第十五章基因重组与基因工程PPT课件.ppt

1、第十五章 基因重组与基因工程 思路思路：定义定义 基因重组基因重组 意义意义 （自然）（自然）方式：接合、转化、转导、转座方式：接合、转化、转导、转座 基因重组基因重组 类型类型 定义定义 基因工程基因工程 意义意义 （人工）（人工）基本要素基本要素 原理原理 临床临床第一节 自然界的基因转移和重组 一、定义：基因重组：指细胞基因组中DNA顺序重新 排列组合的现象。二、意义：基因变种、物种演变、进化的基础 三、方式：接合 转化 转导 转座 1 1接合接合:指指供体供体细胞（细菌）和细胞（细菌）和受体受体细胞（细菌）细胞（细菌）接触接触，使，使DNADNA从一个细胞从一个细胞转移转移到另一个细胞

2、到另一个细胞 的过程。的过程。.例例:较大质粒在细菌间的转移较大质粒在细菌间的转移 2 2转化转化：指：指外源外源DNADNA被被引入引入细胞，导致其遗传和生细胞，导致其遗传和生 物性状改变的过程。物性状改变的过程。方式：自动获取外源方式：自动获取外源DNA DNA 基因重组（自然）基因重组（自然）人为供给外源人为供给外源DNA DNA 基因工程基因工程 例：例：细菌抗药性细菌抗药性 3 3转导转导：以病毒为：以病毒为媒介媒介、将、将供体供体菌的菌的DNADNA片段转移到片段转移到 受体受体菌基因组的过程。菌基因组的过程。例例：噬菌体感染宿主菌：噬菌体感染宿主菌 4转座：指可移动的DNA序列（

3、游动基因）从基因组的 一处移动到另一处 的过程。游动基因 介导形式 保守性转座 复制性转座 种类 插入序列 转座子 a.插入序列：转座酶基因反向重复序列 b.转座子 定义：可从染色体一个位点转移到 另一位点的分散的重复序列。结构：插入序列特殊序列（e.g:抗性基因）四、类型四、类型1.位点特异重组:由整合酶催化，在两个DNA 序列的特异位点间发生的整合。2.同源重组(基本重组)定义：发生在同源序列间的重组。(依赖DNA间同源性，不是特异性)机制：a.产生中间体 b.分解中间体第二节第二节 基因工程（重组基因工程（重组DNADNA技术技术）一、一、定义定义：指在体外用：指在体外用人工人工（酶学）

4、的方法，（酶学）的方法，将将目的基因目的基因与与载体载体DNADNA重组重组，并把并把重组体重组体DNADNA导入宿主导入宿主细胞，细胞，使使目的基因扩增目的基因扩增和和表达表达的技术。的技术。也称：重组也称：重组DNADNA、重组、重组DNADNA工艺学、工艺学、DNADNA克隆、基因克隆、重组克隆、基因克隆、重组DNADNA技术。技术。克隆（克隆（cloneclone）：指由）：指由同一同一个始祖经过个始祖经过无性繁无性繁 殖殖所形成的所形成的副本副本或或拷贝集合拷贝集合。克隆化克隆化 ：获得同一拷贝的过程。：获得同一拷贝的过程。二、意义二、意义 扩增基因、生产蛋白、创造新种扩增基因、生产

5、蛋白、创造新种三、基本要素三、基本要素 酶酶 目的基因目的基因 载体基因载体基因 宿主宿主 （一）、工具酶 限制性核酸内切酶 定义：识别DNA的特异序列,并在识别 位点或其周围切割DNA双链的 一类内切酶.分类：I、II（常用）、III类 命名 II类酶 特点 识别点是DNA回文结构 切割方式 粘性末端 5粘端 3粘端 平头末端 配伍末端配伍末端 识别点不同，识别点不同，末端相同末端相同（二）、目的基因（二）、目的基因 定义定义：是指所要研究或应用的基因。：是指所要研究或应用的基因。类型：类型：cDNAcDNA（互补互补DNADNA）基因组基因组DNADNA 来源来源:化学合成化学合成 （人工

6、合成）（人工合成）基因组基因组DNADNA文库文库 (全部基因组全部基因组DNADNA的集合的集合)cDNA cDNA文库文库 (含全部含全部mRNAmRNA信息信息)PCR PCR （聚合酶链反应聚合酶链反应）PCRPCR:指在反应体系中指在反应体系中加入加入模板、模板、dNTPdNTP、引物、引物、DDRPDDRP和缓冲液；经多次（和缓冲液；经多次（25-3025-30）变性、退火、延伸变性、退火、延伸循环反应循环反应；使；使目目基因扩增基因扩增（指数增长）的过程。（指数增长）的过程。（三（三)基因载体基因载体 定义定义：为：为携带目的基因携带目的基因、实现无性繁殖或表达、实现无性繁殖或表

7、达 成有意义的蛋白质而采用的成有意义的蛋白质而采用的DNADNA分子。分子。作作 用：用：携带携带目的基因目的基因进入受体进入受体细胞。细胞。特征特征：常用：常用：质粒质粒DNA:DNA:pBR323pBR323 噬菌体噬菌体DNADNA:pUC19pUC19 粘粒粘粒 病毒病毒DNADNA YAC(YAC(酵母人工染色体载体酵母人工染色体载体 )四、基本原理四、基本原理 过程过程:分、选（切）、接、转、筛、表分、选（切）、接、转、筛、表。1 1分离分离目的基因。（目的基因。（目的基因的获取目的基因的获取）2 2选择选择与构建与构建基因载体基因载体。(切割切割目的基因和载体基因，便于连接。）目

8、的基因和载体基因，便于连接。）3 3连接连接目的目的基因与载体基因与载体。4 4重组重组DNADNA转入转入受体菌（受体菌（细胞细胞）。）。5 5筛选筛选重组体。（含目的基因的重组体。（含目的基因的受体菌或细胞受体菌或细胞）。）。6 6目的基因目的基因的的表达表达。e.ge.g:质粒为载体进行质粒为载体进行DNADNA克隆克隆（一）、（一）、目的基因的获取目的基因的获取 途经途经 1.1.化学合成法。化学合成法。DNADNA合成仪合成仪 2.2.基因组基因组DNADNA文库文库中筛选。中筛选。限制性内切酶限制性内切酶 3.3.cDNAcDNA文库文库中筛选。中筛选。用于分离编码蛋白的基因用于分

9、离编码蛋白的基因 4.PCR4.PCR dNTP dNTP 目的基因目的基因 酶、引物、模板酶、引物、模板（二）、（二）、克隆载体的选择和构建克隆载体的选择和构建 a.a.常用载体：质粒、噬菌体、病毒常用载体：质粒、噬菌体、病毒DNADNA。b.b.目的基因离开染色体不能复制，目的基因离开染色体不能复制，需在载体需在载体 (染色体）才能复制。染色体）才能复制。c.c.根据操作基因的性质、目的根据操作基因的性质、目的 对载体和目的基因进行切割。对载体和目的基因进行切割。（三）、外（三）、外源基因与载体的连接源基因与载体的连接 原理：原理：目的基因目的基因+载体载体 重组重组DNADNA分子分子

10、DNADNA连接酶连接酶 方式：方式：粘性末端粘性末端 自然自然 同一酶同一酶切点的连接切点的连接 （主主）不同酶切点的连接不同酶切点的连接 人工人工 同聚物加尾连接同聚物加尾连接 人工接头连接人工接头连接 平头连接平头连接 相同或不同酶切后连接相同或不同酶切后连接（四）、重组体（四）、重组体DNA导入受体菌导入受体菌 方式：方式：转化转化 转染转染 感染感染 受体菌条件：安全宿主菌受体菌条件：安全宿主菌 限制酶和重组酶缺陷限制酶和重组酶缺陷处于感受态处于感受态 过程：无性繁殖。过程：无性繁殖。重组重组DNA导入受体菌，随受体菌生长、导入受体菌，随受体菌生长、繁殖，重组繁殖，重组DNA分子得以

11、复制、分子得以复制、扩增的扩增的 过程。过程。（五）、（五）、重组体的筛选重组体的筛选 筛选筛选（选择）：将培养基中众多的转化（选择）：将培养基中众多的转化 菌落（菌斑）菌落（菌斑）分开分开，并，并鉴定鉴定 出带有出带有目的基因目的基因的菌落的过程。的菌落的过程。方法：方法：直接法直接法 抗药性标志抗药性标志选择选择 标志补救标志补救 分子分子杂交法杂交法 非直接法非直接法 免疫化学法免疫化学法 酶联免疫检测法酶联免疫检测法（六）、克隆基因（六）、克隆基因的表达的表达 重组重组DNADNA技术目的技术目的 ：获得大量获得大量目的基因目的基因 基本目的基本目的 目的基因表达（目的基因表达（蛋白质

12、表达蛋白质表达）医药应用医药应用 蛋白表达体系蛋白表达体系 表达载体的构建表达载体的构建 受体细胞的建立受体细胞的建立 表达产物的分离、纯化表达产物的分离、纯化 意义：合成有药用价值的蛋白或多肽意义：合成有药用价值的蛋白或多肽 方式：方式：原核原核表达体系表达体系 真核真核表达体系表达体系五、临床五、临床 1.诊断 a.DNA诊断 b.DNA诊断的应用 产前诊断 携带者诊断 症状前诊断 预防 易感性诊断 器官移植组织配型 法医 2.治疗 a.DNA治疗（基因治疗）e.g:间接体内体细胞基因治疗（ex vivo）b.生物制药基本程序 1.选择治疗性基因（目的基因）2.选择基因载体 3.选择靶细胞

13、（受体细胞）4.基因转移（外源基因导入受体细胞）。间接方式 病毒载体 5.筛选外源基因（利用标记物）6.回输体内（以不同方式回输获得 治疗性基因修饰后的细胞）一、接合作用（一、接合作用（conjugation)当细胞与细胞、或细菌通过菌毛相互接当细胞与细胞、或细菌通过菌毛相互接触时，质粒触时，质粒DNA从一个细胞（细菌）转移至从一个细胞（细菌）转移至另一细胞（细菌）的另一细胞（细菌）的DNA转移称为接合作用。转移称为接合作用。二、转化作用（二、转化作用（transformation)通过自动获取或人为地供给外源通过自动获取或人为地供给外源DNADNA，使细胞或培养的受体细胞获得新的遗传表型。使

14、细胞或培养的受体细胞获得新的遗传表型。分离DNA SH 型肺炎双球菌 RH 型肺炎双球菌三、三、转导作用（转导作用（transduction)当病毒从被感染的细胞（供体）当病毒从被感染的细胞（供体）释放出来，再次感染另一细胞（受体）释放出来，再次感染另一细胞（受体）时，发生在供体细胞与受体细胞之间时，发生在供体细胞与受体细胞之间的的DNADNA转移及基因重组。转移及基因重组。溶溶 菌菌感感 染染重重 组组感感 染染细细 菌菌噬菌噬菌体体图图 15-3 转导作用转导作用转导：通过病毒介导发生在供体细胞与受体细胞转导：通过病毒介导发生在供体细胞与受体细胞 之间的之间的DNA转移及基因重组转移及基因

15、重组插入序列转座插入序列转座插入序列（插入序列（insertion sequences，IS）：）：长长750 1500bp组成：组成：反向重复序列：反向重复序列：941bp，位于两侧，位于两侧转座酶编码基因：产物引起转座，位于中间转座酶编码基因：产物引起转座，位于中间正向重复序列：正向重复序列：412bp，位于反向重复序列，位于反向重复序列外侧，为插入序列所特有外侧，为插入序列所特有转座酶基因转座：转座：1.1.保守性转座保守性转座从从原位原位迁至迁至新位新位2.2.复制性转座复制性转座插入序列复制后，一个插入序列复制后，一个复制本复制本迁到迁到 新位新位，另一个保留在原位。，另一个保留在原

16、位。保守性复制保守性复制插入序列插入序列+反向重复序列反向重复序列+靶位点靶位点内切酶裂解内切酶裂解(转座酶转座酶)切端形成新的磷酸切端形成新的磷酸二酯键二酯键(转座酶转座酶)新新 DNA(poly I)合成合成与连接与连接(转座酶转座酶)位点特异的位点特异的重组重组(转座酶转座酶)老定位老定位新定位新定位图图 15-4 插入序列的插入序列的复制性转座复制性转座33553535 转座子转座转座子转座转座子（转座子（transposons）：）：可从一个染色体可从一个染色体位点转移到另一位点的分散重复序列。位点转移到另一位点的分散重复序列。反向重复序列反向重复序列组成组成 转座酶基因转座酶基因特

17、殊基因：如抗生素抗性基因等特殊基因：如抗生素抗性基因等转座酶基因特殊基因353335555555333333555553333333555555555555333333内切酶内切酶recBCDDNA侵扰侵扰recA 分支迁移分支迁移recA内切酶内切酶recBCDDNA连接酶连接酶Holliday中间体中间体机制机制3333333333333333333355555555555555Holliday中间体中间体内切酶内切酶 ruvC内切酶内切酶 ruvCDNA连接酶连接酶DNA连接酶连接酶图图15-6 同源重组机制同源重组机制 (1)5 A B 3 (8)A 3 5 B 3 5 5 a b 3

18、 两 臂 旋 转 联 会 (2)5 A B 3 b 3 5 a 3 5 5 a b 3 (9)A 酶 切 B (3)5 A B 3 3 5 b 3 5 a 5 a b 3 游 离 端 移 动 联 会 (4)5 A B 3 (1 0)A A 3 5 B B 3 5 5 a b 3 游 离 端 交 叉 连 接 b b (5)5 A B 3 a a 3 5 3 5 (11)A B A b 5 a b 3 形 成 单 链 交 叉 a b a B (6)5 A B 3 3 5 3 5 A B A b 5 a b 3 分 支 点 移 动 (7)A a b a B B a b 图 2 3 8 H o lid

19、 ay 重 组 模 型。Holliday中间体中间体工具酶的工具酶的定义定义 工具酶：指工具酶：指能用于能用于DNA和和RNA分子的分子的切割，连接，聚合，反转录切割，连接，聚合，反转录等有关的各等有关的各种酶系统。种酶系统。常常 用用 的的 工工 具具 酶酶工工 具具 酶酶 名名 称称 主主 要要 功功 能能限制性内切核酸酶限制性内切核酸酶 在在DNA分子内部的分子内部的特异性特异性的的restriction endonucleases 碱基序列碱基序列内部内部进行进行切割切割DNA连接酶连接酶 将两条以上的线性将两条以上的线性DNA分子或片段分子或片段DNA ligase 催化形成磷酸二酯

20、键催化形成磷酸二酯键连接连接成一个整体成一个整体DNA聚合酶聚合酶I 通过向通过向3端端逐一增加逐一增加核苷酸以核苷酸以填补填补双链双链DNA分子上的单链分子上的单链DNA polymerase I 裂口，即裂口，即53DNA聚合酶活性聚合酶活性与与3535及及53外切酶活外切酶活性性多核苷酸激酶多核苷酸激酶 催化将把催化将把一个磷酸一个磷酸分子分子加到多核苷酸链加到多核苷酸链的的DNA polymerase kinease 5OH末端上末端上反转录酶反转录酶 以以RNA或或DNA链为模板链为模板合成合成互补的互补的cDNA链链reverse transcriptaseDNA末端转移酶末端转移

21、酶 将多聚物将多聚物尾巴尾巴加到了线性双链加到了线性双链DNA terminal Deoxynuc 或单链或单链DNA分子的分子的3OH末端或末端或DNA的的3末端标末端标dNTPleatidy transferase (接下表格接下表格)常常 用用 的的 工工 具具 酶酶 (续上表格续上表格)工工 具具 酶酶 名名 称称 主主 要要 功功 能能碱性磷酸酶碱性磷酸酶 去除去除DNA,RNA,dNTP的的5磷酸基团磷酸基团BAP orCIP核酸外切酶核酸外切酶III 降解降解DNA3OH末端的核苷酸残基末端的核苷酸残基exonuclease III降解酶降解酶S1 降解单链降解单链DNA或或RN

22、A,产生带产生带5磷酸的单核苷酸或磷酸的单核苷酸或nuclease S1 寡聚核苷酸，同时也可切割双链核酸分子的单链区寡聚核苷酸，同时也可切割双链核酸分子的单链区核酸酶核酸酶Bal 31 降解双链降解双链DNA,RNA的的5及及3末端，末端，nuclease Bal31 高专一性单链核苷酸高专一性单链核苷酸Taq DNA 聚合酶聚合酶 能在高温（能在高温（72）下的单链）下的单链DNA为模板，为模板，Taq DNA polymerase 从从53方向合成新生的互补链方向合成新生的互补链核糖核酸酶核糖核酸酶 专一性降解专一性降解RNARNase脱氧核糖核酸酶脱氧核糖核酸酶 内切核酸酶，水解单链或

23、双链内切核酸酶，水解单链或双链DNADNase 限制性核酸内切酶的限制性核酸内切酶的分类分类 按限制性核酸内切酶的按限制性核酸内切酶的分解模式分解模式，分为三类：，分为三类：类型类型I(有识别位点有识别位点,切割长短不一而切割长短不一而 无特异性无特异性)类型类型II(切后切后IIa含含粘性末端粘性末端&IIb为为 平末端平末端)类型类型III(界于界于I&II间间)IIII型酶型酶识别序列特点：识别序列特点：1 1、识别特定序列，识别特定序列，2 2、识别序列识别序列 4 48 bP8 bP。3 3、识别点识别点 DNADNA回文结构。回文结构。5-GGATCC-35-GGATCC-3 3-

24、CCTAGG-5 3-CCTAGG-5限制性内切酶的命名原则 命名原则：命名原则：由分离出酶的由分离出酶的微生物的属名微生物的属名第一第一个字母个字母和和种名种名的的前两个字母前两个字母组成，如组成，如Eco(从从Esherichia coli 大肠杆菌中分离出的酶大肠杆菌中分离出的酶);Hin(从从Haemaphilu influenzae流感嗜血菌中流感嗜血菌中分离出的酶分离出的酶)。微生物的株和型写在其后右下角微生物的株和型写在其后右下角EcoRI 若从某株中分离得数种酶为若从某株中分离得数种酶为HindI.II,III II型限制性内切酶的切割方式三种切割方式：三种切割方式：按切割位点

25、相对于二重对称轴的位置来区分：按切割位点相对于二重对称轴的位置来区分：一种是在对称轴一种是在对称轴5侧切割产生侧切割产生5粘端粘端，5-NGAATTCN-3 EcoRI 5-NG AATTCN-3 3-NCTTAAGN-5 3-NCTTAA GN-5 5粘端粘端 另一种是在对称轴的另一种是在对称轴的3侧切割产生侧切割产生3粘端粘端，5-NCTGCAGN-3 PstI 5-NCTGCA CN-3 3-NGACGTCN-5 3-NG ACGTCN-5 3粘端粘端 第三种切割方式是在对称轴处切割，就产生第三种切割方式是在对称轴处切割，就产生平末端平末端 5-NCCC GGGN-3 SmaI 5-NC

26、CC GGGN-3 3-NGGG CCCN-5 3-NGGG CCCN-5 平端平端+1.cDNA(1.cDNA(complementary DNAcomplementary DNA):):是指经反转录合成的，是指经反转录合成的，与与RNARNA互补的单链互补的单链DNADNA。以单链以单链cDNAcDNA为模板，可合成双链为模板，可合成双链cDNAcDNA。cDNAcDNA文库文库：将：将mRNA mRNA 反转录成反转录成cDNAcDNA，再复制成，再复制成 双链双链cDNAcDNA，并，并与与适当的适当的载体重组载体重组后后 导入宿主导入宿主细胞，这种含有细胞，这种含有整个整个mRNAm

27、RNA 信息的集合。信息的集合。2.2.基因组基因组DNADNA（genomic DNAgenomic DNA）：指代表一个细胞）：指代表一个细胞 或生物体或生物体整套遗传信息整套遗传信息（染色体（染色体 及线粒体）的所有及线粒体）的所有DNADNA序列。序列。基因组文库基因组文库：将某种细胞的：将某种细胞的基因组基因组DNADNA切成一切成一 定大小的片段，并与适当的定大小的片段，并与适当的载体重载体重 组组后后导入宿主导入宿主细胞，这种含有细胞，这种含有整个整个 基因组基因组DNADNA信息信息的的集合集合。载体特征载体特征：1.1.能能自主复制自主复制；拷贝数高；拷贝数高2.2.有有筛选

28、标记筛选标记，（如对抗菌素的抗性，某些基因产物，（如对抗菌素的抗性，某些基因产物 的显色反应等。）便于重组体的筛选和鉴定。的显色反应等。）便于重组体的筛选和鉴定。3.3.有克隆位点（外源有克隆位点（外源DNADNA插入点），插入点），具有具有多个单一多个单一酶切位点，称酶切位点，称多克隆位点多克隆位点4.4.分子量小分子量小，能容纳较大的外源，能容纳较大的外源DNADNA。1.质粒质粒（plasmid）是存在于细菌是存在于细菌染色体外染色体外的的小小型型环状双链环状双链DNADNA分子。大小约为分子。大小约为数数千碱基对。常千碱基对。常有有1 1 3 3个个抗药抗药性性基因，基因，以利于以利于

29、筛筛选。选。质粒质粒pUC192686bpEcoRISaclKpnlSmal XmalBamHlXbalHincllPstlSphlHindlllamprlacllac Zori0447Amlll 806Ppai 1765Ctr10i1 1779Gsul 1784Scal 2177Xmnl 2294Sspl 2501Aatll 26117EcoO 1092674Ndel 183Narl 235Plac图图 15-7 质粒质粒 pUC19396质粒获得质粒获得目的基因目的基因 2.2.噬菌体（噬菌体（phagephage）DNADNA 噬菌体噬菌体DNADNA改造系统改造系统 gt gt 系列（

30、插入型，适用系列（插入型，适用cDNAcDNA克隆）克隆）EMBLEMBL系列（置换型，适用基因组克隆）系列（置换型，适用基因组克隆）M13M13噬菌体噬菌体DNADNA改造系统改造系统（含（含lac Zlac Z基因）基因）M13mpM13mp系列系列 pUCpUC系列系列二、重组二、重组DNADNA技术技术基本原理基本原理 粘性末端连接粘性末端连接GGATCCCCTAGGGGATCCCCTAGGGCCTAGGATCCGGCCTAGGATCCGD DN NA A连连接接酶酶GCCTAGGATCCG 抗药性标记抗药性标记选选择择 （插入失活（插入失活法）：法）：将目的基因插将目的基因插入带入带

31、ampampr r和和tettetr r基因载体的基因载体的tettetr r基因中，则基因中，则tettetr r基因基因失活失活。在分别含有氨在分别含有氨苄青霉素和含四苄青霉素和含四环素的两个培养环素的两个培养基中培养，进行基中培养，进行筛选。筛选。标志补救标志补救：若目的基因若目的基因能够在宿主能够在宿主菌菌表达表达，且，且表达表达 产物产物与宿主菌的与宿主菌的营养缺陷互营养缺陷互补。补。就可利用对就可利用对营养素的依营养素的依赖表型来筛赖表型来筛选选分子杂交分子杂交法：利用法：利用3232P P标记的探针与转移至硝酸纤维素标记的探针与转移至硝酸纤维素 膜上的转化子膜上的转化子DNADN

32、A或克隆的或克隆的DNADNA片段进行分片段进行分 子杂交，直接选择并鉴定目的基因。子杂交，直接选择并鉴定目的基因。原位杂交原位杂交 SouthernSouthern印迹印迹硝酸纤维膜硝酸纤维膜菌落菌落琼脂培养板琼脂培养板硝酸纤维膜硝酸纤维膜复制培养复制培养溶菌、中和溶菌、中和蛋白酶处理蛋白酶处理漂洗、烘干漂洗、烘干 1、32P探针探针 2、放射自显影、放射自显影 鉴定克隆鉴定克隆（含感兴趣（含感兴趣DNA）图图15-10原位杂交原位杂交琼脂糖琼脂糖胶电泳胶电泳1.碱变性碱变性2.Southern印迹印迹3.加热加热80C硝酸纤维素膜硝酸纤维素膜与基因与基因X序列互补的序列互补的32P探针（探

33、针（DNA或或RNA）32P放射自显影放射自显影含基因含基因X的的 片段位置片段位置胶片胶片限制性限制性核酸内切酶核酸内切酶DNA基因基因X。图图 15-11 Southern 印记印记1.原核表达体系原核表达体系E.coli的标准：的标准：选择标志选择标志强启动子强启动子翻译调控序列翻译调控序列多接头克隆位点多接头克隆位点E.coli的不足：的不足：缺乏缺乏转录后加工机制转录后加工机制缺乏缺乏翻译后加工机制翻译后加工机制表达产物形成表达产物形成不溶性不溶性包涵体包涵体很很难表达大量难表达大量可溶性蛋白可溶性蛋白 2.2.真核表达体系真核表达体系如酵母、昆虫及哺乳类动物细胞如酵母、昆虫及哺乳类动物细胞优点：优点：可可表达表达克隆的克隆的cDNAcDNA及真核基因组及真核基因组DNADNA可适当可适当修饰修饰表达的蛋白质表达的蛋白质表达产物表达产物分区分区积累积累缺点：缺点：操作技术操作技术难难、费时、不经济、费时、不经济转染：转染：将表达载体导入真核细胞的过程将表达载体导入真核细胞的过程总结：基因重组基因重组 定义定义 意义意义 类型类型 方式（接合、转化、转导、转座）方式（接合、转化、转导、转座）基因工程基因工程 定义定义 意义意义 基本要素基本要素 原理原理 临床临床