1、生物制品中的杂质及污染物清除技术1.工艺概览2.污染物清除技术3.常见污染物及解决方案总结概要生物制药工艺概览下游工艺(DSP)(DSP)上游工艺(USP)(USP)基于细胞表达的抗体或者目标分子纯化目标分子准备贮存准备病毒灭活除菌过滤抛弃型贮存细胞收获澄清循环切向流体积减小除菌过滤贮存种子生物反应器生物反应器生物反应器 取样冻融储液袋监测与控制切向流系统 浓缩/扩散流亲和层析捕获步骤低 pH 病 毒灭活精制1精制2 膜层析切向流系统 除病毒、缓冲液置换 除菌过滤配置与灌装可控冻融系统下游工艺概览典型的抗体下游工艺澄清精制工艺1 1病毒灭活精制工艺2 2除病毒过滤浓缩及制剂除菌过滤近一步的杂质
2、清除(e.g.,(e.g.,HCP,HCP,DNA,DNA,病毒 ,内毒素,etc.),etc.)杂质清除(e.g.,(e.g.,变体,脱落的亲和介质 etc.)etc.)目标产品捕获细胞培养QCQC andand亲和捕获杂质及污染物清除技术-澄清（Clarification）离心深层过滤切向流过滤效率 VS.成本的选择澄清-深层过滤技术（细胞，细胞碎片去除）Minow,B.et.Al.,High-Cell Density Clarification By Single-Use Diatomaceous Earth Filtration Bioprocess International,Apr
3、il,2014Cell Culture(CHO)Volume:600 LCell count:18 x 106 cells/mlViability:95%Wet Cell Weight:8%澄清效果：仅单级处理处理时间小于1小时收率 85%浊度 70PRV:是 5.58 0.28100pH:7.2,电导：4ms/cm，流速：450cm/h，挑战量1%蛋白浓度：4.3g/l 抗体上样量：10.9kg/l膜（3kg/m2）LRV=5.59（流速600cm/h）Zhou J and Tressel T,Amgen:Basic Concepts in Q Membrane Chromatography
4、 for Large-Scale Antibody Production.Submitted for层析精制-膜层析阴离子交换技术（病毒去除）杂质及污染物清除技术-病毒清除（Virus clearance）紫外灭活除病毒过滤层析杂质及污染物清除技术-病毒清除策略杂质及污染物清除技术-病毒清除技术小结大小排除：基于筛分，除菌&除病毒病毒清除-除病毒过滤技术原理病毒清除-除病毒过滤技术要点 可以有效去除4个Log值以上的包膜和非包膜病毒，且高回收率 流速衰减及堵塞情况下扔能维持4个Log值以上的去除效果可滤性实验和验证实验结果的重复性SartoriusSartorius病毒清除-除病毒过滤技术要点
5、病毒清除-除病毒过滤技术要点可滤性实验和验证实验结果的重复性细小病毒截留滤器通量；可滤性研究通量细小病毒截留滤器通量*细小病毒滤器过滤结束点选择：单位面积过滤量或流速衰减*细小病毒滤器通量核算需以病毒挑战结果为依据 基于水相的完整性测试 洁净的材质 有效的病毒截留率-PPV可以去除4个Log-Retrovirus可去除6个Log 易于使用病毒清除-除病毒过滤器选择要点病毒清除-除病毒过滤器选择要点病毒清除-除病毒过滤器选择要点UV-C-选择254nm波长-破坏病毒DNA和RNA,使核酸突变-阻碍其复制、转录及蛋白质的合成UVC紫外灭活：适用于包膜和非包膜病毒灭活病毒清除-UVC紫外灭活技术照射分布可控、均匀一致径向液体混合强烈、充分保留时间最小化灵活高效、可放大病毒清除-UVC紫外灭活技术病毒清除-UVC紫外灭活技术病毒清除-UVC紫外灭活技术病毒百万单位小于1EU内毒素L=K/M(L:内毒素限值；K：最大耐受剂量；M：最大供给量）残留宿主蛋白100 ppm残留DNADNA 100pg/dose聚体；异构体（纯度相关）纯化介质10-12ppm常见污染物总结下游工艺杂质及污染物去除技术总结：1.工艺适用性2.质量标准（法规，企业内标）3.线性放大，重复性4.材料安全5.操作便捷6.成本常见污染物去除技术选择要点
