结核感染酶联免疫法定量检测在结核病中的应用课件.ppt

1、结核感染酶联免疫法定量检测在结核病中的应用流行病学调查结核病的传播途径l传染源l活动性肺结核l大量排菌：直接涂片法查出l微量排菌：直接涂片法阴性，培养阳性l传播途径l飞沫传播：通过咳嗽、喷嚏、大笑、大声谈话产生微滴排到空气中传播结核病的传播途径l易感人群l自然抵抗力：与遗传因素、生活贫困、居住拥挤、营养不良有关。婴幼儿、老年人、HIV感染者、免疫抑制剂使用者、慢性疾病患者易患。l获得性特异性抵抗力：来自自然或人工感染。山区及农村居民移居城市易感。结核感染后的免疫应答临床表现症状呼吸系统症状l咳嗽、咳痰l咯血：1/31/2患者l胸痛：胸膜性疼痛l呼吸困难：干酪性肺炎和大量胸腔积液全身症状l午后潮

2、热、倦怠乏力、盗汗、食欲减退、体重减轻。育龄女性月经不调。临床表现体征l取决于病变性质，部位，范围或程度，如病变范围取决于病变性质，部位，范围或程度，如病变范围大，可有肺实变体征大，可有肺实变体征。l局限性干湿罗音l实变征-干酪性肺炎l哮鸣音 见于支气管结核l胸腔积液征l结核变态反应引起的过敏表现：结节性红斑泡性结结核变态反应引起的过敏表现：结节性红斑泡性结膜炎和结核风湿症等膜炎和结核风湿症等诊断方法病史和症状体征l症状体征情况l诊断治疗过程l肺结核接触史诊断方法2.影像学检查l胸部X线检查l肺部CT对肺结核诊断的重要作用对肺结核诊断的重要作用诊断方法3.纤支镜检查l常用于支气管结核诊断l表现

3、为粘膜充血、溃疡、糜烂，组织增生、形成瘢痕、支气管狭窄l可以病检、采集分泌物、冲洗液标本作病原学检查诊断方法4.实验室检查结核菌素试验：检出结核分枝杆菌感染，而非检出结核病。对儿童、少年及青年的结核病诊断有参考意义；不能区分自然感染或是卡介苗接种的免疫反应；阴性反应,一般表明未受过结核分枝杆菌的感染；以下情况不能排除结核病：感染后4-8周内未充分建立变态反应，可阴性；营养不良、HIV感染、麻疹、水痘、癌症、严重的细菌感染包括重症结核病如粟粒性结核病和结核性脑膜炎和卡介苗接种后，多为阴性。诊断方法痰涂片和痰培养：排菌具有间断性、不均匀性结核菌涂片：初治者3份痰标本（清晨，夜间，即时痰1次痰涂片8

4、0%阳性，2次痰涂片90%阳性，3次痰涂片95%阳性。优点：标本易获取；缺点：易污染、检测时间长，敏感度低。诊断方法结核菌培养：6 weeks结核杆菌DNA和抗体检查：缺点：特异性欠强,敏感性较低,尚需进一步研究。ADA法：优点：检测特异性高，个别报道可达100%；缺点：灵敏度低，40%，影响其整体检测效果。传统检测手段结核病实验室检测难题结核杆菌特异性结核杆菌特异性T T细胞应答体外检测细胞应答体外检测实验实验检测原理 结核分枝杆菌的感染者，当这些人的血液再次接触到结核分枝杆菌的抗原时，特异性T细胞就能迅速产生IFN-。而没有感染结核分枝杆菌的人就不会产生IFN-，并且IFN-的含量与结核菌

5、的量有很好的对应关系，含菌量越高IFN-产生的越多。TB-IGRA就是通过检测体外释放的IFN-的含量来检查是否感染结核分枝杆菌的。通过比较基因组学发现卡介苗和结核分枝杆菌间存在RD区，RD1区一般只存在于结核分枝杆菌，可能形成ESX-1分泌机制。该分泌系统中有两个重要蛋白，早期分泌抗原-6(ESAT-6)和培养基滤过蛋白-10(CFP-10)具有较强的Thl表位。随后，ESAT-6和CFP-10作为体外刺激抗原来检测结核分枝杆菌越来越频繁，这种方法被定义为体外T细胞IFN-释放试验（IGRA）。两种方法(TB-IGRA,T-SPOT.TB)TST与IGRA；、活动性结核与潜伏性结核感染的鉴别

6、“菌阴”结核患者的辅助诊断 肺外结核的鉴别诊断 结核发病风险的预测免疫力低下或受抑制患者的结核病诊断 区别结核感染者与BCG接种者 抗结核疗效的监测 临床应用优点：敏感性及特异性高：不受卡介苗接种及环境分枝杆菌影响，不受机体免疫状态影响。应用广泛：在活动性肺结核、肺外结核、结核性浆膜炎、潜伏性结核感染及免疫抑制的结核患者均能检测。诊断快速：24小时可报告结果。可进行疗效评估：治疗有效则T-SPOT.TB斑点数减少甚至阴性。评价评价缺点：目前尚无统一的界值用来鉴别潜伏结核感染及活动性肺结核。在 5岁儿童、近期暴露于结核杆菌者、免疫功能低下者和需要二次检测者中使用的证据不足。对标本要求高：室温保存

7、和运输血液样本（18-25），不能冷冻或冷藏；血液样本从采集到检测不超过8小时。结果需结合临床和其它检测进行判断，阴性结果不能排除暴露或感染结核杆菌的可能性。不能确定病变部位。IGRA应用实例 IGRA对涂阴肺结核具有较好的辅助诊断作用 治疗效果的评价治疗效果的评价治疗效果的评价小结IGRA不易受BCG接种和NTM感染的干扰，检测MTB感染的特异性高于TST；IGRA对肺结核（涂阳/涂阴）和肺外结核均具有较好的检测性能；IGRA可作为临床结核的辅助诊断方法；IGRA在结核病诊断、流行学调查、疾病发展与治疗效果评价等方面的应用越来越广泛；开展情况欧、美、日、韩等低流行国家和地区已作为常规诊断和筛查指标。国内早就认识到原有方法学的缺陷，列入国家“十一五”重大传染病专项重点研发试剂之一。国内很多大医院相继开展，省内浙一医院、浙二医院、邵逸夫医院、省人民医院、杭州市一医院等等都已经开展或9月1日（新收费执行）就开展。