蛋白质的结构与功能课件.ppt

1、蛋白质的结构与功能蛋白质的结构与功能 第第 一一 章章Structure and Function of ProteinCHONS氨基酸氨基酸蛋白质蛋白质元素元素生生命命 蛋白质的分子组成蛋白质的分子组成The Molecular Component of Protein一、一、组成蛋白质的元素及组成蛋白质的元素及特点特点*有些蛋白质还含有少量的有些蛋白质还含有少量的P P、FeFe、CuCu、MnMn、ZnZn、SeSe、I I等等。C 50 55%H 6 7%O 19 24%N 13 19%S 0 4%主要元素组成主要元素组成 各种蛋白质的含氮量很接近，平均为各种蛋白质的含氮量很接近，平均

2、为1616。由于生物样品的含氮物质以蛋白质为主，由于生物样品的含氮物质以蛋白质为主，因此，只要测定生物样品中的含氮量，就可因此，只要测定生物样品中的含氮量，就可以根据以下公式推算出蛋白质的大致含量以根据以下公式推算出蛋白质的大致含量：100100克样品中蛋白质的含量克样品中蛋白质的含量 (g%)(g%)=每克样品含氮克数每克样品含氮克数 6.25 6.251001001/16%蛋白质元素组成的特点蛋白质元素组成的特点*蛋白质的基本组成单位蛋白质的基本组成单位*存在自然界中的氨基酸有存在自然界中的氨基酸有300300余种，余种，但组成人体蛋白质的基本氨基酸仅有但组成人体蛋白质的基本氨基酸仅有20

3、20种。种。氨基酸的通式氨基酸的通式:L-L-氨基酸氨基酸 氨基均连接在紧靠羧基的氨基均连接在紧靠羧基的-碳原子上碳原子上故称故称-氨基酸氨基酸且均属且均属 L-L-氨基酸（甘氨酸氨基酸（甘氨酸除外）。除外）。H甘氨酸甘氨酸CH3丙氨酸丙氨酸L L-氨基酸的通式氨基酸的通式R C+NH3COO-H 侧链侧链两性解离特性两性解离特性不同的理化不同的理化性质和功能性质和功能 2020种氨基酸中，除种氨基酸中，除脯氨酸脯氨酸和和甘氨酸甘氨酸外，其余均属于外，其余均属于L-L-氨氨基酸基酸。COOH H2N C H R 例外：例外：脯氨酸脯氨酸亚氨基酸亚氨基酸甘氨酸甘氨酸 没有手性没有手性1.1.非极

4、性疏水性氨基酸非极性疏水性氨基酸(7(7种种)2.2.极性中性氨基酸极性中性氨基酸(8(8种种)3.3.酸性氨基酸酸性氨基酸（AspAsp、GluGlu）4.4.碱性氨基酸碱性氨基酸（ArgArg、HisHis、LysLys）三、氨基酸的分类三、氨基酸的分类*（按（按R R基团在中性溶液中的解离性质分）基团在中性溶液中的解离性质分）甘氨酸甘氨酸 glycine Gly G 5.97丙氨酸丙氨酸 alanine Ala A 6.00缬氨酸缬氨酸 valine Val V 5.96亮氨酸亮氨酸 leucine Leu L 5.98 异亮氨酸异亮氨酸 isoleucine Ile I 6.02 苯丙

5、氨酸苯丙氨酸 phenylalanine Phe F 5.48脯氨酸脯氨酸 proline Pro P 6.301.非极性疏水性氨基酸非极性疏水性氨基酸色氨酸色氨酸 tryptophan Trp W 5.89丝氨酸丝氨酸 serine Ser S 5.68酪氨酸酪氨酸 tyrosine Tyr Y 5.66 半胱氨酸半胱氨酸 cysteine Cys C 5.07 蛋氨酸蛋氨酸 methionine Met M 5.74天冬酰胺天冬酰胺 asparagine Asn N 5.41 谷氨酰胺谷氨酰胺 glutamine Gln Q 5.65 苏氨酸苏氨酸 threonine Thr T 5.60

6、2.极性中性氨基酸极性中性氨基酸天冬氨酸天冬氨酸 aspartic acid Asp D 2.97谷氨酸谷氨酸 glutamic acid Glu E 3.22赖氨酸赖氨酸 lysine Lys K 9.74精氨酸精氨酸 arginine Arg R 10.76组氨酸组氨酸 histidine His H 7.593.酸性氨基酸酸性氨基酸4.碱性氨基酸碱性氨基酸习惯分类方法习惯分类方法1.芳香族氨基酸芳香族氨基酸：Trp、Tyr、Phe2.含羟基氨基酸含羟基氨基酸：Ser、Thr、Tyr3.含硫氨基酸含硫氨基酸：Cys、Met4.杂环族氨基酸：杂环族氨基酸：His5.杂环族亚氨基酸：杂环族亚氨

7、基酸：Pro6.支链氨基酸支链氨基酸：Val、Leu、Ile另外：另外：1 1、蛋白质中的很多氨基酸是经过加工修、蛋白质中的很多氨基酸是经过加工修 饰的饰的修饰氨基酸修饰氨基酸 如：如：脯氨酸脯氨酸 羟基化羟基化 成成 羟脯氨酸羟脯氨酸 赖氨酸赖氨酸 羟基化羟基化 成成 羟赖氨酸羟赖氨酸2 2、半胱氨酸半胱氨酸常以常以胱氨酸胱氨酸的形式存在的形式存在-OOC-CH-CH2-S+NH3S-CH2-CH-COO-+NH3-OOC-CH-CH2-S+NH3S-CH2-CH-COO-+NH3 +胱氨酸胱氨酸二硫键二硫键-HH-OOC-CH-CH2-SH+NH3-OOC-CH-CH2-SH+NH3HS-

8、CH2-CH-COO-+NH3HS-CH2-CH-COO-+NH3四、氨基酸的理化性质四、氨基酸的理化性质1.1.两性解离及等电点两性解离及等电点等电点等电点(isoelectric(isoelectric point,pI)point,pI)在某一在某一pHpH的溶液中，氨基酸解离成的溶液中，氨基酸解离成阳离子和阴离子的趋势及程度相等，成阳离子和阴离子的趋势及程度相等，成为兼性离子，呈电中性。此时溶液的为兼性离子，呈电中性。此时溶液的pHpH值值称为该氨基酸的称为该氨基酸的等电点等电点。CHNH2COOHR CHNH2COOHRCHNH3+COO-R CHNH3+COO-RCHNH2COO-

9、R CHNH2COO-RCH COOHRNH3+CH COOHRNH3+思考思考:酸性氨基酸的等电点偏酸还是偏碱酸性氨基酸的等电点偏酸还是偏碱?五、氨基酸之间的连接方式五、氨基酸之间的连接方式 1 1）连接方式：肽键）连接方式：肽键 肽键肽键(peptide bond)(peptide bond)：是由一个氨基酸的是由一个氨基酸的-羧基羧基与另一个氨基酸的与另一个氨基酸的-氨基氨基脱水缩合脱水缩合而形成的化学键。而形成的化学键。氨基酸残基氨基酸残基(residue):(residue):肽链中的氨基酸分肽链中的氨基酸分子因为脱水缩合而基团不全，被称为氨基子因为脱水缩合而基团不全，被称为氨基酸残

10、基。酸残基。NH2-CH-CHOOH甘甘氨氨酸酸NH2-CH-CHOOH甘甘氨氨酸酸NH-CH-CHOHO OH甘甘氨氨酸酸+-HOH甘氨酰甘氨酸甘氨酰甘氨酸肽键肽键NH2-CH-C-N-CH-COOHHHHONH2-CH-C-N-CH-COOHHHHO氨基酸残基氨基酸残基氨基酸残基氨基酸残基氨基末端氨基末端羧基末端羧基末端12*两分子氨基酸缩合形成两分子氨基酸缩合形成二肽二肽，三分，三分子氨基酸缩合则形成子氨基酸缩合则形成三肽三肽*由十个以内由十个以内氨基酸氨基酸相连而相连而成成的的肽肽称称为为寡肽寡肽(oligopeptide)，由更多的氨基酸由更多的氨基酸相连形成的肽称相连形成的肽称多肽

11、多肽(polypeptide)。*多肽链多肽链(polypeptide chain)是指许多是指许多氨基酸之间以肽键连接而成的一种氨基酸之间以肽键连接而成的一种结构。结构。N N 末端：多肽链中有自由氨基的一端末端：多肽链中有自由氨基的一端C C 末端：多肽链中有自由羧基的一端末端：多肽链中有自由羧基的一端）多肽链有方向性：）多肽链有方向性：N端C端N末端末端C末端末端牛核糖核酸酶牛核糖核酸酶六、重要的六、重要的生物活性肽生物活性肽(了解了解)1.1.谷胱甘肽谷胱甘肽(glutathione,GSH)(glutathione,GSH)GSH过氧过氧化物酶化物酶H2O2 2GSH 2H2O GS

12、SG GSH还原酶还原酶NADPH+H+NADP+GSH 有抗氧化剂的作用，可还原细胞有抗氧化剂的作用，可还原细胞内产生的过氧化氢内产生的过氧化氢 体内许多激素属寡肽或多肽体内许多激素属寡肽或多肽 神经肽神经肽(neuropeptide)P P物质（物质（1010肽、属神经肽类）、肽、属神经肽类）、（3131肽）肽）2.2.多肽类激素及神经肽多肽类激素及神经肽抗利尿素与催产素抗利尿素与催产素(9(9肽肽)、胰高血糖素（、胰高血糖素（2929肽）、肽）、降钙素（降钙素（3232肽）、肽）、ACTHACTH（3939肽）、胰岛素（肽）、胰岛素（5151肽）肽）*根据蛋白质组成分根据蛋白质组成分 单

13、纯蛋白质单纯蛋白质结合蛋白质结合蛋白质 =蛋白质部分蛋白质部分 +非蛋白质部分非蛋白质部分 *根据蛋白质形状分根据蛋白质形状分 纤维状蛋白质纤维状蛋白质球状蛋白质球状蛋白质*根据蛋白质功能分根据蛋白质功能分 蛋白质的分子结构蛋白质的分子结构The Molecular Structure of Protein 第第 二二 节节蛋白质的分子结构包括（人为划分）蛋白质的分子结构包括（人为划分）一级结构一级结构(primary structure)(primary structure)二级结构二级结构(secondary structure)(secondary structure)三级结构三级结构(

14、tertiary structure)(tertiary structure)四级结构四级结构(quaternary structure)(quaternary structure)高级高级结构结构定义：定义：蛋白质的一级结构指多肽链中蛋白质的一级结构指多肽链中氨基酸氨基酸 的排列顺序的排列顺序。一、蛋白质的一级结构一、蛋白质的一级结构 主要的维系键：主要的维系键：肽键肽键 有些蛋白质还包括二硫键。有些蛋白质还包括二硫键。第一个被确定一级结构的蛋白质：第一个被确定一级结构的蛋白质：胰岛素胰岛素一级结构是蛋白质空间构象和特异生物学功能一级结构是蛋白质空间构象和特异生物学功能的基础的基础,但不是唯

15、一的决定因素。但不是唯一的决定因素。二、蛋白质的二级结构二、蛋白质的二级结构蛋白质分子中某一段肽链蛋白质分子中某一段肽链主链原主链原子的子的局部空间结构，局部空间结构，不包括氨基酸残不包括氨基酸残基侧链基侧链的构象的构象。(一一)定义定义:二级结构的基本单位二级结构的基本单位：肽键平面或肽单元肽键平面或肽单元肽键平面肽键平面由于肽键具有由于肽键具有部分双键部分双键的性质，使的性质，使参与肽键构成的参与肽键构成的4个原子和两侧的个原子和两侧的被束被束缚在同一平面上，这一平面称为缚在同一平面上，这一平面称为肽键平面或肽单肽键平面或肽单元元。肽单元肽单元(肽键平面肽键平面-理解理解)l由于由于-碳原

16、碳原子与其他原子子与其他原子之间均以之间均以单键单键相连相连，因此，因此两两相邻的肽键平相邻的肽键平面可以作相对面可以作相对旋转旋转 (二）蛋白质二级结构的主要形式二）蛋白质二级结构的主要形式*-螺旋螺旋 (-helix)-helix)-折叠折叠 (-pleated sheet)-pleated sheet)-转角转角 (-turn)-turn)无规卷曲无规卷曲 (random coil)(random coil)-螺旋是螺旋是多肽链的主多肽链的主链原子沿一链原子沿一中心轴盘绕中心轴盘绕所形成的有所形成的有规律的螺旋规律的螺旋构象构象 结构要点结构要点*：（1 1）主链通过）主链通过-碳原子旋

17、转形成稳固的碳原子旋转形成稳固的右右 手螺旋。手螺旋。（2 2）每）每3.63.6个个氨基酸残基上升一圈，间距氨基酸残基上升一圈，间距 0.15nm0.15nm，螺距，螺距0.54nm0.54nm。（3 3）相邻两圈螺旋之间借）相邻两圈螺旋之间借氢键氢键稳定。（这是稳定。（这是 稳定稳定-螺旋的主要键）螺旋的主要键）（4 4）肽链中氨基酸侧链）肽链中氨基酸侧链R R，伸展在螺旋外侧。，伸展在螺旋外侧。（其形状、大小及电荷影响（其形状、大小及电荷影响 -螺旋的形成）螺旋的形成）2.2.-折叠折叠 -折叠是由若干肽段或肽链排列起来所形成折叠是由若干肽段或肽链排列起来所形成的扇面状片层构象的扇面状片

18、层构象 结构特征：结构特征：(1)(1)肽肽键键平面之间折叠成锯齿状，相邻肽键平面之间折叠成锯齿状，相邻肽键 平面间呈平面间呈1101100 0夹角夹角 (2)(2)氨基酸残基的氨基酸残基的R R侧链伸出在锯齿的上方侧链伸出在锯齿的上方 或下方。或下方。(3)(3)依靠两条肽链或一条肽链内的两段肽链依靠两条肽链或一条肽链内的两段肽链 间的间的C CO O与与N-HN-H形成氢键，使构象稳定。形成氢键，使构象稳定。(4)(4)两段肽链可以是逆向平行，也可以是顺两段肽链可以是逆向平行，也可以是顺 向平行。向平行。-折叠包括顺向折叠包括顺向平行平行和和反向平行反向平行两种类型两种类型3.3.-转角转

19、角 是多肽链是多肽链180180回折部分回折部分所形成所形成的一种二级结构的一种二级结构无规卷曲是用来阐述没有确定规律性的那部无规卷曲是用来阐述没有确定规律性的那部分肽链结构。分肽链结构。4.4.无规卷曲无规卷曲（五）（五）影响二级结构形成的因素：影响二级结构形成的因素：1 1）侧链基团的大、小）侧链基团的大、小 2 2）侧链基团的带电性质）侧链基团的带电性质 3 3）脯氨酸是）脯氨酸是-螺旋的绝对破坏者螺旋的绝对破坏者（四）主要的维系键（四）主要的维系键：氢键氢键 三、蛋白质的三级结构三、蛋白质的三级结构疏水键、离子键、氢键和疏水键、离子键、氢键和 范德华力等。范德华力等。（二）维系键：（二

20、）维系键：整条肽链中整条肽链中全部氨基酸残基全部氨基酸残基的相对空的相对空间位置。即肽链中间位置。即肽链中所有原子在三维空间的所有原子在三维空间的排布位置。排布位置。（一）（一）定义定义 次级键次级键对于对于单一多肽链的蛋白质，单一多肽链的蛋白质，三级结三级结构是它的构是它的最高级结构，最高级结构，只有具有完只有具有完整的三级结构，才具有全部的整的三级结构，才具有全部的生物生物学功能学功能 肌红蛋白肌红蛋白(Mb)N 端端 C端端 为单肽蛋白质，为单肽蛋白质，含有含有153个氨基酸，个氨基酸，有有8个螺旋区个螺旋区（三）结构域（三）结构域大分子蛋白质的三级结构常大分子蛋白质的三级结构常可分割成

21、一个或数个球状或纤维可分割成一个或数个球状或纤维状的区域，折叠得较为紧密，各状的区域，折叠得较为紧密，各行使其功能。行使其功能。三级结构中独立执行某种功三级结构中独立执行某种功能的局部区域，称为能的局部区域，称为结构域结构域(domain)(domain)。作用力作用力:亚基之间的结合力主要是亚基之间的结合力主要是疏水力疏水力，其次是其次是氢键、离子键和范德华力氢键、离子键和范德华力 。四、蛋白质的四级结构四、蛋白质的四级结构定义定义:蛋白质分子中各亚基的空间排布及蛋白质分子中各亚基的空间排布及亚基接触部位的布局和相互作用，称为亚基接触部位的布局和相互作用，称为蛋白质蛋白质的四级结构的四级结构

22、。有些蛋白质分子含有二条或多条多肽链，有些蛋白质分子含有二条或多条多肽链，每一条具有完整三级结构的多肽链，称为蛋白每一条具有完整三级结构的多肽链，称为蛋白质的质的亚基亚基(subunit)。蛋白质结构与功能的关系蛋白质结构与功能的关系The Relation of Structure and Function of Protein第第 三三 节节（一）一级结构是空间构象的基础（一）一级结构是空间构象的基础一级结构相似的蛋白质，其基本构象及功能也一级结构相似的蛋白质，其基本构象及功能也相似。相似。如不同哺乳类动物的胰岛素分子，一级结构中仅如不同哺乳类动物的胰岛素分子，一级结构中仅个别氨基酸有差异

23、，形成的空间结构与功能均相似个别氨基酸有差异，形成的空间结构与功能均相似在蛋白质的一级结构中，参与在蛋白质的一级结构中，参与功能活性部位功能活性部位的残的残基或处于基或处于特定构象关键部位特定构象关键部位的残基，即使在整个分子的残基，即使在整个分子中发生一个残基的异常，该蛋白质的功能也会受到明中发生一个残基的异常，该蛋白质的功能也会受到明显的影响。显的影响。一、蛋白质一级结构与功能的关系一、蛋白质一级结构与功能的关系 例：镰刀形红细胞贫血例：镰刀形红细胞贫血N-val his leu thr pro glu glu C(146)N-val his leu thr pro val glu C(1

24、46)这种由蛋白质分子发生变异所导致这种由蛋白质分子发生变异所导致的疾病，称为的疾病，称为“分子病分子病”。重要蛋白质氨基酸序列的改变可引起疾病重要蛋白质氨基酸序列的改变可引起疾病分子伴侣分子伴侣(molecular chaperones)(molecular chaperones)分子伴侣是蛋白质合成过程中形成空间分子伴侣是蛋白质合成过程中形成空间结构的控制因子。结构的控制因子。在新生肽链的折叠、加工和穿膜进入细在新生肽链的折叠、加工和穿膜进入细胞的过程中起关键作用。胞的过程中起关键作用。通过提供一个保护环境从而加速蛋白质通过提供一个保护环境从而加速蛋白质折叠成天然构象或形成四级结构。折叠成

25、天然构象或形成四级结构。一级结构是决定蛋白质空间构象唯一的决定因素吗一级结构是决定蛋白质空间构象唯一的决定因素吗?蛋白质的空间构象是其功能活性的基础，蛋白质的空间构象是其功能活性的基础，构象发生变化，其功能活性也随之改变。构象发生变化，其功能活性也随之改变。二、蛋白质空间结构与功能的关系二、蛋白质空间结构与功能的关系 肌红蛋白肌红蛋白 MbMb血红蛋白血红蛋白 HbHb第四节第四节蛋白质的理化性质和分离纯化蛋白质的理化性质和分离纯化The Physical and Chemical Characters and Separation and Purification of Protein（一）

26、蛋白质的两性电离特性（一）蛋白质的两性电离特性 一、理化性质一、理化性质 蛋白质分子除两端的氨基和羧基可解离外，蛋白质分子除两端的氨基和羧基可解离外，氨基酸残基侧链中某些基团，在一定的溶液氨基酸残基侧链中某些基团，在一定的溶液pHpH条条件下都可解离成带负电荷或正电荷的基团。件下都可解离成带负电荷或正电荷的基团。*蛋白质的蛋白质的等电点等电点(isoelectric point,pI(isoelectric point,pI)COOHNH2COONH3NH3COOHNH2COO-+OH+H-+OH-+H+-pH=pIpHpIpHpIprprprpr当蛋白质溶液处于某一当蛋白质溶液处于某一pHp

27、H时，蛋白质解离成正、负时，蛋白质解离成正、负离子的趋势相等，即成为兼性离子，净电荷为零，离子的趋势相等，即成为兼性离子，净电荷为零，此时溶液的此时溶液的pHpH称为称为蛋白质的等电点蛋白质的等电点碱碱负负酸正酸正思考：思考：1 1）含酸性氨基酸较多的蛋白质其等电点）含酸性氨基酸较多的蛋白质其等电点 是偏酸还是偏碱？是偏酸还是偏碱？2 2）等电点为）等电点为6 6的蛋白质于的蛋白质于8.68.6的缓冲溶的缓冲溶 液中，其于电场中向何方向移动？液中，其于电场中向何方向移动？应用：电泳、离子交换层析分离蛋白质应用：电泳、离子交换层析分离蛋白质（二）蛋白质的胶体性质（二）蛋白质的胶体性质 1 1、分

28、子大，不易透过半透膜、分子大，不易透过半透膜-用于透析、超滤。用于透析、超滤。举例：胶原蛋白的分离纯化举例：胶原蛋白的分离纯化2 2、可形成稳定的水溶液：、可形成稳定的水溶液：稳定因素稳定因素*:水化膜、表面电荷水化膜、表面电荷 思考：若欲使蛋白质沉淀，可采取何策略？思考：若欲使蛋白质沉淀，可采取何策略？+带正电荷的蛋白质带正电荷的蛋白质带负电荷的蛋白质带负电荷的蛋白质在等电点的蛋白质在等电点的蛋白质水化膜水化膜+带正电荷的蛋白质带正电荷的蛋白质带负电荷的蛋白质带负电荷的蛋白质不稳定的蛋白质颗粒不稳定的蛋白质颗粒酸酸碱碱酸酸碱碱酸酸碱碱脱水作用脱水作用脱水作用脱水作用脱水作用脱水作用溶液中蛋白

29、质的聚沉溶液中蛋白质的聚沉（三）蛋白质的变性、沉淀和凝固（三）蛋白质的变性、沉淀和凝固 、蛋白质的变性、蛋白质的变性(denaturation(denaturation)）定义）定义*：在某些物理和化学因素在某些物理和化学因素作用下，其特定的空间构象被破坏，从作用下，其特定的空间构象被破坏，从而导致其理化性质改变和生物活性的丧而导致其理化性质改变和生物活性的丧失的现象。失的现象。）造成变性的因素）造成变性的因素物理因素：高温、高压、紫外线照射、物理因素：高温、高压、紫外线照射、剧烈震荡剧烈震荡等等化学因素：化学因素：强酸、强碱、有机溶剂、重强酸、强碱、有机溶剂、重 金属盐等金属盐等）变性的本质

30、：）变性的本质：空间结构破坏（次级键断裂），空间结构破坏（次级键断裂），）性质改变）性质改变*：生物学活性丧失生物学活性丧失 溶解度下降溶解度下降 粘度增加粘度增加 易被蛋白酶水解易被蛋白酶水解 应用举例应用举例临床医学上，变性因素常被用来消毒临床医学上，变性因素常被用来消毒及灭菌。及灭菌。此外此外,防止蛋白质变性也是有效保存防止蛋白质变性也是有效保存蛋白质制剂（如疫苗等）的必要条件。蛋白质制剂（如疫苗等）的必要条件。若蛋白质变性程度较轻，去除变性若蛋白质变性程度较轻，去除变性因素后，蛋白质仍可恢复或部分恢复其因素后，蛋白质仍可恢复或部分恢复其原 有 的 构 象 和 功 能，称 为原 有 的

31、构 象 和 功 能，称 为 复 性复 性(renaturation(renaturation)。、蛋白质的复性、蛋白质的复性 天然状态，天然状态，有催化活性有催化活性 尿素、尿素、-巯基乙醇巯基乙醇 去除尿素、去除尿素、-巯基乙醇巯基乙醇非折叠状态，无活性非折叠状态，无活性、蛋白质沉淀、蛋白质沉淀在一定条件下，蛋白质在一定条件下，蛋白质从溶液中析出从溶液中析出的现象。的现象。变性与沉淀的关系变性与沉淀的关系变性的蛋白质易于沉淀，但不一定沉变性的蛋白质易于沉淀，但不一定沉淀；沉淀了的蛋白质也并不一定变性。淀；沉淀了的蛋白质也并不一定变性。、蛋白质的凝固作用、蛋白质的凝固作用(protein co

32、agulation)(protein coagulation)蛋白质变性后的絮状物加热可变成比较坚固蛋白质变性后的絮状物加热可变成比较坚固的凝块，此凝块不易再溶于强酸和强碱中。的凝块，此凝块不易再溶于强酸和强碱中。（四）蛋白质的紫外吸收（四）蛋白质的紫外吸收*由于蛋白质分子中含有共轭双键的由于蛋白质分子中含有共轭双键的酪酪氨酸和色氨酸氨酸和色氨酸，因此在，因此在280nm280nm波长处有特波长处有特征性吸收峰。蛋白质的征性吸收峰。蛋白质的ODOD280280与其浓度呈与其浓度呈正比关系，因此可作蛋白质定量测定。正比关系，因此可作蛋白质定量测定。（五）蛋白质的呈色反应（五）蛋白质的呈色反应Fo

33、linFolin-酚试剂反应酚试剂反应 蛋白质分子中带有蛋白质分子中带有酚羟基酚羟基的酪氨酸在碱性的酪氨酸在碱性条件下条件下,能与酚试剂反应生成蓝色化合物。能与酚试剂反应生成蓝色化合物。双缩脲反应双缩脲反应(biuret(biuret reaction)reaction)蛋白质和多肽分子中蛋白质和多肽分子中肽键肽键在稀碱溶液中与在稀碱溶液中与硫酸铜共热，呈现紫色或红色，此反应称为硫酸铜共热，呈现紫色或红色，此反应称为双双缩脲反应缩脲反应，双缩脲反应可用来检测蛋白质水解，双缩脲反应可用来检测蛋白质水解程度。程度。附：蛋白质的分离纯化方法附：蛋白质的分离纯化方法（一）根据分子大小不同根据分子大小不同 （三）利用溶解度和亲和力差别（三）利用溶解度和亲和力差别（二）根据带电性质和多少不同根据带电性质和多少不同 透析、超滤、凝胶过滤、超速离心等透析、超滤、凝胶过滤、超速离心等电泳、离子交换层析等电泳、离子交换层析等 丙酮沉淀、盐析、免疫沉淀、丙酮沉淀、盐析、免疫沉淀、亲和层析等亲和层析等