糖醛酸-硫酸咔唑课件.ppt

1、1肝素肝素硫酸软骨素硫酸软骨素黄芪多糖黄芪多糖枸杞多糖枸杞多糖香菇多糖香菇多糖灵芝多糖灵芝多糖海洋真菌多糖海洋真菌多糖螺旋藻多糖螺旋藻多糖第一节第一节 概述概述:多糖的分类多糖的分类-来源来源2组成分类：组成分类：n均一多糖均一多糖n不均一多糖不均一多糖n粘多糖粘多糖：含氮的不均一多糖：含氮的不均一多糖n结合糖：结合糖：肽聚糖、脂多糖、肽聚糖、脂多糖、糖蛋白糖蛋白(glycoproteins)(glycoproteins)和蛋白聚糖和蛋白聚糖n糖蛋白通过糖肽键糖蛋白通过糖肽键(carbohydrate-peptide linkage)n将糖链和肽链两部分连接起来将糖链和肽链两部分连接起来,连接

2、方式主要分连接方式主要分为为-构型的构型的N-糖苷键和糖苷键和-构型的构型的O-糖苷键糖苷键.3n糖蛋白分为三种主要类型：糖蛋白分为三种主要类型：O O-糖苷键型糖蛋白、糖苷键型糖蛋白、N N-糖糖苷键型糖蛋白和连有磷脂酰肌醇苷键型糖蛋白和连有磷脂酰肌醇-聚糖的糖蛋白。聚糖的糖蛋白。n在大多数的在大多数的O O-糖苷键型糖蛋白糖苷键型糖蛋白中，中，GalNAcGalNAc残基通过残基通过O O-糖苷键与一个丝氨酸或苏氨酸残基连接形成，缩写为糖苷键与一个丝氨酸或苏氨酸残基连接形成，缩写为GalNAc-Ser/ThrGalNAc-Ser/Thr。n在在N N-糖苷键型糖蛋白糖苷键型糖蛋白中，中，G

3、lcNAcGlcNAc残基通过残基通过N N-糖苷键与糖苷键与一个天冬酰胺残基相连，缩写为一个天冬酰胺残基相连，缩写为GlcNAc-AsnGlcNAc-Asn。4O-糖苷键糖苷键N-糖苷键糖苷键O O-（N N-）糖苷键型糖蛋白）糖苷键型糖蛋白5磷酸乙醇胺残基磷酸乙醇胺残基磷脂酰肌醇磷脂酰肌醇-聚糖的糖聚糖的糖蛋白蛋白6蛋白聚糖蛋白聚糖n 软骨蛋白聚软骨蛋白聚糖糖:聚集体的分聚集体的分子量非常大（大子量非常大（大约为约为2108），），其中含有透明质其中含有透明质酸、硫酸角质素、酸、硫酸角质素、硫酸软骨素、连硫酸软骨素、连接蛋白、核心蛋接蛋白、核心蛋白和大量的寡糖白和大量的寡糖链。链。7 环化

4、单糖中氧化数最高的碳称为环化单糖中氧化数最高的碳称为异头碳异头碳。在环式结构。在环式结构中，中，吡喃吡喃呋喃呋喃多糖组成多糖组成-单糖单糖8葡萄糖环状结构9椅式构象椅式构象-D-葡萄糖 -D-葡萄糖n 10直链淀粉是葡萄糖以直链淀粉是葡萄糖以-1-1，4 4糖苷键结合成的链状化合物糖苷键结合成的链状化合物n OHOHOCH2OHOOHOHOCH2OHOOHOHOCH2OHOOOHOHOCH2OHO直链淀粉11纤维素12多糖的理化性质多糖的理化性质n旋光性旋光性 n硫酸蒽酮反应硫酸蒽酮反应（620nm）n硫酸苯酚反应硫酸苯酚反应(490nm)n氨基己糖氨基己糖乙酰丙酮乙酰丙酮(525nm)n糖醛

5、酸糖醛酸硫酸咔唑硫酸咔唑(520nm)13第二节第二节 多糖的纯度测定多糖的纯度测定 n（一）超离心法（一）超离心法:单一区带单一区带n（二）（二）电泳法：电泳法：单一色带单一色带n（三）（三）凝胶色谱法：凝胶色谱法：单一洗脱峰单一洗脱峰n（四）旋光法：（四）旋光法：均一组分均一组分14第三节第三节 多糖的分子量测定多糖的分子量测定 n凝胶色谱法凝胶色谱法n粘度法粘度法n超离心法超离心法n高效液相色谱高效液相色谱15凝胶层析法凝胶层析法n凝胶层析法：将分子量不同凝胶层析法：将分子量不同的蛋白质通过一定孔径的的蛋白质通过一定孔径的凝凝胶固定相胶固定相，由于各组分，由于各组分流经流经体积体积的差异

6、，使不同分子量的差异，使不同分子量的组分得以分离。的组分得以分离。n最先淋出的是最大的分子最先淋出的是最大的分子。nKd=0，Ve=V0；nKd=1，Ve=V0+Vi；n0Kd1，Ve=V0+KdVi。16凝胶色谱法凝胶色谱法n方法：方法：nSephadex G-200，多糖标准品，多糖标准品n分部收集，硫酸分部收集，硫酸-苯酚检测，分别求得洗苯酚检测，分别求得洗脱体积脱体积Ve，Ve与与 1gM之间存在着线性关之间存在着线性关系，绘制标准曲线。系，绘制标准曲线。n Ve=-KlogM+Cn将待测样品上柱，待测多糖将待测样品上柱，待测多糖Ve。n通过标准曲线求出待测多糖分子量。通过标准曲线求出

7、待测多糖分子量。17粘度法、超离心法粘度法、超离心法n粘度法粘度法：用已知结构相似的多糖决定：用已知结构相似的多糖决定K值值（K M2），然后测出待测多糖的特），然后测出待测多糖的特性粘数性粘数，计算待测多糖的分子量。，计算待测多糖的分子量。n超离心法：根据测得的沉降系数计算多糖超离心法：根据测得的沉降系数计算多糖的平均分子量。的平均分子量。18高效液相色谱法测定分子量及高效液相色谱法测定分子量及分布分布n色谱条件色谱条件：凝胶柱（分子量大小），示差折光检测器。凝胶柱（分子量大小），示差折光检测器。n标准曲线：标准曲线：n 标准曲线：标准曲线：LogMW=a+b tRn MW为重均分子量为重均

8、分子量，tR为保留时间为保留时间n待测多糖分子量（待测多糖分子量（GPC专用软件）专用软件）：n 重均分子量重均分子量 Mw=(RIiMi)/RIinMi为为供试品在保留时间供试品在保留时间ti 时的分子量时的分子量，RIi在第在第i部分中部分中被洗脱物质的量（重量）被洗脱物质的量（重量）。19第四节、多糖的含量测定第四节、多糖的含量测定n比色法（硫酸咔唑法、乙酰丙酮法、比色法（硫酸咔唑法、乙酰丙酮法、硫酸苯酚法、蒽酮法）硫酸苯酚法、蒽酮法）n生物测定法（肝素钠）生物测定法（肝素钠）n生色底物法生色底物法（低分子量肝素钠）（低分子量肝素钠）20乙酰丙酮法乙酰丙酮法（elson-morgan）氨

9、基己糖氨基己糖n原理：原理：n氨基己糖在碱性条件下氨基己糖在碱性条件下加热，可与加热，可与乙酰丙酮乙酰丙酮缩缩合成吡咯衍生物，该衍合成吡咯衍生物，该衍生物与生物与对二甲氨基苯对二甲氨基苯甲醛甲醛反应，反应物呈红反应，反应物呈红色，色，于于525nm测定吸测定吸收度收度。21硫酸咔唑法测糖含量硫酸咔唑法测糖含量n硫酸硫酸咔唑法咔唑法己糖醛酸测定己糖醛酸测定n在浓硫酸中，己糖醛酸与咔在浓硫酸中，己糖醛酸与咔唑溶液反应生成的反应物呈唑溶液反应生成的反应物呈红色。红色。n 520nm比色比色22硫酸苯酚法测定糖含量（总糖）硫酸苯酚法测定糖含量（总糖）n原理：原理：多糖在浓硫酸作多糖在浓硫酸作用下水解成

10、单糖，该单用下水解成单糖，该单糖在强酸性条件下，与糖在强酸性条件下，与苯酚反应生成苯酚反应生成橙色衍生橙色衍生物。物。n它在它在490nm处有最大吸处有最大吸收，其吸光度与浓度呈收，其吸光度与浓度呈线性关系。线性关系。23蒽酮法测定糖含量（总糖）蒽酮法测定糖含量（总糖）n原理：多糖在浓硫酸中原理：多糖在浓硫酸中水解后，进一步脱水生水解后，进一步脱水生产糠醛类衍生物，产糠醛类衍生物，与蒽与蒽酮作用形成蓝色化合物，酮作用形成蓝色化合物，620nm进行比色测定。进行比色测定。n特点：特点：10-100g范围范围内其颜色的深浅与糖含内其颜色的深浅与糖含量成正比。量成正比。n灵敏度高。灵敏度高。24生物

11、测定法生物测定法肝素测定肝素测定n美国药典采用羊血浆法。美国药典采用羊血浆法。n即比较肝素标准品和供即比较肝素标准品和供试品延长血浆试品延长血浆凝结时间凝结时间的作用来测定肝素的效的作用来测定肝素的效价。价。25生物测定法生物测定法肝素测定方法肝素测定方法n标准品稀释液的配制标准品稀释液的配制:精密量取标准品溶液，按高、中、精密量取标准品溶液，按高、中、低剂量组（低剂量组（ds1、ds2、ds3）用）用0.9%氯化钠溶液配成氯化钠溶液配成三种浓度的稀释液，三种浓度的稀释液，相邻两浓度的比值为相邻两浓度的比值为1:0.7。n供试品稀释液的配制：按供试品的标示量或估计效价供试品稀释液的配制：按供试

12、品的标示量或估计效价（AT），照标准品溶液与稀释液的配制法配成高、中、），照标准品溶液与稀释液的配制法配成高、中、低（低（dT1、dT2、dT3）三种浓度的稀释液。）三种浓度的稀释液。n各管凝结时间换算成对数，照生物检定统计法中的各管凝结时间换算成对数，照生物检定统计法中的量反量反应平行线应平行线测定法计算效价及实验误差。测定法计算效价及实验误差。n可信限率（可信限率（FL%）不得大于）不得大于5%。26生色底物法原理肝素、低分子肝素生色底物法原理肝素、低分子肝素n n当蛋白酶（当蛋白酶（Fa）从生色底物分裂出从生色底物分裂出pNA时，时，发色发色物的产生量物的产生量与剩余的酶量成正比，与与剩

13、余的酶量成正比，与肝素效价肝素效价成成反比反比。n405 nm测定。测定。27生色底物生色底物nBz：苯甲酰，：苯甲酰，Pip：哌啶酰，：哌啶酰，Tos：甲苯磺酰；：甲苯磺酰；对对-硝基苯胺（硝基苯胺（pNA）。n酰胺分解法酰胺分解法（amidolytic method）。）。n当蛋白酶从生色底物分裂出当蛋白酶从生色底物分裂出pNA时，发色物的产时，发色物的产生量与剩余的酶量成正比，与生量与剩余的酶量成正比，与肝素效价肝素效价成成反比反比。n405 nm测定。测定。28生色底物法生色底物法n 抗抗Xa因子活性测定因子活性测定 n以溶液吸收度和浓度的以溶液吸收度和浓度的对数，照生物检定统计对数，

14、照生物检定统计法中法中量反应平行线量反应平行线测定测定法计算出供试品的抗法计算出供试品的抗Xa因子活性因子活性n 可信限率可信限率(FL%)不得不得大于大于10%。29第五节、多糖类药物的结构分析第五节、多糖类药物的结构分析n单糖组成单糖组成n糖苷键连接方式糖苷键连接方式n糖苷键连接位置糖苷键连接位置DNA蛋白质蛋白质多糖多糖基本单元基本单元4种核苷酸天然20种氨基酸200多种单糖，常见20余种每种单糖存在异构体连接键连接键3-5磷酸二酯键N-C肽键1-1,1-2,1-3,1-4,1-6糖苷键连接键构型连接键构型一种一种存在、两种构型302个相同单糖连接形成的双糖有个相同单糖连接形成的双糖有1

15、1种种Glc-Glc1-1连接连接1-2连接连接1-3连接连接1-4连接连接1-6连接连接型三种海藻糖（-，-，-）曲二糖黑曲二糖麦芽糖异麦芽糖型槐糖昆布二糖纤维二糖龙胆二糖2个相同氨基酸连接形成的二肽仅个相同氨基酸连接形成的二肽仅1种种AlaAla31（一）多糖组成单糖的分析（一）多糖组成单糖的分析n1、水解方法、水解方法n（1 1）、完全酸水解法）、完全酸水解法n（2 2）、部分酸水解、碱水解）、部分酸水解、碱水解n（3）、乙酰解）、乙酰解n（4）、甲醇解甲醇解n（5）、酶降解酶降解n2、鉴定、鉴定32（1 1）、完全酸水解法）、完全酸水解法 n水解难易取决单糖性质及构型。水解难易取决单糖

16、性质及构型。n呋喃型戊聚糖呋喃型戊聚糖较较吡喃型己聚糖吡喃型己聚糖易易水解，水解，型型较较型型易水解。易水解。n已聚糖一般用已聚糖一般用1 mol/L硫酸，硫酸，70，8小时。小时。n氨基葡聚糖为氨基葡聚糖为4 mol/L盐酸，盐酸，100 9 9小时。小时。33 n（2 2）、部分酸水解、碱水解）、部分酸水解、碱水解n选择选择温和温和的条件水解多糖，使糖链中某的条件水解多糖，使糖链中某种类型的键种类型的键特异性地打断特异性地打断。n（3）、乙酰解）、乙酰解n多糖经过乙酰解反应（醋酐、冰醋酸）多糖经过乙酰解反应（醋酐、冰醋酸）可生成可生成乙酰化单糖乙酰化单糖和寡糖和寡糖34（4）、甲醇解）、甲

17、醇解n多糖链在多糖链在80100条件下与无水甲醇反条件下与无水甲醇反应能将糖链变成组成单糖的应能将糖链变成组成单糖的甲基糖苷甲基糖苷。n甲基糖苷能转化为甲基糖苷能转化为三甲基硅醚衍生物三甲基硅醚衍生物或或乙乙酰基衍生物酰基衍生物，进行气相色谱分析。，进行气相色谱分析。35（5）、酶降解）、酶降解n分为分为外切糖苷酶和内切糖苷酶外切糖苷酶和内切糖苷酶。n外切糖苷酶外切糖苷酶：切下多糖非还原末端的一个：切下多糖非还原末端的一个单糖，并对单糖组成和糖苷键有专一性要单糖，并对单糖组成和糖苷键有专一性要求。求。n内切糖苷酶内切糖苷酶可水解糖链内部的糖苷键，释可水解糖链内部的糖苷键，释放多糖链片断以利于结

18、构分析。放多糖链片断以利于结构分析。362、单糖的分离鉴定n气相色谱法气相色谱法n高效液相色谱法高效液相色谱法n气相色谱法与质谱分气相色谱法与质谱分析连用析连用37气相色谱法气相色谱法n常用的衍生物有：常用的衍生物有：n 三甲硅烷（三甲硅烷（TMS）衍生物）衍生物n 三氟乙酰（三氟乙酰（TEA）衍生物）衍生物n 乙酰（乙酰（AC）衍生物）衍生物n 甲基（甲基（Me）衍生物）衍生物38二、糖苷键连接方式的测定二、糖苷键连接方式的测定n红外光谱红外光谱糖苷键类型糖苷键类型n确定吡喃糖糖苷键时，用红外光谱，确定吡喃糖糖苷键时，用红外光谱，在在890cm-1处有特征吸收者，示有处有特征吸收者，示有-型

19、糖苷键，在型糖苷键，在840cm-1处有特征吸收者，示有处有特征吸收者，示有-型糖苷键型糖苷键。n核磁共振谱核磁共振谱糖苷键（糖苷键（型或型或型）。型）。nH-NMR谱中的化学位移谱中的化学位移5.4 和和 5.1，有两个有两个信号说明分子结构中的糖苷键为信号说明分子结构中的糖苷键为型型，如有，如有 4.53说明有说明有型型。39三、糖苷键连接位置的测定三、糖苷键连接位置的测定n（一）、高碘酸氧化、（一）、高碘酸氧化、Smith降解降解n（二）、甲基化反应产物分析（二）、甲基化反应产物分析n（三）、乙酰解后质谱分析（三）、乙酰解后质谱分析40（一）高碘酸氧化、（一）高碘酸氧化、Smith降解降

20、解n原理：原理：n选择性的氧化降解反应选择性的氧化降解反应，能够作用于多糖分子，能够作用于多糖分子中中1，2二羟基和二羟基和1，2，3三羟基，生成三羟基，生成过碘酸氧化产物过碘酸氧化产物；此产物用；此产物用硼氢化钠硼氢化钠还原后，还原后，再用酸水解，生成相应的醛、甲酸。再用酸水解，生成相应的醛、甲酸。n室温下用室温下用稀无机酸稀无机酸水解还原产物。水解还原产物。411，2连接的糖苷键连接的糖苷键n 1，2连接的糖苷键经连接的糖苷键经高碘酸氧化高碘酸氧化后的产物后的产物用用硼氢化钠还原硼氢化钠还原得到稳定的多羟基化合物，得到稳定的多羟基化合物，再用再用稀盐酸水解稀盐酸水解，得到，得到甘油及甘油醛

21、甘油及甘油醛。n方程式：方程式：421，3连接的糖苷键连接的糖苷键n1，3连接的糖苷键与高碘酸连接的糖苷键与高碘酸不起反应不起反应，经还原，经还原与水解后得到原来的单糖。与水解后得到原来的单糖。n方程式：方程式：431，4连接的糖苷键连接的糖苷键n1，4连接的糖苷键经高碘酸氧化后的产物用硼连接的糖苷键经高碘酸氧化后的产物用硼氢化钠还原，用稀盐酸水解得到最终产物为氢化钠还原，用稀盐酸水解得到最终产物为赤赤藓醇和乙醇醛藓醇和乙醇醛。44 1，6连接的糖苷键连接的糖苷键n 1，6连接的糖苷键经高碘酸氧化后的产物连接的糖苷键经高碘酸氧化后的产物用硼氢化钠还原得到稳定的多羟基化合物，用硼氢化钠还原得到稳

22、定的多羟基化合物，再用稀盐酸水解，得到再用稀盐酸水解，得到甘油及乙醇醛甘油及乙醇醛。45（二）甲基化反应产物分析（二）甲基化反应产物分析n原理：多糖经原理：多糖经甲基化试剂甲基化试剂作用使作用使分子中的羟基甲基化，然后用甲分子中的羟基甲基化，然后用甲酸和三氟醋酸水解，以酸和三氟醋酸水解，以气相色谱气相色谱鉴定甲基化水解产物。鉴定甲基化水解产物。n如多糖分子中带有支链，甲基化如多糖分子中带有支链，甲基化水解后可生成水解后可生成二甲基单糖二甲基单糖。46（三）乙酰（三）乙酰化化后质谱分析后质谱分析n原理：原理：多糖经过乙酰化反应（醋酐、冰醋酸）多糖经过乙酰化反应（醋酐、冰醋酸）生成乙酰化单糖和寡糖

23、。生成乙酰化单糖和寡糖。n用氯仿抽提，蒸去氯仿，进行用氯仿抽提，蒸去氯仿，进行质谱分析质谱分析。n分子离子峰如有分子离子峰如有二乙酰葡萄糖二乙酰葡萄糖或或二乙酰单糖二乙酰单糖碎片峰，表明有支链结构。碎片峰，表明有支链结构。47品种品种来源来源类别类别剂型剂型右旋糖酐 20发酵血浆代用品粉剂右旋糖酐 20葡萄糖注射液右酐20、葡萄糖血浆代用品注射剂右旋糖酐 20氯化钠注射液右酐20、氯化钠血浆代用品注射剂右旋糖酐 40发酵血浆代用品粉剂右旋糖酐 40葡萄糖注射液右酐40、葡萄糖血浆代用品注射剂右旋糖酐 40氯化钠注射液右酐40、氯化钠血浆代用品注射剂右旋糖酐 70发酵血浆代用品粉剂右旋糖酐 70

24、葡萄糖注射液右酐70、葡萄糖血浆代用品注射剂右旋糖酐 70氯化钠注射液右酐70、氯化钠血浆代用品注射剂右旋糖酐铁络合物抗贫血药粉剂右旋糖酐铁片右酐铁抗贫血药片剂右旋糖酐铁注射液右酐铁抗贫血药注射剂肝素钠猪、牛肠粘膜抗凝血药粉剂肝素钠注射液肝素钠抗凝血药注射剂肝素钠乳膏肝素钠抗凝血药软膏硫酸软骨素钠猪喉骨、鼻中骨、气管酸性粘多糖类粉剂硫酸软骨素钠片硫酸软骨素钠酸性粘多糖类片剂硫酸软骨素钠胶囊硫酸软骨素钠酸性粘多糖类胶囊剂2015年版中国药典收载的多糖类药品48实例：右旋糖酐实例：右旋糖酐（dextran）n右旋糖酐，又称葡聚糖，是若干个葡萄糖脱水形成右旋糖酐，又称葡聚糖，是若干个葡萄糖脱水形成的

25、聚合物。的聚合物。n微生物多糖微生物多糖，也是第一个工业化的微生物多糖，是，也是第一个工业化的微生物多糖，是由肠膜明串珠菌（由肠膜明串珠菌（Leuconostoc mesenteroides）发酵产生的。发酵产生的。n产物的分子量很大，经水解后，用不同浓度乙醇多产物的分子量很大，经水解后，用不同浓度乙醇多定分级沉淀，得到中、低、小分子量的右旋糖酐成定分级沉淀，得到中、低、小分子量的右旋糖酐成品。品。n临床上使用的是平均分子量为临床上使用的是平均分子量为1600024000，3200042000和和6400076000的的右旋糖酐右旋糖酐20、右旋糖酐右旋糖酐40和右旋糖酐和右旋糖酐70，它们均

26、是用做，它们均是用做代血浆代血浆。49一、结构与理化性质一、结构与理化性质n右 旋 糖 酐 的 结 构：右 旋 糖 酐 的 结 构：它 主 要 由 葡 萄 糖它 主 要 由 葡 萄 糖（16）-糖苷键连接而成，同时含有糖苷键连接而成，同时含有(13)-和和(14)-糖苷键连接形成的糖苷键连接形成的分支结构。分支结构。n右旋糖酐为白色无定形粉末，无臭、无味，右旋糖酐为白色无定形粉末，无臭、无味，易溶于热水。易溶于热水。n右旋糖酐溶于水后形成有一定粘度的胶体右旋糖酐溶于水后形成有一定粘度的胶体溶液，在乙醇等有机溶剂中不溶。溶液，在乙醇等有机溶剂中不溶。50二、鉴别二、鉴别n右旋糖酐经碱性水解后产生

27、葡萄糖，右旋糖酐经碱性水解后产生葡萄糖，葡萄糖可使葡萄糖可使Cu2+还原为红色氧化亚铜还原为红色氧化亚铜沉淀。沉淀。n操作方法：取本品操作方法：取本品0.2 g，加水，加水5 ml溶解后，加氢氧化钠试液溶解后，加氢氧化钠试液2 ml与硫酸与硫酸铜试液数滴，加热后变成铜试液数滴，加热后变成红棕色沉淀红棕色沉淀。51三、检查三、检查n右旋糖酐的检查项目较多，其中氯化物、重右旋糖酐的检查项目较多，其中氯化物、重金属、干燥失重、炽灼残渣的检查参见中国金属、干燥失重、炽灼残渣的检查参见中国药典药典2015年版二部附录，此外还有氮、年版二部附录，此外还有氮、分子分子量与分子量分布量与分子量分布的检查。的检

28、查。n氮氮:用发酵法制备右旋糖酐时，发酵滤液中存用发酵法制备右旋糖酐时，发酵滤液中存在着微量蛋白质在着微量蛋白质。52氮氮n取本品取本品0.2 g，置，置50 ml凯氏烧瓶中，加硫酸凯氏烧瓶中，加硫酸1 ml，加热消化至供试品成黑色油状物，放冷，加热消化至供试品成黑色油状物，放冷，加加30%过氧化氢溶液过氧化氢溶液2 ml，加热消化至溶液，加热消化至溶液澄清，冷却至澄清，冷却至20以下，加水以下，加水10 ml，滴加管，滴加管中，再用水稀释至刻度，缓缓加中，再用水稀释至刻度，缓缓加碱性碘化汞钾碱性碘化汞钾试液试液2 ml，随加随摇匀；如显色，与标准硫酸，随加随摇匀；如显色，与标准硫酸铵溶液铵溶

29、液(每每1 ml相当于相当于10 g的的N)1.4 ml加硫加硫酸酸0.5 ml用同一方法处理后颜色比较，不得更用同一方法处理后颜色比较，不得更深深(0.007%)。53分子量与分子量分布分子量与分子量分布n右旋糖酐右旋糖酐20：3500 7万万n右旋糖酐右旋糖酐40：5000 12万万n右旋糖酐右旋糖酐70：15000 18.5万万54四、含量测定四、含量测定n旋光光度法，根据右旋糖酐水溶液的旋光光度法，根据右旋糖酐水溶液的旋光度旋光度在一定范在一定范围内围内与浓度成正比与浓度成正比来测定含量。来测定含量。n以右旋糖酐以右旋糖酐40氯化钠注射液的含量测定为例。氯化钠注射液的含量测定为例。n取

30、本品取本品10 ml，置，置50 ml容量瓶中，加水稀释至刻度，容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，照旋光度测定法测定，按下式计算右旋糖酐的摇匀，照旋光度测定法测定，按下式计算右旋糖酐的含量含量C=0.5128nC为每为每100 ml注射液中含有右旋糖酐的重量；注射液中含有右旋糖酐的重量；n为测得的旋光度为测得的旋光度稀释倍数。稀释倍数。55第三节第三节 多糖的分子量测定多糖的分子量测定 n凝胶色谱法凝胶色谱法n粘度法粘度法n超离心法超离心法n高效液相色谱高效液相色谱重均分子量重均分子量56四、多糖的含量测定四、多糖的含量测定n比色法（硫酸咔唑法、乙酰丙酮法、比色法（硫酸咔唑法、乙酰丙酮法、硫酸苯酚法、蒽酮法）硫酸苯酚法、蒽酮法）n生物测定法（肝素钠）生物测定法（肝素钠）n生色底物法生色底物法（抗抗Fa 活性活性）57第五节、多糖类药物的结构分析第五节、多糖类药物的结构分析n单糖组成单糖组成n糖苷键连接方式糖苷键连接方式n糖苷键连接位置糖苷键连接位置高碘酸氧化、高碘酸氧化、Smith降解降解