溶血性链球菌的检验课件.ppt

1、（一）形态与染色（一）形态与染色1、呈球形或卵圆形，直径、呈球形或卵圆形，直径0.5um-1um 链状排列（长短不链状排列（长短不一）。一）。2、革兰氏染色阳性，衰老培养革兰氏染色阳性，衰老培养物常成阴性。物常成阴性。3、无芽孢、无鞭毛、多数无夹、无芽孢、无鞭毛、多数无夹膜膜。一、生物学特性一、生物学特性1、多数为需氧或兼性厌氧，少数为微需氧或专性厌氧。、多数为需氧或兼性厌氧，少数为微需氧或专性厌氧。2、对营养要求高，普通培养基不能良好生长，（需加对营养要求高，普通培养基不能良好生长，（需加血清液、腹水等）。血清液、腹水等）。3、最适温度、最适温度37，pH7.4-7.64、在液体培养基中，溶

2、血菌株、在液体培养基中，溶血菌株,呈絮状或颗粒状沉淀生呈絮状或颗粒状沉淀生长（上清下浊）；不溶血菌球，均匀浑浊生长，如粪链长（上清下浊）；不溶血菌球，均匀浑浊生长，如粪链菌。菌。5、在血平板上，形成灰白色，半透明、表面光滑、有、在血平板上，形成灰白色，半透明、表面光滑、有乳光圆形突起的细小菌落，直径乳光圆形突起的细小菌落，直径0.5-0.75mm，针尖大小，针尖大小，菌落周围出现溶血环。菌落周围出现溶血环。（二）培养特性（二）培养特性（三）生化特性（三）生化特性1、均分解葡萄糖产酸。、均分解葡萄糖产酸。2、对乳糖、甘露醇、水杨苷等的分解因菌株而异。、对乳糖、甘露醇、水杨苷等的分解因菌株而异。3

3、、能使牛奶产酸而不凝固，不液化明胶、不分解菊糖、能使牛奶产酸而不凝固，不液化明胶、不分解菊糖（肺炎球菌分解葡萄糖）。（肺炎球菌分解葡萄糖）。4、A群菌对杆菌肽敏感。群菌对杆菌肽敏感。二、流行病学与致病性二、流行病学与致病性 溶血性链球菌在自然界中分布较广，存溶血性链球菌在自然界中分布较广，存 在于水、空气、尘埃、粪便及健康人和动物在于水、空气、尘埃、粪便及健康人和动物的口腔、鼻腔、咽喉中，可通过直接接触、的口腔、鼻腔、咽喉中，可通过直接接触、空气飞沫传播或通过皮肤、粘膜伤口感染，空气飞沫传播或通过皮肤、粘膜伤口感染，被污染的食品如奶、肉、蛋及其制品也会对被污染的食品如奶、肉、蛋及其制品也会对人

4、类进行感染。上呼吸道感染患者、人畜化人类进行感染。上呼吸道感染患者、人畜化脓性感染部位常成为食品污染的污染源。脓性感染部位常成为食品污染的污染源。一般而言，溶血性链球菌常通过以下途径污染食品：一般而言，溶血性链球菌常通过以下途径污染食品：1、食品加工或销售人员口腔、鼻腔、手、面部有化脓、食品加工或销售人员口腔、鼻腔、手、面部有化脓性炎症时造成食品的污染；性炎症时造成食品的污染；2、食品在加工前就已带菌、奶牛患化脓性乳腺炎或畜、食品在加工前就已带菌、奶牛患化脓性乳腺炎或畜禽局部化脓时，其奶和肉尸某些部位污染。禽局部化脓时，其奶和肉尸某些部位污染。3、熟食制品因包装不善而使食品受到污染。、熟食制品

5、因包装不善而使食品受到污染。溶血性链球菌常可引起皮肤、皮下组织的化脓性炎症、溶血性链球菌常可引起皮肤、皮下组织的化脓性炎症、呼吸道感染、流行性咽炎的爆发性流行以及新生儿败血呼吸道感染、流行性咽炎的爆发性流行以及新生儿败血症、细菌性心内膜炎、猩红热和风湿热、肾小球肾炎等症、细菌性心内膜炎、猩红热和风湿热、肾小球肾炎等变态反应。变态反应。溶血性链球菌的致病性与其产生的毒素及其侵溶血性链球菌的致病性与其产生的毒素及其侵袭性酶有关，主要有以下几种：袭性酶有关，主要有以下几种：1、溶血素、溶血素2、致热外毒素、致热外毒素3、透明质酸酶、透明质酸酶4、链激酶、链激酶5、链道酶、链道酶6、杀白细胞素、杀白细

6、胞素抵抗力：抵抗力：6030min即被杀死，对常用消毒剂敏感。即被杀死，对常用消毒剂敏感。乙型链球菌对青霉素、红霉素、氯霉素、四环素、乙型链球菌对青霉素、红霉素、氯霉素、四环素、磺胺均敏感。磺胺均敏感。三、溶血性链球菌的的检验三、溶血性链球菌的的检验GB/T4789.11-2003（一）实验内容（一）实验内容样品处理样品处理增菌培养增菌培养分离培养分离培养纯化培养纯化培养生化鉴定生化鉴定报告报告（二）实验过程（二）实验过程 第一天前半天第一天前半天 预先准备并灭菌的器材预先准备并灭菌的器材 规格名称规格名称数量数量 1、500mL广口瓶广口瓶 2个个 2、13100mm试管试管 7支支 3、1

7、0mL移液管移液管 1支支 4、5mL移液管移液管 3支支 5、1mL移液管移液管 12支支 6、直径为、直径为90mm平皿平皿 28套套 7、250mL量筒量筒 1支支第一天第一天 样品处理和增菌培养样品处理和增菌培养 第一天后半天第一天后半天1、样品处理、样品处理 无菌操作称取检样无菌操作称取检样25g（mL)，加入装有，加入装有225mL灭菌生灭菌生理盐水的理盐水的500mL广口瓶内，固体食品用均质器以广口瓶内，固体食品用均质器以8000-10000r/min打碎打碎1min，制成混悬液，制成混悬液。2、增菌培养、增菌培养 吸取吸取5mL混悬液接种至混悬液接种至50mL葡萄糖肉浸液肉汤（

8、如葡萄糖肉浸液肉汤（如检样污染严重，可同时接种检样污染严重，可同时接种5mL至匹克氏肉汤），至匹克氏肉汤），361培养培养24h。3、分离培养、分离培养 混悬液直接划线于血平板混悬液直接划线于血平板361培养培养24h。第二天第二天 接种平板进行分离培养接种平板进行分离培养从肉汤中接种血平板，从肉汤中接种血平板，361培养培养24h。第三天第三天 分纯培养分纯培养 从分离培养的血平板上，挑起乙型溶血圆形突从分离培养的血平板上，挑起乙型溶血圆形突起的细小菌落，在血平板上分纯起的细小菌落，在血平板上分纯，361培养培养24h。血平板上菌落灰白色，半透明或不透明，表面血平板上菌落灰白色，半透明或不透

9、明，表面光滑，有乳光，直径约光滑，有乳光，直径约0.5mm0.75mm，为圆形突起，为圆形突起的细小菌落，乙型溶血链球菌。周围有的细小菌落，乙型溶血链球菌。周围有2mm4mm界界限分明，无色透明的溶血圈。限分明，无色透明的溶血圈。第四天第四天 鉴定鉴定1、革兰氏染色，阳性，、革兰氏染色，阳性，G+链状排列，符合者可做生链状排列，符合者可做生化鉴定。化鉴定。2、生化鉴定、生化鉴定 （1）链激酶试验（溶纤维蛋白酶试验）链激酶试验（溶纤维蛋白酶试验）吸取草酸钾血浆吸取草酸钾血浆0.2mL，加，加0.8mL灭菌生理盐水，灭菌生理盐水，混匀，再加入链球菌混匀，再加入链球菌18-24h361肉浸液肉汤培养

10、肉浸液肉汤培养物物0.5mL及及0.25%氯化钙氯化钙0.25mL，混匀，置于，混匀，置于361水浴水浴10min,血浆混合物自行凝固，观察凝块血浆混合物自行凝固，观察凝块重新完全溶解的时间，完全溶解为阳性，如重新完全溶解的时间，完全溶解为阳性，如24h后不后不溶解即为阴性。同时用肉浸液肉汤做阴性对照，用已溶解即为阴性。同时用肉浸液肉汤做阴性对照，用已知的链激酶阳性的菌株做阳性对照。知的链激酶阳性的菌株做阳性对照。（2）杆菌肽敏感试验）杆菌肽敏感试验 将分纯的乙型溶血性将分纯的乙型溶血性链球菌接种血平板，在链球菌接种血平板，在划线处贴附杆菌肽纸片，划线处贴附杆菌肽纸片，36，18h，出现抑菌带，出现抑菌带为阳性，（可推测为乙为阳性，（可推测为乙型溶血性链球菌）。型溶血性链球菌）。四、报告四、报告根据培养后的形态，菌落特征及生化试验结果进行报告。根据培养后的形态，菌落特征及生化试验结果进行报告。