凝胶渗透色谱GPC-分析测试中心课件.ppt

1、1 1GPC基础知识岛津国际贸易岛津国际贸易(上海上海)有限公司有限公司分析中心分析中心2Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited2 2SEC定义v SEC全称Size Exclusion Chromatography(体积排阻色谱，或者尺寸排阻色谱）v SEC定义：是利用多孔凝胶固定相的独特特性，而产生的一种主要依据分子尺寸大小的差异来分离的液相色谱方法。3Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited3 3SEC分类v 凝胶渗透色谱凝胶渗透色谱 (GPC)(GPC)v主要用于聚

2、合物领域v以有机溶剂为流动相(氯仿，THF，DMF)v常用固定相填料：苯乙烯二乙烯基苯共聚物v 凝胶过滤色谱凝胶过滤色谱 (GFC)(GFC)v主要用于生命科学领域v以水溶液为流动相v常用固定相填料：亲水性有机凝胶(葡聚糖，琼脂糖，聚丙烯酰胺等)4Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited4 4GPC用途v 高聚物的分子量及其分布是高聚物最基本的参数之一。高聚物的许多性质是与分子量有关的。例如冲击强度、模量、拉伸强度、耐热、耐腐蚀性都与高聚物的分子量和分子量分布有关。5Shimadzu International Trading(Sha

3、nghai)Co.Limited5 5GPC分离原理v 固定相是多孔填料，小分子样品可以进入孔径内部v 样品与固定相之间无作用力v 迁移时间不同孔穴孔穴填充物填充物颗颗粒粒 大大 中中小小样样品品6Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited6 6MW与RT之间的关系Log (MW)排阻极限排阻极限渗透极限渗透极限GPC柱柱7Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited7 7GPC术语v 排阻极限排阻极限排阻极限是指不能进入凝胶颗粒孔穴内部的最小分子的分子量。所有大于排阻极限的分子都

4、不能进入凝胶颗粒内部，直接从凝胶颗粒外流出，所以它们同时被最先洗脱出来。排阻极限代表一种凝胶能有效分离的最大分子量，大于这种凝胶的排阻极限的分子用这种凝胶不能得到分离。随固定相不同，排阻极限范围约在 400至60106之间。v 渗透极限渗透极限能够完全进入凝胶颗粒孔穴内部的最大分子的分子量。在选择固定相时，应使欲分离样品粒子的相对分子质量落在在选择固定相时，应使欲分离样品粒子的相对分子质量落在固定相的渗透极限和排阻极限之间。固定相的渗透极限和排阻极限之间。8Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited8 8平均分子量计算公式数均分子量数均

5、分子量 重均分子量重均分子量 Z均分子量均分子量Z+1均分子量均分子量Hi：峰高峰高 Mi：分子量：分子量Mw=S S Mi HiS S Hi Mn=S S HiS S(Hi/Mi)Mz=Mi 2HiS S Mi Hi Mz+1=Mi 3HiS S Mi 2Hi 9Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited9 9平均分子量含义v 数均分子量数均分子量 (MnMn)v拉力、抗冲击性拉力、抗冲击性v 重均分子量重均分子量 (Mw)(Mw)v脆度脆度v Z Z 均分子量均分子量 (MzMz)v弹性、硬度弹性、硬度分布宽度指数分布宽度指数D(D

6、(分散度分散度)=Mw/)=Mw/MnMn对于多分散试样对于多分散试样 MnMn Mw Mw MzMz10Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited1010高聚物多分散性表征v 样品间分子量分布宽度的比较，最直接的方法是样品间分子量分布宽度的比较，最直接的方法是将实验所得到的分子量分布曲线作对比。将实验所得到的分子量分布曲线作对比。v 分子量分布曲线有两种形式：分子量分布曲线有两种形式：v用重量分数用重量分数W W对分子量作图的曲线叫做微分分布曲线；对分子量作图的曲线叫做微分分布曲线；v用累积重量分布对分子量作图的曲线叫做积分分布曲用累

7、积重量分布对分子量作图的曲线叫做积分分布曲线。线。v 还有一种更一般化且最常用的方法就是重均数均还有一种更一般化且最常用的方法就是重均数均比，即：比，即：Mw/Mw/MnMn。11Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited1111测定聚合物分子量的方法v 直接方法直接方法v渗透压方法(for Mn)v光散射方法(for Mw)v粘度方法(for Mv)v超速离心方法(for Mz)v 间接方法间接方法vGPC(for Mn,Mw and Mz)用标准品进样得到分子量校正曲线，间接算出聚合物样品的相对分子量。如和标准品结构不同，还需进行相

8、应的计算才能得到聚合物样品自身的分子质量。12Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited1212为什么要用GPC方法v 相对分子量分布(多分散性指数)对聚合物的性质有重要影响。v 在相对分子质量分布（多分散性指数）成为人们关注的热点后，经典方法却不能同时测定聚合物的相对分子质量分布。凝胶渗透色谱(GPC)的应用改善了测试条件，并提供了可以同时测定聚合物的相对分子质量及其分布的方法，使其成为测定高分子相对分子质量及其分布最常用、快速和有效的技术。13Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Li

9、mited1313GPC系统配置泵泵进样进样器器色色谱谱柱柱柱温箱柱温箱检测检测器器THF,氯氯仿仿,DMF示差示差检测检测器器需要GPC软件才可计算MW14Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited1414配置实例No.产品编号产品编号产品名称产品名称型号型号数量数量1 1228-45011-3228-45011-38 8系统控制器系统控制器CBM-20AliteCBM-20Alite1 12 2228-45000-3228-45000-38 8输液单元输液单元LC-20ADLC-20AD1 13 3228-45018-3228-45

10、018-32 2在线脱气机在线脱气机DGU-20A3DGU-20A31 14 4228-45041-228-45041-9191容器盘容器盘-1 15 5228-45228-45006006-3-38 8自动进样器自动进样器SIL-20ASIL-20A1 16 6228-4228-466066606-9696自动进样器用自动进样器用GPCGPC对应组件对应组件-1 17 7228-45009-3228-45009-38 8柱温箱柱温箱CTO-20ACTO-20A1 18 8228-45095-3228-45095-38 8示差折光检测器示差折光检测器RID-10ARID-10A1 19228-

11、20810-91228-20810-91色谱柱色谱柱GPC-80M110228-20812-91228-20812-91保护柱保护柱GPC-800P111223-056223-0567 71-91-92 2LCLC工作站工作站LCsolutionLCsolution Single Single1 112223-05655-9223-05655-92 2GPCGPC软件软件LCsolutionLCsolution GPC GPC1 115Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited1515GPC系统与常规HPLC系统区别v 检测器检测器v

12、GPC系统标配示差折光检测器v 常规HPLC有多种检测器可选v 梯度梯度v GPC系统是等度系统，并且用并联泵v 常规HPLC可以是等度或者梯度v 管路管路v GPC系统采用全不锈钢流路v 常规HPLC用PEEK或者不锈钢流路v 自动进样器针密封自动进样器针密封v GPC系统采用Vespel针密封，适用THF、氯仿、DMF等v 常规HPLC用PEEK针密封16Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited1616LCsolution GPC软件该 GPC 可选软件可在 LCsolution 上无缝地运行。作为 LCsolution 的一部分

13、，此软件扩展了方法、数据和报告格式文件的功能，并可使用 LCsolution 的所有功能特性。特点：1)可以操作 GPC 与 LC 工作站2)对方法和数据文件的统一管理3)兼容多个系统和多个检测器（包括 PDA 检测器）4)同时输出色谱图报告和 GPC 计算结果5)可以根据控制样品进行保留时间的校准17Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited1717GPC色谱柱系列v Shim-pack GPC-80X for Shim-pack GPC-80X for THFTHFv Shim-pack GPC-80XC for Shim-pack

14、 GPC-80XC for 氯仿氯仿v Shim-pack GPC-80XD for Shim-pack GPC-80XD for DMFDMFv 排阻极限排阻极限 (聚苯乙烯聚苯乙烯)v1.5x101.5x103 3(GPC-801),5x10(GPC-801),5x103 3(GPC-802),2x10(GPC-802),2x104 4(GPC-(GPC-8025),7x108025),7x104 4(GPC-803),4x10(GPC-803),4x105 5(GPC-804),(GPC-804),4x104x106 6(GPC-805),4x10(GPC-805),4x107 7(GP

15、C-806)(GPC-806)，4x104x107 7(mixed (mixed gelgel，GPC-80M),2x10GPC-80M),2x108 8(GPC-807)(GPC-807)18Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited1818GPC色谱柱类型v 普通凝胶柱普通凝胶柱v按照不同的排阻极限分成很多种型号(如GPC-80X)v每种排阻极限的柱子使用同一种凝胶颗粒v在一段范围内校正曲线成线性v 混合凝胶柱混合凝胶柱v一种型号(如GPC-80M)v使用混合凝胶颗粒v在较宽范围内校正曲线都成线性，可消除不同柱子串联时可能产生非线性

16、校正曲线导致结果偏差的问题19Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited1919GPC色谱柱类型混合凝胶柱混合凝胶柱GPC-80M20Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited2020GPC色谱柱选择v 按照样品所溶解的溶剂来选择柱子所属系列按照样品所溶解的溶剂来选择柱子所属系列vTHF、氯仿、DMFv必须选择合适的溶剂来溶解聚合物v 按照样品分子量范围来选择柱子型号按照样品分子量范围来选择柱子型号v样品分子量应该处在排阻极限和渗透极限范围内，并且最好是处在校正曲线线性范围内21

17、Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited2121标样v 聚苯乙烯聚苯乙烯(PS(PS，溶于各种有机溶剂，溶于各种有机溶剂)v 聚甲基丙烯酸甲酯聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)(PMMA)v 聚环氧乙烷聚环氧乙烷 (PEO(PEO，也叫聚氧化乙烯，溶于水，也叫聚氧化乙烯，溶于水)v 聚乙二醇聚乙二醇(PEG(PEG，溶于水，溶于水)(PEO与PEG的碳链骨架相同，但是其合成原料和封端不同，由于原料的性质，使其产物的分子量和结构都有一定的区别。PEO常是指一端为甲基封端，一端为羟基封端的聚环氧乙烷，而PEG一般是两端都是羟基封端的聚乙二醇。)

18、22Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited2222校正曲线v 逐一注入聚合物标样以确定分子量与保留时间的关系逐一注入聚合物标样以确定分子量与保留时间的关系IDTimeMW114.797853000215.559380000316.239186000416.888100000517.47648000618.03223700718.49512200819.0055800常用线性拟合或者三次方拟合15.016.017.018.0min4.04.55.05.56.0log(M.W.)1234567823Shimadzu Internatio

19、nal Trading(Shanghai)Co.Limited2323GPC校正方法v 窄分布标样校正法窄分布标样校正法v选用与被测样品同类型的单分散性(d1.1)标样，先用其他方法精确测定其平均相对分子质量，然后与被测样品在同样的条件下进行GPC分析。v 普适校正法普适校正法v此法的优点是只要用一种高聚物（一般用窄分布聚苯乙烯）作标准曲线就可以测定其他类型的聚合物，但先决条件是2种高聚物的K和值必须己知。v 渐进试差法渐进试差法(宽分布标样校正法宽分布标样校正法)v这种方法不需要窄分布样品，其标样可为13个不同相对分子质量的宽分布标样（平均相对分子质量精确测量，Mw和Mn为已知），采用数学处

20、理方法得到渐进试差法的校正曲线。24Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited2424窄分布标样校正法v 要有要有5 5个以上的不同分子量的单分散标样来制作个以上的不同分子量的单分散标样来制作校正曲线校正曲线v 样品最好与标样是相同的结构。样品最好与标样是相同的结构。v如果样品与标样结构完全一样，则结果不需再修正v如果样品结构与标样结构不一样，并且样品是单链结构，则可以用QF因子比来修正结果v如果样品结构与标样结构不一样，并且样品带有支链，则无法使用窄分布标样校正法25Shimadzu International Trading(Sha

21、nghai)Co.Limited2525窄分布标样校正法-分子量转换v QFQF因子比因子比(RQF)(RQF)vQFQF定义：单位链长分子量定义：单位链长分子量v仅适用于单链聚合物仅适用于单链聚合物26Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited2626聚苯乙烯的QFv QF=104/2.50=QF=104/2.50=41.541.5 -(CH-CH -(CH-CH2 2)n n-C C6 6H H5 5 单位链长的单位链长的MW=MW=104104v 一个单位长度为一个单位长度为 2.502.50 A.A.vC-C C-C 键长度约为

22、键长度约为 1.54 A.1.54 A.vC-C-C C-C-C 键角度约为键角度约为 109109度度.v一个单位长度计算如下：一个单位长度计算如下：1.54 x sin(109/2)x 2=2.501.54 x sin(109/2)x 2=2.5027Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited2727聚苯乙烯的QFCCCC1091.54 A1.54 x sin(109/2)1.54 x sin(109/2)x 22.50 ACC28Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited2

23、828聚异丁烯的QFv QF=56/2.50=QF=56/2.50=22.322.3 CH CH3 3 -(C-CH -(C-CH2 2)n n-CH CH3 3 单位链长的单位链长的MW=MW=5656v 一个单位长度为一个单位长度为 2.502.50 A.A.29Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited2929RQFv 聚异丁烯与聚苯乙烯的聚异丁烯与聚苯乙烯的QFQF之比为之比为 RQF.RQF.RQF=22.3/41.5=0.537 RQF=22.3/41.5=0.537 M M 聚异丁烯聚异丁烯=M=M GPCGPC x 0.

24、537 x 0.53730Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited3030RQF的制约因素v RQF RQF 仅适用于单链聚合物仅适用于单链聚合物v 如果聚合物有支链结构如果聚合物有支链结构,MW,MW的计算就有误的计算就有误31Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited3131普适校正法v 用一种高聚物标样做校正曲线，常用聚苯乙烯用一种高聚物标样做校正曲线，常用聚苯乙烯v 样品结构可以与标样不一样，并且可以有支链样品结构可以与标样不一样，并且可以有支链v 样品及标样在流动相溶

25、剂中的样品及标样在流动相溶剂中的K K和和值必须己知值必须己知v可以用粘度法来测定K和的值32Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited3232普适校正法公式v GPCGPC反映的是淋洗体积与高聚物流体力学体积间的关系。反映的是淋洗体积与高聚物流体力学体积间的关系。根据根据EinsteinEinstein粘度关系：粘度关系：为特性粘度；v表示聚合物链等效的流体力学体积；N为阿佛加德罗常数；M为聚合物分子量。根据上式可用M表示流体力学体积。MNV/5.233Shimadzu International Trading(Shanghai)C

26、o.Limited3333普适校正法公式v 当样品与标样有相同的淋洗体积时，下式成立：当样品与标样有相同的淋洗体积时，下式成立：式中下标式中下标1 1为标样参数，为标样参数，2 2为样品参数。为样品参数。v 将将Mark-Mark-HouwinkHouwink方程方程(=KM(=KM)代入，即得到：代入，即得到：从而得出：从而得出：2121212lg11lg11lgKKMM11M11M2211MM21122111MKMK34Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited3434渐进试差法(宽分布标样校正法)v 不需要窄分布标样，只需要宽分布

27、标样不需要窄分布标样，只需要宽分布标样v 标样和样品为同一种物质标样和样品为同一种物质v 标样数量最少可以只有标样数量最少可以只有1 1个个v 标样的分子量标样的分子量MwMw和和MnMn必须已知必须已知v 标样校正曲线呈线性标样校正曲线呈线性35Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited3535渐进试差法(宽分布标样校正法)v 在一定条件下，有：在一定条件下，有：(1)(1)v 将标样色谱峰分成若干个切片，则：将标样色谱峰分成若干个切片，则：(2)(2)v 根据定义，有：根据定义，有：(3)(4)(3)(4)v 将公式将公式(2)(2

28、)代入公式代入公式(3)(3)和和(4)(4)，则：，则：(5)(5)(6)(6)v 标样的标样的MwMw和和MnMn已知，将已知，将Hi,ViHi,Vi代入，软件自动算出代入，软件自动算出A,BA,B值。值。VBAMlniiiiiwHMHMiiinMiHiHM)/()exp(iiVBAMiiiwHVBAHM)exp()exp(/iiinVBAHHM36Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited3636GPC分析大致步骤v 根据样品的特点选择合适的根据样品的特点选择合适的GPCGPC柱子和标样，并柱子和标样，并且确定采用的且确定采用的G

29、PCGPC校正方法校正方法v 配制标样和样品，用配制标样和样品，用LCsolutionLCsolution进样得到色谱图进样得到色谱图v 用用LCsolutionLCsolution GPC GPC生成校正曲线并计算样品平均生成校正曲线并计算样品平均分子量，制作报告分子量，制作报告37Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited3737GPC系统安装注意事项v 安装色谱柱安装色谱柱v 柱子串联时排阻极限大的接前面v 管路选择管路选择v 使用全不锈钢流路，不能有PEEK材质的部件存在v 溶剂更换溶剂更换v 水和氯仿不互溶v 最高压力设置最高

30、压力设置v 柱子串联时将最高压力设为所有柱子允许承受的最高压力之和v 柱子使用注意事项柱子使用注意事项v 一定要严格按照说明书使用色谱柱(部分柱子不能用甲醇冲洗)氯仿柱子要用氯仿冲洗柱子，THF柱子要用THF冲洗，氺相柱子一般用60水40乙腈保存38Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited3838安装色谱柱v 通常而言，分析结果与色谱柱组安装的顺序无关。尽管如此，为了提高分离度和延长色谱柱寿命，应按孔径由大到小顺序安装色谱柱，即排阻极限大的接前面，排阻极限小的接后面。v 原因在于，孔径越大，越粗糙，越能承受外来物质的积累污染。而且，样

31、品中高分子量的物质对样品的粘度影响最大。如果大分子先被分离，粘度下降更快，对色谱柱的压力降低。39Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited3939GPC分析注意事项v 如何配制标样和样品如何配制标样和样品v 系统平衡系统平衡v 柱子冲洗及保存柱子冲洗及保存v 校正曲线有效时间校正曲线有效时间v 亲水性聚合物分析亲水性聚合物分析40Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited4040GPC标样配制v 由于凝胶色谱中浓度检测通常使用示差折光检测器，其灵敏度不太高，所以试样的浓度不能配

32、置得太稀。但另一方面色谱柱的负荷量是有限的，浓度太大易发生“超载”现象。v 一般情况下，进样浓度按分子质量大小的不同在0.050.5%（质量分数）范围内配置。分子质量越大，溶液浓度越低。v 标样配制应该严格按照标样说明书进行。通常室温静置12小时以上，然后轻轻混匀。绝对不能超声或者剧烈振荡来加速溶解。v 溶液进样前应先经过过滤，以防止固体颗粒进入色谱柱内，引起柱内堵塞，损坏色谱柱。41Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited4141GPC标样配制v 一种分子量的标样进样一次得到标样色谱图，这样的结果是最理想的。通常，为节约时间，可以将

33、分子量相差较大(峰不会重合)的两种标样配制在一个瓶中，然后进样，可以节约一半的标样分析时间。v 如8个不同分子量的标样可以按右表编成4组分别进样。组分子量1853000480002380000237003186000122004100000580042Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited4242进样浓度范围及体积v分子量范围分子量范围 样品浓度样品浓度v低于5,000 1.0%v5,00025,000 0.5%v25,000200,000 0.25%v200,0002,000,000 0.1%v高于2,000,000 0.05%v

34、进样体积进样体积v50-100uL之间(浓度在0.05%-0.5%之间)43Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited4343GPC系统平衡v 安装色谱柱之前，用两通管连接管路，用流动相安装色谱柱之前，用两通管连接管路，用流动相替换系统后换上替换系统后换上GPCGPC柱子。柱子。(注意溶剂互溶情况注意溶剂互溶情况)v RIDRID平衡操作平衡操作v分析开始前，用流动相冲洗检测器流路。v流动相流速1ml/min，切换到R Flow，使流动相通过检测池的样品池和参比池，冲洗20min左右。v然后切换R Flow 流路数次，将气泡赶出检测池。

35、v关闭R Flow，等待基线平稳。v当Balance 值高于50，进行Balance 调整。v 色谱柱平衡色谱柱平衡v等溶剂峰出峰后在经过约一次分析时间后基线才能走平。44Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited4444GPC柱子冲洗及保存v 如果在如果在24h24h内再次使用色谱柱，无需特别的处理内再次使用色谱柱，无需特别的处理步骤。如果长时间不使用，应用保存溶剂冲洗色步骤。如果长时间不使用，应用保存溶剂冲洗色谱柱，拆下色谱柱，上紧堵头，放入色谱柱盒子谱柱，拆下色谱柱，上紧堵头，放入色谱柱盒子中保存。中保存。v 严格按照柱子说明书中

36、允许条件下使用。严格按照柱子说明书中允许条件下使用。v 避免振动和机械撞击。避免振动和机械撞击。v 专柱专用，经常改变样品和溶剂会加速色谱柱恶专柱专用，经常改变样品和溶剂会加速色谱柱恶化，降低分离度。化，降低分离度。45Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited4545GPC校准曲线有效时间v 每周用标样评价标准曲线，如果偏差大于每周用标样评价标准曲线，如果偏差大于0.10M0.10M（10%10%），重做标准曲线。），重做标准曲线。v 更换色谱柱后，需重做标准曲线。更换色谱柱后，需重做标准曲线。46Shimadzu Internati

37、onal Trading(Shanghai)Co.Limited4646亲水性聚合物分析注意事项v 使用亲水性使用亲水性 GPC GPC 柱柱vShodexShodex OHpakOHpak SB-800 HQ series SB-800 HQ seriesvTOSOH TSK-GEL PW series TOSOH TSK-GEL PW series v 使用葡聚糖，聚乙二醇和聚氧化乙烯作为标使用葡聚糖，聚乙二醇和聚氧化乙烯作为标准物准物v 使用盐如使用盐如(50mmol/L)(50mmol/L)NaClNaCl,NaNO,NaNO3 3,LiClLiCl 等等以消除离子间引力以消除离子间引

38、力v 使用有机溶剂如甲醇、乙腈等以消除疏水性使用有机溶剂如甲醇、乙腈等以消除疏水性作用力作用力47Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited4747GPC分析例v 色谱柱：色谱柱：ShodexShodex GPC KF-804,802,801 GPC KF-804,802,801三根串联三根串联v 保护柱：保护柱：ShodexShodex GPC KF-G GPC KF-Gv 流动相：流动相：THFTHFv 流流 速：速：1.0ml/min1.0ml/minv 柱柱 温：温：5050v 进样量：进样量：50ul50ulv 检测器：示差折

39、光检测器检测器：示差折光检测器RID-10ARID-10Av 标准品：标准品：PS(PS(聚苯乙烯）聚苯乙烯）(8(8个不同分子量标样个不同分子量标样)48Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited4848标准品及样品配制方法 v 分子量校准曲线所用的标准品为分子量校准曲线所用的标准品为PSPS，有，有8 8种不同分子量的标种不同分子量的标品。将它们按下表分为品。将它们按下表分为4 4组，每组含组，每组含2 2种标品，各称约种标品，各称约4mg4mg左左右，然后用右，然后用20ml20ml流动相溶解，配成流动相溶解，配成4 4个标样。个

40、标样。v 称量称量5mg5mg样品，加入样品，加入4ml4ml流动相溶解过夜。流动相溶解过夜。PS Standard分子量称量值(mg)STD_15600004.2206504.1STD_21560004.0116004.0STD_3660004.270004.1STD_4285004.029504.249Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited4949标样图谱15.016.017.018.019.020.021.022.0min0.51.01.52.02.53.03.54.04.55.05.56.06.57.07.5mV4(#1)3

41、(#1)2(#1)1(#1)四种颜色分别表示四个标样的图谱50Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited5050分子量校准曲线16.017.018.019.020.021.0min3.503.754.004.254.504.755.005.255.505.75log(M.W.)1234567851Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited5151样品分析结果0.05.010.015.020.025.030.0min-1.00.01.0mV(x10)Detector B 17.72

42、3MnMwMzMz1Mw/MnMz/Mw43679731781013771251211.675341.3853652Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited5252PS1和PS2为同一操作人员测定同一样品的两次测定结果PS3为另一实验室对同一样品测得的结果结果评价示例53Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited5353v 重复性考察对于数均分子量同一操作人员两次测定值之差，不应超过重复性考察对于数均分子量同一操作人员两次测定值之差，不应超过式（式（1 1）的数值）的数值r m

43、 r m：v r m=0.10Mnr m=0.10Mn平均平均 （1 1）式中：）式中：MnMn平均表示数均分子量的平均值。平均表示数均分子量的平均值。v 对于多分散系数同一操作者两次测定值之差，不应超过式（对于多分散系数同一操作者两次测定值之差，不应超过式（2 2）的数）的数值值r D r D：v r D=0.06Dr D=0.06D （2 2）式中：）式中：D D表示多分散系数测定值的平均值。表示多分散系数测定值的平均值。v r m=0.10r m=0.10（72645+7196572645+71965）/2=7231/2=7231v MnMn（室内）（室内）=Mn2-Mn1=72645-

44、71965=680=Mn2-Mn1=72645-71965=680（0.00940.0094）v r D=0.06r D=0.06(1.032+1.041)/2=0.062(1.032+1.041)/2=0.062v D D（室内）（室内）=D 2-D 1=1.041-1.032=0.009=D 2-D 1=1.041-1.032=0.009（0.00860.0086）v 对于样品对于样品PSPS，同一操作者两次数均分子量测定值之差，同一操作者两次数均分子量测定值之差M nM n小于小于r mr m；多分散；多分散系数之差系数之差D D 小于小于r Dr D，实验的重复性很好。，实验的重复性很

45、好。数均分子量和多分散系数重现性54Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited5454v 对于数均分子量，两个实验室各测一次的结果之差，不应超过式（对于数均分子量，两个实验室各测一次的结果之差，不应超过式（3 3）的数值的数值R R MnMn ：v R R MnMn=0.25=0.25 MnMn平均平均 （3 3）式中：式中：MnMn平均表示数均分子量测定值的平均值。平均表示数均分子量测定值的平均值。v 对于多分散系数，两个实验室提出的结果之差，不应超过式（对于多分散系数，两个实验室提出的结果之差，不应超过式（4 4）的）的R R D

46、D：v R D=0.15DR D=0.15D （4 4）式中：式中：D D表示多分散系数测定值的平均值。表示多分散系数测定值的平均值。v MnMn （室间）（室间）=72645-70985=1660=72645-70985=1660（0.0920.092）v R R MnMn=0.25=0.25 MnMn平均平均 =0.25=0.25（72645+7098572645+70985）/2=17954/2=17954v D D（室间）（室间）=1.041-1.032=0.009=1.041-1.032=0.009v R D=0.15R D=0.15（1.041+1.0331.041+1.033）=0.311=0.311（0.00870.0087）v 对于样品对于样品PSPS，两个实验室间检测的数均分子量之差小于，两个实验室间检测的数均分子量之差小于R R MnMn，多分散系数之差，多分散系数之差小于小于R DR D，实验的再现性很好。，实验的再现性很好。数均分子量和多分散系数再现性