1、基因测序技术简介简介主讲人:徐德阳目录一、测序技术发展与比较一、测序技术发展与比较二、二、illumina测序原理测序原理三、三、Pacbio测序原理测序原理全基因组测序的英文是Whole Genome Sequencing,简称WGS,目前默认指的是人类的全基因组测序。所谓全(Whole),指的就是把物种细胞里面完整的基因组序列从第1个DNA开始一直到最后一个DNA,完完整整地检测出来,并排列好,因此这个技术几乎能够鉴定出基因组上任何类型的突变。第一代DNA测序技术用的是1975年由桑格(Sanger)和考尔森(Coulson)开创的链终止法,以及1976-1977年由马克西姆(Maxam)
2、和吉尔伯特(Gilbert)发明的化学法(链降解)。在1977年,由桑格老人家测定了第一个基因组序列噬菌体phiX-174。http:/smcg.cifn.unam.mx/enp-unam/03-EstructuraDelGenoma/animaciones/secuencia.swf目录一、测序技术发展与比较一、测序技术发展与比较二、二、illumina测序原理测序原理三、三、Pacbio测序原理测序原理测序流程Illumina测序原理测序原理上机测序的文库Illumina测序原理测序原理测序流程Illumina测序原理测序原理cBotIllumina测序原理测序原理测序芯片测序芯片Flow
3、cellLane:八条相对独立通道两端小孔:进液孔与出液孔Oligo:DNA小片段,通过化学键连接在Flowcell上,能与文库两端碱基互补配对oligoIllumina测序原理测序原理Index变性:双链DNA变为单链DNA,杂交在Flowcell上结合方式:碱基互补配对原则杂交杂交Illumina测序原理测序原理延伸延伸RCR扩增扩增模版:杂交结合链引物:OligoIllumina测序原理测序原理变性变性Originaltemplate:与Flowcell氢键连接,不稳定Newlysynthesizedstrand:与Flowcell磷酸二酯键连接,稳定Illumina测序原理测序原理成簇
4、成簇二代测序核心技术之一:桥式扩增桥式扩增Illumina测序原理测序原理桥式扩增桥式扩增搭“桥”:DNA链与周围Oligo通过碱基互补配对结合PCR扩增:以DNA链为模版以新结合的Oligo为引物Illumina测序原理测序原理变性变性结果:一条DNA链变成两条Illumina测序原理测序原理继续桥式扩增继续桥式扩增Illumina测序原理测序原理线性化线性化Illumina测序原理测序原理切割切割Illumina测序原理测序原理阻断阻断ddNTPs 阻断阻止继续扩增一簇完全相同的DNA链增强检测信号ead1 Illumina测序原理测序原理Read1 测序引物杂交测序引物杂交目录一、测序技术发展与比较一、测序技术发展与比较二、二、illumina测序原理测序原理三三、Pacbio测序测序原理原理Pacbio测序原理测序原理Pacbio测序原理测序原理Pacbio测序原理测序原理Pacbio测序原理测序原理Oxford NanoporeMinION它是基于电信号而不是光信号的测序技术!MinION最大的特点:除了极小的体积之外,就是数据将是可实时读取的,并且起始DNA在测序过程中不被破坏!