《药物分析》维生素类药物的分析.课件.ppt

1、Analysis of Vitamines 第一节第一节 Vit A)2-Cis Neovitamin Aa 2,6-dicis Isovitamin Ab4-Cis Neovitamin Ab2,4-dicis Neovitamin Ac6-Cis Isovitamin Aa R=HRetinol(Vit A alcohol)R=CCH3OVA acetateR=CC15H31OVA polmitateCH3CH3CH3CH3CH2ORCH3912345678Vit A1Vit A2H2Vit A3Vit A1去H2OVit A含量表示I.U.(international Unit)国际单位

2、效价效价(I.U./g)按WHO规定 VA acetate VA alcohol效价效价(I.U./g)2.907106 3.33106 1g pure VA acetate 2.907106I.U.按WHO规定 VA acetateVA alcoholVit A含量表示I.U.(international Unit)国际单位效价效价(I.U./g)效价效价(I.U./g)2.9071063.331061g pure VA acetate 2.907106I.U.)(1530nm)(328%1cm1环已烷 E)(1820nm)5(32%1cm1异丙醇 E效价含量标样)()(/g).U.(I%1

3、cm1%1cm1EE Emax%1cm1/g).U.(I效价换算因数 183018201033.361900)(/g.U.I%1cm1)(VA测酯E1830)(/g.U.I%1cm1)(VA测醇E1900153010907.26 第一法测定VA acetate 环己烷为溶剂 max328nm吸收度比值nm328AA0.555 0.907 1.000 0.811 0.299 测定吸收度(nm)300 316 328 340 360 如果 max为326329nm;测)(nm328AA-规定值0.02 则不需要校正 如果 max为326329nm;但是，测)(nm328AA-规定值0.02，则需校

4、正Vit A UV法校正公式第一法第一法 A328(校正)=3.25(2A328-A316-A340)%100)(328328328AA-A校正若若 在在3%范围，则仍以范围，则仍以A328计算含量计算含量%100)(328328328AA-A校正若若 在在-15%-3%范围范围，则则以以A325(校正校正)计算含量计算含量%100)(328328328AA-A校正若若 3%，或，或-15%，则采用第二法则采用第二法第二法 测定其他维生素测定其他维生素第一法未通过第一法未通过，包括：则则A325(校正)=6.815A325-2.555A310-4.260A334max不在326329nm，必须

5、经皂化：蒸去醚水解OH-酯 乙醚提取VA醇，洗涤，过滤 溶于异丙醇在 300，310，325，334nm处分别测A 当当max为323327nm，A300nm/A325nm0.73%100)(325325325AA-A校正 若若 在在3%范围，则仍范围，则仍以以A325计算含量计算含量 若若max不在不在323327nm，或者，或者 A300nm/A325nm0.73表明干扰杂质含量过高，则可采用色谱法将未皂化部分纯化后再进行测定第一法第一法 A328(校正)=3.25(2A328-A316-A340)A213nmA213nmVit A samplepure VA acetateimpurit

6、ies用几何图形推导出公式A325(校正)=7A325-2.625A310-4.375A334比实际值高出2.62.7%故扣除2.65%得第二法校正公式A325(校正)=6.815A325-2.555A310-4.260A334 称取Vit A滴剂0.1082g(标示量50 000I.U./g)，加环已烷至50.0ml，取出5.0ml置于另一50 ml量瓶中，加环已烷至刻度，摇匀后置石英比色皿中，以环已烷为空白，分别于以下波长处测得相应的吸收度值，试求此滴剂中Vit A的标示量百分率：(nm)300 316 328 340 360A 0.330 0.508 0.570 0.477 0.190

7、精密称取Vit A滴剂0.06126g(标示量50000 I.U./g)，置于25ml量瓶中，加环已烷至刻度，精密吸取2ml置于另一25ml量瓶中，加环已烷至刻度，并混匀，置石英比色皿中，以环已烷为空白，分别于以下波长处测得吸收度值，试求此滴剂中Vit A为标示量的百分含量：(nm)300 316 328 340 360A 0.330 0.508 0.570 0.477 0.190 第二节第二节 Vit B1)NNNH2CH3CH2NSCH2CH2OHCH3Cl-HClVit B1Thiamine HydrochlorideNNNH2CH3CH2NSCH2CH2OHCH3Cl-HClNaOHN

8、NNH2CH3CH2SCH2CH2OHCH3NCOHNaH2ONNCH3NNSCH2CH2OHCH3NaNNCH3NNSCH2CH2OHCH3H环合NNCH3NNSCH2CH2OHCH3NaNNCH3NNSCH2CH2OHCH3O2H硫色素Thiochtome 结构特点与鉴别结构特点与鉴别 噻唑环在碱性介质中可被高铁氰化钾等氧噻唑环在碱性介质中可被高铁氰化钾等氧化剂氧化，然后与嘧啶环上的化剂氧化，然后与嘧啶环上的-NH2缩合生缩合生成成具有荧光的硫色素具有荧光的硫色素，后者，后者易溶于异丁醇易溶于异丁醇中显强烈的蓝色荧光中显强烈的蓝色荧光，该反应又，该反应又称为硫色称为硫色素荧光反应。为维生素

9、素荧光反应。为维生素B1所特有所特有生成沉淀反应生成沉淀反应 分子结构中含有杂环，易与生物碱沉淀剂分子结构中含有杂环，易与生物碱沉淀剂(碘化铋钾、碘化汞钾、苦味酸等碘化铋钾、碘化汞钾、苦味酸等)，硅钨酸，硅钨酸，雷氏盐等作用形成组成恒定的沉淀雷氏盐等作用形成组成恒定的沉淀 维生素维生素B1在碱性加热条件下反应放出在碱性加热条件下反应放出H2S,与与Pb(Ac)2试液形成黑色试液形成黑色PbS 含量测定含量测定 Assay 硅钨酸重量法硅钨酸重量法 Silicotungstic Acid Gravimetry 非水溶液滴定法非水溶液滴定法 Non-aqueous Titrimetry 硫色素荧光

10、法硫色素荧光法 Thiochrone FluoremetryVit B1 硅钨酸重量法硅钨酸重量法2Vit B1+过量硅钨酸过量硅钨酸*滤过滤过洗涤洗涤*用热的稀用热的稀HCl洗洗干燥恒重干燥恒重*80H+煮沸煮沸*23分钟；过长，沉淀易于分钟；过长，沉淀易于 附着于器壁上附着于器壁上Vit B12SiO2(OH)212WO34H2O沉淀沉淀 第三节第三节 Vit C)OHOOHOCCH2OHHOH612345L-抗坏血酸 L-去氢抗坏血酸 L-二酮古罗糖酸有生物活性 有生物活性 无生物活性OHOOHOCCH2OHHOHOOCOOCH2OHHOHCH2OHCCCCCOONa(H)OOHHHHO

11、O-2H+2HH2OOH-(H+)OHOOHOCCH2OHHOHOHOHOOCCH2OHOHHNHNCH2OHCHOH(CHOH)2CCOHOOH2ONOCHH2O+50蓝色OCHO-3H2O糠醛CH2OHCH(CHOH)2CHOOH-CO2戊糖含量测定含量测定碘量法碘量法2,6-二氯靛酚法二氯靛酚法NaHSO3RCH(CH3)ORCH(CH3)OHSO3Na 白色溶于水ONOHClCl玫瑰红有氧化性OHClClNHOH无色还原型酚亚胺Vit CH+去氢Vit C 第五节第五节 Vit E)R1R2OCH3()CH3OCH3()CH3(CH2)3COCH3C(CH2)3HHC(CH2)3HHC

12、HCH3CH3Vit E(dl-Tocopheryl Acetate)Synthetic NaturalProductR1 R2 content(%)-Tocopheryl 52.0 68.0CH3CH3-Tocopheryl 9.3 22.0CH3H-Tocopheryl 28.0 5.0CH3H-Tocopheryl 10.7 5.0HHChP VE 中检查生育酚 取Vit E 0.1g，加无水乙醇5ml溶解后，加二苯胺T.S.1滴，用硫酸鈰滴定液(0.01mol/L)滴定，消耗硫酸鈰滴定液(0.01mol/L)不得过1.0mlOCH3CH3CH3CH3COOCH3C16H33OCH3CH

13、3CH3HOCH3C16H33无水乙醇H2SO4回流CH3CH3CH3OOC16H33CH3OH+2Ce3+2Ce4+固定液：5%SE30柱 温：25510检测器：FID内 标：十六酸十六醇酯鈰量法(%)GC(%)97.91 83.53 97.99 82.51 98.48 85.0914.54VE24.40内标VE丸剂GC法VE(纯品)测得量(mg)17.22 17.15加入量(mg)17.3回收率(%)99.54 99.13中国药典 维生素E色谱条件与系统适应性试验 System Suitability Tests SST 以硅酮(OV-17)为固定相，涂布浓度为2%；柱温为265，理论板数

14、按VE峰计算，应不低于500，VE峰与内标峰的分离度应大于2。内标：正三十二烷216YtNr12122YYt-tRrr校正因子测定 取正三十二烷正三十二烷适量，加正已烷溶解并稀释成每1ml中含1.0g的溶液，摇匀，作为内标溶液。另取Vit E对照品对照品约20mg，精密称定，置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内标溶液10ml，密塞，振摇使溶解；取13l注入气相色谱仪，计算校正因子测定法 取本品约20mg，精密称定，置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内标溶液10ml，密塞，振摇使溶解；取13l注入气相色谱仪，测定，计算，即得JP Vit E:dl-生育酚色谱柱：ODS 1530cm4mm 510m流动相：甲

15、醇-水 (491)流 速：调整到生育酚的tr10minUVD：292nm R2.6人血清中人血清中VA和和VE的含量测定的含量测定Waters-Bondapak C18 30cm3.9mm Resolve C18 预柱甲醇-水(964)，1.2ml/minUVD：08min 330nm 8min后 292nm血清样品的制备血清样品的制备血样离心后，分离血清，置5ml塑料试管中，充N2密封，于-40保存备用HO4,6 CholestadienolHOH胆甾醇，胆固醇Cholesteral胆甾-5烯-3-醇Vit D2 骨化醇 Ergocalciferol9,10-开链麦角甾-5,7,10(19)

16、,22-四烯-3-醇22123456710HHOCH2HHVit D3 胆骨化醇 Cholecalciferol胆钙化醇9,10-开链胆甾-5,7,10(19)-三烯-3-醇HOCH2USP 24Cleanup column 30cm4.6mm C8Mobile phase A CH3CNCH3OHH2O 25 25 1 The amount of H2O&the flow rate may be varied to meet system suitability requirement.Analytical column 25cm4.6mm porous silica particle 510mMobile phase B n-amyl alcoholDehydrated hexane 3 1000UVD：254nm