电子显微镜技术及在病理诊断上的作课件.ppt

1、2021/3/71电子显微镜技术及在病理诊断上电子显微镜技术及在病理诊断上的作用的作用小组成员 高玉梅 于 虹 郭 峰 刘 阳 张 杰 指导教师 吴 岩 教 授 2007级电子显微镜技术硕士研究生课程级电子显微镜技术硕士研究生课程2021/3/72电子显微镜技术及在病理诊断上的作用电子显微镜技术及在病理诊断上的作用一、电子显微镜技术一、电子显微镜技术 二、诊断病理学 三、电子显微镜技术在病理诊断上的作用三、电子显微镜技术在病理诊断上的作用四、讨论四、讨论2021/3/73（一）概念（一）概念电子显微镜技术：也称电子显微技术 或电子显微术 2021/3/74概念概念电子显微镜技术 电镜精密仪器

2、样品制备技术 2021/3/751、电子显微镜、电子显微镜：是用电子束成像的显微镜，电子显微镜是一种高精密度的电子光学仪器，它具有较高分辨率本领和放大倍数，是观察和研究物质微观结构的重要工具。发明背景：发明背景：它是在发现电子束具有波动性质及利用磁场改变电子束行径，在上述理论的指导下发明出的。电子显微镜主要分为两种类型电子显微镜主要分为两种类型：一种是观察样品内部超微结构的透射电子显微镜，另一种是揭示样品表面形貌的扫描电子显微镜。电子显微镜特征电子显微镜特征：电镜与光镜的区别扫描电镜与透射电镜比较扫描电镜与透射电镜比较：（见下表）2021/3/76扫描电镜和透射电镜比较扫描电镜和透射电镜比较项

3、目扫描电镜透射电镜分辨本领70100 2 发大倍数2040万倍万倍100万倍万倍加速电压150 KV几十千伏几百千伏几十千伏几百千伏图像特点景深长、三维立体结构景深长、三维立体结构景深小、两维平面结构景深小、两维平面结构样品制备固定固定-脱水脱水-临界点干燥临界点干燥-喷涂金属喷涂金属固定固定-脱水脱水-包埋包埋-超薄切片超薄切片-重金属染色重金属染色样品尺寸1cm350100nm切片切片样品损伤光斑直径只有几十埃的电子束在光斑直径只有几十埃的电子束在样品上扫描，对样品损伤极小样品上扫描，对样品损伤极小大约大约1m直径电子束打到样品上，造成一直径电子束打到样品上，造成一定程度损伤定程度损伤样品

4、成像信号二次电子、背散射电子二次电子、背散射电子透射电子透射电子发大倍数调节用衰减器改变扫描线圈电流，进用衰减器改变扫描线圈电流，进行放大率调节行放大率调节调整中间镜电流改变放大率调整中间镜电流改变放大率决定分辨率因素入射电子束直径决定图像分辨率。入射电子束直径决定图像分辨率。加速电压、透镜缩小率、电源稳定度加速电压、透镜缩小率、电源稳定度及像差决定电子束斑直径及像差决定电子束斑直径加速电压、电源稳定度、像差、样品厚度加速电压、电源稳定度、像差、样品厚度等影响分辨率等影响分辨率2021/3/77本图片来自中科科仪2021/3/78本图片来自中科科仪2021/3/792、样品制备、样品制备透射电

5、镜样品制备的常用方法：透射电镜样品制备的常用方法：包括超薄切片、冷冻复型、负染色等。扫描电镜样品制备：扫描电镜样品制备：比透射电镜样品制备简单。除保存样品表面形貌结构外，只要求样品干燥并能导电，而不需包埋和切片。制备方法与透射电镜样品制备方法一样。2021/3/710电子显微镜技术及在病理诊断上的作用电子显微镜技术及在病理诊断上的作用一、电子显微镜技术一、电子显微镜技术二、诊断病理学三、电子显微镜技术在病理诊断上的作用三、电子显微镜技术在病理诊断上的作用四、讨论四、讨论2021/3/711二诊断病理学概述二诊断病理学概述病理学病理学是研究疾病病因、发病机制、形态结构、功能、代谢变化的一门基础医

6、学及其与临床医学之间的桥梁学科。主要包括主要包括基础病理学、实验病理学及诊断病理学(以往称外科病理学或临床病理学)。各级医院病理科所从事的工作主要是诊断病理学。病理检查内容病理检查内容通常包括活体组织检查、手术切除标本检查、术中冰冻检查、细胞学检查、尸体解剖检查等。病理检查的手段病理检查的手段很多很多,如:HE 常规检查、特殊染色(组织化学)、免疫组化、原位分子杂交、聚合酶链反应(PCR)、电子显微镜检查、病理图像分析、流式细胞仪检查、细胞培养、传真病理学(telepathology)等。2021/3/712电子显微镜技术及在病理诊断上的作用电子显微镜技术及在病理诊断上的作用一、电子显微镜技术

7、一、电子显微镜技术二、诊断病理学三、电子显微镜技术在病理诊断上的作用三、电子显微镜技术在病理诊断上的作用四、讨论四、讨论2021/3/713三电子显微镜技术在病理诊断上的作用三电子显微镜技术在病理诊断上的作用（一）电镜检查起决定性作用（一）电镜检查起决定性作用（二）电镜检查起参考和修正作用电镜检查起参考和修正作用（三）电镜检查起验正作用电镜检查起验正作用2021/3/714三电子显微镜技术在病理诊断上三电子显微镜技术在病理诊断上的作用的作用（一）电镜检查起决定性作用：（一）电镜检查起决定性作用：电镜发现特异性超微结构信息做出最后病理诊断。例：男,39 岁,发现右侧颈部无痛肿物1 年余,花生米大

8、,取肿物做活检。光镜:增大的淋巴结,结构紊乱,但仍残留滤泡与淋巴窦,窦腔及淋巴索充以大量胞质丰富的嗜伊红细胞,直径约20 m。核圆,卵圆或扭曲状。间有增生的淋巴细胞及嗜酸性粒细胞。电镜:大细胞排列疏松、无连接、胞质宽广,见有似网球拍或柄的双膜结构(Birbeck 颗粒),证明光镜下嗜伊红大细胞为朗格汉斯细胞(图1)。诊断为淋巴结朗格汉斯细胞组织细胞增生症。电镜诊断具有独特的确诊价值。2021/3/715图图1朗格汉斯细胞组织细胞增生症:见双模构成的似网球拍状的Birbeck 颗粒。EM 10 000 注：图片取自 张瑞祥,齐洁敏,张洁茹等.235例疑难病理标本的电镜诊断价值.临床与实验病理学杂

9、志;2002;15（5）2021/3/716（二）电镜检查起参考和修正作用：电镜检查起参考和修正作用：电镜获得的信息对光镜结果予以补充或修正,最终做出最后病理诊断。例：男,因左颌下淋巴结肿大就诊。经淋巴结活检,病理诊断为淋巴组织增生。不久颌下淋巴结又肿大,再次淋巴结(颌下)活检病理诊断为恶性淋巴瘤(免疫母细胞型)。电镜:瘤细胞大、多边形或不规则形,核质比大,核膜弯曲,不规则或奇特的内陷,核常染色质丰富,网栏状大核仁。少许胞质突,胞质内核糖体丰富,其他细胞器稀少。质膜间见发育不良的桥粒样连接(图2)。最后病理诊断为颌下淋巴结转移癌。随后临床发现鼻咽癌原发灶。此例电镜有确诊价值。2021/3/71

10、7图图2 转移癌:瘤细胞大、长圆形,胞核大、梭形,核膜不平滑,显著增大的核质比质膜间有桥粒样连接,胞质含少许欠发达的细胞器,网栏状大核仁,两团染色质间颗粒。EM 10 000 注：图片取自 张瑞祥,齐洁敏,张洁茹等.235例疑难病理标本的电镜诊断价值.临床与实验病理学杂志;2002;15（5）2021/3/718（三）电镜检查起验正作用：电镜检查起验正作用：超微结构信息进一步证实、丰富了光镜的组织学诊断 例：男,30 岁,肝穿活检。光镜诊断:慢迁肝。虽未见典型碎屑样坏死,但不除外活动性变化。电镜见肝细胞大,疏松,细胞周围间隙加大,有微绒毛化,滑面内质网增生,内含管状体,肝窦内充塞胶原纤维。有的

11、区域见部分肝细胞胞质有胞溶,周围有淋巴细胞浸润。最后电镜诊断:慢性迁延性乙型病毒 性 肝 炎 有 轻 微 活 动(图 3)。电 镜 有 确 诊 价 值。2021/3/719图图3 慢性迁延性乙型病毒性肝炎:滑面内质网增生,腔内含量多的乙肝表面抗原管状体。EM 8 000注：图片取自 张瑞祥,齐洁敏,张洁茹等.235例疑难病理标本的电镜诊断价值.临床与实验病理学杂志;2002;15（5）2021/3/720电子显微镜技术及在病理诊断上的作用电子显微镜技术及在病理诊断上的作用一、电子显微镜技术一、电子显微镜技术二、诊断病理学三、电子显微镜技术在病理诊断上的作用三、电子显微镜技术在病理诊断上的作用四

12、、讨论四、讨论2021/3/721四、讨论国内外对电镜诊断的价值,在肿瘤应用方面报道较多,Gyorkey 等65%。文献中电镜诊断价值的比率高低不同。主要原因是病例的选择不太相同,使用标准、统计的方法也不同还有检查者的光镜诊断水平或侧重点不同等因素也有关 2021/3/722应用电镜做最后病理诊断工作应用电镜做最后病理诊断工作,有以下几点注意：有以下几点注意：(1)由于电镜费用较高,制作程序繁杂,应有选择地送电镜检查。有的临床医师,认为电镜是优于光镜的先进技术而盲目送检,如胃镜取胃黏膜活检无选择的送电镜检查,造成资源、人力和财力的浪费。(2)电镜标本要求尽可能活体取材,立即投入预冷的固定液中固

13、定,以利完好地保存细胞的超微结构。(3)涉及病原学诊断,特别是怀疑病毒、支原体、衣原体等微生物感染的标本应充分使用电镜。(4)作为辅助手段应用电镜时应做到:2021/3/723在光镜观察基础上有的放矢地做电镜观察 半薄切片选区定位要求准确 超微结构观察仍应依次行组织学和细胞学观察,根据需要采取不同的放大倍率观察 树立电镜观察是为获得组织细胞的超微结构病理信息的观念,而不是代替光镜诊断。2021/3/724因此,如同战争中使用常规武器与战略武器的关系,在病理诊断过程中能用光镜者不用电镜,只在必要时辅以电镜、免疫组化检查。当然,应用电镜深入研究细胞细微结构在疾病发生和发展中的变化,许多工作有待开展。2021/3/725THANK YOUTHANK YOU