兽药残留快速检测课件.ppt

1、模块模块三三 兽药残留快速检测兽药残留快速检测学习目标学习目标了解了解兽药残留所兽药残留所带来的食品安全带来的食品安全问题、获得关于问题、获得关于兽药残留的有关兽药残留的有关标准依据和检测标准依据和检测试剂制造商信息试剂制造商信息等；等；理解理解常见的兽常见的兽药残留快速检药残留快速检测的基本原理；测的基本原理；掌握掌握常见的兽常见的兽药残留快速检药残留快速检测基本方法和测基本方法和基本操作技能基本操作技能。兽药和兽药残留的定义兽药和兽药残留的定义兽药兽药指用于预防和治指用于预防和治疗畜禽疾病的药疗畜禽疾病的药物。物。兽药残留兽药残留指给畜禽使用兽药指给畜禽使用兽药或添加剂后，药物或添加剂后，

2、药物以其原形及其代谢以其原形及其代谢产物的形式蓄积或产物的形式蓄积或储存在动物的细胞储存在动物的细胞、组织、器官或可、组织、器官或可食性产品（如蛋、食性产品（如蛋、奶）中。奶）中。兽药的分类兽药的分类 抗生素、磺胺药类、呋喃药类、抗球虫药、激素药类和驱虫药 5第七章第七章 收养收养第一节第一节 收养和收养法收养和收养法第二节第二节 收养关系的成立收养关系的成立第三节第三节 收养的效力收养的效力第四节第四节 收养关系的解除收养关系的解除6第一节第一节 收养和收养法收养和收养法 一、收养的概念和法律特征（一）收养的概念 收养，是公民（自然人）依法领养他人子女为己之子女，使本无亲子关系的当事人间发生

3、法律拟制的亲子关系的民事法律行为。（二）收养的法律特征1收养行为的身份性 2收养关系主体的限定性 3收养关系的可变性 7二、收养制度的历史沿革二、收养制度的历史沿革（一）古代法中的收养制度 收养制度由来已久，早在父系氏族社会就为当时的习惯所确认；进入阶级社会以后，收养制度具有了一定的法律形式，成为不同时代、不同国家的亲属制度、家庭制度的重要组成部分。在中国古代的宗法制度下，立嗣是收养的一种特殊形式，立嗣的宗旨是为了承继宗祧，它同近、现代的收养有着严格的区别：1、按照礼、法的规定，只有男子无后才能立嗣，同时所立者也仅限于男子；2、嗣子的地位高于他种收养的被收养人 3立嗣行为可由需立嗣者在生前进行

4、，亦可在其死后，由配偶或其他尊长代为立嗣。4立嗣的条件是很严格的。8（二）近、现代的收养制度（三）新中国的收养法制建设 中华人民共和国成立后，在一个相当长的时期内，收养问题是按照婚姻法中的原则规定和最高人民法院的有关司法解释处理的。法律渊源：中华人民共和国收养法 民政部关于中国公民收养子女登记办法，民政部关于外国人在中华人民共和国收养子女登记办法，民政部关于华侨以及居住在香港、澳门、台湾地区的中国公民办理收养登记的管辖以及所需要出具的证件和证明材料的规定等，以及关于适用中华人民共和国收养法的民族自治地方的变通的或者补充的规定，最高人民法院关于适用收养法的司法解释和中华人民共和国缔结或参加的有关

5、解决收养关系法律冲突的国际条约，9（四）我国收养法的基本原则1、有利于未成年人的抚养和成长的原则2、保障被收养人和收养人合法权益的原则3、平等自愿的原则4、不得违背社会公德的原则5、不得违背计划生育的法律和法规的原则10 第二节第二节 收养关系的成立收养关系的成立一、收养关系成立的条件 收养行为是民事法律行为的特定种类，收养成立的实质要件既要符合民法中有关民事法律行为的一般规定，又要符合收养法中有关收养行为的专门规定。（一）被收养人的条件 我国收养法第4条规定，下列不满14周岁的未成年人可以被收养：1、丧失父母的孤儿2、查找不到父母的弃婴和儿童3、生父母有特殊困难无力抚养的子女11（二）送养人

6、的条件 我国收养人第5条规定，下列公民、组织可以作为送养人:1、孤儿的监护人2、社会福利机构3、有特殊困难无力抚养子女的生父母 关于以生父母为送养人的问题，我国收养法中还有下列相关规定：第一，收养法第10条第1款规定：“生父母送养子女，须双方共同送养。生父母一方不明或者查找不到的可以单方送养。”第二，收养法第18条规定：“配偶一方死亡，另一方送养未成年子女的，死亡一方的父母有优先抚养的权利。”我国收养法还规定：“未成年人的父母均不具备完全民事行为能力的，该未成年人的监护人不得将其送养，但父母对该未成年人有严重危害可能的除外。”（第12条）12(三）收养人的条件 我国收养法第6条规定，收养人应当

7、同时具备下列条件：1、无子女2、有抚养教育被收养人的能力3、未患有在医学上认为不应当收养子女的疾病4年满30周岁关于收养人方面的条件，我国收养法中还有下列几项规定。第一，收养法第9条规定：“无配偶的男性收养女性的，收养人与被收养人的年龄应当相差40周岁以上。”第二，收养法第10条第2款规定：“有配偶者收养子女，须夫妻共同收养。”此外，收养法还对收养人作了只能收养一名子女的数量限制（第8条）。13（四）当事人的收养合意1、收养人收养与送养人送养须双方自愿2、收养年满10周岁以上的未成年人还应征得被收养人的同意14（五）在法定情形下放宽收养条件的特别规定1、关于收养三代以内同辈旁系血亲的子女的规定

8、 收养法第7条第1款指出：“收养三代以内同辈旁系血亲的子女，可以不受本法第4条第3项、第5条第3项、第9条和被收养人不满14周岁的限制。”按此规定，在收养兄弟姊妹的子女、堂兄弟姊妹的子女、表兄弟姊妹的子女时，条件放宽之处有四：第一，其生父母无特殊困难、有抚养能力的子女，亦可为被收养人。第二，无特殊困难、有抚养能力的生父母，亦可为送养人。第三，无配偶的男性收养女性，不受收养人与被收养人间须有40周岁以上年龄差的限制。第四，可以收养年满14周岁的未成年人。收养法第7条第2款还指出：“华侨收养三代以内同辈旁系血亲的子女，还可以不受收养人无子女的限制。”152、关于收养孤儿，残疾儿童或者查找不到生父母

9、的弃婴和儿童 收养法第8条第2款指出：“收养孤儿、残疾儿童或者社会福利机构抚养的查找不到生父母的弃婴和儿童、可以不受收养人无子女和收养一名的限制。”按此规定，有子女的公民亦可收养孤儿、残疾儿童或者社会福利机构抚养的查找不到生父母的弃婴和儿童，收养一名或数名均可。3、关于继父母收养继子女的规定 收养法第14条指出：“继父或者继母经继子女的生父母同意，可以收养继子女，并可以不受本法第4条第3项、第5条第3项、第6条和被收养人不满14周岁以及收养一名的限制。”按此规定，继子女的生父母即使无特殊困难，有抚养能力，继父或者继母即使已有子女，欠缺抚养教育的能力，患有在医学上认为不应当收养子女的疾病，不满3

10、0周岁，继子女即使是已满14周岁的未成年人，仍得成立此种收养关系，而且可以收养一名或数名。16二、收养关系成立的程序二、收养关系成立的程序（一）收养登记1、办理收养登记的机关 办理收养登记的法定机关，是县级以上人民政府的民政部门。按照被收养人情况的不同，又可分为：（1）收养社会福利机构抚养的查找不到生父母的弃婴、儿童和孤儿的，在社会福利机构所在地的收养登记机关办理登记。（2）收养非社会福利机构抚养的查找不到生父母的弃婴和儿童的，在弃婴和儿童发现地的收养登记机关办理登记。（3）收养生父母有特殊困难无力抚养的子女或者由监护人监护的孤儿的，在被收养人生父母或者监护人常住户口所在地（组织作监护人的，在

11、该组织所在地）的收养登记机关办理登记。（4）收养三代以内同辈旁系血亲的子女，以及继父或者继母收养继子女的，在被收养人生父或者生母常住户口所在地的收养登记机关办理登记。172、收养登记的具体程序（1）申请 首先，夫妻共同收养子女者，一方如果不能亲自到收养登记机关的，应当书面委托另一方办理登记手续，委托书应当经过村民委员会或者居民委员会证明或者经过公证。其次，送养人为公民的，须送养人亲自到收养登记机关办理收养登记。送养人为社会福利机构的，须由其负责人或委托代理人到收养登记机关办理收养登记，最后，被收养人是年满10周岁以上的未成年人的，亦必须亲自到收养登记机关。申请收养登记时，收养人应当向收养登记机

12、关提交收养申请书。收养申请书应包括如下内容：第一，收养人情况；第二，送养人情况；第三，被收养人情况；第四，收养的目的；第五，收养人作出的不虐待、不遗弃被收养人和抚育被收养人健康成长的保证。18（2）审查 收养登记机关收到收养登记申请书及有关材料后，应当自次日起30日内进行审查。审查的主要内容包括：第一，收养申请人是否符合法律所规定的收养人条件以及其收养的目的是否正当。第二，被收养人是否符合法律所规定的被收养人条件。第三，送养人是否符合法律所规定的送养人条件。第四，当事人申请收养的意思表示是否真实。（3）登记 经过审查后，收养登记机关对申请人证件齐全有效、符合收养法规定的收养条件的，应为其办理收

13、养登记，发给收养证。收养关系自登记之日起成立。对不符合收养法规定条件的，不予登记，并对当事人说明理由。收养查找不到生父母的弃婴、儿童的，收养登记机关应当在登记前公告查找其生父母；自公告之日起满60日，弃婴、儿童的生父母或者其他监护人未认领的，视为查找不到生父母的弃婴、儿童。公告期间不计算在登记办理期限内。19（二）收养协议和收养公证 收养协议和收养公证并不是收养的法定形式要件，而是由当事人自主选择的。1、收养协议 收养协议，是收养关系当事人之间，依照法律规定的条件订立的，关于同意成立收养关系的协议。订立收养协议应当符合如下法律要求：（1）订立收养协议的当事人即收养人、被收养人与送养人均须符合收

14、养法规定的收养成立的条件。（2）收养协议的主要条款，应当包括收养人、送养人和被收养人的基本情况，收养的目的，收养人不虐待、不遗弃被收养人和抚育被收养人健康成长的保证，以及双方要求订入的其他内容。（3）收养协议的形式，应当为书面协议。兽药残留带来的食品安全问题兽药残留带来的食品安全问题Text in here多宝鱼多宝鱼瘦肉精瘦肉精项目一项目一 兽药残留快速检测原理兽药残留快速检测原理一、微生物法快速检测兽药残留微生物法快速检测兽药残留 微生物法检测动物性食品中抗菌药物残留的原理是根据抗菌药物对微生物生理功能、代谢的抑制作用，来定性或定量确定样品中药物残留。一般选用不同的菌株和培养基，并在培养基

15、中加入某些成分，利用抗菌药物对不同菌株敏感性的差异，以及影响药物活性的特定成分和培养条件来推断受检药物的化学结构。优点：单个试剂盒分析样品数量大，操作便捷，灵敏度高以及对调价要求低，适用于养殖场和食品加工车间使用。1、平皿法、平皿法2、生化检测法、生化检测法二、免疫学方法快速检测兽药残留免疫学方法快速检测兽药残留 基于抗原抗体特异性反应的检测原理。分为：1.放射免疫分析2.荧光免疫分析3.酶免疫分析4.发光免疫分析5.胶体金免疫分析6.仪器免疫分析7.无标记免疫分析二、免疫学方法快速检测兽药残留免疫学方法快速检测兽药残留 内容主要包括：1.检测对象的选择2.检测对象结构分析和免疫半抗原的合成3

16、.人工结合抗原的制备与鉴定4.抗体的制备5.检测方法的确立与方法评价其中2,3 是免疫学方法建立的关键和技术难点二、免疫学方法快速检测兽药残留免疫学方法快速检测兽药残留检测方法的确立包括以下：（1）胶体金免疫色谱实验测定法（2）酶联免疫吸附测定法（3）放射免疫及荧光免疫测定法（4）生物感应器项目二兽药残留检测卡和试剂盒项目二兽药残留检测卡和试剂盒一、盐酸克伦特罗检测卡一、盐酸克伦特罗检测卡1 适用范围适用范围 此方法应用于猪肉、内脏和猪尿液中盐此方法应用于猪肉、内脏和猪尿液中盐酸克伦特罗含量的检测。酸克伦特罗含量的检测。2 检测原理检测原理 本试剂运用抗原抗体的特异反应以及侧向层析和胶体金技本

17、试剂运用抗原抗体的特异反应以及侧向层析和胶体金技术进行样品中克伦特罗分子的快速定性检测。术进行样品中克伦特罗分子的快速定性检测。用用BSA(牛血清白蛋白牛血清白蛋白)偶联的克伦特罗分子与胶体金颗粒偶联的克伦特罗分子与胶体金颗粒结合后，包被在醋酸纤维素膜上；在硝酸纤维素膜上将克伦结合后，包被在醋酸纤维素膜上；在硝酸纤维素膜上将克伦特罗抗体和特罗抗体和BSA抗体分别包被在检测区（抗体分别包被在检测区（T）和质控区（）和质控区（C）。当样本加到加样孔后，样本中的克伦特罗分子与克伦特罗。当样本加到加样孔后，样本中的克伦特罗分子与克伦特罗-BSA-胶体金偶联物一起层析泳动到检测区竞争与克伦特罗抗胶体金偶

18、联物一起层析泳动到检测区竞争与克伦特罗抗体结合，剩余的克伦特罗体结合，剩余的克伦特罗-BSA-胶体金继续泳动到质控区与抗胶体金继续泳动到质控区与抗体结合。因此，当样本中的克伦特罗浓度超过一定量后，胶体结合。因此，当样本中的克伦特罗浓度超过一定量后，胶体金偶联物就不能与克伦特罗抗体结合，此时检测区不出现体金偶联物就不能与克伦特罗抗体结合，此时检测区不出现紫红色线条；当样本中克伦特罗浓度低于一定值或样本中没紫红色线条；当样本中克伦特罗浓度低于一定值或样本中没有克伦特罗时，胶体金偶联物就与克伦特罗抗体结合，从而有克伦特罗时，胶体金偶联物就与克伦特罗抗体结合，从而在检测区显示出一条紫红色线条；而无论样

19、本中是否含有克在检测区显示出一条紫红色线条；而无论样本中是否含有克伦特罗分子，质控区都会出现紫红色线条，以示检测有效。伦特罗分子，质控区都会出现紫红色线条，以示检测有效。3 主要仪器主要仪器 食品加工机，低速离心机，电子秤（精食品加工机，低速离心机，电子秤（精度度0.1克），克），250ul单道微量移液器（移液枪单道微量移液器（移液枪）。）。4 材料与试剂材料与试剂 克伦特罗胶体金法检测卡，检测试剂克伦特罗胶体金法检测卡，检测试剂A（3%三氯乙酸溶液），检测试剂三氯乙酸溶液），检测试剂B（0.1N氢氧氢氧化钠溶液），化钠溶液），pH试纸（试纸（1-14），剪刀，），剪刀，10ml试管（或离心管

20、），一次性塑料吸管试管（或离心管），一次性塑料吸管、一次性手套等。、一次性手套等。5 操作步骤操作步骤（1）从原包装铝箔袋中取出检测卡，在）从原包装铝箔袋中取出检测卡，在1小时内应尽小时内应尽快地使用；快地使用；（2）将肉或内脏样本用剪刀剪成碎条后放入食品加工）将肉或内脏样本用剪刀剪成碎条后放入食品加工机中用一字刀粉碎，秤取机中用一字刀粉碎，秤取5g粉碎样本置于试管中，粉碎样本置于试管中，加入加入5毫升检测试剂毫升检测试剂A。盖上盖，摇匀，浸泡约。盖上盖，摇匀，浸泡约10分分钟；钟；（3）用离心机离心装有浸泡液和样本的试管）用离心机离心装有浸泡液和样本的试管2分钟（分钟（3000rpm），用移

21、液枪移取），用移液枪移取250l上清液转移入上清液转移入2ml检测管中，加入极少量检测试剂检测管中，加入极少量检测试剂B，调整，调整pH值至值至7左右；左右；（4）将盐酸克伦特罗检测卡片置于干净平坦的台面上）将盐酸克伦特罗检测卡片置于干净平坦的台面上，用塑料吸管垂直滴加，用塑料吸管垂直滴加3滴无空气样品处理液于加滴无空气样品处理液于加样孔内；样孔内；（5）等待紫红色条带的出现，测试结果应在）等待紫红色条带的出现，测试结果应在5分钟时分钟时读取。读取。6 结果判定结果判定 阳性（阳性（+）：仅质控区（）：仅质控区（C）出现一条紫红色条带，）出现一条紫红色条带，在测试区（在测试区（T）内无紫红色条

22、带出现；）内无紫红色条带出现；阴性（阴性（-）：两条紫红色条带出现。一条位于测试区）：两条紫红色条带出现。一条位于测试区（T）内，另一条位于质控区（）内，另一条位于质控区（C）内；）内；无效：质控区（无效：质控区（C）未出现紫红色条带，表明不正）未出现紫红色条带，表明不正确的操作过程或检测卡已变质损坏，应重新测试确的操作过程或检测卡已变质损坏，应重新测试1次，如仍为此现象，应更换检测卡或联系供应厂家次，如仍为此现象，应更换检测卡或联系供应厂家；阳性结果表明盐酸克伦特罗含量在阈值以上，阴性阳性结果表明盐酸克伦特罗含量在阈值以上，阴性结果表明盐酸克伦特罗含量在阈值以下。结果表明盐酸克伦特罗含量在阈

23、值以下。7 灵敏度灵敏度 灵敏度（阈值）：根据每种检测灵敏度（阈值）：根据每种检测卡控制浓度而定，盐酸克伦特罗有卡控制浓度而定，盐酸克伦特罗有3ng/ml、5ng/ml、6ng/ml、15ng/ml、20ng/ml、30ng/ml和和50ng/ml等控等控制规格，判断前请向供应厂家咨询控制规格，判断前请向供应厂家咨询控制阈值。制阈值。8 注意事项注意事项（1）肉及内脏中脂肪会导致假阳性结果）肉及内脏中脂肪会导致假阳性结果，取样时请剔除肉眼可见的脂肪；，取样时请剔除肉眼可见的脂肪；（2）盐酸克伦特罗检测卡应在常温下使）盐酸克伦特罗检测卡应在常温下使用，不用对刚屠宰的猪肉或冷冻猪肉用，不用对刚屠宰

24、的猪肉或冷冻猪肉直接进行检测；直接进行检测；二、克伦特罗ELISA试剂盒检测 1 适用范围适用范围 此方法应用于猪肉、内脏、猪尿此方法应用于猪肉、内脏、猪尿液及饲料中盐酸克伦特罗含量的检测液及饲料中盐酸克伦特罗含量的检测。二、使用单位需自备的设备及试剂二、使用单位需自备的设备及试剂 1、设备：、设备：微孔板酶标仪微孔板酶标仪450nm/630nm 振荡器振荡器 离心机离心机 天平：感量天平：感量0.01g 刻度移液管：刻度移液管：10ml 聚苯乙烯离心管：聚苯乙烯离心管：10ml、50ml 微量移液器：单道微量移液器：单道 20 l200 l、100 l1000 l 试剂试剂：甲醇(分析纯)氢

25、氧化钠(分析纯)浓盐酸 蒸馏水三、提供的材料与试剂三、提供的材料与试剂 1、96孔酶标板孔酶标板1块块 2、标准品、标准品6瓶：瓶：(1ml/瓶）瓶）0ppb,0.1ppb,0.3ppb,0.9ppb,2.7ppb,8.1ppb 3、高浓度标准品：、高浓度标准品：100ppb（1ml/瓶）瓶）4、克伦特罗酶标物、克伦特罗酶标物6ml 5、克伦特罗抗试剂、克伦特罗抗试剂 9ml 6、底物液、底物液 A液液 6ml 7、底物液、底物液 B液液 6ml 8、终、终 止止 液液 6ml 9、浓缩洗涤液、浓缩洗涤液(10)40ml 10、克伦特罗浓缩样品稀释液、克伦特罗浓缩样品稀释液(2)40ml四、溶

26、液的配制四、溶液的配制 配液配液1:样品稀释液样品稀释液 用去离子水将克伦特罗浓缩样品稀释液用去离子水将克伦特罗浓缩样品稀释液(2)按按1:1体积比进行稀体积比进行稀释，即：释，即：1份克伦特罗浓缩样品稀释液份克伦特罗浓缩样品稀释液(2)+1份去离子水；用于提取份去离子水；用于提取样本的稀释，样品稀释液在样本的稀释，样品稀释液在4环境可保存一个月。环境可保存一个月。配液配液2:洗涤工作液洗涤工作液 用去离子水将浓缩洗涤液用去离子水将浓缩洗涤液(10)按按1:9体积比进行稀释，即：体积比进行稀释，即：1份份浓缩洗涤液浓缩洗涤液(10)+9份去离子水；用于酶标板的洗涤，洗涤工作液在份去离子水；用于

27、酶标板的洗涤，洗涤工作液在4环境可保存一个月。环境可保存一个月。配液配液3:1M 氢氧化钠溶液氢氧化钠溶液 称取称取4.0g 氢氧化钠加去离子水混匀溶解定容至氢氧化钠加去离子水混匀溶解定容至100ml。配液配液4:0.1M 盐酸溶液盐酸溶液 量取量取0.83ml浓盐酸加去离子水混匀定容至浓盐酸加去离子水混匀定容至100ml 配液配液5：25%甲醇溶液甲醇溶液 将将25ml无水甲醇加入到无水甲醇加入到75ml去离子水中并充分混匀去离子水中并充分混匀 配液配液6：组织样本提取液：组织样本提取液 80ml 25%甲醇溶液加甲醇溶液加20ml 0.1M 盐酸盐酸五、样本前处理步骤五、样本前处理步骤 样

28、本处理前须知：样本处理前须知：（a）实验中必须使用一次性吸头，在吸取不同的试剂时要更换吸头。）实验中必须使用一次性吸头，在吸取不同的试剂时要更换吸头。（b）实验之前须检查各种实验器具是否洁净，必须使用洁净实验器具）实验之前须检查各种实验器具是否洁净，必须使用洁净实验器具，以避免污染干扰实验结果。，以避免污染干扰实验结果。（c）未处理的样本需冷冻保存。）未处理的样本需冷冻保存。（d）处理后的样本可在）处理后的样本可在2-8避光保存避光保存24h。（一）组织（带有低脂肪的肉、肝）（一）组织（带有低脂肪的肉、肝）-称取称取2.00.05g匀浆样本至匀浆样本至50ml聚苯乙烯离心管中；聚苯乙烯离心管中

29、；-加入加入6ml组织样本提取液，用振荡器振荡摇；组织样本提取液，用振荡器振荡摇；-4000r/min离心离心5min；-取取1ml上清液上清液,加入加入10l 1M 氢氧化钠溶液混匀（混匀后测定氢氧化钠溶液混匀（混匀后测定pH值值，大约为，大约为8）；）；-4000r/min离心离心5min；-取上清液取上清液20 l用于分析。用于分析。（二）尿液（二）尿液 -取20l清亮尿样直接测定（如尿样浑浊须经过滤或3000g以上，15离心10min直至清亮），暂不使用的样本需冷冻保存。（三）（三）饲料前处理方法饲料前处理方法 -用均质器均质饲料样本；-称取10.05g均质样本至50ml离心管中，加0

30、.1MHCL溶液10ml，用振荡器剧烈振荡5min，4000r/min以上离心5min；-取1ml上清液,加入1M 氢氧化钠溶液混匀（大约40l70l，混匀以后测定pH值，大约为8）；-4000r/min离心5min；-将上清液用样品稀释液五倍稀释（即：1份上清液+4份稀释后的样品稀释液）并充分混匀 -取20l用于分析。六、检测步骤六、检测步骤 测定前应须知：测定前应须知：1、使用之前将所有试剂和需用板条的温度回升至室温（2025）。2、使用之后立即将所有试剂放回28。3、在ELISA分析中的再现性，很大程度上取决于洗板的一致性，正确的洗板操作是ELISA测定程序中的要点。4、在所有恒温孵育过

31、程中，避免光线照射，用盖板膜封住微孔板。操作步骤：操作步骤：1、将所需试剂从冷藏环境中取出，置于室温（、将所需试剂从冷藏环境中取出，置于室温（2025）平衡）平衡30min以上，注意每种液体试剂使用以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。前均须摇匀。2、取出需要数量的微孔板，将不用的微孔放入自、取出需要数量的微孔板，将不用的微孔放入自封袋，保存于封袋，保存于28。3、洗涤工作液在使用前也需回温。、洗涤工作液在使用前也需回温。4、编号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每、编号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔平行，并记录标准孔和样本孔

32、所在的位置。孔所在的位置。5、加标准品、加标准品/样本：加标准品样本：加标准品/样本样本20 l/孔到对应的孔到对应的微孔中，再加入克伦特罗酶标物微孔中，再加入克伦特罗酶标物50 l/孔，再加入克孔，再加入克伦特罗抗试剂伦特罗抗试剂80ul/孔轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板孔轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置后置25避光环境中反应避光环境中反应10min。6、洗板：小心揭开盖板膜，将孔内液体甩、洗板：小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，用洗涤工作液干，用洗涤工作液200 l/孔，充分洗涤孔，充分洗涤5次次，每次间隔，每次间隔30s，用吸水纸拍干（拍干后未，用吸水纸拍干（拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪

33、头戳破）。被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破）。7、显色：加入底物液、显色：加入底物液A液液50 l/孔，再加底孔，再加底物液物液B液液50 l/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置盖板后置25避光环境中反应避光环境中反应10min。8、测定：加入终止液、测定：加入终止液50 l/孔，轻轻振荡混孔，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于匀，设定酶标仪于450nm处（建议用双波长处（建议用双波长450/630nm检测，请在检测，请在5min内读完数据）内读完数据），测定每孔，测定每孔OD值。值。(若无酶标仪，则不加终若无酶标仪，则不加终止液用目测法可进行判定止液用目测法可进行判定)。

34、七、检测方法灵敏度、准确度、精密度七、检测方法灵敏度、准确度、精密度 试剂盒灵敏度：试剂盒灵敏度：0.1ppb 样本最低检测限：样本最低检测限：组织样品 0.3ppb 尿液样品0.1ppb 饲料样品 5ppb八、注意事项八、注意事项 1、室温低于、室温低于20或试剂及样本没有回到室温（或试剂及样本没有回到室温（2025）会导致所有标准的）会导致所有标准的OD值偏低。值偏低。2、在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会、在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。洗板拍干后应立即进

35、行下一步操作。3、每加一种试剂前需将其摇匀。、每加一种试剂前需将其摇匀。4、反应终止液为、反应终止液为2M硫酸，避免接触皮肤。硫酸，避免接触皮肤。5、不要使用过了有效日期的试剂盒；也不要使用、不要使用过了有效日期的试剂盒；也不要使用过了有效期的试剂盒中的任何试剂，掺杂使用过了过了有效期的试剂盒中的任何试剂，掺杂使用过了有效期的试剂盒会引起灵敏度的降低；不要交换使有效期的试剂盒会引起灵敏度的降低；不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。用不同批号试剂盒中的试剂。6、储存条件、储存条件 保存试剂盒于保存试剂盒于28，不要冷冻，将不用的酶标板微孔板放，不要冷冻，将不用的酶标板微孔板放进自封袋重新密封。标

36、准物质和无色的发色剂对光敏感，因进自封袋重新密封。标准物质和无色的发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。此要避免直接暴露在光线下。7、试剂变质的迹象、试剂变质的迹象 发色试剂有任何颜色表明发色剂变质，应当弃之。发色试剂有任何颜色表明发色剂变质，应当弃之。0标准的吸标准的吸光度（光度（450/630nm）值小于）值小于0.5（A450nm0.5）时，表示试）时，表示试剂可能变质。剂可能变质。8、在加入底物液、在加入底物液A液和底物液液和底物液B液后，一般显色时间为液后，一般显色时间为1520min即可。若颜色较浅，可延长反应时间到即可。若颜色较浅，可延长反应时间到30min（或更长（或更长），但不得超过），但不得超过40min。反之，则减短反应时间。反之，则减短反应时间。9、该试剂盒最佳反应温度为该试剂盒最佳反应温度为25，温度过高或过低将导致检测，温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化。吸光度值和灵敏度发生变化。九、贮藏条件及保存期九、贮藏条件及保存期 贮藏条件：保存试剂盒于贮藏条件：保存试剂盒于28。保存期：该产品有效期为保存期：该产品有效期为12个月。个月。Thank You!