专题2微生物的培养与应用课件.ppt

1、一、基础知识(一一)微生物微生物:1.1.特点：结构都相当简单特点：结构都相当简单,个体多数十分微小个体多数十分微小.通常要通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚至没用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚至没有细胞结构有细胞结构.且体内一般不含有叶绿素且体内一般不含有叶绿素.不能进行光不能进行光合作用合作用.2.微生物包括五类微生物包括五类病病 毒毒细细 菌菌放线菌放线菌真真 菌菌原生动物原生动物原核生物界原核生物界 原生生物界原生生物界真菌界真菌界病毒界病毒界(二)培养基1.分类(按物理形态分按物理形态分)(1)液体培养基液体培养基(2)固体培养基固体培养基 常用的固体培养基常用的

2、固体培养基:琼琼脂固体培养基脂固体培养基.微生物在固体培养基微生物在固体培养基表面生长表面生长,可以形成肉可以形成肉眼可见的眼可见的菌落菌落.固体培养基固体培养基液体培养基液体培养基一般用于增菌（扩大一般用于增菌（扩大培养）、工业生产培养）、工业生产一般用于分离纯化、一般用于分离纯化、鉴定、计数鉴定、计数微生物在固体培养基微生物在固体培养基表面生长表面生长,可以形成肉可以形成肉眼可见的眼可见的菌落菌落按功能分按功能分选择培养基选择培养基鉴别培养基鉴别培养基选择培选择培养基养基（课本（课本22页）页）鉴别培鉴别培 养基养基（课本（课本26页）页）几种选择培养基：加入青霉素的培养基加入青霉素的培养

3、基:分离酵母菌、霉菌等真菌分离酵母菌、霉菌等真菌加入高浓度食盐的培养基加入高浓度食盐的培养基:分离金黄色葡萄球菌分离金黄色葡萄球菌只有尿素作为只有尿素作为唯唯一氮源的培养基一氮源的培养基：分离出分解尿素的细菌分离出分解尿素的细菌不加氮源的无氮培养基不加氮源的无氮培养基:分离固氮菌分离固氮菌不加含碳有机物的无碳培养基不加含碳有机物的无碳培养基:分离自养型微生物分离自养型微生物按化学组成分按化学组成分合成培养基合成培养基天然培养基天然培养基由化学成分和由化学成分和浓度完全清楚浓度完全清楚的物质配制的的物质配制的培养基。培养基。以动植物组织或以动植物组织或天然成分为原料天然成分为原料配制的培养基，配

4、制的培养基，培养基成分不明培养基成分不明确确。（牛肉膏、。（牛肉膏、蛋白胨）蛋白胨）2.培养基内所含的基本物质培养基内所含的基本物质(1)水水:(2)碳源碳源 (3)氮源氮源(4)无机盐无机盐(1)pH(1)pH值值 如如:培养霉菌需酸性、培养细菌需中性或微碱培养霉菌需酸性、培养细菌需中性或微碱性性(2)(2)特殊营养物质特殊营养物质 如：培养乳酸杆菌需要在培养基中添加维生如：培养乳酸杆菌需要在培养基中添加维生素素(3)(3)氧气的含量氧气的含量 如如:培养厌氧微生物时需要提供无氧的条件培养厌氧微生物时需要提供无氧的条件3.3.培养基内所需的其他条件培养基内所需的其他条件4.4.配制原则配制原

5、则目的明确：目的明确：营养全面、浓度适宜、比例恰当营养全面、浓度适宜、比例恰当适宜的适宜的pHpH值：值：有机碳源有机碳源异养型：异养型：根据微生物的根据微生物的种类、培养目的种类、培养目的选择原料选择原料自养型：自养型：不加碳源不加碳源加入缓冲剂加入缓冲剂（COCO2 2）生产生产科研科研（三）无菌技术（三）无菌技术1 1、获得纯净培养物的关键、获得纯净培养物的关键:2 2、无菌技术包括的四大方面（教材、无菌技术包括的四大方面（教材P15P15）防止外来杂菌的入侵防止外来杂菌的入侵实验操作的空间、操作者的衣着、手实验操作的空间、操作者的衣着、手培养器皿、接种用具、培养基培养器皿、接种用具、培

6、养基实验操作实验操作已灭菌物品避免与未灭菌物品接触已灭菌物品避免与未灭菌物品接触清洁、消毒清洁、消毒灭菌灭菌酒精灯火焰旁酒精灯火焰旁(三三)无菌技术无菌技术3 3、消毒与灭菌、消毒与灭菌(1)(1)消毒：消毒：概念：使用较为温和的物理或化学方法仅杀概念：使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物物 方法方法:a.a.煮沸消毒法煮沸消毒法b.b.巴氏消毒法巴氏消毒法:如牛奶的消毒如牛奶的消毒c.c.化学药剂消毒化学药剂消毒:酒精、氯气等酒精、氯气等d.d.紫外线或石碳酸、煤酚皂溶液等化学药剂消紫外线或石碳酸、煤酚皂溶液等化学药剂

7、消毒（实验室中）毒（实验室中）(不包括芽不包括芽孢和孢子孢和孢子)（2 2）灭菌）灭菌 概念：使用强烈的理化因素杀死物体内外概念：使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子所有的微生物，包括芽孢和孢子 方法：方法：a.灼烧灭菌灼烧灭菌b.干热灭菌干热灭菌c.高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌微生物的接种工具微生物的接种工具(接接种环、接种针种环、接种针)或其或其他金属用具直接在火他金属用具直接在火焰的充分燃烧层灼烧焰的充分燃烧层灼烧a.灼烧灭菌灼烧灭菌b.干热灭菌干热灭菌 16070 12h能耐高温的需要保持干能耐高温的需要保持干燥的物品燥的物品(玻璃器皿玻璃器皿)c.高压蒸汽灭菌高压蒸

8、汽灭菌 100kPa 121 15-30min通常用于培养基的灭菌通常用于培养基的灭菌二二.实验操作实验操作（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 计算称量计算称量溶化溶化灭菌灭菌倒平板倒平板（二）纯化大肠杆菌（二）纯化大肠杆菌 接种方法有：接种方法有：平板划线法平板划线法和和稀释稀释涂布涂布平板法平板法（三）将接种后的培养基和一个未接（三）将接种后的培养基和一个未接种的培养基放入种的培养基放入37恒温箱中培养恒温箱中培养12h和和24h后，观察并记录后，观察并记录三、课题延伸：菌种的保藏三、课题延伸：菌种的保藏 1、临时保藏、临时保藏 2、甘油保藏、甘油保藏练习练习

9、倒平板倒平板讨论讨论:(1).(1).培养基灭菌后，需要冷却到培养基灭菌后，需要冷却到50 50 左右时，才能用来倒平左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？板。你用什么办法来估计培养基的温度？提示：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度提示：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。(2).(2).为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。(3).(3).平板冷凝后

10、，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，为什么要将平板倒置？答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使防止皿盖上的水珠落入湿度也比较高，将平板倒置，既可以使防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染培养基，造成污染,又可以避免培养基表面的水分过快地挥发。又可以避免培养基表面的水分过快地挥发。(4).(4).在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？答：

11、空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。因此最好不要用这个平板培养微生物。1、平板划线法、平板划线法 划划3 3个平板个平板 1 1个不划线个不划线（重复实验）（重复实验）（空白对照）（空白对照）(1).(1).为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免

12、接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。染环境和感染操作者

13、。(2).(2).在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？答：以免接种环温度太高，杀死菌种。答：以免接种环温度太高，杀死菌种。(3).(3).在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？划线的末端开始划线？答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落

14、。而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。讨论讨论:稀释涂布平板法稀释涂布平板法梯度稀释菌液梯度稀释菌液分别（依次）涂布平板分别（依次）涂布平板 (1)(1)梯度稀释操作梯度稀释操作:6 6支试管，分别加入支试管，分别加入9ml9ml无菌水无菌水1ml1011ml1021ml1031ml1041ml1051ml106菌液菌液微量微量 移移液器液器2.稀释涂布法稀释涂布法:(1)系列稀释操作:讨论:编号为 的浓度是 的多少倍?提示:为 倍.105101104涂布平板操作涂布平板操作 讨论讨论:涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系

15、列稀释的无菌操作要求，想一想，第平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步步应如何进行无菌操作？应如何进行无菌操作？提示：应从操作的各个细节保证提示：应从操作的各个细节保证“无菌无菌”。例如，酒精。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围；等等。体、吸管要在酒精灯火焰周围；等等。（2）涂布平板操作各梯度分别涂布各梯度分别涂布3 3个平板个平板1 1个不涂布作空白对照个不涂布作空白对照稀稀释释10103 3倍倍稀稀释释10104 4倍倍稀稀释释10105 5倍倍SARS病毒病毒 禽流感病毒禽流感病毒

16、朊病毒（蛋白质病毒）朊病毒（蛋白质病毒）病毒的增殖：病毒的增殖：返回返回细菌细菌 细菌：单细胞不分枝的原核微生物细菌：单细胞不分枝的原核微生物,微小而透明微小而透明。生殖方式为分裂生殖生殖方式为分裂生殖 某些细菌在恶劣环境下某些细菌在恶劣环境下,能形成休眠体能形成休眠体-芽孢芽孢(壁壁厚厚.有很强的抵抗力有很强的抵抗力)图图1-1 常见的三种细菌典型形态常见的三种细菌典型形态A.球菌球菌 B.杆菌杆菌 C.弧菌弧菌返回返回a.a.结构：结构：单细胞原核单细胞原核分支状的菌丝（基内菌丝、气生菌丝）分支状的菌丝（基内菌丝、气生菌丝）放线菌放线菌孢子丝孢子丝孢子孢子微生物中发现了几千种抗生素，其中微

17、生物中发现了几千种抗生素，其中2/3是由放是由放线菌产生的线菌产生的:链霉素、土霉素、四环素、氯霉素、链霉素、土霉素、四环素、氯霉素、红霉素、庆大霉素红霉素、庆大霉素c.应用应用:b.放线菌的繁殖放线菌的繁殖返回返回上图是酵母菌电子显微镜下的上图是酵母菌电子显微镜下的形态结构形态结构(正发生出芽生殖正发生出芽生殖)青霉青霉酵母菌和霉菌酵母菌和霉菌营养菌丝营养菌丝(匐匍菌丝匐匍菌丝)直立菌丝直立菌丝霉菌的孢子生殖霉菌的孢子生殖返回返回菌落（课本18页）：单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结就会形成一个肉眼可见的，具

18、有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落构的子细胞群体，叫做菌落。菌落是鉴定菌种的重要依据。菌落是鉴定菌种的重要依据。细菌的菌落细菌的菌落特征因种而特征因种而异异 菌落返回返回(2)碳源碳源 可作为碳源的物质有可作为碳源的物质有:a.含碳无机物含碳无机物:碳酸盐、碳酸氢盐碳酸盐、碳酸氢盐b.含碳有机物：含碳有机物：不同微生物所利用的碳源不同不同微生物所利用的碳源不同a.异养型微生物的碳源为含碳有机物异养型微生物的碳源为含碳有机物b.自养型微生物的碳源为含碳无机物自养型微生物的碳源为含碳无机物糖类（主要）糖类（主要）蛋白质蛋白质脂肪脂肪核酸核酸返回返回(3)氮源氮源 可作为氮源的物质有可作为氮源的物

19、质有:a.含氮无机物：氮气、硝酸盐、氨盐含氮无机物：氮气、硝酸盐、氨盐b.含氮有机物：含氮有机物：固氮微生物所利用的氮源是游离氮固氮微生物所利用的氮源是游离氮蛋白质蛋白质（主要）（主要）核酸核酸返回返回思考:1)无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？生物污染外，还有什么目的？2)消毒和灭菌有何不同？消毒和灭菌有何不同？3)为什么消毒牛奶要用巴氏消毒法为什么消毒牛奶要用巴氏消毒法?4)请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。需要，请选择合适的

20、方法。培养细菌用的培养基与培养皿培养细菌用的培养基与培养皿玻棒、试管、烧瓶和吸管玻棒、试管、烧瓶和吸管实验操作者的双手实验操作者的双手消毒消毒灭菌灭菌条件条件温和温和强烈强烈作用作用范围范围物体表面或内部一部物体表面或内部一部分分,不包括芽孢和孢子不包括芽孢和孢子物体内外所有微生物物体内外所有微生物,包括芽包括芽孢和孢孢和孢子子无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。灭菌灭菌 灭菌灭菌 消毒消毒思考思考1 溶化时为什么要将牛肉膏连同称量纸一起溶化时为什么要将牛肉膏连同称量纸一起加热加热?（课本（课本16页）页）加琼脂的目的是什么加琼脂的目的是什么

21、?思考思考2 在灭菌前在灭菌前,用牛皮纸、旧报纸包紧培养基的用牛皮纸、旧报纸包紧培养基的目的是什么？目的是什么？培养皿能否用高压蒸汽灭菌？培养皿能否用高压蒸汽灭菌？练习练习2:1.1.获得纯净培养物的关键是获得纯净培养物的关键是 A A 将用于微生物培养的器皿将用于微生物培养的器皿.接种用具和培养基等器具进行接种用具和培养基等器具进行灭菌灭菌 B B 接种纯种细菌接种纯种细菌 C C 适宜环境条件下培养适宜环境条件下培养 D D 防止外来杂菌的入侵防止外来杂菌的入侵 2.2.下操作与无菌技术无关的是下操作与无菌技术无关的是 A A 接种前用肥皂洗双手接种前用肥皂洗双手,再用酒精擦拭双手再用酒精

22、擦拭双手 B B 接种前用火焰烧灼接种针接种前用火焰烧灼接种针 C C 培养在培养在5050左右时搁置斜面左右时搁置斜面 D D 在酒精灯的火焰旁完成在酒精灯的火焰旁完成 3.3.外科手术器械和罐头食品的处理外科手术器械和罐头食品的处理,要以能够杀死什么为标要以能够杀死什么为标准准 A A 球菌球菌 B B 杆菌杆菌 C C 螺旋菌螺旋菌 D D 芽孢芽孢C CD D 4.4.某学校打算开辟一块食用菌栽培基地某学校打算开辟一块食用菌栽培基地,以丰富学生以丰富学生的劳动技术课内容的劳动技术课内容,首先对食用菌实验室进行清扫和首先对食用菌实验室进行清扫和消毒处理消毒处理,准备食用菌栽培所需的各种原

23、料和用具准备食用菌栽培所需的各种原料和用具,然然后从菌种站购来各种食用菌菌种后从菌种站购来各种食用菌菌种.请回答以下问题请回答以下问题:(1)(1)对买回来的菌进行扩大培养对买回来的菌进行扩大培养,首先制备试管培养基首先制备试管培养基,写出制备固体牛肉膏蛋白胨培养基所需的原写出制备固体牛肉膏蛋白胨培养基所需的原料料 。其中。其中提供氮源的主要提供氮源的主要 是是 ；提供能源的主要物质；提供能源的主要物质是是 ；琼脂的作用是；琼脂的作用是 ，它不提，它不提供营养。供营养。(2)(2)微生物在生长过程中对各种成分所需量不同微生物在生长过程中对各种成分所需量不同,故制备故制备培养基时各成分要有合适的

24、培养基时各成分要有合适的 ,在烧杯加入琼在烧杯加入琼脂后要不停地脂后要不停地 ,防止防止 .牛肉膏、蛋白胨、水、无机盐、琼脂牛肉膏、蛋白胨、水、无机盐、琼脂牛肉膏牛肉膏蛋白胨蛋白胨凝固剂凝固剂比例比例搅拌搅拌琼脂糊底引起烧杯破裂琼脂糊底引起烧杯破裂(3)(3)将配制好的培养基转移到锥形瓶中将配制好的培养基转移到锥形瓶中,加棉塞后包加棉塞后包上牛皮纸并用皮筋勒紧放入上牛皮纸并用皮筋勒紧放入 中灭中灭菌菌,压力为压力为 ,温度为温度为 ,时时间间 ,灭菌完毕拔掉电源灭菌完毕拔掉电源,待锅内压待锅内压力力 ,将试管取出将试管取出.(4)(4)使用高压蒸汽灭菌锅时注意使用高压蒸汽灭菌锅时注意,先向锅内

25、倒入先向锅内倒入 ,把锅内水加热煮沸并将基中原有冷空气彻底排除后把锅内水加热煮沸并将基中原有冷空气彻底排除后将锅密闭将锅密闭.(5)(5)从一支试管向另一支试管接种时注意从一支试管向另一支试管接种时注意,接种环要接种环要在酒精灯在酒精灯 焰灭菌焰灭菌.并且待接种环并且待接种环 后沾后沾取菌种取菌种,试管口不能离开酒精灯火焰附近试管口不能离开酒精灯火焰附近,将接种的将接种的试管放入试管放入 冰箱中保藏冰箱中保藏.高压灭菌锅高压灭菌锅100KPa100KPa121 121 自然降至零后自然降至零后 适量水适量水外外冷却冷却415-30min15-30min（五）练习（五）练习 1.提示：可以从微生

26、物生长需要哪些条件的角度来思提示：可以从微生物生长需要哪些条件的角度来思考。例如，微生物的生长需要水、空气、适宜的温度，考。例如，微生物的生长需要水、空气、适宜的温度，食品保存可以通过保持干燥、真空的条件，以及冷藏食品保存可以通过保持干燥、真空的条件，以及冷藏等方法来阻止微生物的生长。等方法来阻止微生物的生长。2.提示：可以从这三种培养技术的原理、操作步骤等提示：可以从这三种培养技术的原理、操作步骤等方面分别进行总结归纳。例如，这三种培养技术都需方面分别进行总结归纳。例如，这三种培养技术都需要为培养物提供充足的营养，但无土栽培技术的操作要为培养物提供充足的营养，但无土栽培技术的操作并不需要保证

27、无菌的条件，而其他两种技术都要求严并不需要保证无菌的条件，而其他两种技术都要求严格的无菌条件。格的无菌条件。3.提示：这是一道开放性的问题，答案并不惟一，重提示：这是一道开放性的问题，答案并不惟一，重点在于鼓励学生积极参与，从不同的角度思考问题。点在于鼓励学生积极参与，从不同的角度思考问题。例如，正是由于证明了微生物不是自发产生的，微生例如，正是由于证明了微生物不是自发产生的，微生物学才可能发展成为一门独立的学科；巴斯德实验中物学才可能发展成为一门独立的学科；巴斯德实验中用到的加热灭菌的方法导致了有效的灭菌方法的出现，用到的加热灭菌的方法导致了有效的灭菌方法的出现，而这一灭菌原理也适用于食品的

28、保存等。而这一灭菌原理也适用于食品的保存等。练练 习习1 1不同的微生物对营养物质的需要各不相不同的微生物对营养物质的需要各不相同。下列有关一种以同。下列有关一种以COCO2 2为唯一碳源的自养为唯一碳源的自养微生物营养的描述，不正确的是微生物营养的描述，不正确的是()A A氮源物质为该微生物提供必要的氮素氮源物质为该微生物提供必要的氮素B B碳源物质也是该微生物的能源物质碳源物质也是该微生物的能源物质C C无机盐是该微生物不可缺少的营养物质无机盐是该微生物不可缺少的营养物质D D水是该微生物的营养要素之一水是该微生物的营养要素之一B2 2细菌培养过程中分别采用了高压蒸细菌培养过程中分别采用了

29、高压蒸汽、酒精、火焰灼烧等几种不同的处理，汽、酒精、火焰灼烧等几种不同的处理，这些方法依次用于杀灭哪些部位的杂菌这些方法依次用于杀灭哪些部位的杂菌()A A接种环、手、培养基接种环、手、培养基 B B高压锅、手、接种环高压锅、手、接种环C C培养基、手、接种环培养基、手、接种环 D D接种环、手、高压锅接种环、手、高压锅C2 2稀释涂布平板法是微生物培养中的一种常稀释涂布平板法是微生物培养中的一种常用的接种方法。下列相关叙述错误的是用的接种方法。下列相关叙述错误的是()A A操作中需要将菌液进行一系列的浓度梯度操作中需要将菌液进行一系列的浓度梯度 稀释稀释B B需将不同稀释度的菌液分别涂布到固

30、体培需将不同稀释度的菌液分别涂布到固体培 养基表面养基表面C C不同浓度的菌液均可在培养基表面形成单不同浓度的菌液均可在培养基表面形成单 个的菌落个的菌落D D操作过程中对培养基和涂布器等均需进行操作过程中对培养基和涂布器等均需进行 严格灭菌处理严格灭菌处理C3 3(2013(2013江苏，江苏，18)18)某研究小组从有机某研究小组从有机废水中分离微生物用于废水处理。下列叙废水中分离微生物用于废水处理。下列叙述正确的是述正确的是()A A培养基分装到培养皿后进行灭菌培养基分装到培养皿后进行灭菌B B转换划线角度后需灼烧接种环再进行转换划线角度后需灼烧接种环再进行 划线划线C C接种后的培养皿

31、须放在光照培养箱中接种后的培养皿须放在光照培养箱中 培养培养D D培养过程中每隔一周观察一次培养过程中每隔一周观察一次B4 4(2012(2012北京，北京，5)5)高中生物学实验中，高中生物学实验中，在接种时不进行严格无菌操作对实验结果在接种时不进行严格无菌操作对实验结果影响最大的一项是影响最大的一项是()A A将少许干酵母加入到新鲜的葡萄汁中将少许干酵母加入到新鲜的葡萄汁中B B将毛霉菌液接种在切成小块的鲜豆腐上将毛霉菌液接种在切成小块的鲜豆腐上C C将转基因植物叶片接种到无菌培养基上将转基因植物叶片接种到无菌培养基上D D将土壤浸出液涂布在无菌的选择培养基将土壤浸出液涂布在无菌的选择培养

32、基 上上C5 5(2011(2011新课标，新课标，39)39)有些细菌可分解原油，有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从受原油污染的土壤中筛选出能高效降解原欲从受原油污染的土壤中筛选出能高效降解原油的菌株。回答问题：油的菌株。回答问题：(1)(1)在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以以_为唯一碳源的固体培养基上。从功为唯一碳源的固体培养基上。从功能上讲，该培养基属于能上讲，该培养基属于_培养基。培养基。(2)(2)纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用

33、的接种方法有两种，即种方法有两种，即_和和_。原油原油选择选择平板划线法平板划线法稀释涂布平板法稀释涂布平板法5 5(2011(2011新课标，新课标，39)39)有些细菌可分解原油，有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从受原油污染的土壤中筛选出能高效降解原欲从受原油污染的土壤中筛选出能高效降解原油的菌株。回答问题：油的菌株。回答问题：(3)(3)为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈大说明该菌株的降解能力解圈的大小，分解圈大说明该菌株的降解能力_。(4)(4)通常情况下，

34、在微生物培养过程中，实验室通常情况下，在微生物培养过程中，实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、常用的灭菌方法有灼烧灭菌、_和和_。无菌技术要求实验操作应在酒。无菌技术要求实验操作应在酒精灯精灯_附近进行，以避免周围环境中微附近进行，以避免周围环境中微生物的污染。生物的污染。强强干热灭菌干热灭菌高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌火焰火焰6 6(2014(2014新课标新课标，39)39)为了调查某河流的水为了调查某河流的水质状况，某研究小组测定了该河流水样中的细质状况，某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量，并进行了细菌分离等工作。回答下列菌含量，并进行了细菌分离等工作。回答下列问题：问题：(1)(1)该小组

35、采用稀释涂布平板法检测水样中的细该小组采用稀释涂布平板法检测水样中的细菌含量。在涂布接种前，随机取若干灭菌后的菌含量。在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是是_；然；然后，将后，将1 mL1 mL水样稀释水样稀释100100倍，在倍，在3 3个平板上用涂个平板上用涂布法分别接入布法分别接入0.1 mL0.1 mL稀释液；经适当培养后，稀释液；经适当培养后，3 3个平板上的菌落数分别为个平板上的菌落数分别为3939、3838和和3737。据此可。据此可得出每升水样中的活菌数为得出每升水样中的活菌数为_。检测培养基平板灭菌

36、是否合格检测培养基平板灭菌是否合格3.83.810107 7(2)(2)该小组采用平板划线法分离水样中的细菌。该小组采用平板划线法分离水样中的细菌。操作时，接种环通过操作时，接种环通过_灭菌，在第二次及灭菌，在第二次及以后划线时，总是从上一次划线的末端开始划线以后划线时，总是从上一次划线的末端开始划线。这样做的目的是。这样做的目的是_ 。(3)(3)示意图示意图A A和和B B中，中，_表示的是用稀释涂表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。布平板法接种培养后得到的结果。灼烧灼烧将聚集的菌体逐步稀释以便将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落获得单个菌落B B(4)(4)该小组将得到的菌株接

37、种到液体培养该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养。结果发现：振荡培养部分进行振荡培养。结果发现：振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因是：振荡培养能提高培养液中析其原因是：振荡培养能提高培养液中_的含量，同时可使菌体与培养的含量，同时可使菌体与培养液充分接触，提高液充分接触，提高_的利用率。的利用率。溶解氧溶解氧营养物质营养物质练习1（多项选择）1、下列细菌中，能利用含碳无机物作碳源的是 A 酵母菌 B 根瘤菌 C 硝化细菌 D 乳酸菌 2、培养大肠杆菌的培养基中，必需含有的碳源和氮源是 A 糖、有机酸等 B 二氧化碳、碳酸盐 C 蛋白质 D 无机氮化物 3、下列叙述不正确的是 A 培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质 B 液体培养基和固体培养基所含的最基本物质不相同 C 微生物在固体培养基上生长时，可以形成肉眼可见的单个细菌CAB.C.