临床血液检验仪器课件.ppt

1、临床血液检验仪器 血细胞分析仪概述血细胞分析仪(B l o o d C e l l A nWallace H.&Joseph R.Coulter血细胞分析仪概述 1 9 4 7 年 C o u l t e r 发明了小孔电血细胞分析仪概述血细胞计数 (B l o o d c o u n t)血细胞分析仪概述白细胞分类计数 白细胞分类计数 血细胞分析仪概述血细胞分析仪概述白细胞分类计数 项项 目目 单单 位位 项项 目目 定定 义义 数数 据据 来来 源源 1 1 W W B B C C x x 1 1 0 03 3/u u l l 白白 血血 球球 直直 接接 测测 量量 2 2 R R B

2、B C C x x 1 1 0 06 6/u u l l 红红 血血 球球 直直 接接 测测 量量 3 3 H H G G B B G G/d d l l 血血 红红 蛋蛋 白白 浓浓 度度（比比 色色 法法）直直 接接 测测 量量 4 4 H H C C T T%红红 血血 球球 容容 积积 比比 R R B B C C*M M C C V V 5 5 M M C C V V f f l l 平平 均均 红红 血血 球球 体体 积积 直直 接接 测测 量量 6 6 M M C C H H p p g g 平平 均均 红红 血血 球球 血血 红红 蛋蛋 白白 含含 量量 H H G G B B

3、/R R B B C C 7 7 M M C C H H C C G G/d d l l 平平 均均 红红 血血 球球 血血 红红 蛋蛋 白白 浓浓 度度 H H G G B B/H H C C T T 8 8 R R D D W W%红红 血血 球球 体体 积积 分分 布布 宽宽 度度 直直 接接 测测 量量 9 9 P P L L T T x x 1 1 0 03 3/u u l l 血血 小小 板板 直直 接接 测测 量量 1 1 0 0 M M P P V V f f l l 平平 均均 血血 小小 板板 容容 积积 直直 接接 测测 量量 1 1 1 1 P P D D W W%血血

4、 小小 板板 容容 积积 分分 布布 宽宽 度度 直直 接接 测测 量量 1 1 2 2 C C B B C C P P C C T T%血血 小小 板板 容容 积积 比比 P P L L T T*M M P P V V 1 1 N N E E U U T T x x 1 1 0 03 3/u u l l，%嗜嗜 中中 性性 细细 胞胞 计计 数数 嗜嗜 中中 性性 细细 胞胞 百百 分分 比比 一一 次次，#N N E E U U T T/W W B B C C 2 2 L L Y Y M M P P x x 1 1 0 03 3/u u l l，%淋淋 巴巴 细细 胞胞 计计 数数 淋淋

5、巴巴 细细 胞胞 百百 分分 比比 一一 次次，#L L Y Y M M P P/W W B B C C 3 3 M M O O N N O O x x 1 1 0 03 3/u u l l，%单单 核核 细细 胞胞 计计 数数 单单 核核 细细 胞胞 百百 分分 比比 一一 次次，#M M O O N N O O/W W B B C C 4 4 E E O O S S x x 1 1 0 03 3/u u l l，%嗜嗜 酸酸 性性 细细 胞胞 计计 数数 嗜嗜 酸酸 性性 细细 胞胞 百百 分分 比比 一一 次次，#E E O O S S/W W B B C C 5 5 D D I I F

6、 F F F B B A A S S O O x x 1 1 0 03 3/u u l l，%嗜嗜 碱碱 性性 细细 胞胞 计计 数数 嗜嗜 碱碱 性性 细细 胞胞 百百 分分 比比 一一 次次，#B B A A S S O O/W W B B C C 1 1%R R e e t t i i c c%网网 状状 红红 血血 球球 百百 分分 比比#R R e e t t/R R B B C C r r 2 2#R R e e t t i i c c x x 1 1 0 06 6/u u l l 网网 状状 红红 血血 球球 绝绝 对对 值值 直直 接接 测测 量量 3 3%H H R R e

7、e t t i i c c%高高 核核 酸酸 浓浓 度度 网网 状状 红红 血血 球球 比比 率率#H H R R e e t t/#R R E E T T 4 4%M M R R e e t t i i c c%中中 核核 酸酸 浓浓 度度 网网 状状 红红 血血 球球 比比 率率#M M R R e e t t/#R R E E T T 5 5%L L R R e e t t i i c c%低低 核核 酸酸 浓浓 度度 网网 状状 红红 血血 球球 比比 率率#L L R R e e t t/#R R E E T T 6 6 R R E E T T I I C C I I R R F F

8、-H H%低低 成成 熟熟 度度 网网 状状 红红 血血 球球 比比 率率(高高)#H H R R e e t t/#R R E E T T 五分群血液分析仪的基本检查项目五分群血液分析仪的基本检查项目五分群血液分析仪的基本检查项目血细胞分析仪分型按自动化程度分类：小孔电阻抗法是利用血细胞混悬液中血细胞的电阻小孔电阻抗法是利用血细胞混悬液中血细胞的电阻 大于电解液溶液（稀释液）电阻的特性，当血细胞大于电解液溶液（稀释液）电阻的特性，当血细胞 通过小孔时引起小孔两端电阻抗增大的原理而进行通过小孔时引起小孔两端电阻抗增大的原理而进行 血细胞计数和体积测定。血细胞计数和体积测定。小孔电阻抗法能够进行

9、白细胞、红细胞、血小板计小孔电阻抗法能够进行白细胞、红细胞、血小板计 数及体积的测定。数及体积的测定。小孔电阻抗法在对白细胞分类上只能将白细胞按体小孔电阻抗法在对白细胞分类上只能将白细胞按体 积大小分为三个亚群，故分析精度较差。（积大小分为三个亚群，故分析精度较差。（164164页）页）测定原理(P r 红细胞红细胞白细胞白细胞血小板血小板t 测定原理(P r通道内计数 256256个计数通道个计数通道 /每通道每通道1fl（1立方微米）立方微米）=10-15升升测定原理(P r i n c i p l e )通道内计数白细胞“三分群”小孔电阻抗法基本原理 LYMP35fl-90flMONOE

10、OSBASO90fl-160flNEUT160fl单核细胞、嗜酸性细胞、嗜碱性细胞 淋巴细胞 LYMP35fl-90flMONOEOSBASO90fl-160flNEUT160fl小孔电阻抗法基本原理L Y MP MO N O N E U T 小孔电阻抗法基本原理 联合型检测法基本原理 测定原理(P r联合型检测法基本原理 联合型检测法基本原理白细胞二维散点图二维散点图及直方图 AbsorbanceVolumeDebrisATLLymphEosMonoNeutIMMCh 127联合型检测法基本原理A b s o r b a n c e V o l u me D e b r7135073CVOL

11、UMEDF 1DF 2and DF 3V联合型检测法基本原理图中三维坐标分别为V、C、S，各种不同类几种有代表性的白细胞“五分群”型分析仪：联合型检测法基本原理几种有代表性的白细胞“五分群”型分析仪：联合型检测法基本原理（2）激光散射和细胞化学染色联合检测法：几种有代表性的白 用两个流式通道进行测定，用两个流式通道进行测定，髓过氧化物酶通道髓过氧化物酶通道(卤素灯卤素灯 光源，测吸光度与散射光光源，测吸光度与散射光)；嗜碱性核叶通道（激光光嗜碱性核叶通道（激光光 源，测高角度散射光与低角源，测高角度散射光与低角 度散射光度散射光)。通道还同时进行。通道还同时进行 红细胞、血小板及网织红细红细胞

12、、血小板及网织红细 胞的测定。胞的测定。（2）激光散射和细胞化学染色联合检测法：几种有代表性的白几种有代表性的白细胞“五分群”型分析仪：联合型检测法基本原理几种有代表性的白细胞“五分群”型分析仪：联合型检测法基本原理（4）电阻抗和射频传导联合检测特殊溶血剂法：几种有代表性的计数网织红细胞的方法：几种有代表性的白细胞“五分群”型分析仪各种类型的分析仪大都由以下几部分组成血细胞分析仪基本结构各种类型的分析仪大都由以下几部分组成血细胞分析仪基本结构血细胞分析仪工作流程图血细胞分析仪工作流程图血细胞分析仪基本结构血细胞分析仪血细胞分析仪工作流程图维护工作的基本要点血细胞分析仪使用维护现代医学仪器第三章

13、 第七节 流式细胞分析仪流式细胞分析仪概述流式细胞分析仪（f l o w c y t o me t e流式细胞仪基本原理待测标本制备成单细胞悬液通过荧光染色后加流式细胞仪基本原理通过一定波长选择通透性的滤光片，将散射光、(一）一）流动室及液流驱动系统流动室及液流驱动系统（二）（二）激光光源及光束形成系统激光光源及光束形成系统（三）（三）光学系统：透镜光学系统：透镜,滤光片滤光片,小孔小孔,聚焦光源，聚焦光源，收集不同波长的荧光信号收集不同波长的荧光信号 (四）四）信号检测与信号检测与存储、显示、分析系统存储、显示、分析系统：光电倍：光电倍 增管（增管（PMTPMT）、补偿电路。荧光信号转换为）

14、、补偿电路。荧光信号转换为 电信号，并将信号放大电信号，并将信号放大（五）（五）细胞分选系统细胞分选系统流式细胞仪基本结构(一）流动室及液流驱动系统Laser 激光光源及光束形成系统激光光源及光束形成系统DichroicFiltersBandpassFilters光学系统光学系统PMT 1PMT 2PMT 5PMT 4PMT 3ScatterSensor信号检测与存储显示分析系统信号检测与存储显示分析系统Flow cellSample流动室及液流驱动系统流动室及液流驱动系统+-细胞分选系统细胞分选系统L a s e r 激光光源及光束形成系统D i c h r o i c F i l t eN

15、oImage流动室及液流驱动系统流动室及液流驱动系统流动室与液流驱动系统流动室与液流驱动系统q空气泵空气泵q压力传感器压力传感器q压力调节器压力调节器q石英流动室石英流动室流式细胞仪基本结构流动室及液流驱动系统流动室与液流驱动系统空NoImage流动室及液流驱动系统流动室及液流驱动系统q空气泵空气泵q压力传感器压力传感器q压力调节器压力调节器q石英流动室石英流动室Piezoelectriccrystal oscillatorSignaldirectionSample inSheath inSheath inLaser beamScatter SensorCoreSheath流式细胞仪基本结构流

16、动室及液流驱动系统空气泵P i e z o e l eNoImage激光光源及光束形成系统激光光源及光束形成系统q氩离子激光器氩离子激光器 （Argon）q半导体激光器半导体激光器 （He-Ne）q紫外紫外UV激光器激光器 （He-Cd）q按功率大小可按功率大小可 分为水冷分为水冷/空冷空冷q到达流动室前到达流动室前 经透镜聚焦经透镜聚焦He-Cd Laser 325/441Argon Laser 353/488 nm (High speed sorting)He-Ne Laser 633 nmArgon Laser 488 nm325 nm353 nm633 nm488 nm仪器顶视图仪器顶

17、视图流式细胞仪基本结构激光光源及光束形成系统氩离子激光器H e-CNoImage激光光源及光束形成系统激光光源及光束形成系统q氩离子激光器氩离子激光器 （Argon）q半导体激光器半导体激光器 （He-Ne）q紫外紫外UV激光器激光器 （He-Cd）q按功率大小可按功率大小可 分为水冷分为水冷/空冷空冷q到达流动室前到达流动室前 经透镜聚焦经透镜聚焦流式细胞仪基本结构激光光源及光束形成系统氩离子激光器NoImage光学系统：透镜、滤光片、小孔，聚焦光源，光学系统：透镜、滤光片、小孔，聚焦光源，收集不同波长的荧光信号收集不同波长的荧光信号Argon LaserHeNe Laser流式细胞仪基本结

18、构光学系统：透镜、滤光片、小孔，聚焦光源，ANoImage光学系统：透镜、滤光片、小孔，聚焦光源，光学系统：透镜、滤光片、小孔，聚焦光源，收集不同波长的荧光信号收集不同波长的荧光信号488DLP675BP620SPFL2PE525BPFL1FITC615DSPFL3ECD755BP710DLPFL4PC5 or APCFL5PC7 or APC-Cy7SSC600DLP550DLP575BP500LPqLP-长通滤光片长通滤光片qSP-短通滤光片短通滤光片qBP-带通滤光片带通滤光片qDLP、DSP 双色性长通双色性长通 短通滤光片短通滤光片流式细胞仪基本结构光学系统：透镜、滤光片、小孔，聚焦

19、光源，4NoImage光学系统：透镜、滤光片、小孔，聚焦光源，光学系统：透镜、滤光片、小孔，聚焦光源，收集不同波长的荧光信号收集不同波长的荧光信号LONG(700nm)550 Long Pass(650LP)650 Short Pass(600SP)SHORT(500nm)Pass Through Filters600/100 Band Pass(600/100)Transmitted 550 nm550-650 nm(60050)Wavelengths Blocked650 nm550 nm650 nmShort PassLong PassBand PassLONG(700nm)550 Lo

20、ng Pass(650LP)650 Short Pass(600SP)SHORT(500nm)Dichroic FiltersTransmitted 550 nmDiflected 90650 nm550 nm流式细胞仪基本结构光学系统：透镜、滤光片、小孔，聚焦光源，Air-cooled Argon Ion LaserBeam Shaping LensesHigh Sensitivity Quartz Flow CellForward Scatter DetectorSide Scatter DetectorFL1-FL4DetectorNoImage信号检测与信号检测与存储、显示、分析系统存

21、储、显示、分析系统：光电倍：光电倍 增管（增管（PMTPMT）、补偿电路。荧光信号转换为）、补偿电路。荧光信号转换为 电信号，并将信号放大电信号，并将信号放大q前向角散射光检前向角散射光检 测（测（FSC）采用）采用 光电二极管光电二极管q侧向角散射光检侧向角散射光检 测（测（SSC）采用）采用 光电二极管光电二极管q荧光检测（荧光检测（FL）采用光电倍增管采用光电倍增管A i r-c o o l e d B e a m S h a p i n g L e n s e sNoImage信号检测与信号检测与存储、显示、分析系统存储、显示、分析系统：光电倍增：光电倍增 管管(PMTPMT )、补偿

22、电路、将荧光信号转换为电信、补偿电路、将荧光信号转换为电信 号，并将信号放大，处理分析。号，并将信号放大，处理分析。Logq荧光信号的线性测量荧光信号的线性测量 与对数测量与对数测量q荧光信号的面积测量荧光信号的面积测量 与宽度测量与宽度测量q荧光光谱的重叠校正荧光光谱的重叠校正Log ampLinear0 50 100 150 200 2560 V2 V10 V4 V6 V8 VChannels0 50 100 150 200 2560 mV1 mV10 mV1 V10 V100 mV流式细胞仪基本结构信号检测与存储、显示、分析系统：光电倍增LNoImage信号检测与信号检测与存储、显示、分

23、析系统存储、显示、分析系统：光电倍增：光电倍增 管管(PMTPMT )、补偿电路、将荧光信号转换为电信、补偿电路、将荧光信号转换为电信 号，并将信号放大，处理分析。号，并将信号放大，处理分析。q荧光信号的线性测量荧光信号的线性测量 与对数测量与对数测量q荧光信号的面积测量荧光信号的面积测量 与宽度测量与宽度测量q荧光光谱的重叠校正荧光光谱的重叠校正流式细胞仪基本结构信号检测与存储、显示、分析系统：光电倍增荧NoImage信号检测与信号检测与存储、显示、分析系统存储、显示、分析系统：光电倍增：光电倍增 管管(PMTPMT )、补偿电路、将荧光信号转换为电信、补偿电路、将荧光信号转换为电信 号，并

24、将信号放大，处理分析。号，并将信号放大，处理分析。q数据存储采用数据存储采用 列表排队方式列表排队方式q数据显示通常数据显示通常 有一维直方图有一维直方图 二维散点图、二维散点图、等高线图、密等高线图、密 度图等度图等流式细胞仪基本结构信号检测与存储、显示、分析系统：光电倍增数NoImage信号检测与信号检测与存储、显示、分析系统存储、显示、分析系统：光电倍增：光电倍增 管管(PMTPMT )、补偿电路、将荧光信号转换为电信、补偿电路、将荧光信号转换为电信 号，并将信号放大，处理分析。号，并将信号放大，处理分析。q数据存储采用数据存储采用 列表排队方式列表排队方式q数据显示通常数据显示通常 有

25、一维直方图有一维直方图 二维散点图、二维散点图、等高线图、密等高线图、密 度图等度图等SSFS流式细胞仪基本结构信号检测与存储、显示、分析系统：光电倍增数NoImage细胞分选系统细胞分选系统q捕获管分选和捕获管分选和 静电分选静电分选q水滴形成部件水滴形成部件q分选逻辑电路分选逻辑电路q水滴充电及偏转水滴充电及偏转捕获管分选捕获管分选流式细胞仪基本结构细胞分选系统捕获管分选和捕获管分选NoImage细胞分选系统细胞分选系统488 nm laser+-Charged PlatesSingle cells sorted into test tubesFALS SensorFluorescence

26、 detectorq捕获管分选和捕获管分选和 静电分选静电分选q水滴形成部件水滴形成部件q分选逻辑电路分选逻辑电路q水滴充电及偏转水滴充电及偏转流式细胞仪基本结构细胞分选系统4 8 8 n m l a s e r+-CNoImage细胞分选系统细胞分选系统q捕获管分选和捕获管分选和 静电分选静电分选q水滴形成部件水滴形成部件q分选逻辑电路分选逻辑电路q水滴充电及偏转水滴充电及偏转SMALL BEADLARGE BEADFrequency HistogramSMALL BEADLARGE BEADSample inSheathSheath inLaser beamStream Charge+2K

27、V-2KVWasteSORT RIGHTSORT LEFTSORT DECISIONSPiezoelectriccrystal oscillatorLast attacheddropletLEFTRIGHTSensorsSensor细胞分选系统捕获管分选和S MA L L B E A D L A R G E B E型（大型机）型（大型机）两种类型两种类型流式细胞仪主要性能指标流式细胞仪可分为科研型（大型机）流式细胞仪主要性能指标流式细胞仪可分为科研型（大型机）流式细胞仪主要性能指标流式细胞仪可分为科研型（大型机）型型两种类型两种类型（台式机）（台式机）科研型科研型临床型临床型荧光灵敏度荧光灵敏

28、度 200个荧光分子个荧光分子 600个荧光分子个荧光分子分辨率分辨率2.0%2.0%散射光灵敏度散射光灵敏度0.2-0.5um0.2-0.5um分析速度分析速度5-7万万/S3000-6000/S分选速度分选速度1万以上万以上/S300/S分选纯度分选纯度99%99%流式细胞仪主要性能指标流式细胞仪可分为科研型和临床型两种类型NoImage流式细胞仪会在硬件上不断更新，采用更新的器件流式细胞仪会在硬件上不断更新，采用更新的器件（如半导体激光、大规模集成电路），以实现小型化；（如半导体激光、大规模集成电路），以实现小型化；用数字电路取代模拟电路，充分发挥微处理器的功能用数字电路取代模拟电路，充分发挥微处理器的功能以实现简单化；在软件上提高数据自动分析能力，充以实现简单化；在软件上提高数据自动分析能力，充分发挥图形界面的优点，分发挥图形界面的优点，使操作更加简便。使操作更加简便。流式细胞仪主要性能指标流式细胞仪可分为科研型（大型机）流式细胞仪主要性能指标流式细胞仪可分为科研型（大型机）谢谢！流式细胞仪小结 1 7 4 页待测标本制备成单细胞悬液通过荧光染色流式细胞仪小结 1 7 5 页通过一定波长选择通透性的滤光片，将散 血液分析仪复习 小孔电阻抗法测定原理 （1 6检测原理检测原理 血液分析仪复习白细胞的“三分群”细胞计数时使用多项技术（激光、射频传导谢谢大家！谢谢大家！