血红蛋白的提取和分离习题讲解课件.pptx

1、既可与底物结合又可与产物分离，可反复利用酶不会混在产物中，不会影响产品质量加入样品加入样品样品的洗脱样品的洗脱1 1洗脱洗脱2 2洗脱洗脱3 3三、血红蛋白的提取和分离三、血红蛋白的提取和分离三、血红蛋白的提取和分离三、血红蛋白的提取和分离得到了含许多杂质的血红蛋白水溶液三、血红蛋白的提取和分离三、血红蛋白的提取和分离得到了含许多杂质的血红蛋白水溶液三、血红蛋白的提取和分离三、血红蛋白的提取和分离得到了含许多杂质的血红蛋白水溶液 1、干凝胶吸水膨胀。2、凝胶色谱柱的装填：将吸水膨胀的凝胶颗粒沿玻璃管内壁灌入，同时轻轻敲击管壁，排出柱内气泡，并保证柱床上表面平整。静置，使凝胶颗粒沉降至柱内出现清

2、晰固液分界面。3、凝胶珠装填完成之后，需要立即连接磷酸缓冲液洗涤平衡凝胶12h，使凝胶装填紧密。三、血红蛋白的提取和分离三、血红蛋白的提取和分离得到了含许多杂质的血红蛋白水溶液 样品加入：滴管尖端紧贴柱内壁，以匀速转圈的方式沿内壁加入样品，保证样品在凝胶上表面均匀分布，形成狭窄、均匀、整齐的圆环状样品层。洗脱：以匀速转圈的方式沿内壁加入磷酸缓冲液，不能冲乱整齐的环状样品层。加入样品加入样品样品的洗脱样品的洗脱1 1洗脱洗脱2 2洗脱洗脱3 3三、血红蛋白的提取和分离三、血红蛋白的提取和分离得到了含许多杂质的血红蛋白水溶液 思考思考2 2、SDSSDS聚丙烯酰胺凝胶电泳还可以聚丙烯酰胺凝胶电泳还

3、可以测定蛋白质测定蛋白质的的分子量分子量，其原理是？，其原理是？分析：使用分析：使用SDSSDS聚丙烯酰胺凝胶电泳测定样品蛋白的分子量时，可选用一组聚丙烯酰胺凝胶电泳测定样品蛋白的分子量时，可选用一组已知分子量已知分子量的标准蛋的标准蛋白同时进行电泳，根据标准蛋白的电泳区带位置，经过一定得换算，可以测定未知蛋白质的分子量。白同时进行电泳，根据标准蛋白的电泳区带位置，经过一定得换算，可以测定未知蛋白质的分子量。蛋白质在蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶聚丙烯酰胺凝胶电泳电泳中的迁移率取决于它所带中的迁移率取决于它所带净电荷的多少净电荷的多少以及以及分子的大小分子的大小。Marker纯化前纯化后1纯化后297

4、KD66KD45KD20.1KD14.4KD（一组已知分子量的蛋白质）（一组已知分子量的蛋白质）电泳结果血红蛋白的提取和分离血红蛋白的提取和分离习题讲解习题讲解2020课标II卷37.生物选修1:生物技术实践（15分）研究人员从海底微生物中分离到一种在低温下有催化活性的a-淀粉酶A3,并对其进行了研究。回答下列问题：（1)在以淀粉为底物测定A3酶活性时，既可检测淀粉的减少，检测应采用的试剂是_，也可采用斐林试剂检测_的增加。（2)在A3的分离过程中可采用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测其纯度，通常会在凝胶中添加 SDS,SDS 的作用是_和_。还原糖（或葡萄糖）清除蛋白质所带净电荷对迁移率的影响碘液使蛋

5、白质发生变性 （3)本实验中，研究人员在确定A3的最适pH时使用了三种组分不同的缓冲系统，结果如图所示。某同学据图判断，缓冲系统的组分对酶活性有影响，其判断依据是_。在pH相同时，不同缓冲系统条件下所测得的相对酶活性不同 （4)在制备 A3的固定化酶时，一般不宜采用包埋法，原因是_（答出1点即可）。酶分子体积小，容易从包埋材料中漏出2、上方右图表示血红蛋白提取和分离的部分实验装置，请回答下列问题。（1）血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的主要组成成分，其在红细胞中的作用体现了蛋白质具有运输功能，一个血红蛋白分子至少含有_个游离的氨基，含有_个亚铁离子。血红蛋白因为含有_而呈现红色。（2）甲装置用

6、于_，原理_。（3）乙装置中，C溶液是_。用乙装置分离血红蛋白时，待_接近色谱柱底端时，用试管收集流出液，每5mL收集一管，连续收集。如果，则说明色谱柱制作成功。44血红素透析（或粗分离）透析袋是半透膜制作的，小分子物质可以通过，大分子物质不能通过磷酸缓冲溶液红色的血红蛋白3、羊的红细胞含有大量血红蛋白，可以选用羊的血液来提取和分离血红蛋白。请根据材料回答下列问题：（1）实验前取新鲜血液，为了防止血液凝固，要在采血器中预先加入_。取血后，马上进行离心，目的是分离、收集_。（2）在对样品进行处理时，主要包括红细胞的洗涤、_、分离血红蛋白溶液、透析等步骤。其中分离血红蛋白溶液是利用离心法将红细胞的

7、不同组分分开，结果可以从试管中明显看到溶液分为4层，自上往下数，血红蛋白位于第_层。（3）同学甲利用琼脂糖凝胶电泳技术将得到的蛋白质进行分离，在电泳过程中，影响蛋白质迁移速率的因素包括蛋白质分子的大小、_以及_等。（4）电泳是指_的过程。柠檬酸钠红细胞血红蛋白的释放3带电性质分子的形状带电离子在电场的作用下发生迁移4、哺乳动物成熟的红细胞，在生命科学研究中有着广泛的应用。请回答下列有关问题：（1）哺乳动物成熟的红细胞是由骨髓中的造血干细胞经_（填“有丝分裂”或“无丝分裂”）和分化形成的。（2）从哺乳动物成熟的红细胞中提取血红蛋白时，首先要用相当于红细胞液体体积五倍的_洗涤红细胞_次，然后用蒸馏

8、水和甲苯使红细胞破裂，释放出血红蛋白。（3）得到血红蛋白混合液之后，可先用离心法进行样品处理及粗分离，再通过_法或凝胶电泳法进一步纯化。使用前一种方法纯化时，先从色谱柱洗脱出来的是_（填“大分子”或“小分子”）蛋白质。（4）因哺乳动物成熟的红细胞没有细胞核和众多的细胞器，常被用作制备细胞膜的材料。与提取血红蛋白不同的是：在制备细胞膜时，红细胞的破裂只能使用_而不能使用_。有丝分裂生理盐水3凝胶色谱大分子蒸馏水甲苯5、科学家关于分泌酶的研究，对阿尔兹海默症的特异性药物设计提供了重要的结构信息。回答下列问题：（1）酶大规模应用于食品、医药等领域，于是出现了固定化酶和固定化细胞技术。固定化酶和固定化

9、细胞技术是利用_将_固定在_的技术，包括_、_和物理吸附法。（2）分泌酶由4个跨膜蛋白亚基组成。若对分泌酶4个跨膜蛋白亚基进行分离、纯化及分子量测定，需采用_及电泳技术。前者是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法，相对分子质量较大的跨膜蛋白移动速度_（较快、较慢、无差异）。（3）电泳是指_在电场的作用下发生迁移的过程。电泳利用了待分离样品中各种分子带电性质以及分子本身的大小、形状的不同，使带电分子产生不同的_，从而实现样品中各种分子的分离。（4）对分泌酶的4个跨膜蛋白亚基进行分子量测定时，通常采用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法，SDS能使蛋白质完全变性，并解聚成单条肽链，SDS所带负电荷

10、的量大大超过了蛋白质分子原有的电荷量，因而掩盖了不同蛋白质间的电荷差别，使该电泳迁移率完全取决于_。相对分子量的大小物理或化学方法酶或细胞一定空间内化学结合法包埋法凝胶色谱较快带电粒子迁移速度6、大肠杆菌是人和许多动物肠道中最主要且数量最多的一类细菌，含有2000种以上的蛋白质。回答下列问题：（1）大肠杆菌的培养基为牛肉膏蛋白胨培养基，此培养基为大肠杆菌的生长提供_。培养大肠杆菌时，在接种前通常需要检测固体培养基是否被污染，检测的方法是_。（2）利用平板划线法纯化大肠杆菌时，通过接种环在培养基表面连续划线，将聚集的菌种_分散到培养基的表面；长期保存纯化后的菌种，可以采用_的方法。稀释涂布平板法

11、是根据培养基上的菌落的数目来推测样品中的活菌数，其原理是_。稀释度足够高时，培养基表面的一个菌落来源于样品中的一个活菌碳源、氮源、维生素、水和无机盐将未接种的培养基在适宜的条件下培养一段时间，观察培养基上是否有菌落出现逐步稀释甘油管藏6、大肠杆菌是人和许多动物肠道中最主要且数量最多的一类细菌，含有2000种以上的蛋白质。回答下列问题：（3）利用凝胶色谱法分离大肠杆菌蛋白质过程如图一，正确的加样顺序是_（用数字表示）。图二、图三分别是同学甲、乙利用同一种样品分离得到的结果，则图三中与图二中蛋白质P对应的是_。（4）图四是用凝胶色谱法分离大肠杆菌蛋白质粗品的洗脱曲线（横轴表示将某成分洗脱出来所需的

12、洗脱液体积，纵轴表示该组分在某光下的吸收光度值）。实验中常用到的洗脱液是_，分析曲线可得，分离得到的这5种蛋白质中，相对分子质量最小的是_（序号）。丙磷酸缓冲液57、某生物兴趣小组在“蛋白质的提取和分离”实验中，准备从猪的血液中初步提取血红蛋白，设计的“血红蛋白提取、分离流程图”如下：请回答下列有关问题：（1）样品处理中红细胞的洗涤要用_反复冲洗、离心。向红细胞悬液中加入一定量的低浓度pH7.0的缓冲液并充分搅拌，可以破碎红细胞，破碎细胞的原理是_。（2）血红蛋白粗分离阶段，透析的目的是_，若要尽快达到理想的透析效果，可以_（写出一种方法）。（3）一同学通过血红蛋白醋酸纤维薄膜电泳，观察到正常人和镰刀型细胞贫血症患者的血红蛋白电泳结果如图所示。由图可知携带者有_种血红蛋白，从分子遗传学的角度作出的解释是_。携带者具有（控制血红蛋白的）一对等位基因，可以控制合成两种不同的蛋白质生理盐水细胞吸水涨破除去小分子杂质增加缓冲液的量或及时更换缓冲液2