维生素类药物的分析课件2.ppt

1、第九章第九章概概 述述维生素维生素A维生素维生素D维生素维生素E维生素维生素B1维生素维生素C练习与思考练习与思考返回主目录返回主目录基本要求基本要求第1页，共128页。基基 本本 要要 求求一、掌握维生素类药物的结构特点与分析方法之间的关系。一、掌握维生素类药物的结构特点与分析方法之间的关系。二、掌握维生素类药物的鉴别原理与方法。二、掌握维生素类药物的鉴别原理与方法。三、掌握三点校正法测定维生素三、掌握三点校正法测定维生素A A的原理、测定方法与计算的原理、测定方法与计算方法。方法。四、掌握维生素四、掌握维生素D D的的HPLCHPLC含量测定法和维生素含量测定法和维生素E E的的GCGC含

2、量测定法。含量测定法。五、掌握维生素五、掌握维生素B B1 1非水溶液滴定法与维生素非水溶液滴定法与维生素C C碘量法的测定碘量法的测定原理、方法与注意事项。原理、方法与注意事项。六、熟悉本类药物其他的含量测定方法。六、熟悉本类药物其他的含量测定方法。七、熟悉本类药物杂质检查方法。七、熟悉本类药物杂质检查方法。八、了解维生素八、了解维生素A A三点校正法的推导过程。三点校正法的推导过程。返 回第2页，共128页。概概 述述维生素：维生素：是维持人体正常代谢机能所必是维持人体正常代谢机能所必需的需的 微量营养物资。微量营养物资。人体不能合成维生素。人体不能合成维生素。第3页，共128页。VitA

3、、D2、D3、E、K1 等等 脂溶性脂溶性水溶性水溶性 VitB族族(B1、B2、B6、B12)VitC、叶酸、烟酸、泛酸等。、叶酸、烟酸、泛酸等。分类分类按溶解度分按溶解度分返 回第4页，共128页。CH3CH3CH2ORCH3CH3CH3-H 维生素维生素A A醇醇-COCH3 维生素维生素A A醋酸酯醋酸酯-COC15H31 维生素维生素A A棕榈酸酯棕榈酸酯R:第一节第一节 维生素维生素A第5页，共128页。为一个具有共轭多烯侧链的为一个具有共轭多烯侧链的 环己烯环己烯（一）（一）结构与性质结构与性质一、一、v 具有具有UV吸收吸收v 存在多种立体异构化合物存在多种立体异构化合物第6页

4、，共128页。CH2OHVitA2CH2VitA3v 易发生脱氢、脱水、聚合反应易发生脱氢、脱水、聚合反应第7页，共128页。鲸醇鲸醇CH2OHCH2OHCH3第8页，共128页。酸酸醛醛环氧化物环氧化物、氧化剂、氧化剂紫外线、紫外线、VitAVitAVitAOO2v 或有金属离子存在时氧化或有金属离子存在时氧化共轭多烯侧链共轭多烯侧链 易被氧化易被氧化（二）（二）第9页，共128页。环氧化物环氧化物OCH2OHVitA醛醛HOCVitA酸酸COOH第10页，共128页。三氯化锑反应三氯化锑反应（一）（一）条件条件 无水无醇无水无醇紫紫红红蓝蓝色色 3SbClVitACHCl3 鉴别试验鉴别试

5、验二、二、第11页，共128页。-RCOOSbCl5+CH2蓝色蓝色紫红紫红+CH2-RCOOSbCl5第12页，共128页。（BP（2000）VitAVitAHCl去水去水无水乙醇无水乙醇max为为326nm一个吸收峰一个吸收峰UV法法（二）（二）max为为350390nm三个吸收峰三个吸收峰第13页，共128页。去水去水VitA（VitA3）CH2CH3CH3CH2ORCH3CH3CH3VitA第14页，共128页。第15页，共128页。USP 显色剂显色剂 磷钼酸磷钼酸 规定斑点颜色和规定斑点颜色和Rf值值BP 杂质对照品法杂质对照品法 显色剂显色剂 三氯化锑三氯化锑TLC法法（三）（三

6、）第16页，共128页。立体异构体立体异构体氧化降解产物氧化降解产物合成中间体合成中间体UV法法（一）（一）含量测定含量测定三、三、维生素维生素A A2 2维生素维生素A A3 3环氧化物环氧化物维生素维生素A A醛醛维生素维生素A A酸酸第17页，共128页。三点校正法（法定方法）三点校正法（法定方法）1.原理：原理：（1）杂质的吸收在）杂质的吸收在310340nm波长波长范围内呈一条直线，且随波长的增范围内呈一条直线，且随波长的增大吸收度减小；大吸收度减小；（2）物质对光的吸收具有加和性。）物质对光的吸收具有加和性。第18页，共128页。2.波长的选择：波长的选择：（1）1 VitA的的

7、max（328nm）（2）2 3 分别在分别在 1的两侧各选一点的两侧各选一点第19页，共128页。测定对象测定对象 VitA醋酸酯醋酸酯328340316328 第一法第一法 等波长差法等波长差法=12nm第20页，共128页。第二法第二法 等吸收比法等吸收比法测定对象测定对象 VitA醇醇32176 AAA 1=325nm,2=310nm,3=334nm第21页，共128页。测定法测定法（1）基本步骤）基本步骤:v第一步第一步 A的选择的选择选择依据：选择依据：所选所选A值中杂质的干扰已基本消除值中杂质的干扰已基本消除第22页，共128页。注意：注意：C 为混合样品的浓度为混合样品的浓度

8、第二步第二步 求求)(%cm1样样 l(%)CA%)(cm1 样样)()(%cm1%cm1纯纯样样 第23页，共128页。第三步第三步 求效价求效价换算因数换算因数）效价（效价（样样样样%)(cm1)(Eg/IU换算因数由纯品计算而得：换算因数由纯品计算而得：%)(cm1Eg/IU纯纯）效价（效价（换算因数换算因数第24页，共128页。醋酸酯醋酸酯维生素维生素Ag344.0IU1 2907000g344.0g101g/IU6 ）效价（效价（15302907000Eg/IU%)(cm1 纯纯）效价（效价（换算因数换算因数1900 第25页，共128页。醇醇维生素维生素Ag300.0IU1 333

9、0000g300.0g101g/IU6 ）效价（效价（18203330000Eg/IU%)(cm1 纯纯）效价（效价（换算因数换算因数1830 第26页，共128页。第四步：求标示量第四步：求标示量标示量标示量平均丸重平均丸重100g/IU 标示量标示量丸丸标示量标示量100/IU 标示量标示量平均丸重平均丸重换算因数换算因数100CA 第27页，共128页。方法：方法：（2）第一法第一法维生素维生素A醋酸酯醋酸酯iAnm360340328316300ml/IU159S处测处测、分别于分别于溶液溶液环己烷环己烷第28页，共128页。判断判断 是否在是否在326329nm之间之间max max

10、在在326329nm之间之间改用第二法改用第二法是是否否 求算求算 并与规定值比较并与规定值比较328iA/A第29页，共128页。299.0AA811.0AA0000.1AA907.0AA555.0AA328360328340328328328316328300 规定值规定值 差值差值328iA/A第30页，共128页。判断差值是否超过规定值的判断差值是否超过规定值的02.0 有一个以上超有一个以上超过过02.0 无超过无超过02.0 计算计算 A328（校正）（校正）用用A328计算计算第31页，共128页。%100AAAf328328)(328 校正校正 3403163283282523

11、AAA.A 校校正正第32页，共128页。03%15%3%第二法第二法 校校正正328A328A第二法第二法第33页，共128页。讨讨 论论VA醋酸酯的吸收度校正公式是用直线方程式法（即醋酸酯的吸收度校正公式是用直线方程式法（即代数法）推导而来；代数法）推导而来；VA醇的吸收度校正公式是用相似醇的吸收度校正公式是用相似三角形法（几何法或称三角形法（几何法或称6/7定位法）推导而来。定位法）推导而来。在应用三点校正法时，除其中一点在最大吸收波长处测定在应用三点校正法时，除其中一点在最大吸收波长处测定外，其余两点均在最大吸收峰的两侧进行测定外，其余两点均在最大吸收峰的两侧进行测定。在测定。在测定前

12、务必要校正波长。测定的样品应不得少于两份。前务必要校正波长。测定的样品应不得少于两份。第34页，共128页。VitAD胶丸中胶丸中VitA的含量测定的含量测定 精密称取本品精密称取本品(规格规格10000VitAIU/丸丸)装量装量差异项下（平均装量差异项下（平均装量0.07985g/丸）的内容物丸）的内容物 0.1287g 至至10ml烧杯中，加环己烷溶解并定量烧杯中，加环己烷溶解并定量转移至转移至50ml量瓶中，用环己烷稀释至刻度，量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀；精密量取摇匀；精密量取2.0ml，置另一，置另一50 ml量瓶中，量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀。以环己烷为空用环己烷稀释至

13、刻度，摇匀。以环己烷为空白，测定最大吸收波长为白，测定最大吸收波长为328nm，并在下列，并在下列波长处测得吸收度为波长处测得吸收度为第35页，共128页。A300 ：0.374A316 ：0.592A328 ：0.663A340 ：0.553A360 ：0.228A300/A328 ：0.564A316/A328 ：0.893A328/A328 ：1.000A340/A328 ：0.834A360/A328 ：0.344 求本品中维生素求本品中维生素A占标示量的百分含量？占标示量的百分含量？第36页，共128页。A300/A328 ：0.564A316/A328 ：0.893A328/A32

14、8 ：1.000A340/A328 ：0.834A360/A328 ：0.344 0.555 0.907 1.000 0.811 0.299 +0.010.01 0+0.02+0.04=A328(校正校正)=3.52(2A328-A316-A340)=3.52(20.663 0.592 0.553)=0.637第37页，共128页。A328(校正校正)A328(实测实测)A328(实测实测)100=0.637 0.6630.663100=-3.92E1%1cm(328nm)=A328(校正校正)100ms/D=0.6371000.1287/1250=61.87第38页，共128页。供试品中维生

15、素供试品中维生素A A效价效价=E1%1cm(328nm)1900=61.87 1900=117553（IU/g）标示量标示量%=VA效价效价(IU/g)每丸内容物平均装量每丸内容物平均装量(g/丸丸)标示量标示量(IU/丸丸)100%=1175530.0798510000100%=93.9%第39页，共128页。适用于维生素适用于维生素A醇醇（等吸收比法）（等吸收比法）第一法无法消除杂质干扰时用此法第一法无法消除杂质干扰时用此法 皂化法、皂化法、6/7A法法（3）第二法）第二法第40页，共128页。i/KOHAnm334325310300ml/IU159VitAVitAS处测处测、于于稀释至

16、稀释至溶解溶解异丙醇异丙醇除去植物油的干扰除去植物油的干扰甘油和脂肪酸盐甘油和脂肪酸盐植物油植物油醇醇醋酸酯醋酸酯皂化液皂化液挥干乙醚挥干乙醚乙醚提取乙醚提取乙醇乙醇 水溶性水溶性脂溶性脂溶性第41页，共128页。判断判断 max是否在是否在323327nm之间之间取未皂化样品采取未皂化样品采用色谱法纯化后用色谱法纯化后再测定再测定 计算计算325300AA是是否否第42页，共128页。判断判断 A300/A325 是否大于是否大于0.73是是否否取未皂化样品采取未皂化样品采用色谱法纯化后用色谱法纯化后再测定再测定 计算计算A325(校正校正)第43页，共128页。%100AAAf325325

17、)(325 校正校正 334310325325260455528156A.A.A.A 校校正正第44页，共128页。03%3%校校正正325A325A 校校正正325A第45页，共128页。三氯化锑比色法三氯化锑比色法（二）（二）优点优点 简便简便 快速快速max 618nm620nm标准曲线法标准曲线法 SbOClSbClOH32缺点缺点呈色不稳定呈色不稳定（5 10s内）内）水分干扰水分干扰与标准曲线温差与标准曲线温差1专属性差专属性差三氯化锑有腐蚀性三氯化锑有腐蚀性（二）（二）蓝色蓝色+3SbClVitA返 回第46页，共128页。第二节第二节 维生素维生素DHOHHCH2CH3HHHC

18、H3CH3CH3CH3维生素维生素D2一、结构与性质一、结构与性质第47页，共128页。HOHHCH2CH3HHCH3CH3CH3维生素维生素D3第48页，共128页。开环的甾体开环的甾体：具有甾类化合物的显色反：具有甾类化合物的显色反应，可用于鉴别。应，可用于鉴别。手性碳原子手性碳原子：具有旋光性，可用于鉴别。：具有旋光性，可用于鉴别。多烯多烯：可进行紫外检测。：可进行紫外检测。第49页，共128页。二、鉴别试验二、鉴别试验1.显色反应显色反应醋酐醋酐-硫酸反应硫酸反应 D2 黄黄 红红 紫紫 绿绿 D3 黄黄 红红 紫、蓝绿紫、蓝绿 绿绿 三氯化锑反应三氯化锑反应 橙红色渐变粉红橙红色渐变

19、粉红三氯化铁反应三氯化铁反应 橙黄色橙黄色二氯丙醇和乙酰氯反应二氯丙醇和乙酰氯反应 绿色绿色第50页，共128页。2.比旋度鉴别比旋度鉴别维生素维生素D D2 2维生素维生素D D3 3溶溶 剂剂 浓浓 度度 比旋度值比旋度值无水乙醇无水乙醇无水乙醇无水乙醇40mg/ml40mg/ml5mg/ml5mg/ml+102.5+102.5+107.5+107.5+105+105+112+112注意事项注意事项：应于容器开启：应于容器开启3030分钟内取样，分钟内取样，在溶液配制后在溶液配制后3030分钟内测定。分钟内测定。第51页，共128页。3.3.区别反应：区别反应：以以96%96%乙醇为溶剂，

20、加乙醇和乙醇为溶剂，加乙醇和85%85%硫酸，硫酸，D D2 2显红色，在显红色，在570nm570nm处有最大吸收，处有最大吸收，D D3 3显黄色，显黄色，在在495nm495nm处有最大吸收。处有最大吸收。4.4.其他方法其他方法：TLCTLC、HPLCHPLC、制备衍生物测熔点、制备衍生物测熔点第52页，共128页。三、杂质检查三、杂质检查维生素维生素D D2 2中麦角甾醇的检查中麦角甾醇的检查：加洋地：加洋地黄皂苷溶液，混合，放置黄皂苷溶液，混合，放置18h18h不得发生不得发生浑浊或沉淀。浑浊或沉淀。前维生素前维生素D D的光照产物的光照产物第53页，共128页。四、含量测定方法四

21、、含量测定方法 中国药典（中国药典（20002000年版）采用年版）采用正相高效液相色谱法正相高效液相色谱法测定维测定维生素生素D D的含量，定量方法为内标法，内标物为邻苯二甲酸的含量，定量方法为内标法，内标物为邻苯二甲酸二甲酯，该法分为二甲酯，该法分为三个方法三个方法。固定相：硅胶固定相：硅胶流动相：正己烷流动相：正己烷-正戊醇（正戊醇（997997：3 3）第54页，共128页。第一法第一法：用于无维生素：用于无维生素A A醇及其它杂质的干扰的情况，步骤如醇及其它杂质的干扰的情况，步骤如下：下：1 1系统适用性试验：测定重复性和分离度。系统适用性试验：测定重复性和分离度。Vit D3对 照

22、 品前 Vit D3反 式 Vit DVit D3速 甾 醇 DVit D3重 复 性前 Vit D3与 反 式 Vit D3Vit D3与 速 甾 醇 D3901h254nm365nmHPLC冷 却 环 己 烷R大 于 1.0RSD小 于 2.0%峰：峰峰33第55页，共128页。2 2测定校正因子：测定校正因子：A A S S/m/m S S f f1 1=-=-A A r r/m/m r r f f2 2=（A A S S m m r r-f-f1 1 m m S S A A r1r1）/（A A r1 r1 m m S S）3 3含量测定：含量测定：m mi i=（f f1 1 A A

23、i1i1+f+f 2 2 A A i2i2）m m S S/A /A S S第56页，共128页。第二法第二法：用于有杂质的干扰的情况，步骤如下：用于有杂质的干扰的情况，步骤如下：1 1皂化处理：皂化、乙醚提取、洗涤提取液、蒸除乙皂化处理：皂化、乙醚提取、洗涤提取液、蒸除乙 醚、制备供试液醚、制备供试液A A。2 2净化：供试液净化：供试液A A经液相色谱分离，准确收集含有维经液相色谱分离，准确收集含有维 生素生素D D及前维生素及前维生素D D混合物的全部流出液，制混合物的全部流出液，制 备成供试液备成供试液B B。固定相：固定相：ODSODS 流动相：甲醇流动相：甲醇-乙腈乙腈-水（水（5

24、050：5050：2 2）3 3含量测定：取供试液含量测定：取供试液B B按第一法测定。按第一法测定。第57页，共128页。第三法第三法：用于经第二法处理后仍有杂质的干扰的情况。步骤如：用于经第二法处理后仍有杂质的干扰的情况。步骤如下：下：1 1制备供试液：取供试液制备供试液：取供试液A A，净化，水浴加热，得供，净化，水浴加热，得供 试液试液C C。制备对照液：对照品储备液：稀释、加热。制备对照液：对照品储备液：稀释、加热。2 2含量测定：在第一法的色谱条件下，交替精密进样含量测定：在第一法的色谱条件下，交替精密进样 对照液和供试液，按外标法定量。对照液和供试液，按外标法定量。返 回第58页

25、，共128页。苯并二氢吡喃醇苯并二氢吡喃醇第三节第三节 维生素维生素EOHO 第59页，共128页。OR1HOR2CH3名名 称称R1R2相对活性相对活性-生育酚生育酚-生育酚生育酚-生育酚生育酚-生育酚生育酚CH3CH3HHCH3HCH3H1.00.50.20.1*第60页，共128页。CH3COOCH3CH3CH3CH3CH3CH3H3CH3COdl生育酚醋酸酯生育酚醋酸酯第61页，共128页。结构与性质结构与性质一、一、苯环苯环+二氢吡喃环二氢吡喃环+饱和烃链饱和烃链1、UV2、乙酰化的酚羟基、乙酰化的酚羟基 易水解易水解緘緘緘緘緘緘瑌瑌O醌型化合物醌型化合物生育酚生育酚緘緘緘緘緘緘緘緘

26、畗畗緘緘+or OHHVitE杂质，需检查杂质，需检查第62页，共128页。緘緘O生育红生育红（一）（一）硝酸反应硝酸反应橙红色橙红色鉴别鉴别二、二、7515緘緘緘緘緘緘畗畗緘緘HNO3VitE生育酚生育酚第63页，共128页。OOCH3C16H33H3CCH3O（橙红色）（橙红色）生育红生育红CH3HOOCH3C16H33CH3H3C生育酚生育酚HNO3强氧化剂强氧化剂第64页，共128页。三氯化铁联吡啶反应三氯化铁联吡啶反应（二）（二）OCH3CH3CH3CH3CH3-COOC16H33KOHHOOCH3CH3CH3CH3C16H33第65页，共128页。OOH3CCH3OHCH3C16H

27、33CH3CH3HOOCH3C16H33CH3H3C生育酚生育酚对对-生育醌生育醌+3FeO弱氧化剂弱氧化剂第66页，共128页。血红色血红色+23Fe3+2FeNNNN第67页，共128页。=41.045.5%cmE11max=284nmmin=254nm0.01%无水乙醇中无水乙醇中UV法法（三）（三）第68页，共128页。薄层板薄层板 硅胶硅胶G展开剂展开剂 环己烷环己烷-乙醚（乙醚（4 ：1）显色剂显色剂 硫酸（硫酸（105 5）VitE Rf =0.7-生育酚生育酚 Rf =0.5-生育醌生育醌 Rf =0.9TLC法法（四）（四）第69页，共128页。2.游离生育酚游离生育酚 生生

28、育育醌醌对对生生育育酚酚+3422CeCe 杂质检查杂质检查 三、三、原理原理 酸度酸度 以以NaOHNaOH滴定液（滴定液（0.1mol/L0.1mol/L）体积控制。）体积控制。第70页，共128页。nCMT （M生育酚生育酚=430.8）（ml/mg154.228.43001.0T 例例 取本品取本品0.10g，加无水乙醇，加无水乙醇5ml溶溶解后，加二苯胺试液解后，加二苯胺试液1滴，用硫酸铈液滴，用硫酸铈液（0.01mol/L）滴定，消耗硫酸铈液）滴定，消耗硫酸铈液（0.01mol/L）不得过）不得过 1.0ml。第71页，共128页。%100WTV%限限量量2.15%15.2%100

29、1.0002154.00.1%限量限量限量限量第72页，共128页。四、四、含量测定含量测定GC法（法定方法）法（法定方法）（一）（一）1、选择性好选择性好灵敏度高灵敏度高速度快速度快分离效能好分离效能好挥发性低、不稳挥发性低、不稳定、极性强定、极性强衍衍生化易受样品蒸生化易受样品蒸气压限制气压限制第73页，共128页。载气载气N2固定液固定液硅酮（硅酮（OV-17）担体担体硅藻土或高分子多孔小球硅藻土或高分子多孔小球柱温柱温265检测器检测器氢火焰离子化检测器氢火焰离子化检测器(FID)内标内标正三十二烷正三十二烷 n 500 R2VitE测定的色谱条件测定的色谱条件2、内标法加校正因子内标

30、法加校正因子第74页，共128页。内标法内标法供试液（样品供试液（样品+内标）内标）内标物内标物对照液（对照对照液（对照+内标）内标）是样品中不存在的物质是样品中不存在的物质与被测组分峰靠近与被测组分峰靠近能与各组分完全分离能与各组分完全分离与被测组分的量接近与被测组分的量接近第75页，共128页。对对样样内内对对内内样样样样样样内内内内对对对对内内内内相对相对WWAAAAWAWAWAWAf 校正因子：校正因子：第76页，共128页。1KAA 内内对对2KAA 内内样样WWKK%VitE%10012 稀释倍数稀释倍数稀释倍数稀释倍数样样对对实际工作中的计算方法实际工作中的计算方法第77页，共1

31、28页。（二）（二）HPLC法法 外标法外标法 此外，还有铈量法、比色此外，还有铈量法、比色法和荧光法法和荧光法返 回第78页，共128页。NSCH3CH2CH2OHNNH3CNH2CH2+第四节第四节 维生素维生素B1HClCl-第79页，共128页。（一）（一）溶解性溶解性1、易溶于水、易溶于水2、水溶液呈酸性、水溶液呈酸性（二）（二）UV共轭双键共轭双键max=246nm结构与性质结构与性质一、一、第80页，共128页。与生物碱与生物碱 蓝色荧光蓝色荧光硫色素硫色素正丁醇正丁醇 OOH（三）（三）硫色素反应硫色素反应（四）（四）嘧啶环嘧啶环 噻唑环噻唑环 （五）盐酸根（五）盐酸根 呈氯化

32、物的反应，用于鉴别。呈氯化物的反应，用于鉴别。第81页，共128页。荧荧光光消消失失蓝蓝色色荧荧光光硫硫色色素素正正丁丁醇醇）（环环合合 +HCNFeKOHNaOHVitB6321O OHChP鉴别试验鉴别试验二、二、（一）（一）硫色素反应硫色素反应第82页，共128页。CH2NNH3CNH2CH3NNaSC2H4OHONNH3CNH2HClNSCH3C2H4OHCH2NaOHNNH3CNNNaSCH3C2H4OH-H2O第83页，共128页。硫色素硫色素SCH3C2H4OHNNH3CNNH 环合环合NNH3CNNSCH3C2H4OH H22H第84页，共128页。VitB1 4242HgIH

33、BHgIK 淡淡黄黄H+2KIIIHIB2 红红色色H+白白色色硅硅钨钨酸酸 H+OH4WO12OHSiOB23222 白白色色扇扇形形苦苦酮酮酸酸 H+（二）（二）沉淀反应沉淀反应第85页，共128页。OHNHAgNOAgCl白白3HNO HNO蓝蓝淀淀粉粉试试纸纸 KIMnOCl+H S元素反应元素反应Cl-反应反应（三）（三）其他反应其他反应 瘆瘆緘緘緘緘緘緘緘緘緘緘 1 1PbSNaSVitBNO3PbNaOH 第86页，共128页。三、三、含量测定含量测定 +HClOClOBHClOHClClBAcHg）（喹那啶红亚甲蓝（紫红喹那啶红亚甲蓝（紫红天蓝）天蓝）（一）（一）非水溶液滴定法

34、非水溶液滴定法第87页，共128页。ml/mg.nMcT861622733710 反应摩尔比为反应摩尔比为1：2第88页，共128页。UV法法（二）（二）第89页，共128页。片剂、注射剂片剂、注射剂=421%cmE11（每片）相当于标示量的（每片）相当于标示量的%=A=ECL规格规格g/片片g/100mlgChPWEA%cmD10011磢磢%100标示量标示量平均片重平均片重第90页，共128页。（每（每ml）相当于标示量的）相当于标示量的%=规格规格g/mlml%VEA%cm100110011磢磢磢磢磢磢标示量标示量稀释倍数稀释倍数第91页，共128页。畗畗（三）（三）硫色素荧光法硫色素荧

35、光法1、荧光荧光硫色素硫色素异丁醇异丁醇铁氰化钾铁氰化钾緘緘緘緘 畗畗緘緘緘緘緘緘緘緘畗畗1 1VitBNaOH第92页，共128页。2、（1）灵敏度高，线性范围宽）灵敏度高，线性范围宽（2）代谢产物不干扰，适用于）代谢产物不干扰，适用于 体液分析体液分析第93页，共128页。第五节第五节 维生素维生素C654321OOHHOO C OHHCH2OHL抗坏血酸抗坏血酸第94页，共128页。1、易溶于水、易溶于水2、水溶液呈酸性、水溶液呈酸性结构与性质结构与性质一、一、（一）（一）溶解性溶解性第95页，共128页。O二烯醇结构二烯醇结构二酮基结构二酮基结构二烯醇结构二烯醇结构（二）（二）还原性还

36、原性OHOHCCOOCC第96页，共128页。CH2OHOOOO C OHHCH2OHCHHOCHOHCOCOCOONa HH+OH-有活性有活性有活性有活性无活性无活性OHOO C OHHCH2OHHOO第97页，共128页。显显色色糠糠醛醛衍衍生生物物糠糠醛醛酚酚类类脱脱水水 +H糖类的显色反应糖类的显色反应蓝蓝色色糠糠醛醛吡吡咯咯脱脱水水 +HVitC50结构与糖类相似结构与糖类相似（三）（三）具糖的性质具糖的性质第98页，共128页。OOHHOO C OHHCH2OH123456C3OH的的pKa=4.17C2OH的的pKa=11.57酸性酸性（四）（四）一元酸一元酸第99页，共128

37、页。OOHHOO C OHHCH2OH123456L(+)抗坏血酸抗坏血酸活性最强活性最强手性手性C（C4、C5）（五）（五）光学活性光学活性*第100页，共128页。与碱反应与碱反应单钠盐单钠盐32CONa酮酮酸酸盐盐水水解解 NaOH（六）（六）水解性水解性第101页，共128页。OHOO C OHHCH2OHHOOHOO C OHHCH2OHNaOCOONaOCOCCHOHHOCHCH2OHNa2CO3NaOH第102页，共128页。与氧化剂的反应与氧化剂的反应（一）（一）鉴别试验鉴别试验二、二、OHOO C OHHCH2OHHOCH2OHOOOO C OHH O去氢抗坏血酸去氢抗坏血酸

38、緘緘緘緘畗畗緘緘OVitC第103页，共128页。（银镜）（银镜）黑黑 AgAgNOVitC1、与、与AgNO3反应反应2、与、与2，6-二氯靛酚反应二氯靛酚反应(ChP2000)无无色色二二氯氯靛靛酚酚，VitC62氧化型氧化型玫瑰红色玫瑰红色+H还原型还原型蓝色蓝色 OHOH(ChP2000)第104页，共128页。NClHOClONClHOClOHH（玫瑰色）玫瑰色）（无色）（无色）第105页，共128页。3.3.其他氧化剂的反应其他氧化剂的反应：亚甲蓝或高锰酸钾亚甲蓝或高锰酸钾 试剂褪色试剂褪色碱性酒石酸铜碱性酒石酸铜 砖红色沉淀砖红色沉淀磷钼酸磷钼酸 钼蓝钼蓝第106页，共128页。

39、糖类的反应糖类的反应（二）（二）蓝蓝色色糠糠醛醛戊戊糖糖脱脱水水三三氯氯醋醋酸酸 VitC或盐酸或盐酸50吡咯吡咯USP第107页，共128页。OO C OHHCH2OHHOOHCH2OHOO C OHHHHOOCCOHO OCHOH3CH2OHH2O第108页，共128页。-CO2-H2OOCHN（蓝色）（蓝色）OCHO(糠醛糠醛)OCHOH3CH2OHCH（戊糖）（戊糖）NNH50(吡咯吡咯)第109页，共128页。UV（三）（三）BP0.01mol/L HClnmmax243 58554511E%cm 第110页，共128页。1.1.溶液的澄清度与颜色：有色杂质溶液的澄清度与颜色：有色杂

40、质 分光光度法分光光度法2.2.铁、铜离子：原子吸收分光光度法铁、铜离子：原子吸收分光光度法第111页，共128页。+IIVitCH去去氢氢抗抗坏坏血血酸酸2指示剂指示剂 淀粉指示液淀粉指示液原理原理1、碘量法碘量法（一）（一）含量测定含量测定四、四、第112页，共128页。OO C OHHOOCH2OHHI2+OHOO C OHHCH2OHHOH+I第113页，共128页。取本品约取本品约0.2g，精密称定，加新，精密称定，加新沸过的冷水沸过的冷水100ml与稀醋酸与稀醋酸10ml使溶使溶解，加淀粉指示液解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴，立即用碘滴定液（定液（0.1mol/L）滴定，至溶液

41、显蓝）滴定，至溶液显蓝色，在色，在30秒内不褪。每秒内不褪。每1ml碘滴定液碘滴定液(0.1mol/L)相当于相当于8.806mg的的C6H8O6方法方法2、第114页，共128页。（1）酸性环境）酸性环境 d.HCl （2）新沸冷）新沸冷H2O减慢减慢VitC被被O2氧化速度氧化速度讨论讨论3、（3）立即滴定）立即滴定 赶走水中赶走水中O2减少减少O2的干扰的干扰第115页，共128页。（4）附加剂干扰的排除）附加剂干扰的排除片剂片剂 滑石粉滑石粉 过滤过滤注射剂注射剂 抗氧剂抗氧剂 丙酮丙酮甲醛甲醛Na2SO3 NaHSO3 Na2S2O3 Na2S2O5 第116页，共128页。CHHO

42、OaS3a S O+H2N H ON2252HO NH COS3a33COCHCH33CHCHCNaSO3OH33CHCHCNaSO3OH第117页，共128页。2，6-二氯靛酚钠滴定法法二氯靛酚钠滴定法法（二）（二）USPJP原理原理1、酚亚胺酚亚胺二氯靛酚二氯靛酚緘緘緘緘 畗畗，-6 62 2VitCVitC第118页，共128页。空空样样二氯靛酚液二氯靛酚液空白空白样品样品VVHAcHPO 3自身指示终点法自身指示终点法蓝蓝色色玫玫瑰瑰红红 +OHH无无色色还还原原 方法方法2、第119页，共128页。（2）快速滴定）快速滴定 2min内内 （1）酸性环境）酸性环境 HPO3-HAc 稳

43、定稳定VitC防止其他还原性物质干扰防止其他还原性物质干扰（3）剩余比色测定）剩余比色测定 AVitC测测二二氯氯靛靛酚酚（定量过量）（定量过量）（测剩余染料）（测剩余染料）讨论讨论3、第120页，共128页。（4）缺点）缺点 需经常标定需经常标定贮存贮存一周一周不稳定不稳定干扰多干扰多 氧化力较强氧化力较强第121页，共128页。公元前公元前35003500年年-古埃及人发现能防治夜盲症的物质，也就是后来古埃及人发现能防治夜盲症的物质，也就是后来 的维的维A A。16001600年年-医生鼓励以多吃动物肝脏来治夜盲症。医生鼓励以多吃动物肝脏来治夜盲症。17471747年年-苏格兰医生林德发现

44、柠檬能治坏血病，也就是后来的维苏格兰医生林德发现柠檬能治坏血病，也就是后来的维C C。18311831年年-胡萝卜素被发现。胡萝卜素被发现。19051905年年-甲状腺肿大被碘治愈。甲状腺肿大被碘治愈。19111911年年-波兰化学家丰克为维生素命名。波兰化学家丰克为维生素命名。19151915年年-科学家认为糙皮病是由于缺乏某种维生素而造成的科学家认为糙皮病是由于缺乏某种维生素而造成的19161916年年-维生素维生素B B被分离出来。被分离出来。19171917年年-英国医生发现鱼肝油可治愈佝偻病，随后断定这种病是英国医生发现鱼肝油可治愈佝偻病，随后断定这种病是 缺乏维缺乏维D D引起的。

45、引起的。维生素发展史维生素发展史第122页，共128页。19201920年年-发现人体可将胡萝卜转化为维生素发现人体可将胡萝卜转化为维生素A A。19221922年年-维维E E被发现。被发现。19281928年年-科学家发现维科学家发现维B B至少有两种类型。至少有两种类型。19331933年年-维维E E首次用于治疗。首次用于治疗。19481948年年-大剂量维大剂量维C C用于治疗炎症。用于治疗炎症。19491949年年-维维B3B3与维与维C C用于治疗精神分裂症。用于治疗精神分裂症。19541954年年-自由基与人体老化的关系被揭开。自由基与人体老化的关系被揭开。19571957年年

46、-Q10-Q10多酶被发现。多酶被发现。19691969年年-体内超级抗氧化酶被发现。体内超级抗氧化酶被发现。19701970年年-维维C C被用于治疗感冒。被用于治疗感冒。19931993年年-哈佛大学发表维生素哈佛大学发表维生素E E与心脏病关系的研究结果。与心脏病关系的研究结果。返 回第123页，共128页。练习与思考练习与思考AA型题型题 1.1.维生素维生素B B1 1的鉴别方法是的鉴别方法是A.A.三氯化铁反应三氯化铁反应 B.B.硫色素反应硫色素反应 C.C.柯柏反应柯柏反应 D.D.与碱性酒石酸铜试液反应与碱性酒石酸铜试液反应 E.E.双缩脲反应双缩脲反应第124页，共128页

47、。2.2.维生素维生素E E中国药典中国药典规定的含量规定的含量 测定方法为测定方法为A.A.非水溶液滴定法非水溶液滴定法 B.B.旋光法旋光法 C.HPLCC.HPLC法法 D.D.紫外分光法紫外分光法 E.GCE.GC法法第125页，共128页。BB型题型题 A A。亚消基铁氰化钠反应。亚消基铁氰化钠反应 B.B.硫色素反应硫色素反应 C.C.硝酸反应硝酸反应 D.D.三氯化锑反应三氯化锑反应 E.E.硝酸银试液的反应硝酸银试液的反应 1.1.维生素维生素C C 2.2.维生素维生素E E 3.3.维生素维生素B B1 1 4.4.维生素维生素A AECBD第126页，共128页。XX型题型题 1.1.用碘量法测定的药物有用碘量法测定的药物有A.A.醋酸地塞米松醋酸地塞米松 B.B.丙酸睾酮丙酸睾酮 C.C.维生素维生素C C D.D.硫酸阿托品硫酸阿托品 E.E.维生素维生素C C注射液注射液第127页，共128页。返 回2.2.可用紫外分光光度法测定含量的可用紫外分光光度法测定含量的 药物有药物有A.A.维生素维生素A A丸剂丸剂 B.B.丙酸睾酮丙酸睾酮 C.C.维生素维生素A A D.D.硫酸阿托品硫酸阿托品 E.E.维生素维生素B B1 1片片第128页，共128页。