乙肝病毒检测培训课件.ppt

1、乙肝病毒检测乙肝病毒检测乙肝病毒结构2乙肝病毒检测（一）乙型肝炎病毒结构特点HBsAg：是HBV感染的主要标志HBsAb：保护性抗体HBcAg：仅存于感染的肝细胞核内，一般不存在于血循环中HBcAb:非保护性抗体，HBcAb-IgM提示HBV处于复制状态HBeAg：HBV复制及强感染性的指标HBeAb：有一定的保护作用，预后良好3乙肝病毒检测患者血清中存在三种基本形态患者血清中存在三种基本形态 大球型颗粒，又称大球型颗粒，又称Dane颗粒；小球型颗颗粒；小球型颗粒；管型颗粒粒；管型颗粒 小球型颗粒；管型颗粒小球型颗粒；管型颗粒 管型颗粒管型颗粒4乙肝病毒检测乙型肝炎病毒的实验室诊断（一）血清学

2、检查（一）血清学检查 （二）生化学检查（二）生化学检查 （三）（三）HBV DNA、基因型和变异检查、基因型和变异检查 5乙肝病毒检测血清学检查 项目：项目：HBsAg、抗、抗-HBs、HBeAg、抗、抗-HBe、抗、抗-HBc以及抗以及抗-HBc IgM 方法方法 ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay，最常用，定性，最常用，定性)6乙肝病毒检测 HBsAg 感染的标志感染的标志 Anti-HBs 既往感染既往感染/接种疫苗接种疫苗 Anti-HBc IgM 急性感染标志急性感染标志 Anti-HBc IgG 既往或慢性感染既往或慢性感染 HBeAg

3、急性病毒复制，有传染性急性病毒复制，有传染性 Anti-HBe 病毒不再复制病毒不再复制 HBV-DNA 急性病毒复制，比急性病毒复制，比HBeAg更准确；更准确；主要用于监测治疗反应主要用于监测治疗反应7乙肝病毒检测HBV血清学标志物的临床意义感染模式感染模式HBsAgHBeAgHBc(IgM)抗抗HBc(IgG)抗抗HBe抗抗HBs临床意义临床意义1+-急性乙肝潜伏期后期，携带者。2+-急性乙肝早期或潜伏期3+-急性乙肝早期4+-+-急性乙肝后期5+-+-急性或慢性乙肝，有HBV复制6+-+-+-急性或慢性乙肝。急性期或无症状携带者7+-+-+-阴性慢性乙肝8+-+-慢性乙肝，无或低度HB

4、V复制，乙肝恢复期，既往感染，隐匿性9-+-+乙肝恢复期，既往感染，隐匿性10-+慢性乙肝，接种过乙肝疫苗。8乙肝病毒检测两对半的意义两对半的意义 乙型肝炎的诊断乙型肝炎的诊断 判断传染性判断传染性 判断预后判断预后 筛查献血员筛查献血员 流行病学调查流行病学调查9乙肝病毒检测 乙肝三系定性检查是用来判断是否感染乙肝或粗略估计病毒复制水平的初步检查，对患者病情程度的评估参考性不大，所以乙肝患者在做乙肝三系定性检查的时候，应结合肝功能检查、乙肝病毒DNA检查、B超检查等来判定病情的轻重，10乙肝病毒检测ELISAELISA检测灵敏低的原因及局限检测灵敏低的原因及局限 ELISAELISA法受其自

5、身敏感性和特异性的限制法受其自身敏感性和特异性的限制;HBV SHBV S和前和前C C基因区出现位点突变导致基因区出现位点突变导致HBsAgHBsAg和和HBeAgHBeAg表达缺陷。表达缺陷。影响因素多影响因素多,如加样时间如加样时间,试剂平衡时间试剂平衡时间,样本样本溶血程度等等。特别是低浓度样本易导致假阴溶血程度等等。特别是低浓度样本易导致假阴性结果性结果,使弱阳性样本漏检。使弱阳性样本漏检。急性感染的窗口期急性感染的窗口期;HBsAg;HBsAg检测方法灵敏度不检测方法灵敏度不足足;血清亚型的漏检等。血清亚型的漏检等。标本中病毒颗粒少标本中病毒颗粒少;11乙肝病毒检测血清学检测的局限

6、性 HBV具有具有“检测窗口期检测窗口期 假阴性结果假阴性结果 无法检测突变株及抗体无法检测突变株及抗体12乙肝病毒检测乙肝病毒的定量检测 1、乙肝表面抗原（HBsAg）定量检测：1）参考值：0-0.05IU/mL 2）临床意义：（1）可作为HBV携带者乙肝病毒复制的参考指标（2）评价拉美呋定的治疗效果（3）监测应用alpha-干扰素治疗病人的乙肝病毒复制（4）确定肝移植病人免疫球蛋白的使用剂量13乙肝病毒检测2.乙肝表面抗体（抗-HBs）定量测定：是HBsAg刺激机体产生的特异性抗体，是一种保护性抗体，能中和HBV。（1）抗-HBs含量在0-10mIU/ml，表示不具有保护性，需要注射乙肝疫

7、苗（3针：0-1-6方案）。（2）抗-HBs含量在10-100mIU/ml，表示具有保护性，但较弱，需要乙肝疫苗强化注射（1针）。（3）抗-HBs含量大于100mIU/ml，表示具有很强的保护性，不需要注射乙肝疫苗。14乙肝病毒检测 3、乙肝病毒e抗原（HBeAg）HBeAg增高说明病毒复制，具有很强的传染性。4、乙肝病毒e抗体（抗-HBe）抗-HBe阳性说明病毒复制减少，传染性弱，但并非没有传染性。抗HBe不是保护性抗体。15乙肝病毒检测 5、乙肝病毒核心抗体（抗-HBc）抗-HBc：不是中和抗体，有IgG和IgM两种形式。IgM在早期出现，而IgG在恢复期出现，可持续多年或终身存在。16乙

8、肝病毒检测乙肝五项定量检测的优点 由于乙肝病毒容易发生变异，再加上乙肝定性检测方法的局限性，会出现假阴性结果，导致不能及时发现乙肝的感染，也就不能得到及时的治疗，对医护人员和其他患者也存在着被感染的威胁。乙肝五项定量应用目前最先进的化学发光法检测，避免了假阴性和漏检的问题，而且准确，尤其对乙肝病人的疗效观察提供了依据，这是检验发展的趋势。17乙肝病毒检测两对半定量检测极大地提高了检测的灵敏度，LiCa技术检测HBsAg灵敏度可达05ng/ml，而ELISA检测HBsAg达到2ng/ml时才会阳性。急性乙肝早期定量能及早检出HBsAg，确证HBV感染，几乎能与PreSi同时检测，在病程观察中大大

9、缩短了“窗口期”，而酶标检测在乙肝早期往往HBsAg呈阴性。慢性乙肝一些患者由于机体常缺乏对HBV包膜蛋白的免疫应答，HBsAg表达较低，酶标检测可出现HBsAg和HBsAb均阴性的情况，而定量检测则可避免这些情况的出现，为正确判断病情提供依据。灵敏度如病毒发生变异后，表达量较低，常规ELISA测不出抗原，而定量检测具有极高的灵敏度，可发现极有可能同时检测出HBsAg和HBsAb，血清中HBsAg含量与病人对HBsAg细胞免疫成反比关系，而肝功能改变则与此种细胞免疫成正比。定量HBsAg是反映这一关系的唯一手段。可发现低浓度的HBsAg携带者，特别是一些群体如医务工作者及病人家属等。18乙肝病

10、毒检测定量检测意义l监测疾病发展l评估药物疗效l指导疫苗接种19乙肝病毒检测PCR技术在乙肝方面的应用 乙型肝炎病毒属嗜肝DNA病毒科（hepadnaviridae），基因组长度3.2kb 目前感染人类最小的DNA病毒 部分双链环状DNA。21乙肝病毒检测定量PCR的特点22乙肝病毒检测23乙肝病毒检测HBV基基 因因 及及 编编 码码 蛋蛋 白白24乙肝病毒检测HBV-DNA定量检测的临床应用 慢性乙肝诊断 治疗监测和疗效评价 跟踪随访 预后判断25乙肝病毒检测（二）HBV-DNA与“两对半”26乙肝病毒检测3.血清学指标()不能排除HBV感染。103 copy27乙肝病毒检测HBV-DNA

11、检测的临床意义28乙肝病毒检测29乙肝病毒检测 一、乙肝病毒DNA检查可检查乙肝病毒的复制状况。如乙肝病毒DNA测定值1000copies/ml，就提示乙肝病毒有复制，而且病毒数量的高低与病毒复制的程度成正相关。若结果阴性，则表明病毒处于不活跃阶段，病情比较平稳。二、乙肝病毒DNA检查还是判断乙肝病毒传染性的重要指标。如果乙肝病毒DNA测定值1000copies/ml，常提示具有传染性，且检测值越高就说明乙肝病毒复制越活跃，传染性越强。30乙肝病毒检测 三、乙肝病毒DNA检查可以作为肝病患者确诊病情的主要依据。乙肝病毒DNA阳性者，即使肝功能正常，必要时也应考虑进行抗病毒治疗。乙肝抗病毒治疗的

12、标准就是乙肝病毒DNA1000copies/ml，且患者转氨酶超过正常值两倍，此时是肝病患者抗病毒治疗的最佳时机。四、乙肝病毒DNA检查结果还可以在一定程度上辅助判断乙肝病毒是否产生了变异，如在治疗过程中乙肝病毒DNA检测结果由阴性转为阳性时，则提示病毒已发生变异，应结合具体病情重新选择抗病毒药物。31乙肝病毒检测基因检测在乙肝诊疗各阶段的应用基因检测在乙肝诊疗各阶段的应用药物治疗方案的确定药物治疗方案的确定（用药：干扰素、拉米夫定、（用药：干扰素、拉米夫定、阿德福韦、恩替卡韦）阿德福韦、恩替卡韦）药物治疗药物治疗（疗效评价）（疗效评价）前前C C区区18961896位点突变检测位点突变检测跟

13、踪随访跟踪随访乙乙 肝肝 病病 毒毒 定定 量检测量检测确确诊诊病毒学病毒学分析分析乙肝病毒分型检测乙肝病毒分型检测拉米夫定耐药检测拉米夫定耐药检测阿德福韦耐药检测阿德福韦耐药检测共价闭合环状共价闭合环状DNA(cccDNA)检测检测恩替卡韦耐药检测恩替卡韦耐药检测32乙肝病毒检测FQ-PCR检测的优势 灵敏度高可以达到灵敏度高可以达到 pg pg 级而级而 ELISA ELISA 只能检测只能检测 ng ng级，级，可以检测包括乳汁的其他低含量的标本可以检测包括乳汁的其他低含量的标本;不受病毒变异影响，而前不受病毒变异影响，而前C C和和S S变异后变异后ELISAELISA难以检测难以检测;荧光定量荧光定量PCR PCR 技术采用闭管检测技术采用闭管检测,无须凝胶电泳无须凝胶电泳,避避免了交叉污染免了交叉污染,实现了对实现了对HBV DNA HBV DNA 的定量测定的定量测定,其实其实时监测技术使药物选择和疗效观察成为可能时监测技术使药物选择和疗效观察成为可能;漏检率低。漏检率低。33乙肝病毒检测34乙肝病毒检测