动物细胞融合与单克隆抗体正式版课件.ppt

1、22.2动物细胞融合与单克隆抗体动物细胞融合与单克隆抗体课标领航课标领航1掌握动物细胞融合技术。掌握动物细胞融合技术。2理解单克隆抗体技术。理解单克隆抗体技术。3了解动物细胞融合和单克隆抗体技术的应用。了解动物细胞融合和单克隆抗体技术的应用。【重点重点】动物细胞融合技术；单克隆抗体技术。动物细胞融合技术；单克隆抗体技术。【难点难点】杂交瘤细胞的筛选过程。杂交瘤细胞的筛选过程。情景导航情景导航20世纪世纪90年代初，英国科学家成功年代初，英国科学家成功地利用地利用“生物导弹生物导弹”单克隆抗体瞄单克隆抗体瞄准并杀死了癌细胞，使患血癌的一准并杀死了癌细胞，使患血癌的一名名67岁退休教授与一名女患者

2、的癌细胞奇迹般消失岁退休教授与一名女患者的癌细胞奇迹般消失了。被称为了。被称为“生物导弹生物导弹”的单克隆抗体，能够跟踪的单克隆抗体，能够跟踪和杀死细菌、病毒或癌细胞。和杀死细菌、病毒或癌细胞。核心要点突破核心要点突破基础自主梳理基础自主梳理知能过关演练知能过关演练2.2.2动物动物细胞细胞融合融合与单与单克隆克隆抗体抗体基础自主梳理基础自主梳理两个或多个两个或多个杂交杂交DNA杂交杂交4意义：克服了意义：克服了_杂交的不亲合性，成为研杂交的不亲合性，成为研究细胞究细胞_、_、肿瘤和生物、肿瘤和生物_培培育的重要手段。育的重要手段。二、单克隆抗体二、单克隆抗体1传统抗体的获得传统抗体的获得(1

3、)方法：方法：向动物体内反复注射某种向动物体内反复注射某种_，使，使动物产生动物产生_；从动物从动物_中分离所需抗体。中分离所需抗体。(2)特点：特点：_、纯度低、纯度低、_差。差。远缘远缘遗传遗传细胞免疫细胞免疫新品种新品种抗原抗原抗体抗体血清血清产量低产量低特异性特异性2单克隆抗体的制备单克隆抗体的制备脾脾骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞B淋巴细胞淋巴细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞增殖增殖产生抗体产生抗体克隆化克隆化抗体抗体体外培养体外培养小鼠腹腔小鼠腹腔细胞培养液细胞培养液腹水腹水3单克隆抗体的应用单克隆抗体的应用(1)优点：优点：_、_、产量大。、产量大。(2)应用应用作为诊断试剂，具有准确、作为诊断试

4、剂，具有准确、_、简易、简易、_的优点。的优点。用于用于_和和_。特异性强特异性强灵敏度高灵敏度高高效高效快速快速治疗疾病治疗疾病运载药物运载药物思考感悟思考感悟什么是单克隆抗体？鼠的单克隆抗体能否用于人体什么是单克隆抗体？鼠的单克隆抗体能否用于人体疾病的治疗？为什么？疾病的治疗？为什么？【提示提示】单克隆抗体是由单一杂交瘤细胞增殖产单克隆抗体是由单一杂交瘤细胞增殖产生的高度专一的抗体。不能。因为鼠的生的高度专一的抗体。不能。因为鼠的B淋巴细淋巴细胞所产生的抗体与人体胞所产生的抗体与人体B淋巴细胞产生的抗体是不淋巴细胞产生的抗体是不同的。同的。核心要点突破核心要点突破动物细胞融合动物细胞融合1

5、原理：膜的流动性。原理：膜的流动性。2诱导方法：物理法诱导方法：物理法离心、振动、电激；化离心、振动、电激；化学法学法聚乙二醇；生物方法聚乙二醇；生物方法灭活的病毒。灭活的病毒。3动物细胞融合的过程动物细胞融合的过程4优点：动物细胞融合技术突破了有性杂交方法优点：动物细胞融合技术突破了有性杂交方法的局限性，使远缘杂交成为可能。的局限性，使远缘杂交成为可能。特别提醒特别提醒灭活是指用物理或化学的手段使病毒或细菌失去感灭活是指用物理或化学的手段使病毒或细菌失去感染能力，但是并不破坏这些病原体的抗原结构。染能力，但是并不破坏这些病原体的抗原结构。5植物体细胞杂交与动物细胞融合的比较植物体细胞杂交与动

6、物细胞融合的比较比较比较项目项目植物体细胞杂交植物体细胞杂交动物细胞融合动物细胞融合细胞融细胞融合原理合原理细胞膜的流动性、细胞的全细胞膜的流动性、细胞的全能性能性细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞融细胞融合方法合方法用纤维素酶、果胶酶去除细用纤维素酶、果胶酶去除细胞壁后诱导原生质体融合胞壁后诱导原生质体融合用胰蛋白酶或胶原蛋白酶用胰蛋白酶或胶原蛋白酶使细胞分散后，诱导细胞使细胞分散后，诱导细胞融合融合诱导诱导手段手段离心、电激、振动、显微操离心、电激、振动、显微操作、聚乙二醇等诱导作、聚乙二醇等诱导与植物体细胞杂交相比，与植物体细胞杂交相比，还可用灭活的病毒诱导还可用灭活的病毒诱导结果结果获取

7、杂种植株获取杂种植株获得杂交细胞，以生产细获得杂交细胞，以生产细胞产品胞产品用途用途克服远缘杂交不亲和的障碍克服远缘杂交不亲和的障碍,扩展杂交亲本组合范围，培扩展杂交亲本组合范围，培育新品种育新品种制备单克隆抗体、病毒疫制备单克隆抗体、病毒疫苗、干扰素等苗、干扰素等 (2010年安庆高二检测年安庆高二检测)某同学在学习某同学在学习“细胞工细胞工程程”时，列表比较了动植物细胞工程的有关内容，时，列表比较了动植物细胞工程的有关内容，你认为有几处是不正确的你认为有几处是不正确的()植物细胞工程植物细胞工程动物细胞工程动物细胞工程技术技术手段手段植物组织培养，植物体细植物组织培养，植物体细胞杂交胞杂交

8、动物细胞培养和融合，单动物细胞培养和融合，单克隆抗体的制备克隆抗体的制备特殊特殊处理处理机械法去除细胞壁机械法去除细胞壁胰蛋白酶处理，制作细胞胰蛋白酶处理，制作细胞悬液悬液融合融合方法方法物理方法、化学方法物理方法、化学方法物理方法、化学方法、生物理方法、化学方法、生物方法物方法典型典型应用应用人工种子、杂种植株人工种子、杂种植株单克隆抗体的制备单克隆抗体的制备培养基培养基区别区别生长素和细胞分裂素影响生长素和细胞分裂素影响愈伤组织的生长和分化愈伤组织的生长和分化动物血清不可缺少动物血清不可缺少A.1B2C3 D4【尝试解答尝试解答】B【解析解析】选选B。植物细胞工程常采用的技术手段。植物细胞

9、工程常采用的技术手段有植物组织培养和植物体细胞杂交。动物细胞工程有植物组织培养和植物体细胞杂交。动物细胞工程常采用的技术手段有动物细胞培养、细胞融合、单常采用的技术手段有动物细胞培养、细胞融合、单克隆抗体的制备，还有胚胎移植、核移植等。动、克隆抗体的制备，还有胚胎移植、核移植等。动、植物细胞工程中都需要对所取材料进行特殊处理，植物细胞工程中都需要对所取材料进行特殊处理，植物细胞工程要利用酶解法去除细胞壁，得到有生植物细胞工程要利用酶解法去除细胞壁，得到有生活力的原生质体，动物细胞工程则需要用胰蛋白酶活力的原生质体，动物细胞工程则需要用胰蛋白酶处理动物组织。动、植物细胞工程所用的培养基是处理动物

10、组织。动、植物细胞工程所用的培养基是不同的，植物细胞工程中利用固体或半固体培养基不同的，植物细胞工程中利用固体或半固体培养基,含有蔗糖、植物必需的矿质元素、植物激素等，动含有蔗糖、植物必需的矿质元素、植物激素等，动物细胞工程中利用液体培养基，含有动物所需的营物细胞工程中利用液体培养基，含有动物所需的营养物质、无机盐、维生素、动物血清等。养物质、无机盐、维生素、动物血清等。【互动探究互动探究】动物细胞融合中两种不同细胞融合动物细胞融合中两种不同细胞融合,则：则：融合的方式有几种？融合的方式有几种？融合完成的标志是融合完成的标志是什么？什么？【提示提示】三种；三种；细胞核融合成一个核。细胞核融合成

11、一个核。【易误警示易误警示】(1)常用的病毒诱导剂有仙台病毒、常用的病毒诱导剂有仙台病毒、新城鸡瘟病毒、疱疹病毒等新城鸡瘟病毒、疱疹病毒等,其中仙台病毒最常用。其中仙台病毒最常用。(2)用做诱导剂的病毒必须事先灭活，使病毒的感染用做诱导剂的病毒必须事先灭活，使病毒的感染活性、增殖能力丧失但不破坏病毒的抗原结构。活性、增殖能力丧失但不破坏病毒的抗原结构。跟踪训练跟踪训练(2011年滦县高二检测年滦县高二检测)能使动物细胞融能使动物细胞融合的特有的诱导因素是合的特有的诱导因素是()A离心离心 B灭活的病毒灭活的病毒C电激电激 D振动振动答案：答案：B单克隆抗体的制备单克隆抗体的制备1关键思路及操作

12、依据关键思路及操作依据(1)关键思路关键思路克隆单一的克隆单一的B淋巴细胞，形成细胞群。淋巴细胞，形成细胞群。将将B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，获得杂交瘤淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，获得杂交瘤细胞。细胞。(2)用用B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合的原因淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合的原因每一个每一个B淋巴细胞只能分泌一种特异性抗体；淋巴细胞只能分泌一种特异性抗体；不同种类的不同种类的B淋巴细胞分泌的抗体不同。淋巴细胞分泌的抗体不同。B淋巴细胞在体外培养时不能无限增殖；骨髓淋巴细胞在体外培养时不能无限增殖；骨髓瘤细胞能够无限增殖。瘤细胞能够无限增殖。2单克隆抗体的制备过程单克隆抗体的制备过程3单克隆抗体制备过程

13、中的筛选及原因单克隆抗体制备过程中的筛选及原因(1)第一次筛选是在第一次筛选是在B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合之淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合之后，因为有三种融合情况：后，因为有三种融合情况：B淋巴细胞与淋巴细胞与B淋巴细淋巴细胞融合、骨髓瘤细胞与骨髓瘤细胞融合、胞融合、骨髓瘤细胞与骨髓瘤细胞融合、B淋巴细淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，而只有胞与骨髓瘤细胞融合，而只有B淋巴细胞与骨髓瘤淋巴细胞与骨髓瘤细胞的融合细胞才是需要的杂种细胞。细胞的融合细胞才是需要的杂种细胞。(2)第二次筛选需先在多孔培养皿上培养，在每个第二次筛选需先在多孔培养皿上培养，在每个孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始培养，然后孔只有一个杂交

14、瘤细胞的情况下开始培养，然后再筛选出能产生特异性抗体的细胞群。由于该细再筛选出能产生特异性抗体的细胞群。由于该细胞群是由单个杂交瘤细胞克隆来的，所以产生的胞群是由单个杂交瘤细胞克隆来的，所以产生的抗体一定是化学性质单一、特异性强的单克隆抗抗体一定是化学性质单一、特异性强的单克隆抗体。体。特别提醒特别提醒上述上述B淋巴细胞为经过免疫的淋巴细胞为经过免疫的B淋巴细胞。淋巴细胞。(2011年青岛市高二检测年青岛市高二检测)如图表示用生物工程如图表示用生物工程制备人抗制备人抗A抗体的过程。请回答下列问题。抗体的过程。请回答下列问题。(1)人的红细胞膜表面有被称为凝集原的特异人的红细胞膜表面有被称为凝集

15、原的特异_;从免疫学角度看，这种凝集原是从免疫学角度看，这种凝集原是_。(2)图中细胞图中细胞1是小鼠体内注入人是小鼠体内注入人A型血红细胞后而型血红细胞后而获得的获得的_细胞，这种细胞具有产生细胞，这种细胞具有产生_的的特点，但难以在体外培养。甲培养皿中培养的细胞特点，但难以在体外培养。甲培养皿中培养的细胞2，是从患骨髓瘤的小鼠体内获取的骨髓瘤细胞，是从患骨髓瘤的小鼠体内获取的骨髓瘤细胞，这种细胞在体外培养时能这种细胞在体外培养时能_，但不，但不会产生抗体。会产生抗体。(3)为了能充分发挥上述两种细胞各自的特点，经为了能充分发挥上述两种细胞各自的特点，经特殊处理，在促细胞融合因子的作用下，使

16、两种特殊处理，在促细胞融合因子的作用下，使两种细胞发生融合，形成图中的细胞细胞发生融合，形成图中的细胞3，这种细胞称为，这种细胞称为_。把它在乙培养皿中进行培养，则能产。把它在乙培养皿中进行培养，则能产生大量的细胞群，这种方法称为生大量的细胞群，这种方法称为_。(4)过程过程的主要目的是的主要目的是_。通过过程通过过程或或的培养方法能产生大量的培养方法能产生大量_抗体。抗体。【尝试解答尝试解答】(1)糖蛋白抗原糖蛋白抗原(2)B淋巴单一的抗淋巴单一的抗A抗体抗体(或单一的特异性抗体或单一的特异性抗体)快速大量增殖快速大量增殖(3)杂交瘤细胞单克隆杂交瘤细胞单克隆(4)筛选出能产生单一抗筛选出能

17、产生单一抗A抗体的杂交瘤细胞抗抗体的杂交瘤细胞抗A单克隆单克隆【解析解析】此题主要考查了单克隆抗体的制备过程此题主要考查了单克隆抗体的制备过程及其相关知识。及其相关知识。(1)红细胞表面的凝集原与细胞识别有关，其化学本红细胞表面的凝集原与细胞识别有关，其化学本质是糖蛋白。从免疫学角度看是抗原。质是糖蛋白。从免疫学角度看是抗原。(2)小鼠受到抗原刺激后能产生小鼠受到抗原刺激后能产生B淋巴细胞，这种细淋巴细胞，这种细胞能产生单一抗体，但不能增殖，骨髓瘤细胞能无胞能产生单一抗体，但不能增殖，骨髓瘤细胞能无限增殖但不能产生抗体。限增殖但不能产生抗体。(3)通过动物细胞融合的方式可以获得杂交瘤细胞，通过

18、动物细胞融合的方式可以获得杂交瘤细胞，产生单克隆抗体。产生单克隆抗体。(4)过程过程的目的是筛选出能产生单一抗的目的是筛选出能产生单一抗A抗体的抗体的杂交瘤细胞杂交瘤细胞,通过通过或或可大量产生抗可大量产生抗A单克隆抗单克隆抗体。体。【易误警示易误警示】解答单克隆抗体的有关题目时要特解答单克隆抗体的有关题目时要特别注意以下几点：别注意以下几点：(1)所用所用B淋巴细胞是否是经过免疫的淋巴细胞是否是经过免疫的B淋巴细胞。淋巴细胞。(2)细胞融合之后需要经过两次筛选，方可获得能产细胞融合之后需要经过两次筛选，方可获得能产生单一抗体的杂交瘤细胞。生单一抗体的杂交瘤细胞。(3)利用单克隆抗体制成的利用

19、单克隆抗体制成的“生物导弹生物导弹”，其选择性，其选择性是由抗体决定的，与药物无关。是由抗体决定的，与药物无关。跟踪训练跟踪训练(2011年惠州高二检测年惠州高二检测)关于应用动物细关于应用动物细胞工程技术获取单克隆抗胞工程技术获取单克隆抗X抗体的具体操作步骤如抗体的具体操作步骤如下，其中对单克隆抗体制备的相关叙述中不正确的下，其中对单克隆抗体制备的相关叙述中不正确的是是()将将X抗原注入小鼠体内，获得能产生抗抗原注入小鼠体内，获得能产生抗X抗体的抗体的B淋巴细胞淋巴细胞从患骨髓瘤的小鼠体内获取骨髓瘤细胞从患骨髓瘤的小鼠体内获取骨髓瘤细胞利用促细胞融合因子使两种细胞发生融合利用促细胞融合因子使

20、两种细胞发生融合将杂交瘤细胞注入小鼠腹腔培养将杂交瘤细胞注入小鼠腹腔培养筛选出能产生抗筛选出能产生抗X抗体的杂交瘤细胞抗体的杂交瘤细胞从腹水中提取抗体从腹水中提取抗体A实验顺序应当是实验顺序应当是B过程中产生多个杂交瘤细胞的过程也为克隆过程中产生多个杂交瘤细胞的过程也为克隆C过程获得的细胞均可无限增殖过程获得的细胞均可无限增殖D到到的过程中通常要经过两次筛选的过程中通常要经过两次筛选解析：解析：选选C。本题考查的是单克隆抗体的制备，属。本题考查的是单克隆抗体的制备，属于考纲识记层次。解答本题的关键是知道单克隆抗于考纲识记层次。解答本题的关键是知道单克隆抗体制备的过程，理解其原理。只有骨髓瘤细胞

21、与体制备的过程，理解其原理。只有骨髓瘤细胞与B淋巴细胞的融合体才可以无限增殖。淋巴细胞的融合体才可以无限增殖。知能过关演练知能过关演练本部分内容讲解结束本部分内容讲解结束点此进入课件目录点此进入课件目录按按ESC键退出全屏播放键退出全屏播放谢谢使用谢谢使用随着年岁的叠加，我们会渐渐发现：越是有智慧的人，越是谦虚，因为昂头的只是稗子，低头的才是稻子；越是富有的人，越是高贵，因为真正的富裕是灵魂上的高贵以及精神世界的富足；越是优秀的人，越是努力，因为优秀从来不是与生俱来，从来不是一蹴而就。随着沧桑的累积，我们也会慢慢懂得：成功的路，其实并不拥挤，因为能够坚持到底的人实在太少；所有优秀的人，其实就是

22、活得很努力的人，所谓的胜利，其实最后就是自身价值观的胜利。人到中年，突然间醒悟许多，总算明白：人生，只有将世间的路一一走遍，才能到尽头；生活，只有将尘世况味种种尝遍，才能熬出头。这世间，从来没有最好，只有更好。每天，总想要努力醒得比太阳还早，因为总觉得世间万物，太阳是最能赐人力量和能量的。每当面对喷薄的日出，心中的太阳随之冉冉腾起，生命之火熊熊燃烧，生活的热情就会光芒四射。我真的难以想象，那些从来不早起的人，一生到底能够看到几回日升？那些从来没有良好习惯的人，活到最后到底该是多么的遗憾与愧疚？曾国藩说：早晨不起，误一天的事；幼时不学，误一生的事。尼采也说：每一个不曾起舞的日子，都是对生命的辜负

23、。光阴易逝，岂容我待？越是努力的人，越是没有时间抱怨，越是没有工夫颓丧。每当走在黎明的曙光里，看到那些兢兢业业清洁城市的“美容师”，我就会由衷地欣赏并在心底赞叹他们，因为他们活得很努力很认真。每当看见那些奔跑在朝霞绚烂里的晨练者，我就会从心里为他们竖起大拇指，因为他们给自己力量的同时，也赠予他人能量。我总觉得：你可以不优秀，但你必须有认真的态度；你可以不成功，但你必须努力。这个世界上，从来没有谁比谁更优秀，只有谁比谁更努力。我也始终认为：一个活得很努力的人，自带光芒万丈；一个人认真的样子，比任何时候都要美好；一个能够自律自控的人，他的人生也就成功了大半。世间每一种的好，从来都只为懂得努力的人盛

24、装而来。有时候，我真的感觉，人生的另一个名字应该叫做努力，努力了就会无悔，努力了就会无愧；生活的另一种说法应该叫做煎熬，熬过了漫漫黑夜，天就亮了，熬过了萧萧冬日，春天就来了。人生不易，越努力越幸运；余生不长，越珍惜越精彩。人生，是一本太仓促的书，越认真越深刻；生命，是一条无名的河，越往前越深邃。愿你不要为已逝的年华叹息，不要为前路的茫茫而裹足不前愿你相信所有的坚持总能奏响黎明的号角，所有的努力总能孕育硕果的盛驾光临。愿你坚信越是成功的人越是不允许自己颓废散漫，越是优秀的人越是努力生活中很多时候，我们遇到一些复杂的情况，会很容易被眼前的障碍所蒙蔽，找不到解决问题的方法。这时候，如果能从当前的环境

25、脱离出来，从一个新角度去解决问题，也许就会柳暗花明。一个土豪，每次出门都担心家中被盗，想买只狼狗栓门前护院，但又不想雇人喂狗浪费银两。苦思良久后终得一法：每次出门前把WiFi修改成无密码，然后放心出门每次回来都能看到十几个人捧着手机蹲在自家门口，从此无忧。护院，未必一定要养狗换个角度想问题，结果大不同。一位大爷到菜市场买菜，挑了3个西红柿到到秤盘，摊主秤了下：“一斤半3块7。”大爷：“做汤不用那么多。”去掉了最大的西红柿。摊主:“一斤二两，3块。”正当身边人想提醒大爷注意秤时，大爷从容的掏出了七毛钱，拿起刚刚去掉的那个大的西红柿，潇洒地换种算法，独辟蹊径，你会发现解决问题的另一个方法。生活中，

26、我们特别容易陷入非A即B的思维死角，但其实，遭遇两难困境时换个角度思考，也许就会明白：路的旁边还有路。一个鱼塘新开张，钓费100块。钓了一整天没钓到鱼，老板说凡是没钓到的就送一只鸡。很多人都去了，回来的时候每人拎着一只鸡，大家都很高兴！觉得老板很够意思。后来，钓鱼场看门大爷告诉大家，老板本来就是个养鸡专业户，这鱼塘本来就没鱼。巧妙的去库存，还让顾客心甘情愿买单。新时代，做营销，必须打破传统思维。孩子不愿意做爸爸留的课外作业，于是爸爸灵机一动说：儿子，我来做作业，你来检查如何？孩子高兴的答应了，并且把爸爸的“作业”认真的检查了一遍，还列出算式给爸爸讲解了一遍不过他可能怎么也不明白为什么爸爸所有作业都做错了。巧妙转换角色，后退一步，有时候是另一种前进。一个博士群里有人提问：一滴水从很高很高的地方自由落体下来，砸到人会不会砸伤？或砸死？群里一下就热闹起来，各种公式，各种假设，各种阻力，重力，加速度的计算，足足讨论了近一个小时 后来，一个不小心进错群的人默默问了一句：你们没有淋过雨吗 人们常常容易被日常思维所禁锢，而忘却了最简单也是最直接的路有两个年轻人，大学毕业后一起到广州闯天下。