病理组织的取材保存与送检讲义解析课件.ppt

1、病料的采集、保存与送检病料的采集、保存与送检（二）确采集、保存与送检病料的重要性（二）确采集、保存与送检病料的重要性（三）病料的采集、保存与送检三者之间的关系（三）病料的采集、保存与送检三者之间的关系（一）病料的含义（一）病料的含义（一）病料的含义（一）病料的含义 狭义狭义：用于疾病诊断的材料。：用于疾病诊断的材料。广义广义：用于动物科学研究、实验等各方面：用于动物科学研究、实验等各方面的实验室检查材料。如：动物研究中的重的实验室检查材料。如：动物研究中的重要内容要内容形态学和生理机能的变化。涉及形态学和生理机能的变化。涉及到病理学、组织胚胎、药物毒理、动物营到病理学、组织胚胎、药物毒理、动物

2、营养、动物生化、生化等学科养、动物生化、生化等学科（二）（二）正确采集、保存与送检病料的重要正确采集、保存与送检病料的重要性性 1.1.关系到疾病诊断的关系到疾病诊断的准确性准确性：病变材料反应了疾病：病变材料反应了疾病 的本质变化。的本质变化。2.2.关系到科研和关系到科研和实验结果正确与否实验结果正确与否：科研试验：设计科研试验：设计 实施实施 结果结果。实施（实验）实施（实验）的过程的过程 获取数据获取数据 动物动物 形态变形态变 化、机能（生理生化指标）化、机能（生理生化指标）。（三）病料的采集、保存与送检三者之间的关系（三）病料的采集、保存与送检三者之间的关系 1.1.正确的采集病料

3、是获得正确结果的正确的采集病料是获得正确结果的关键关键。2.2.正确的保存病料是获得正确结果的正确的保存病料是获得正确结果的保证保证。3.3.正确的送检病料是获得正确结果的正确的送检病料是获得正确结果的必要条件必要条件。三者均能影响结果！三者均能影响结果！二、实用举例二、实用举例（一）用于病理组织学检查病料的采集、（一）用于病理组织学检查病料的采集、保存与送检保存与送检（二）微生物学检查的材料的采集、保存（二）微生物学检查的材料的采集、保存 与送检与送检 (三三)用于毒物分析材料的收集保存与送检用于毒物分析材料的收集保存与送检（一）用于病理组织学检查病料的采（一）用于病理组织学检查病料的采 集

4、、保存与送检集、保存与送检 1.病料的采集（取材）病料的采集（取材）2.病料的保存（固定）病料的保存（固定）3.病料的送检病料的送检 1.1.病料的采集（取材）病料的采集（取材）取材应目的准确，有病变的组织必须取，有疑问处重点取，变化不明现时全面取。取材部位要准确，所取组织块应含有病变、正常和两者相交过度结构;组织结构要完整,如肠（外膜层、肌层、粘膜层）、肾（皮质、髓质）。取材时间尽量早。病死动物夏季不超过6h，冬季不超过24h。（相对）取材大小及数量。一般1.52.00.30.5cm为好，不同的变化均取。特殊组织取材特殊组织取材 壁薄的囊腔脏器（肠、胆囊）。壁薄的囊腔脏器（肠、胆囊）。体积微

5、小的组织（小鼠的肾上腺、垂体、体积微小的组织（小鼠的肾上腺、垂体、甲状腺等）。甲状腺等）。液状病料、渗出液。液状病料、渗出液。柔软与变形的组织（肠系膜、神经干）。柔软与变形的组织（肠系膜、神经干）。防人为变化：取材刀具要防人为变化：取材刀具要快，动作要轻，快，动作要轻，防挤压。防挤压。2.病料的保存（固定）病料的保存（固定）固定的作用：使细胞内的物质尽量接近生活状态时的形态，结构和位置，并便于切片和观察。固定液的选择：用于组织固定的固定液种类繁多，根据切片观察的目的而定（形态结构、组织内抗原、组织内脂肪、糖原）固定液的量：固定液的量：10倍于组织的体积。倍于组织的体积。固定的时间：数小时固定的

6、时间：数小时24小时，不同种小时，不同种类不一样（固定液种类、组织大小类不一样（固定液种类、组织大小）固定温度：常温固定温度：常温2025，低温，低温4时时间要延长。间要延长。固定用容器：玻璃容器为好，禁用金属固定用容器：玻璃容器为好，禁用金属容器，底部最好垫纱布或棉花，防组织贴容器，底部最好垫纱布或棉花，防组织贴壁而固定不良。壁而固定不良。固定方法：固定方法：浸泡法：要固定的组织浸入固定液中，是最常用的 方法。注射、灌流固定法：用于体积过大，固定液 又难 进入肉尸的组织或整个器官、动物体进行固定。电镜取材 活体固定 眼球固定 动物整体浸渍标本制作 蒸气固定法：固定组织中的可溶性物质，甲醛或锇

7、 酸固定。石蜡切片常用固定液石蜡切片常用固定液 10福尔马林固定液福尔马林固定液 甲醛溶液甲醛溶液 1份份 自来水自来水 9份份 10中性福尔马林固定液（中性福尔马林固定液（PH 7.0）甲醛溶液甲醛溶液 120ml NaH2PO4H2O 4g Na2HPO4 13g 蒸蒸 馏馏 水水 880ml 4多聚甲醛固定液多聚甲醛固定液（用于免疫组织化学）（用于免疫组织化学）多聚甲醛多聚甲醛 4g 0.1mol/L PB（PH 7.4）100ml 多聚甲醛多聚甲醛PBPB，于磁力搅拌器上，加热到，于磁力搅拌器上，加热到6060左左右完全溶解，溶液变清（有时需加几滴右完全溶解，溶液变清（有时需加几滴1

8、1mol/L mol/L NaOHNaOH ），最后最后PBPB补足至补足至100100mlml。Bouin氏固定液氏固定液（用于组织学和免疫组织化学固定）（用于组织学和免疫组织化学固定）苦味酸饱和水溶液苦味酸饱和水溶液 75ml 甲醛甲醛 25ml 冰醋酸冰醋酸 5ml Carnoy氏固定液氏固定液（使用于染色体、（使用于染色体、DNA、RNA、糖、糖 原的固定）原的固定）纯酒精纯酒精 6份份 冰醋酸冰醋酸 1份份 三氯甲烷三氯甲烷 3份份3.病料的送检病料的送检 及时送检及时送检 新鲜病料：新鲜病料：2h以内能送到的，气温高时要加冰冷藏。以内能送到的，气温高时要加冰冷藏。已固定的病料：已固

9、定的病料：用塑料袋或瓶密封包装。用塑料袋或瓶密封包装。附送检说明：检查的目的与要求，基本情况介绍附送检说明：检查的目的与要求，基本情况介绍 （病史、发病、死亡及剖检、取材的组织种类、数量（病史、发病、死亡及剖检、取材的组织种类、数量 等）等）专人送检：人畜共患的烈性传染病（炭疽），国家专人送检：人畜共患的烈性传染病（炭疽），国家 规定的一类动物疫病（口蹄疫、高致病性禽流感、规定的一类动物疫病（口蹄疫、高致病性禽流感、牛海绵状脑病等）。牛海绵状脑病等）。（二）微生物学检查的材料的采集保存与送检二）微生物学检查的材料的采集保存与送检 要求在没有其它微生物污染情况下进行，因此要求在没有其它微生物污染

10、情况下进行，因此必须做到以下几点：必须做到以下几点：所有取材的用具（刀、剪所有取材的用具（刀、剪、盛装容器等）事先要、盛装容器等）事先要 严格消毒、灭菌，取材环境尽量做到无菌。严格消毒、灭菌，取材环境尽量做到无菌。尸检时应首先采取用于微生物检查的病料。尸检时应首先采取用于微生物检查的病料。取材时间尽量早，动物死后肠道内微生物大量繁取材时间尽量早，动物死后肠道内微生物大量繁 殖造成污染。殖造成污染。必要时将整个脏器、尸体送检。必要时将整个脏器、尸体送检。1.病料的采集（取材）病料的采集（取材）实质脏器的取材：先用烧热的刀片烧烙脏器表 面，再用消毒的刀、剪取深部组织，同时作触片。最好一种组织用一套

11、刀具 液体病料（血液、胆汁、渗出物、脓汁等）表 面 烧烙后，用灭菌注射器吸取保存。全血 抗凝剂抗凝剂 4枸橼酸钠 0.1ml，可抗凝血 1ml。20枸橼酸钠23滴可抗凝血 5ml。10乙二胺四醋酸钠23滴可抗凝血5ml。肝素：1mg可抗凝1ml，多用于病毒学检 查的抗凝血。肠内容物：烧烙表面，吸取内容 物于灭菌容器内。皮肤及皮屑：刀刮至真皮层收集 皮屑，作真菌、疥癣检查。脑、脊髓：常作病毒检查。2.病料的保存病料的保存 细菌学检查材料：细菌学检查材料：A.组织块：一般用灭菌的液体石蜡、组织块：一般用灭菌的液体石蜡、30甘油甘油 缓冲盐水或饱和氯化钠溶液。缓冲盐水或饱和氯化钠溶液。B.液体材料：

12、保存于灭菌的密封性好的试管内，液体材料：保存于灭菌的密封性好的试管内，可用石蜡或密封胶封口。可用石蜡或密封胶封口。C.各种涂片、触片、抹片各种涂片、触片、抹片,自然干燥后装盒冷自然干燥后装盒冷 藏。藏。病毒学检查材料：病毒学检查材料：A 组织块：浸入组织块：浸入50甘油缓冲盐水或鸡蛋生甘油缓冲盐水或鸡蛋生 理盐水。理盐水。B 液体材料：灭菌试管严密封口低温保存。液体材料：灭菌试管严密封口低温保存。在在4时可保存数小时，若长期保存应在时可保存数小时，若长期保存应在 -70条件下。条件下。保存液的配制保存液的配制 30 30甘油缓冲盐水：甘油缓冲盐水：纯甘油 30ml 氯化钠 0.5g 碱性磷酸钠

13、 1g 0.02%酚红液 1.5ml 中性蒸馏水加至 100ml 混合后在15磅高压灭菌 30mins 50甘油缓冲盐水溶液：氯化钠氯化钠 2.5g 酸性磷酸钠酸性磷酸钠 0.46g 溶于溶于100ml中性蒸馏水内中性蒸馏水内 碱性磷酸钠碱性磷酸钠 10.74g 纯中性甘油纯中性甘油 150ml 中性蒸馏水中性蒸馏水 50ml 混合后在混合后在15磅高压灭菌磅高压灭菌 30mins 鸡蛋表面消毒 破壳 搅匀后加灭菌生理盐水（9份蛋浆1份灭菌生理盐水）摇匀过滤 加热565830mins，于第二、三天再按上述过程加热一次，冷却备用。鸡蛋生理盐水溶液：鸡蛋生理盐水溶液：（三）用于毒物分析材料的收集保

14、存与送检（三）用于毒物分析材料的收集保存与送检 中毒的诊断：临床症状尸体剖检 初步诊断，要 确诊还需进行实验室诊断。（毒物分析：毒物性质）（病理切片：中毒靶器官病理变化）1.样品的采集样品的采集 原则：采集含毒量多而易检出的材料。常采集：呕吐、排泄物、胃肠内容物、血、粪、尿以及肝、肾、脑等组织；剩余的饲料及饮水。样品的种类及量：量要足够，多处取材时最好分装，有时胃肠内容物可以不分装。常见毒物中毒的样品采取表常见毒物中毒的样品采取表毒毒 物物剩剩 余余饲饲 料料呕吐物、胃及呕吐物、胃及胃内容物胃内容物肠肠 内内容容 物物粪粪便便尿尿液液血血液液肝肝肾肾脑脑氰化物氰化物+磷磷 及及 磷化锌磷化锌+

15、砷、铅砷、铅+有有 机机 磷磷农农 药药+有有 机机 氯氯农农 药药+汞汞 及及有有 机机 汞汞+生物碱生物碱+亚硝酸盐亚硝酸盐+毒鼠药毒鼠药+检检 品品采采 取取 量量 包包 装装 法法 附附 注注剩余饲料剩余饲料500-1000500-1000克克塑塑 料料 袋袋胃及内容物胃及内容物250-500 250-500 克克广口玻璃瓶或塑料袋广口玻璃瓶或塑料袋 密密 封封肠段和肠内容物肠段和肠内容物250250左右左右广口玻璃瓶或塑料袋广口玻璃瓶或塑料袋 密密 封封粪便粪便250250左右左右广口玻璃瓶或塑料袋广口玻璃瓶或塑料袋 密密 封封实质赃器实质赃器每个脏器每个脏器100-100-2502

16、50克克广口玻璃瓶或塑料袋广口玻璃瓶或塑料袋 密密 封封血液血液50-10050-100毫升毫升玻璃瓶或大试管玻璃瓶或大试管 密密 封封尿液尿液200-50200-50毫升毫升玻玻 璃璃 瓶瓶 密密 封封检品采取的量及包装方法检品采取的量及包装方法 2.保存保存 保存容器：用干净，未盛装过化学药品的玻璃或保存容器：用干净，未盛装过化学药品的玻璃或 陶瓷器皿，勿用金属制品。陶瓷器皿，勿用金属制品。干物质：可用干净的塑料袋、纸袋。干物质：可用干净的塑料袋、纸袋。检查材料中不可用防腐剂，非用时可用酒精，但要用检查材料中不可用防腐剂，非用时可用酒精，但要用 同种酒精作对照。同种酒精作对照。所有的检查材

17、料要标明名称、取材时间。所有的检查材料要标明名称、取材时间。3.送检送检 封装（严密）尽快送检，最好在冷藏条件下，防变质或挥发。提供中毒情况：饲养管理情况：使役、饲料、饮水腐败变质否，群饲还 是单养。周围环境：农药使用情况，有否毒鼠药，周围有无化 工厂、废水等。发病及死亡情况：发病时间、头数、症状、剖检变化等。参考文献参考文献 1.兽医学检验.军兽大编，农业出版社，1979.2.动物尸体剖检技术.陈怀涛编，甘肃科技出版社，1989.3.兽医临床病理学.（美）E.H.科尔斯著，朱坤熹、秦礼让译，上海科技出版社，1989.4.家畜中毒学.王洪章编，农业出版社.5.病理学技术.王伯沄编，人民卫生出版社，2000.6.动物实验方法学.孙敬方编，人民卫生出版社，2001.