临床微生物室标本处理及操作流程(93页)课件.ppt

1、InfectionControlTeam临床标本临床标本留取留取环节一环节一运送运送实验室实验室环节二环节二分析前分析前分析中分析中标本合格？标本合格？环节三环节三接种接种培养培养检测检测门诊门诊病房病房诊所诊所合格合格环节四环节四 环节五环节五分析后分析后报告报告环节六环节六 IQ培养基、冰箱培养基、冰箱温箱、气体温箱、气体直接检测直接检测仪器设备、试剂仪器设备、试剂EQA标本标本标本合格标本合格判定判定SOP对每个环节进行控制，构成质量保证体系对每个环节进行控制，构成质量保证体系+内内 容容微生物鉴定微生物鉴定标本处理标本处理药敏试验药敏试验血培养血培养 脑脊液培养脑脊液培养呼吸道标本呼吸

2、道标本(痰标本、咽部标本）痰标本、咽部标本）尿培养尿培养生殖道标本培养生殖道标本培养抽吸物和组织标本的培养（需氧、厌氧培养）抽吸物和组织标本的培养（需氧、厌氧培养）粪便培养粪便培养严格无菌操作严格无菌操作如何看待如何看待CSFCSF的培养结果？的培养结果？（1 1）如如果同期送检的血培养大于果同期送检的血培养大于3天报警，通常不是很紧急天报警，通常不是很紧急（2）假如仍不确定，电话联系微生物室值日主管，了解革兰氏假如仍不确定，电话联系微生物室值日主管，了解革兰氏染色涂片的相关情况。染色涂片的相关情况。（3）必须综合生化和血液学结果必须综合生化和血液学结果（4）如果如果CSF常规检查报告中没有中

3、性粒细胞或脑脊液的其他常规检查报告中没有中性粒细胞或脑脊液的其他指标正常，对报告的致病菌应保持怀疑，可能送检污染。指标正常，对报告的致病菌应保持怀疑，可能送检污染。下呼吸道感染下呼吸道感染下呼吸道标本下呼吸道标本Lower Respiratory Tract Specimen自然咳痰自然咳痰诱导痰诱导痰 气管内吸取物气管内吸取物支气管肺泡灌洗液支气管肺泡灌洗液保护性毛刷保护性毛刷支气管灌洗液支气管灌洗液 肺部组织肺部组织标本质量标本质量带血痰带血痰唾液唾液oror诱导痰诱导痰 (?)(?)脓痰脓痰粘液样痰粘液样痰用革兰氏染色来评估用革兰氏染色来评估 呼吸道标本是否合格呼吸道标本是否合格有有PM

4、NPMN的痰标本，中性粒细胞多，且鳞状上皮细胞特别少的痰标本，中性粒细胞多，且鳞状上皮细胞特别少=接受，进行培养接受，进行培养粘液丝粘液丝细胞内细菌细胞内细菌胞内细菌胞内细菌 提示感染提示感染柱状纤毛上皮细胞柱状纤毛上皮细胞肺泡巨噬细胞肺泡巨噬细胞滑石颗粒滑石颗粒淀粉样小体淀粉样小体见于迁延长时间的呼吸道疾病见于迁延长时间的呼吸道疾病弹性纤维弹性纤维库什曼螺旋体库什曼螺旋体呈链排列的革兰阳性球菌和革兰阴性球杆菌。缺乏鳞状上呈链排列的革兰阳性球菌和革兰阴性球杆菌。缺乏鳞状上皮细胞提示混合厌氧菌感染皮细胞提示混合厌氧菌感染你看见多少种形态？你看见多少种形态？呼吸道标本中未被染色的，有折射的杆菌呼吸

5、道标本中未被染色的，有折射的杆菌=抗酸杆菌抗酸杆菌呈链排列的革兰阳性球菌？或革兰阳性分枝杆菌？呈链排列的革兰阳性球菌？或革兰阳性分枝杆菌？肺中的结节吸出物，不规则肺中的结节吸出物，不规则“球菌球菌”，分叉，无短链，链的末端的呈尖状，都，分叉，无短链，链的末端的呈尖状，都证明是分枝状的革兰阳性杆菌，可能是放线菌或诺卡菌（通常来自脑或肺组织证明是分枝状的革兰阳性杆菌，可能是放线菌或诺卡菌（通常来自脑或肺组织的标本）的标本）肺炎肺炎-可接受的可接受的不合格标本不合格标本评述评述很少的鳞状上皮细胞很少的鳞状上皮细胞10个个/低倍视野低倍视野可以在玻片上看到许多鳞状上皮细胞，说明在可以在玻片上看到许多鳞

6、状上皮细胞，说明在采集时受到了上呼吸道分泌物的污染或口水的采集时受到了上呼吸道分泌物的污染或口水的污染。污染。很多的中性粒细胞很多的中性粒细胞很少有或没有中性粒细胞很少有或没有中性粒细胞免疫抑制的病人也会出现免疫抑制的病人也会出现中性粒细胞减少中性粒细胞减少中性粒细胞和上皮细胞都很少的标本需要培养中性粒细胞和上皮细胞都很少的标本需要培养很多中性粒细胞混合有形态多很多中性粒细胞混合有形态多样的细菌（革兰氏阴性杆菌，样的细菌（革兰氏阴性杆菌，纺锤形，革兰氏阳性球菌）纺锤形，革兰氏阳性球菌）吸入性肺炎标本革兰氏染色的典型形式，培养吸入性肺炎标本革兰氏染色的典型形式，培养只会培养出正常菌群，所以革兰氏

7、染色是用于只会培养出正常菌群，所以革兰氏染色是用于诊断的方法。诊断的方法。许多或中等量的中性粒细胞，许多或中等量的中性粒细胞，以一种形态的细菌为主以一种形态的细菌为主酵母菌样，酵母菌是一种酵母菌样，酵母菌是一种很少引起肺炎的细菌，常很少引起肺炎的细菌，常由口腔污染由口腔污染成双革兰氏阳性球菌，短链成双革兰氏阳性球菌，短链=肺炎链球菌肺炎链球菌革兰氏阳性菌成群排列革兰氏阳性菌成群排列=金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌革兰氏阴性球杆菌（小）革兰氏阴性球杆菌（小）=流感嗜血杆菌流感嗜血杆菌革兰氏阴性杆菌大且肥厚革兰氏阴性杆菌大且肥厚=肺炎克雷伯菌或其他肺炎克雷伯菌或其他肠道菌肠道菌革兰氏阴性双球菌革兰氏

8、阴性双球菌=卡他莫拉菌卡他莫拉菌许多不着色的有折射的杆状细许多不着色的有折射的杆状细菌菌可能是肺结核，抗酸杆菌不能被革兰氏染色所可能是肺结核，抗酸杆菌不能被革兰氏染色所染色。染色。呼吸道标本的涂片评估模式呼吸道标本的涂片评估模式尿道感染尿道感染每年每年850万例尿路感染万例尿路感染,90%为女为女性性1/2.5个妇女在一生中会得个妇女在一生中会得UTI下行性感染：血流下行性感染：血流肾脏肾脏膀胱膀胱（金黄色葡萄球菌，酵母菌，结（金黄色葡萄球菌，酵母菌，结核分枝杆菌）核分枝杆菌）上行性感染：尿道上行性感染：尿道膀胱膀胱肾盂肾盂 血流血流用于尿液培养的标本用于尿液培养的标本 肾活检或肾抽吸物（外科

9、）肾活检或肾抽吸物（外科）耻骨上膀胱抽吸物耻骨上膀胱抽吸物（孕妇，婴儿，全膀胱）（孕妇，婴儿，全膀胱）微导管尿（内部导管和外部导管）微导管尿（内部导管和外部导管）-老年人老年人 中段尿，清洁留取中段尿，清洁留取急诊成年人急诊成年人 留置导尿管中采集的标本（经常被三种以上细菌污染）留置导尿管中采集的标本（经常被三种以上细菌污染）尿液标本尿液标本尿液运输方法尿液运输方法如不能及时送检，需冷藏。如不能及时送检，需冷藏。4 4小时延迟送检，须废弃标本小时延迟送检，须废弃标本。过夜培养过夜培养否否自然排尿自然排尿是是继续培养；继续培养；随后观察；发送初步的培养阴性报告随后观察；发送初步的培养阴性报告24

10、小时后仍不生长则发出小时后仍不生长则发出最终的生长阴性报告最终的生长阴性报告 105 CFU/ml1 organism一种以上细菌生长一种以上细菌生长多种肠道细菌或混杂的皮肤菌丛；重新采集清洁标本多种肠道细菌或混杂的皮肤菌丛；重新采集清洁标本纯培养的机会致病菌纯培养的机会致病菌（查阅凝固酶阴性葡萄球菌的注释）（查阅凝固酶阴性葡萄球菌的注释）ID&Suscept.鉴定鉴定&药敏药敏 105 CFU/ml)1-2种机会致病菌种机会致病菌（查阅凝固酶阴性葡萄球菌的注释）（查阅凝固酶阴性葡萄球菌的注释）进行鉴定和药敏，若数量进行鉴定和药敏，若数量 104 CFU/ml一种以上细菌生长一种以上细菌生长多

11、种肠道细菌或混杂的皮肤菌丛；重新采集清多种肠道细菌或混杂的皮肤菌丛；重新采集清洁标本洁标本 纯培养的机会致病菌纯培养的机会致病菌（查阅凝固酶阴性葡萄球菌的注释）（查阅凝固酶阴性葡萄球菌的注释）鉴定鉴定&药敏药敏 104 CFU/ml1-21-2种机会致病菌（查阅凝固酶阴性葡萄球菌的以上相同注释种机会致病菌（查阅凝固酶阴性葡萄球菌的以上相同注释进行鉴定和药敏，若数量进行鉴定和药敏，若数量 10 104 4CFU/mlCFU/ml，仍然对可能的致病菌进行操作仍然对可能的致病菌进行操作检出检出三种或以上的机会致病菌包括酵母菌三种或以上的机会致病菌包括酵母菌（病人的首份尿标本显示如此的培养结果（病人的

12、首份尿标本显示如此的培养结果，若重复的尿标本仍然培养出相同的细菌，若重复的尿标本仍然培养出相同的细菌，则需要对菌株进行操作），则需要对菌株进行操作）多种肠道细菌或混杂的皮肤菌丛；多种肠道细菌或混杂的皮肤菌丛；重新采集清洁标本重新采集清洁标本.若为腐生葡萄球菌，若为腐生葡萄球菌，则处理与其他致病菌相同；则处理与其他致病菌相同；其他的凝固酶阴性葡萄球菌则视为污其他的凝固酶阴性葡萄球菌则视为污染染评价尿培养的标准评价尿培养的标准病人病人标本特征标本特征有意义菌落形成单位有意义菌落形成单位/ml（非皮肤污染）（非皮肤污染）无症状者无症状者清洁留取清洁留取100,000有症状者，不固定的有症状者，不固定

13、的清洁留取清洁留取10,000 1-2种机会致病菌。若多于种机会致病菌。若多于2种则认为尿种则认为尿液被污染液被污染有症状，性活跃女性有症状，性活跃女性清洁留取清洁留取100个纯菌落肠杆菌科菌个纯菌落肠杆菌科菌男性男性清洁留取清洁留取1000个，机会致病菌个，机会致病菌任何人任何人内置导尿管内置导尿管100,000任意数量机会致病菌任意数量机会致病菌任何人任何人通过直接导管获得通过直接导管获得100任意数量机会致病菌任意数量机会致病菌任何人任何人外科手术从肾脏获得外科手术从肾脏获得任意数量（肉汤增菌，厌氧菌）任意数量（肉汤增菌，厌氧菌）任何人任何人经皮穿刺膀胱吸取经皮穿刺膀胱吸取任意数量（肉汤

14、增菌，厌氧菌）任意数量（肉汤增菌，厌氧菌）任何人任何人任意标本任意标本任何数量金黄色葡萄球菌任何数量金黄色葡萄球菌不同人不同人有争议有争议任何数量的酵母菌任何数量的酵母菌出现如下情况时，怎样判断？出现如下情况时，怎样判断？尿常规结果尿常规结果尿培养结果尿培养结果可能原因可能原因WBC PRO 计数计数+PRO +计数计数+PRO +计数计数 105培养出一种致病菌培养出一种致病菌预示患者泌尿系统感染。按药敏预示患者泌尿系统感染。按药敏结果选择性用药。结果选择性用药。WBC +PRO +计数计数 105培养出大于两种致病菌培养出大于两种致病菌患者泌尿系统可能感染，但标本患者泌尿系统可能感染，但标

15、本可能被污染，应重复送检。可能被污染，应重复送检。WBC 105培养出大于两种致病菌培养出大于两种致病菌标本污染标本污染宫颈或宫颈内部：淋病奈瑟菌，沙眼衣宫颈或宫颈内部：淋病奈瑟菌，沙眼衣原体，人乳头瘤病毒原体，人乳头瘤病毒阴道高位拭子：酵母菌，阴道毛滴阴道高位拭子：酵母菌，阴道毛滴虫，细菌性阴道感染虫，细菌性阴道感染肛门或直肠拭子：淋病奈瑟菌，肛门或直肠拭子：淋病奈瑟菌，B B群链球群链球菌（菌（+阴道拭子）阴道拭子）1%的新生儿因母亲定植的新生儿因母亲定植（10-30%的孕妇）发展为的孕妇）发展为EOD 50%病死率病死率 25%的美国女性在的美国女性在L&D期间期间得到得到IV预防预防

16、长期病症包括：在长期病症包括：在30%以上的以上的新生儿中产生严重精神运动新生儿中产生严重精神运动发展障碍发展障碍Adriaanse et al.Neonatal early onset group B streptococcal infection:a nine-year retrospective study in a tertiary care hospital.J Perinat Med.1996;24:5315381.在孕期在孕期3537周时的普查培养周时的普查培养a.阴道和直肠拭子阴道和直肠拭子b.肉汤过夜增菌肉汤过夜增菌c.接种于血平板上接种于血平板上d.再孵育过夜和鉴定可疑菌落

17、再孵育过夜和鉴定可疑菌落2.任何有任何有GBS菌尿的患者需要在分娩期做好预菌尿的患者需要在分娩期做好预防防3.分娩时快速检测敏感性不够分娩时快速检测敏感性不够淋病奈瑟氏菌感染淋病奈瑟氏菌感染禁止冷藏禁止冷藏发现发现评述评述出现鳞状上皮细胞出现鳞状上皮细胞提示标本采集技术不过关；培养出来的可能是提示标本采集技术不过关；培养出来的可能是皮肤正常菌群皮肤正常菌群大量的中性粒细胞大量的中性粒细胞如果查见细胞内的细菌，则更有意义。如果查见细胞内的细菌，则更有意义。大量的中性粒细胞染色多样染色阳性和阴性，小的细大量的中性粒细胞染色多样染色阳性和阴性，小的细菌菌混合有厌氧或兼性厌氧菌感染混合有厌氧或兼性厌氧

18、菌感染出现少量破碎的中性粒细胞和比较大的面包车样的染出现少量破碎的中性粒细胞和比较大的面包车样的染色不定的杆菌色不定的杆菌可能是梭菌引起的组织坏死，紧急外科手术，可能是梭菌引起的组织坏死，紧急外科手术，产气荚膜梭菌引起的气性坏疽产气荚膜梭菌引起的气性坏疽很少有中性粒细胞，但是有其他体细胞很少有中性粒细胞，但是有其他体细胞患者不能产生足够的免疫反应或微生物不能趋患者不能产生足够的免疫反应或微生物不能趋化中性粒细胞（如球菌）。仍然高度怀疑细菌化中性粒细胞（如球菌）。仍然高度怀疑细菌病因。病因。细胞内微生物细胞内微生物细菌感染细菌感染成块的小的灰白的染色不规则的阳性成链的球菌成块的小的灰白的染色不规

19、则的阳性成链的球菌如果分离自脓肿，提示咽峡炎链球菌（米勒链如果分离自脓肿，提示咽峡炎链球菌（米勒链球菌）感染。球菌）感染。很细小的革兰氏阴性杆菌很细小的革兰氏阴性杆菌特别是从淋巴结或组织中分离的，可能是生物特别是从淋巴结或组织中分离的，可能是生物恐怖试剂（布鲁氏杆菌，耶尔森，弗朗西斯）恐怖试剂（布鲁氏杆菌，耶尔森，弗朗西斯）要在风厨中操作。平板用胶条密封在生物安全要在风厨中操作。平板用胶条密封在生物安全柜中操作，不可以嗅标本。柜中操作，不可以嗅标本。组织和抽吸物涂片检查组织和抽吸物涂片检查微生物鉴定微生物鉴定微生物鉴定（微生物鉴定（1）血平皿上的菌落形态血平皿上的菌落形态革兰阳性细菌革兰阳性细

20、菌所有的链球菌所有的链球菌-溶血链球菌溶血链球菌-溶血链球菌与肺炎链球菌溶血链球菌与肺炎链球菌葡萄球菌属葡萄球菌属肠道革兰阴性杆菌肠道革兰阴性杆菌沙门菌属，志贺菌属沙门菌属，志贺菌属假单胞菌属假单胞菌属嗜血杆菌属嗜血杆菌属 微生物鉴定（微生物鉴定（2）奈瑟菌属、莫拉菌属奈瑟菌属、莫拉菌属不动杆菌属不动杆菌属布氏杆菌属、巴斯德菌属布氏杆菌属、巴斯德菌属芽胞杆菌属芽胞杆菌属产单核李斯特菌产单核李斯特菌酵母菌属酵母菌属纸片扩散法药敏试验纸片扩散法药敏试验 特殊药敏试验特殊药敏试验 MRSA 克林霉素耐药的葡萄球菌克林霉素耐药的葡萄球菌 VISA或或VRSA 青霉素耐药的葡萄球菌青霉素耐药的葡萄球菌 超广谱超广谱-内酰胺酶内酰胺酶使用透射光观察使用透射光观察：Staphylococcus spp.葡萄球菌属葡萄球菌属 linezolid利奈唑烷利奈唑烷 oxacillin苯唑西林苯唑西林 vancomycin万古霉素万古霉素 任何生长均有意义任何生长均有意义Enterococcus spp.肠球菌属肠球菌属 vancomycin万古霉素万古霉素使用反射光观察：使用反射光观察：所有其他药物所有其他药物/菌株组菌株组合合Linezolid利奈唑烷利奈唑烷圈内菌落圈内菌落谢谢谢谢!