L-型-菌课件.ppt

1、川崎病病原体川崎病病原体化膿球菌型菌検討化膿球菌型菌検討L型菌野生型多型菌野生型多産生産生 川崎病病原体化膿球菌型菌検討。川崎病病原体化膿球菌型菌検討。川崎病病態溶連菌感染症似、当初化膿川崎病病態溶連菌感染症似、当初化膿球菌原因菌検討、患者本菌球菌原因菌検討、患者本菌L型菌、抗型菌、抗SLO抗体、抗抗体、抗SK抗体等検出抗体等検出、現在、否定的見解多。、現在、否定的見解多。我第我第79回本学会西日本地方学術集会、回本学会西日本地方学術集会、L型型菌化化膿球菌菌化化膿球菌O産生株（産生株（124 124 L L 株）報株）報告、川崎病原因菌本菌告、川崎病原因菌本菌L L型菌更型菌更検証検証必要指

2、摘。必要指摘。今回、今回、O産生関、産生関、124L株親株株親株124株結果追加株結果追加報告、更野生型報告、更野生型L型菌型菌産生産生量量比較比較。【目的】菌株菌株L L型菌型菌124 124 L L株、野生型株、野生型124124株（帝京大学西山彌生博士分与）、株（帝京大学西山彌生博士分与）、K58665866株、株、K6274K6274株、株、K61696169株（鹿児島大学西順一郎博士分与）用株（鹿児島大学西順一郎博士分与）用。0産生比較産生比較0溶血反応観察溶血反応観察2方法（、）用行方法（、）用行。型菌用液体培地（型菌用液体培地（0.5%yeast extract,4%NaCl,1

3、0%FBS加加brain heart infusion broth）、羊血液寒天培地（日水製薬）滅菌飽和食羊血液寒天培地（日水製薬）滅菌飽和食塩水塩水1.5ml加加（浸透圧調製）浸透圧調製）37乾燥培地用。培養乾燥培地用。培養共共好気嫌気培養行、血液寒天面溶血帯調。好気嫌気培養行、血液寒天面溶血帯調。SLO、SK酵素酵素産生確認、全菌体成分対、抗産生確認、全菌体成分対、抗SLO抗体（社抗体（社003）用抗）用抗SK 抗体（社抗体（社988）用行。用行。産生比較産生比較培養、型菌用液体培地（培養、型菌用液体培地（0.5%0.5%yeast extract,4%NaCl,10%yeast extr

4、act,4%NaCl,10%胎仔胎仔血清血清 加加brain heart infusion broth brain heart infusion broth）静置培養嫌気培養静置培養嫌気培養37374848時間行。時間行。産生量比較、同一条件下超音波破産生量比較、同一条件下超音波破砕全菌体成分対抗砕全菌体成分対抗hyaluronidase polyclonalhyaluronidase polyclonal抗体（抗体（NORNOR社社NE076/7SNE076/7S）用行。用行。【方法】化膿球菌野生型化膿球菌野生型 L 型菌型菌L 型菌 L 株由来：臨床分離株株L型菌株作成、継代成功安定型L型

5、菌株（横浜市大江田年）野生型野生型L 型菌型菌(L株）株）L型菌細胞小型化、培養条件大型化。通常大小細胞混在、型菌細胞小型化、培養条件大型化。通常大小細胞混在、budding極微小顆粒状細胞多量。極微小顆粒状細胞多量。化膿球菌 L 型菌 L 株10.05 数菌体見実験 化膿球菌 L 型菌 L 株O 産生確認赤血球対溶血反応（嫌気培養好気培養）L型菌用液体培地血液寒天培地型菌通常血液寒天培地増殖液体培地型菌増殖、溶血有無観察結果（嫌気培養）ControlK5866K6169124 L野生型L 型菌L 株溶血帯（）見(好気培養結果同様）結果回収菌体培養液K5866K6169124 L菌体培養液野生

6、型L 型菌124 L株増殖確認、溶血培地赤変結果 化膿球菌L型菌L株好気培養羊血液寒天培地（3.5NaCl）溶血反応ccabab菌増殖分角度撮影溶血帯示透過光撮影a:K6169株株,b:124P株株,c:124L株株好気培養L株溶血帯見結果 化膿球菌L型菌L株嫌気培養羊血液寒天培地（3.5NaCl）溶血反応bccabaa:K6169株株,b:124P株株,c:124L株株菌増殖分角度撮影溶血帯示透過光撮影嫌気培養L株溶血帯見結果 化膿球菌L型菌L株O産生関解析Anti-streptolysin O mouse monoclonal antibody(1：250希釈）K6169KK124 LL株

7、抗抗体反応、見KKSDS-PAGEK6169 124 LK6169株124 L10結果 化膿球菌 L 型菌 L 株産生関解析Anti-streptokinase rabbit polyclonal antibody(1：12000希釈）K5866 株 K6169 株 124 L 株野生型L型菌L株抗抗体反応見11野生型 L 型菌産生量比較Antisheephyalunonidase polyclonal rabbit IgG(NOR)解析K株K株 L 株P 株K株 L 株本培養条件L型菌抗抗体反応野生型濃厚12【結果考察】産生比較、産生比較、野生型野生型株溶血帯、抗株溶血帯、抗SLO蛋白反応見

8、、型菌蛋白反応見、型菌124株、株、好気、嫌気培養共溶血帯見、抗好気、嫌気培養共溶血帯見、抗SLO抗体対反応見抗体対反応見。、抗、抗SK抗体抗体反応見。結反応見。結果、果、化膿球菌型菌化、酵素産生株化膿球菌型菌化、酵素産生株出現可能性示唆。出現可能性示唆。産生調結果、産生調結果、124L株、株、124L株親株含株親株含4株野生型明瞭濃厚見株野生型明瞭濃厚見、L型菌化野生型産生量増加可能型菌化野生型産生量増加可能性示唆。性示唆。病原細菌型菌化、病原細菌型菌化、一般的一般的病原性減弱傾向病原性減弱傾向。、病原性病原性弱弱事事原因不明疾患原因不明疾患可能性可能性考考、一、一、川崎病川崎病検討。今回検

9、討。今回L型菌株型菌株様化膿様化膿球菌球菌L型菌原因、抗型菌原因、抗SLO 抗体、抗抗体、抗SK抗体患者検抗体患者検出事出事理解理解、種症状関連、種症状関連可能性可能性。川崎病患者組織。川崎病患者組織、型菌様微生物観察型菌様微生物観察、他型菌疑知見、他型菌疑知見、今後、今後、更更川崎病病原川崎病病原体体L型菌型菌検討必要思。検討必要思。13 考察 L 型菌化 SLO 産生 L 型菌化場合蛋白量変化減少又減少又大量産生可能性大量産生可能性野生型野生型不安定型 L 型菌L 型菌型菌完全細胞壁不完全細胞壁蛋白蛋白蛋白量蛋白量 正常値正常値安定型 L 型菌細胞壁減少又消失減少又消失L 型菌細胞壁成分存

10、在報告、図様状態漏出蛋白過度産生、細胞壁完全失場合蛋白減少消失起考。川崎病川崎病化膿球菌否定点川崎病化膿球菌否定点患者検体、溶連菌、L型菌分離川崎病患者回復期血中ASLO値、ASK値上昇系抗生剤無効参考川崎病L型菌疑点陰性菌様、様、型菌様、形容微小粒子、患者急性期血液、発疹部皮下組織冠状動脈瘤部心筋炎部観察（電子顕微鏡）、型菌細胞表面形態、大小細胞点類似。無効。L 型菌通常菌比分離培養困難。川崎病患者Cater、川崎病患者Ueno、川崎病患者Ueno、川崎病患者濱島、川崎病患者検出細菌様微小粒子川崎病Cater川崎病Ueno川崎病濱島、川崎病Ueno発疹部皮下組織血液脾臓炎病巣部血液川崎病（Ueno）L型菌L株（江田、）川崎病患者細菌様微小粒子型菌形態的近似川崎病患者細菌様微小粒子型菌形態的近似 細菌様微細菌様微小粒子小粒子型菌型菌