临床微生物标本处理及操作流程-课件.pptx

1、临床微生物标本处理及操作流程临床标本留取环节一运送实验室环节二分析前分析中标本合格？环节三接种培养检测门诊病房诊所合格环节四 环节五分析后报告环节六 IQ培养基、冰箱温箱、气体直截了当检测仪器设备、试剂EQA标本标本合格判定SOP对每个环节进行控制,构成质量保证体系+内 容微生物鉴定标本处理药敏试验血培养 脑脊液培养呼吸道标本(痰标本、咽部标本)尿培养生殖道标本培养抽吸物和组织标本的培养(需氧、厌氧培养)粪便培养严格无菌操作上呼吸道标本 Upper Respiratory Tract Specimens下呼吸道感染下呼吸道标本Lower Respiratory Tract Specimen自然

2、咳痰诱导痰 气管内吸取物支气管肺泡灌洗液保护性毛刷支气管灌洗液 肺部组织标本质量带血痰唾液oror诱导痰 (?)(?)脓痰粘液样痰用革兰氏染色来评估 呼吸道标本是否合格有PMNPMN的痰标本,中性粒细胞多,且鳞状上皮细胞特别少=接受,进行培养粘液丝细胞内细菌胞内细菌 提示感染柱状纤毛上皮细胞肺泡巨噬细胞滑石颗粒淀粉样小体见于迁延长时间的呼吸道疾病弹性纤维库什曼螺旋体呈链排列的革兰阳性球菌和革兰阴性球杆菌。缺乏鳞状上皮细胞提示混合厌氧菌感染您看见多少种形态？呼吸道标本中未被染色的,有折射的杆菌=抗酸杆菌呈链排列的革兰阳性球菌？或革兰阳性分枝杆菌？肺中的结节吸出物,不规则“球菌”,分叉,无短链,链

3、的末端的呈尖状,都证明是分枝状的革兰阳性杆菌,估计是放线菌或诺卡菌(通常来自脑或肺组织的标本)肺炎-可接受的不合格标本评述特别少的鳞状上皮细胞10个/低倍视野能够在玻片上看到许多鳞状上皮细胞,说明在采集时受到了上呼吸道分泌物的污染或口水的污染。特别多的中性粒细胞特别少有或没有中性粒细胞免疫抑制的病人也会出现中性粒细胞减少中性粒细胞和上皮细胞都特别少的标本需要培养特别多中性粒细胞混合有形态多样的细菌(革兰氏阴性杆菌,纺锤形,革兰氏阳性球菌)吸入性肺炎标本革兰氏染色的典型形式,培养只会培养出正常菌群,因此革兰氏染色是用于诊断的方法。许多或中等量的中性粒细胞,以一种形态的细菌为主酵母菌样,酵母菌是一

4、种特别少引起肺炎的细菌,常由口腔污染成双革兰氏阳性球菌,短链=肺炎链球菌革兰氏阳性菌成群排列=金黄色葡萄球菌革兰氏阴性球杆菌(小)=流感嗜血杆菌革兰氏阴性杆菌大且肥厚=肺炎克雷伯菌或其他肠道菌革兰氏阴性双球菌=卡他莫拉菌许多不着色的有折射的杆状细菌估计是肺结核,抗酸杆菌不能被革兰氏染色所染色。呼吸道标本的涂片评估模式尿道感染每年850万例尿路感染,90%为女性1/2、5个妇女在一生中会得UTI下行性感染:血流肾脏膀胱(金黄色葡萄球菌,酵母菌,结核分枝杆菌)上行性感染:尿道膀胱肾盂 血流用于尿液培养的标本 肾活检或肾抽吸物(外科)耻骨上膀胱抽吸物(孕妇,婴儿,全膀胱)微导管尿(内部导管和外部导管

5、)-老年人 中段尿,清洁留取急诊成年人 留置导尿管中采集的标本(经常被三种以上细菌污染)尿液标本尿液运输方法如不能及时送检,需冷藏。4 4小时延迟送检,须废弃标本。过夜培养否自然排尿是接着培养;随后观察;发送初步的培养阴性报告24小时后仍不生长则发出最终的生长阴性报告 105 CFU/ml1 organism一种以上细菌生长多种肠道细菌或混杂的皮肤菌丛;重新采集清洁标本纯培养的机会致病菌(查阅凝固酶阴性葡萄球菌的注释)ID&Suscept、鉴定&药敏 105 CFU/ml)1-2种机会致病菌(查阅凝固酶阴性葡萄球菌的注释)进行鉴定和药敏,若数量 104 CFU/ml一种以上细菌生长多种肠道细菌

6、或混杂的皮肤菌丛;重新采集清洁标本 纯培养的机会致病菌(查阅凝固酶阴性葡萄球菌的注释)鉴定&药敏 104 CFU/ml1-21-2种机会致病菌(查阅凝固酶阴性葡萄球菌的以上相同注释进行鉴定和药敏,若数量 10 104 4CFU/mlCFU/ml,仍然对估计的致病菌进行操作检出三种或以上的机会致病菌包括酵母菌(病人的首份尿标本显示如此的培养结果,若重复的尿标本仍然培养出相同的细菌,则需要对菌株进行操作)多种肠道细菌或混杂的皮肤菌丛;重新采集清洁标本、若为腐生葡萄球菌,则处理与其他致病菌相同;其他的凝固酶阴性葡萄球菌则视为污染评价尿培养的标准病人标本特征有意义菌落形成单位/ml(非皮肤污染)无症状

7、者清洁留取100,000有症状者,不固定的清洁留取10,000 1-2种机会致病菌。若多于2种则认为尿液被污染有症状,性活跃女性清洁留取100个纯菌落肠杆菌科菌男性清洁留取1000个,机会致病菌任何人内置导尿管100,000任意数量机会致病菌任何人通过直截了当导管获得100任意数量机会致病菌任何人外科手术从肾脏获得任意数量(肉汤增菌,厌氧菌)任何人经皮穿刺膀胱吸取任意数量(肉汤增菌,厌氧菌)任何人任意标本任何数量金黄色葡萄球菌不同人有争议任何数量的酵母菌出现如下情况时,如何判断？尿常规结果尿培养结果估计原因WBC PRO 计数+PRO +计数+PRO +计数 105培养出一种致病菌预示患者泌尿

8、系统感染。按药敏结果选择性用药。WBC +PRO +计数 105培养出大于两种致病菌患者泌尿系统估计感染,但标本估计被污染,应重复送检。WBC 105培养出大于两种致病菌标本污染宫颈或宫颈内部:淋病奈瑟菌,沙眼衣原体,人乳头瘤病毒阴道高位拭子:酵母菌,阴道毛滴虫,细菌性阴道感染肛门或直肠拭子:淋病奈瑟菌,B B群链球菌(+阴道拭子)1%的新生儿因母亲定植(10-30%的孕妇)发展为EOD 50%病死率 25%的美国女性在L&D期间得到IV预防 长期病症包括:在30%以上的新生儿中产生严重精神运动发展障碍Adriaanse et al、Neonatal early onset group B s

9、treptococcal infection:a nine-year retrospective study in a tertiary care hospital、J Perinat Med、1996;24:5315381.在孕期3537周时的普查培养a.阴道和直肠拭子b.肉汤过夜增菌c.接种于血平板上d.再孵育过夜和鉴定可疑菌落2.任何有GBS菌尿的患者需要在分娩期做好预防3.分娩时快速检测敏感性不够淋病奈瑟氏菌感染禁止冷藏发现评述出现鳞状上皮细胞提示标本采集技术只是关;培养出来的估计是皮肤正常菌群大量的中性粒细胞假如查见细胞内的细菌,则更有意义。大量的中性粒细胞染色多样染色阳性和阴性,小

10、的细菌混合有厌氧或兼性厌氧菌感染出现少量破碎的中性粒细胞和比较大的面包车样的染色不定的杆菌估计是梭菌引起的组织坏死,紧急外科手术,产气荚膜梭菌引起的气性坏疽特别少有中性粒细胞,然而有其他体细胞患者不能产生足够的免疫反应或微生物不能趋化中性粒细胞(如球菌)。仍然高度怀疑细菌病因。细胞内微生物细菌感染成块的小的灰白的染色不规则的阳性成链的球菌假如分离自脓肿,提示咽峡炎链球菌(米勒链球菌)感染。特别细小的革兰氏阴性杆菌特别是从淋巴结或组织中分离的,估计是生物恐怖试剂(布鲁氏杆菌,耶尔森,弗朗西斯)要在风厨中操作。平板用胶条密封在生物安全柜中操作,不能够嗅标本。组织和抽吸物涂片检查微生物鉴定微生物鉴定

11、(1)血平皿上的菌落形态革兰阳性细菌所有的链球菌-溶血链球菌-溶血链球菌与肺炎链球菌葡萄球菌属肠道革兰阴性杆菌沙门菌属,志贺菌属假单胞菌属嗜血杆菌属 微生物鉴定(2)奈瑟菌属、莫拉菌属不动杆菌属布氏杆菌属、巴斯德菌属芽胞杆菌属产单核李斯特菌酵母菌属纸片扩散法药敏试验 特别药敏试验 MRSA 克林霉素耐药的葡萄球菌 VISA或VRSA 青霉素耐药的葡萄球菌 超广谱-内酰胺酶使用透射光观察:Staphylococcus spp、葡萄球菌属 linezolid利奈唑烷 oxacillin苯唑西林 vanycin万古霉素 任何生长均有意义Enterococcus spp、肠球菌属 vanycin万古霉素使用反射光观察:所有其他药物/菌株组合Linezolid利奈唑烷圈内菌落感谢您的聆听！