、50.0 50.0 -50.0 50.0 50.0 50.0 50.0 -样样 品品(ul)(ul)50.050.0 50.050.0 50.0 50.0 50.0 50.0 50.0 50.0 50.0 50.0弃弃50.0-50.0-阳性血清阳性血清(ul)-(ul)-50.050.0 -阴性血清阴性血清(ul)-(ul)-50.050.0抗原悬液抗原悬液(ul)(ul)16.7 16.7 16.7 16.7 16.7 16.7 16.7 16.716.7 16.7 16.7 16.7 16.7 16.7 16.7 16.7 定量检测操作定量检测操作步骤步骤非梅毒螺旋体抗原检测意义n早期梅

9、毒硬下疳出现12周后，血清学可呈阳性n梅毒患者经治疗后血清滴度可下降并转阴性，故可作为疗效观察、判愈、复发或再感染的指征n为什么要做定量检测？n滴度常与病情活动相关，滴度改变4倍具有临床意义n技术性技术性n标本的污染标本的污染n溶血溶血n操作失误操作失误n生物学假阳性生物学假阳性n患者有其他疾病，使梅毒血清试验出现阳性患者有其他疾病，使梅毒血清试验出现阳性n生理机能发生变化：少数孕妇也可发生生物生理机能发生变化：少数孕妇也可发生生物学假阳性学假阳性梅毒血清试验假阳性因素：梅毒血清试验假阳性因素：急性生物学假阳性反应的疾病n麻疹、风疹、水痘、牛痘疹n传染性单核细胞增多症n传染性肝炎n上呼吸道感染

10、、猩红热n肺炎链球菌肺炎、病毒性肺炎n其他，如亚急性心内膜炎、斑疹伤寒等急性生物学假阳性的特点n滴度低，一般低于1:8n持续时间短，多在疾病消退后6日内转阴n用梅毒螺旋体抗原血清试验检测阴性慢性生物学假阳性反应的疾病n系统性红斑狼疮、盘状红斑狼疮n干燥综合征、类风湿性关节炎n自身免疫学溶血性贫血、桥本氏甲状腺炎n风湿性心脏病、慢性肾炎、肝硬化n系统性硬化症、毒品瘾者n孕妇、老年人慢性生物学假阳性特点n可持续6个月以上，甚至终身n滴度低，一般低于1:8n用梅毒螺旋体抗原血清试验检测呈阴性梅毒血清反应假阴性n前带现象：在非梅毒螺旋体抗原血清试验中，二期梅毒患者血清中存在高浓度的抗体时出现的弱阳性或

11、阴性反应的结果。若将血清稀释后再进行试验即可出现阳性结果n合并HIV感染的梅毒患者，梅毒血清试验可呈阴性n技术操作血清固定（耐血清性）n指经抗梅毒治疗后，非梅毒螺旋体抗原血清试验在一定时期内不阴转n早期的血清固定常与治疗量不足或不规则治疗、复发、再感染或有神经系统性梅毒有一定的关系nFTA-ABSnTPPA/TPHAnTP-ELISAn发光法发光法n胶体金法胶体金法梅毒螺旋体抗原血清学检测血清学检测TPPA基本原理TPPA称为梅毒螺旋体明胶凝集实验n用超声裂解梅毒螺旋体制备抗原，致敏明胶颗粒n致敏粒子与待检血清中的抗梅毒螺旋体特异性抗体结合n产生肉眼可见的凝集。TPPA操作步骤n试剂准备试剂准

12、备：恢复室温n加稀释液加稀释液：每份样本做4孔，加标本稀释液加至微量反应板孔内，第1孔100L，第24孔各25Ln样本稀释样本稀释：取血清25L加至第1孔，混匀后取25L至第2孔，混匀后取25L至第3孔，混匀后取25L至第4孔，混匀后弃去25Ln加对照液加对照液：第3孔加未致敏颗粒25L，第4孔加致敏 颗粒25Ln混合混合：将反应板置振荡器振荡30秒n反应反应：孵育2h观察结果TPPA结果判读观察第3孔，不出现凝集为有效试验TPPA结果判断观察凝集反应强度：分级如下n 4+3+：颗粒光滑覆盖整个孔底，有时边缘有折叠 n 2+：颗粒光滑集聚覆盖孔底，周围有一颗粒环 n 1+：颗粒光滑集聚覆盖孔底

13、，周围有一明显颗粒环n ：颗粒模糊覆盖，边缘有明显的小环 一：颗粒紧密沉积孔底中央或形成一小点梅毒螺旋体抗原检测意义优点n敏感性高，特异性强n对非特异性试验进行证实缺点n通常终身持续阳性n不能区分现症感染和既往感染n不能作为疗效观察指标梅毒血清学试验结果解释TRUST/RPRTPPA 临床意义阴性阴性 排除梅毒（一期梅毒的早早期）阳性阳性 现症梅毒（梅毒孕妇所生的婴儿除外）阳性阴性 生物学假阳性阴性阳性 早期梅毒经治疗后 （早期梅毒）先天梅毒的实验室诊断n暗视野查到梅毒螺旋体n非梅毒螺旋体抗体滴度持续上升n非梅毒螺旋体抗体滴度高于母亲4倍n检测抗梅毒特异性IgM抗体阳性梅毒产妇所生儿童的随访n随访18个月观察抗体的变化n随访过程中及时发现先天梅毒n非梅毒螺旋体抗原血清学试验由阴转阳n滴度上升且有临床症状的儿童n随访至18月龄时梅毒螺旋体抗原血清学试验仍持续阳性的儿童再见再见