1、实验目的实验目的 实验原理实验原理实验材料实验材料 涂片涂片干燥干燥 固定固定染色染色水洗水洗干燥干燥镜检镜检操作步骤操作步骤 操作步骤操作步骤（continued）革兰氏染色（革兰氏染色（Gram stain）1984年，丹麦医生年，丹麦医生Gram采用革兰氏染色法细采用革兰氏染色法细菌细胞壁区分为两种类型：革兰氏阴性（菌细胞壁区分为两种类型：革兰氏阴性（G+）和革兰氏阳性（和革兰氏阳性（G-）革兰氏染色步骤革兰氏染色步骤:1）结晶紫初染；）结晶紫初染；2）碘液媒染；）碘液媒染；3）酒精脱色；）酒精脱色；4）番红复染）番红复染 G G菌：细胞壁厚，肽聚糖网菌：细胞壁厚，肽聚糖网状分子形成一种
2、透性屏障，当状分子形成一种透性屏障，当乙醇脱色时，肽聚糖脱水而孔乙醇脱色时，肽聚糖脱水而孔障缩小，故保留结晶紫障缩小，故保留结晶紫-碘复碘复合物在细胞膜上。呈紫色。合物在细胞膜上。呈紫色。G菌：肽聚糖层薄，交联松菌：肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收散，乙醇脱色不能使其结构收缩，其脂含量高缩，其脂含量高,乙醇将脂溶乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫解，缝隙加大，结晶紫-碘复碘复合物溶出细胞壁，番红复染后合物溶出细胞壁，番红复染后呈红色。呈红色。本实验安排本实验安排简单染色：枯草芽孢（简单染色：枯草芽孢（1d1d）。）。革兰氏染色：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、本人革兰氏染色：大肠杆菌、金黄色
3、葡萄球菌、本人斜面菌株。斜面菌株。荚膜染色：胶质芽孢杆菌。荚膜染色：胶质芽孢杆菌。芽孢染色：枯草芽孢（芽孢染色：枯草芽孢（2d2d）另外，每大组选两人从斜面挑取枯草芽孢（另外，每大组选两人从斜面挑取枯草芽孢（2d2d）于离心管，水浴锅中煮沸。于离心管，水浴锅中煮沸。思考题思考题简单染色简单染色:(1)(1)你认为制备细菌染色标本时，尤其应该注意哪些环节你认为制备细菌染色标本时，尤其应该注意哪些环节?(2)(2)如果你的涂片未经热固定，将会出现什么问题？如果加热温度过高、如果你的涂片未经热固定，将会出现什么问题？如果加热温度过高、时间太长，又会怎样呢？时间太长，又会怎样呢？革兰氏染色革兰氏染色:
4、(1)(1)你认为哪些环节会影响革兰氏染色结果的正确性你认为哪些环节会影响革兰氏染色结果的正确性?其中最关键的环节其中最关键的环节是什么是什么?(2)(2)现有一株细菌宽度明显大于大肠杆茵的粗壮杆菌，请你鉴定其革兰现有一株细菌宽度明显大于大肠杆茵的粗壮杆菌，请你鉴定其革兰氏染色反应。你怎样运用大扬杆菌和金黄色葡萄球菌为对照菌株进氏染色反应。你怎样运用大扬杆菌和金黄色葡萄球菌为对照菌株进行涂片染色，以证明你的染色结果正确性。行涂片染色，以证明你的染色结果正确性。(3)(3)进行革兰氏染色时，为什么特别强调菌龄不能太老，用老龄细菌染进行革兰氏染色时，为什么特别强调菌龄不能太老，用老龄细菌染色会出现
5、什么问题？色会出现什么问题？思考题思考题荚膜染色法荚膜染色法:(1)通过荚膜染色法染色后，为什么被包在荚膜里面的菌体着通过荚膜染色法染色后，为什么被包在荚膜里面的菌体着色而荚膜不着色？色而荚膜不着色？芽孢染色法芽孢染色法:(1)说明芽孢染色法的原理。用简单染色法能否观察到细菌的说明芽孢染色法的原理。用简单染色法能否观察到细菌的芽孢芽孢?思考题思考题芽孢染色法芽孢染色法(1)说明芽孢染色法的原理。用简单染色法能说明芽孢染色法的原理。用简单染色法能否观察到细菌的芽孢否观察到细菌的芽孢?(2)若涂片中观察到的只是大量游离芽孢，很若涂片中观察到的只是大量游离芽孢，很少看到芽孢囊及营养细胞，你认为这是什少看到芽孢囊及营养细胞，你认为这是什么原因？么原因？
