医学仪器分析培训课件.ppt

1、文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。Company 传统分离方法，如：传统分离方法，如：分离分析篇蒸馏蒸馏萃取萃取结晶结晶沉淀沉淀过滤过滤电解电解文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。Company 现代常用的分离技术：现代常用的分离技术：分离分析篇色谱法色谱法(chromatography)固相萃取固相萃取微滤、超滤微滤、超滤反渗透反渗透离子交换离子交换复杂混合物？复杂混合物？分析？分析？文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。Company 茨维特实验：用石油醚洗脱植物叶

2、子提取物茨维特实验：用石油醚洗脱植物叶子提取物实验存在两相：实验存在两相：固定相固定相:碳酸钙碳酸钙流动相流动相:石油醚石油醚15.1 色谱法引论文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。Company 固定相固定相:氧化铝氧化铝流动相流动相:95%:95%乙醇乙醇混合物甲基橙、亚甲蓝的分离装置图混合物甲基橙、亚甲蓝的分离装置图15.1 色谱法引论文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。Company 薄层色谱法和纸色谱法薄层色谱法和纸色谱法15.1 色谱法引论文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联

3、系网站或本人删除。Company 色谱法：色谱法：固定相固定相（stationary phase）：流动相流动相（mobile phase）：）：色谱柱（色谱柱（chromatographic column）：）：15.1 色谱法引论保留组分；保留组分；洗脱组分并携带组分运动的流体；洗脱组分并携带组分运动的流体；一种内有固定相，用以分离混合物的柱管一种内有固定相，用以分离混合物的柱管适合于适合于复杂混合物复杂混合物的一种的一种分离分析分离分析技术；技术；文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。Company 色谱法分类色谱法分类：根据流动相的状态根据流动相

4、的状态气相色谱法（GC）气固色谱气液色谱液相色谱法 (LC)液固色谱液液色谱超临界流体色谱法超临界流体色谱法SFCSFC15.1 色谱法引论文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。Company 平面色谱法平面色谱法色谱法分类色谱法分类：根据固定相状态：根据固定相状态纸色谱法纸色谱法薄层色谱法薄层色谱法柱色谱法柱色谱法填充色谱柱法（填充色谱柱法（LCLC用）用）毛细管柱色谱法（毛细管柱色谱法（GCGC用）用）15.1 色谱法引论文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。Company 填充柱色谱法填充柱色谱法15.1 色

5、谱法引论文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。Company 毛细管柱色谱法毛细管柱色谱法15.1 色谱法引论文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。Company 色谱法分类色谱法分类：根据分离机理：根据分离机理 吸附色谱吸附色谱 分配色谱分配色谱 尺寸排阻色谱尺寸排阻色谱 离子交换色谱离子交换色谱 亲合色谱亲合色谱 15.1 色谱法引论文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。Company 色谱法的特点：色谱法的特点：15.1 色谱法引论文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模

6、仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。Company 色谱法的应用色谱法的应用药物开发、药物质量控制药物开发、药物质量控制临床检验临床检验食品安全食品安全环境保护环境保护军事领域军事领域公安、法医、国家安全部门公安、法医、国家安全部门石油、化工石油、化工体育、娱乐体育、娱乐15.1 色谱法引论文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。Company 中国制药实验室是目前分离技术最大的消费群，占据了中国制药实验室是目前分离技术最大的消费群，占据了24%24%的分离技术市场需求份额，在的分离技术市场需求份额，在20122012年达到年达到2 2亿美元的消费亿美

7、元的消费额。额。色谱法的应用：色谱法的应用：15.1 色谱法引论文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。Company 色谱仪基本构造色谱仪基本构造DetectorCarrier gasFlow or pressurecontrollerInjection port ColumnData station(Recorder)气相色谱流程图气相色谱流程图15.1 色谱法引论文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。Company PUMPDetectorData station(Recorder)ColumnMobile p

8、hase液相色谱流程图液相色谱流程图色谱仪基本构造色谱仪基本构造15.1 色谱法引论文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。Company 15.2 15.2 色谱流出曲线色谱流出曲线（chromatogram）：）：文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。Company 基线基线基线t信信号号色谱峰色谱峰15.2 15.2 色谱流出曲线色谱流出曲线文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。Company 保留值保留值 死时间死时间 t t0 0 保留时间保留时间 t tr r 调整

9、保留时间调整保留时间 t tr rtrtr=tr-t0基线trt0进进样样空空气气峰峰t信信号号-定性分析定性分析15.2 15.2 色谱流出曲线色谱流出曲线文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。Company 峰高峰高h h与峰面积与峰面积A A区域宽度区域宽度偏差偏差峰底宽度峰底宽度 W W半峰宽半峰宽 W W1/21/2信信号号基线进样hW1/2Wh/2t-柱效柱效-定量分析定量分析15.2 15.2 色谱流出曲线色谱流出曲线文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。Company 根据色谱峰的个数，可判断样品所

10、含的最少组分数。根据色谱峰的个数，可判断样品所含的最少组分数。根据色谱峰的保留值，可以进行定性分析。根据色谱峰的保留值，可以进行定性分析。根据色谱峰的面积或峰高根据色谱峰的面积或峰高,可以进行定量分析可以进行定量分析色谱峰的保留值及其区域宽度是评价色谱柱分离效色谱峰的保留值及其区域宽度是评价色谱柱分离效能的依据能的依据色谱峰两峰间的距离，是评价色谱峰两峰间的距离，是评价固定相固定相(或流动相或流动相)选择是否合适的依据。选择是否合适的依据。15.2 15.2 色谱流出曲线色谱流出曲线文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。Company 1.1.色谱法具有

11、同时能进行色谱法具有同时能进行 和和 的特点而区别于其它方法，的特点而区别于其它方法，特别对特别对 和和 的分离，色谱法的优势更为明显。的分离，色谱法的优势更为明显。2.2.按固定相外形不同色谱法是如何分类的？按固定相外形不同色谱法是如何分类的？3.3.什么是气相色谱法和液相色谱法？什么是气相色谱法和液相色谱法？4.4.保留时间、死时间及调整保留时间的关系是怎样的？保留时间、死时间及调整保留时间的关系是怎样的？5.5.从色谱流出曲线可以得到哪些信息？从色谱流出曲线可以得到哪些信息？练练 习习文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。Company 15.3

12、15.3 色谱分离优化色谱分离优化文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。Company 15.3 15.3 色谱分离优化色谱分离优化文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。Company 15.3 15.3 色谱分离优化色谱分离优化文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。Company 供试品主成分峰达到最小供试品主成分峰达到最小理论塔板数理论塔板数要求要求定量峰与其他峰定量峰与其他峰分离度分离度应大于应大于1.5 1.5 重复性：取各品种项下的对照溶液，连续进样重复性：取各品种

13、项下的对照溶液，连续进样5 5次，次，其峰面积测量值的相对标准偏差应不大于其峰面积测量值的相对标准偏差应不大于2.0%2.0%拖尾因子拖尾因子（T T）：用于评价色谱峰的对称性）：用于评价色谱峰的对称性T T应在应在0.950.951.051.05间间 药典规定色谱系统适用性试验药典规定色谱系统适用性试验:文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。Company 分离度（分离度（Resolution,R）tR2tR1W1W2 15.3 15.3 色谱分离优化色谱分离优化文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。Compan

14、y 意义：分离度可作为色谱柱的总分离效能指标意义：分离度可作为色谱柱的总分离效能指标R=1.0 R=1.0 基本分离基本分离不同不同 R R 值色谱峰分离程度值色谱峰分离程度R1 R1 部分重叠部分重叠R=1.5 R=1.5 完全分离完全分离15.3 15.3 色谱分离优化色谱分离优化文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。第一个和第二个峰之间的分离度计算第一个和第二个峰之间的分离度计算min123456mAU050100150200250300 DAD1 B,Sig=230,4 Ref=550,100(DEMO005-0102.D)0.747 1.022

15、 2.569 5.849答案_文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。Company 色谱基本分离方程式色谱基本分离方程式n n 柱效柱效 选择因子选择因子k k 容量因子容量因子 15.3 15.3 色谱分离优化色谱分离优化文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。Company 选择因子选择因子 12rrtt意义意义:表示两组分在给定柱子上的选择性，值越大表示两组分在给定柱子上的选择性，值越大说明柱子的选择性越好。说明柱子的选择性越好。=1.1=1.4=1.815.3 15.3 色谱分离优化色谱分离优化文档仅供参考，

16、不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。Company 选择因子影响峰的间距选择因子影响峰的间距 组分性质越接近越难分离组分性质越接近越难分离增大柱选择性是改善分离度的最有力手段增大柱选择性是改善分离度的最有力手段主要受固定相、流动相性质以及柱温影响主要受固定相、流动相性质以及柱温影响,改变固定相改变固定相和流动相的性质和组成，可有效增大和流动相的性质和组成，可有效增大。选择因子选择因子 与分离度与分离度 R R15.3 15.3 色谱分离优化色谱分离优化文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。Company 改变固定相对分离选择性

17、的影响改变固定相对分离选择性的影响15.3 15.3 色谱分离优化色谱分离优化文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。Company mAU保留时间(min.)80%乙腈乙腈20%水水246810改变流动相对分离选择性的影响改变流动相对分离选择性的影响15.3 15.3 色谱分离优化色谱分离优化文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。Company 容量因子可由色谱图测得容量因子可由色谱图测得 容量因子是衡量色谱柱对被分离组分保留能力的容量因子是衡量色谱柱对被分离组分保留能力的重要参数重要参数k=tr t0 容量因子容

18、量因子-分离度分离度15.3 15.3 色谱分离优化色谱分离优化文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。容量因子对分离度的影响容量因子对分离度的影响Rk0246810 理想的 k 范围改变 k对分离度几乎没有影响改变 k 对分离度影响最大12141615.3 15.3 色谱分离优化色谱分离优化文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。容量因子对分离度的影响容量因子对分离度的影响:当当k k在在0 0到到5 5的范围内时，利用保留作用来提高分的范围内时，利用保留作用来提高分离度是最有效的离度是最有效的.15.3 15.3

19、色谱分离优化色谱分离优化影响峰位影响峰位，主要受固定相与流动相的性质及主要受固定相与流动相的性质及固定相用量、固定相用量、流动相的组成（流动相的组成（LC)、柱温、柱温(GC)和流动相流速的影响和流动相流速的影响文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。Company 柱效与分离度柱效与分离度15.3 15.3 色谱分离优化色谱分离优化文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。Company 色谱分离过程示意图色谱分离过程示意图反复分配反复分配15.3 15.3 色谱分离优化色谱分离优化文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿

20、模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。Company 理论塔板数和理论塔板高度的计算理论塔板数和理论塔板高度的计算H=n=16trW2=5.54trW1/22Ln理论塔板数和理论塔板高度是衡量柱效的指标。理论塔板数和理论塔板高度是衡量柱效的指标。在说明柱效时，需说明是对什么物质而言。tRWWi/2保留时间B进样15.3 15.3 色谱分离优化色谱分离优化文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。计算柱效计算柱效min123456mAU050100150200250300 DAD1 B,Sig=230,4 Ref=550,100(DEMO005-0102.

21、D)0.747 1.022 2.569 5.849文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。Company Van DeemterVan Deemter（范第姆特）方程简式（范第姆特）方程简式：流动相的线速：流动相的线速A A：涡流扩散系数：涡流扩散系数B B：分子扩散系数：分子扩散系数C C：传质阻力项系数：传质阻力项系数速率理论速率理论15.3 15.3 色谱分离优化色谱分离优化文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。Company 初始谱带最终谱带宽度宽度涡流扩散涡流扩散 使用细而均匀的颗粒并填充均匀是减少涡流扩散

22、和提高使用细而均匀的颗粒并填充均匀是减少涡流扩散和提高柱效的有效途径。空心毛细管柱没有涡流扩散。柱效的有效途径。空心毛细管柱没有涡流扩散。15.3 15.3 色谱分离优化色谱分离优化文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。Company 减少分子扩散：减少分子扩散：分子扩散分子扩散浓度梯度造成纵向扩散浓度梯度造成纵向扩散。flash4.4.在在LCLC中作用小中作用小15.3 15.3 色谱分离优化色谱分离优化文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。Company 传质阻力传质阻力15.3 15.3 色谱分离优化色谱分

23、离优化文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。Company 传质阻力传质阻力15.3 15.3 色谱分离优化色谱分离优化产生原因：产生原因：样品在两相分配，样品未及进入样品在两相分配，样品未及进入固定相就被带走，或在固定相中延迟重入流动固定相就被带走，或在固定相中延迟重入流动相从而造成峰扩张。相从而造成峰扩张。用分用分子量小的流动相，较低的流速。子量小的流动相，较低的流速。文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。Company H u关系曲线关系曲线u 最佳最佳uHB/uCuH最小最小扩散扩散-各项的贡献：各项的贡献

24、：15.3 15.3 色谱分离优化色谱分离优化文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。续前续前柱效和分离度小结：柱效和分离度小结：15.3 15.3 色谱分离优化色谱分离优化柱效影响色谱峰的宽窄柱效影响色谱峰的宽窄根据速率理论，降低板高根据速率理论，降低板高主要取决于色谱柱性能、主要取决于色谱柱性能、固定液液膜厚度、流动相的性质和流速，柱温等。固定液液膜厚度、流动相的性质和流速，柱温等。提高柱效、改善分离的途径：增加柱长；降低板高。提高柱效、改善分离的途径：增加柱长；降低板高。文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。C

25、ompany 拖尾因子：拖尾因子：评价峰形的参数，目的是为了保证色谱分离效果和评价峰形的参数，目的是为了保证色谱分离效果和测量精度。测量精度。15.3 15.3 色谱分离优化色谱分离优化文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。Company 拖尾因子：拖尾因子：5%5%峰高处峰宽与峰顶点至前沿的距离比，常峰高处峰宽与峰顶点至前沿的距离比，常用用T T来表示。来表示。T=WT=W0.05h0.05h/2f/2f15.3 15.3 色谱分离优化色谱分离优化中国药典中国药典规定定量时规定定量时T T应该在应该在0.95-1.050.95-1.05之之间，低于间，

26、低于0.950.95为前延峰，高于为前延峰，高于1.051.05为拖尾峰。为拖尾峰。文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。增大 k增加选择性提高柱效分离优化小结：分离优化小结：对于常规分析工作，一般选用：对于常规分析工作，一般选用：选择因子选择因子来评价固定液来评价固定液 有效塔板数有效塔板数N N有效有效来评价色谱柱与分离条件来评价色谱柱与分离条件 以分离度以分离度R R作为柱的总分离效能指标作为柱的总分离效能指标文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。t0初始初始改变改变?增加增加?增加增加?t练习练习请指出每种

27、情况改请指出每种情况改变了分离度变了分离度公式中的哪个参数公式中的哪个参数:n,k,or n,k,or .文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。练习练习1.1.列出提高样品组分保留作用的三种方法列出提高样品组分保留作用的三种方法.2.2.列出减小色谱峰宽的四种方法列出减小色谱峰宽的四种方法.3.3.下面参数中哪些影响柱效下面参数中哪些影响柱效?洗脱强度洗脱强度流动相黏度流动相黏度固定相的颗粒度固定相的颗粒度柱长柱长色谱柱温度色谱柱温度文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。练习练习例：已知物质例：已知物质A A和和B

28、 B在一根在一根30.0cm30.0cm长的柱上的保留时间分别为长的柱上的保留时间分别为 16.4016.40和和17.63min17.63min，不被保留组分通过该柱的时间为，不被保留组分通过该柱的时间为1.30min1.30min，峰底宽为，峰底宽为1.111.11和和1.21min1.21min，试计算，试计算 （1 1）柱的分离度（）柱的分离度（2 2）柱的平均塔板数（）柱的平均塔板数（3 3）塔板高度）塔板高度 （4 4）达）达1.51.5分离所需柱长分离所需柱长解：06.121.111.1)40.1663.17(2)(22112WWttRRR文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿

29、；如有不当之处，请联系网站或本人删除。练习练习解：2)(16WtnR3493)11.140.16(1621 n3397)21.163.17(1622n34452)33973493(221nnn例：已知物质例：已知物质A A和和B B在一根在一根30.0cm30.0cm长的柱上的保留时间分别为长的柱上的保留时间分别为 16.4016.40和和17.63min17.63min，不被保留组分通过该柱的时间为，不被保留组分通过该柱的时间为1.30min1.30min，峰底宽为峰底宽为1.111.11和和1.21min1.21min，试计算，试计算 （1 1）柱的分离度（）柱的分离度（2 2）柱的平均塔

30、板数（）柱的平均塔板数（3 3）塔板高度）塔板高度 （4 4）达）达1.51.5分离所需柱长分离所需柱长文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。续前续前mmnLH3107.83445300LRnRcmL6022121LLRR2305.106.1L例：已知物质例：已知物质A A和和B B在一根在一根30.0cm30.0cm长的柱上的保留时间分别为长的柱上的保留时间分别为 16.4016.40和和17.63min17.63min，不被保留组分通过该柱的时间为，不被保留组分通过该柱的时间为1.30min1.30min，峰底宽为峰底宽为1.111.11和和1.21

31、min1.21min，试计算，试计算 （1 1）柱的分离度（）柱的分离度（2 2）柱的平均塔板数（）柱的平均塔板数（3 3）塔板高度）塔板高度 （4 4）达）达1.51.5分离所需柱长分离所需柱长文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。Company 1.1.什么是选择因子？它表征的意义是什么？什么是选择因子？它表征的意义是什么？2.2.什么是分配比（即容量因子）？它表征的意义是什什么是分配比（即容量因子）？它表征的意义是什么？么？3.3.4.4.板高、柱效及柱长三者的关系（公式）？板高、柱效及柱长三者的关系（公式）？5.5.利用色谱图如何计算理论塔板数（

32、公式）？利用色谱图如何计算理论塔板数（公式）？思考题思考题文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。Company 6.6.7.7.塔板理论对色谱理论的主要贡献是怎样的？塔板理论对色谱理论的主要贡献是怎样的？8.8.速率理论的简式速率理论的简式,影响板高的是哪些因素影响板高的是哪些因素?9.9.可作为色谱柱的总分离效能指标可作为色谱柱的总分离效能指标.10.10.如何根据分离度分析色谱分离的情况如何根据分离度分析色谱分离的情况?思考题思考题文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。Company 定义：采用气体作为流动相的

33、一种色谱法。定义：采用气体作为流动相的一种色谱法。16.1 气相色谱法概述分为气固吸附色谱和气液分配色谱分为气固吸附色谱和气液分配色谱气体做流动相对分离所起作用较小，主要基于溶质气体做流动相对分离所起作用较小，主要基于溶质和固定相的作用。和固定相的作用。气体的黏度小，在色谱柱内流动的阻力小，同时气体的黏度小，在色谱柱内流动的阻力小，同时气体扩散系数大，组分在两相间传质速率快，有气体扩散系数大，组分在两相间传质速率快，有利于快速高效分离。利于快速高效分离。文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。Company 16.1 气相色谱法概述局限：定性困难；不能分析

34、分子量大、极性强或局限：定性困难；不能分析分子量大、极性强或热不稳定的化合物。热不稳定的化合物。适用于沸点较低适用于沸点较低,较易挥发并且热稳定性好的化合较易挥发并且热稳定性好的化合物物特点：高选择性、高柱效、高灵敏度、快速。特点：高选择性、高柱效、高灵敏度、快速。文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。Company 16.2 气相色谱仪包括：载气系统、进样系统、包括：载气系统、进样系统、分离系统分离系统、检测、检测系统、系统、温控温控和数据处理系统和数据处理系统文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。Company

35、 固定液要求固定液要求一般为高沸点有机化合物。一般为高沸点有机化合物。对试样各组分有适当的溶解能力对试样各组分有适当的溶解能力,选择性好选择性好;挥发性小，热稳定性好挥发性小，热稳定性好;化学稳定性好。化学稳定性好。16.3 分离系统文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。Company 烃类硅氧烷类 醇类和醚类 酯类和聚酯腈和腈醚等固定液的分类固定液的分类弱极性弱极性到强极性强极性中强极性强极性16.3 分离系统文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。Company 聚硅氧烷类SiO SiO SiOSiRRRRCH3

36、CH3H3CCH3CH3CH3nCH3CH2CH2CH2CNCH2CH2CF3R=methyl(甲甲基基)cyanopropyl(腈腈丙丙基基)trifluoropropylphenyl(苯苯基基)(三三氟氟丙丙基基)16.3 分离系统文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。Company 聚硅氧烷类是目前聚硅氧烷类是目前应用最广泛应用最广泛的通用型固定液。的通用型固定液。聚硅氧烷类SiO SiO SiOSiRRRRCH3CH3H3CCH3CH3CH3n硅氧烷类经不同的基团修饰可得到不同极性的固定相。硅氧烷类经不同的基团修饰可得到不同极性的固定相。具有很高

37、的热稳定性和液态温度范围具有很高的热稳定性和液态温度范围(50(50350)350)，16.3 分离系统文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。固定相组成固定相组成J&WSGE 极性极性100%甲基聚硅氧烷甲基聚硅氧烷DB-1BP-1 非极性非极性5%苯基甲基聚硅氧烷苯基甲基聚硅氧烷DB-5BP-5 弱极性弱极性 聚乙二醇聚乙二醇DB-WaxBP-20 强极性强极性50%苯基甲基聚硅氧烷苯基甲基聚硅氧烷DB-17BP-17 中极性中极性 常用固定相文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。Company 固定液的选择：固

38、定液的选择：固定液选择的一般规律固定液选择的一般规律相似相溶原则相似相溶原则非极性和极性混合物试样：非极性和极性混合物试样：选择极性固定液。选择极性固定液。复杂混合物：使用两种或以上固定液。复杂混合物：使用两种或以上固定液。完全分离的前提下，优先选择非极性柱。完全分离的前提下，优先选择非极性柱。16.3 分离系统文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。Company 柱温应低于固定液的最高使用温度柱温应低于固定液的最高使用温度柱温是影响色谱分离效能和分析时间的重要参数柱温是影响色谱分离效能和分析时间的重要参数柱温选择的原则是，在保证难分离物质有良好分柱温选

39、择的原则是，在保证难分离物质有良好分离的前提下（分离度满足要求），尽可能采取较离的前提下（分离度满足要求），尽可能采取较高柱温，以缩短分析时间，保证峰型对称。高柱温，以缩短分析时间，保证峰型对称。组分复杂，沸程宽的试样，采用程序升温组分复杂，沸程宽的试样，采用程序升温。柱温的选择：柱温的选择：16.3 分离系统文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。Company 恒温：45oC程序升温：30-180oC恒温：145oC 温度低，分离效果较好，但分析时间长程序升温，分离效果好，且分析时间短温度高，分析时间短，但分离效果差程序升温文档仅供参考，不能作为科学依

40、据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。Company 16.4 气相色谱检测器文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。Company 原理：原理：含碳物质在氢火焰（以氢气含碳物质在氢火焰（以氢气-空气燃烧为能源）中离子化，空气燃烧为能源）中离子化，外电场作用形成电流，外电场作用形成电流，电流与待测物质量成正比电流与待测物质量成正比氢火焰离子化检测器（hydrogen flame ionization detector）FID文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。Company 小结：气相色谱分离条件的选择

41、固定液的选择固定液的选择柱长和内径及液膜厚度的选择柱长和内径及液膜厚度的选择载气及流速的选择载气及流速的选择柱温的选择柱温的选择检测器及温度的选择检测器及温度的选择进样口温度的选择进样口温度的选择进样量的选择进样量的选择文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。Company 人体排泄物中胆汁酸分析图人体排泄物中胆汁酸分析图 色谱峰：色谱峰：1 1 甾醇甾醇 2 2胆固醇胆固醇 3 3粪甾醇粪甾醇 4 4 谷甾醇谷甾醇 5 5降胆酸（内标）降胆酸（内标）6 6石胆酸石胆酸 7 7异去氧胆酸异去氧胆酸 8 8去氧胆酸去氧胆酸 9 9 熊去氧熊去氧胆酸胆酸色谱柱

42、色谱柱:CP-Sil1919 CB（14%腈丙基腈丙基-苯基，苯基，86%二甲基二甲基聚硅氧烷固定相，中等极性）聚硅氧烷固定相，中等极性）25m x 0.32mm25m x 0.32mm，0.25m0.25m，柱温柱温:140:140（1min1min）270 270（10 /min10 /min）载气载气:氢气（氢气（H H2 2），），70 KPa 70 KPa 进样器进样器:140 :140 检测器：检测器：FID FID 进样量：进样量：1L1L毛细管柱用于胆汁酸的分离测定毛细管柱用于胆汁酸的分离测定 文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。练习练

43、习例：两组分在例：两组分在1m1m长柱子上的分离度为长柱子上的分离度为0.750.75，问使用，问使用 多长柱子可以使它们完全分离？多长柱子可以使它们完全分离？解：LRnR2121LLRR215.175.0LmL42练 习文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。Company 1.1.利用已知标准物质对照定性利用已知标准物质对照定性一、定性分析一、定性分析15-4 色谱法定性和定量分析保留时间保留时间峰高增加法峰高增加法双柱比较法双柱比较法(Qualitative analysis)条件：严格控制色谱条件条件：严格控制色谱条件文档仅供参考，不能作为科学依据

44、，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。Company 4.4.与其它仪器联用，与其它仪器联用，将结构分析仪器作为色谱检测器将结构分析仪器作为色谱检测器2.2.利用相对保留值定性利用相对保留值定性(p303(p303）气相色谱气相色谱-质谱联用仪质谱联用仪15-4 色谱法定性和定量分析3.3.利用保留指数定性（自学）利用保留指数定性（自学）液相色谱液相色谱-质谱联用仪质谱联用仪文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。Company 二、定量分析二、定量分析 原理原理:当操作条件一致时，被测组分的质量（或浓度）当操作条件一致时，被测组分的质量（或浓度

45、）与检测器给出的响应信号与检测器给出的响应信号(峰面积峰面积A A或峰高或峰高h)h)成正比。成正比。Quantitative Analysis）15-4 色谱法定性和定量分析iAiiAfmihiihfm 文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。色谱定性和定量分析方法Qualitative and Quantitative Analysis of Chromatography定量校正因子定量校正因子绝对校正因子绝对校正因子miiAiAf miiAiAf iihihmf 15-4 色谱法定性和定量分析与仪器的灵敏度有关，不容易测量准确，无通用性。与仪器的灵敏

46、度有关，不容易测量准确，无通用性。文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。色谱定性和定量分析方法Qualitative and Quantitative Analysis of Chromatography 相对校正因子相对校正因子isfsiisssiisimimAmAAmAmfff基准物：基准物：TCDTCD苯；苯；FIDFID正庚烷正庚烷与待测物、基准物和检测器类型有关，与操作条件与待测物、基准物和检测器类型有关，与操作条件（进样量）无关（进样量）无关同类型检测器，相对校正因子可以通用同类型检测器，相对校正因子可以通用siAAsi和测混匀进样基准物纯品

47、过程：精称15-4 色谱法定性和定量分析文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。Company 常用的定量方法常用的定量方法外标法（标准校正法）外标法（标准校正法）内标法内标法 峰面积归一化法峰面积归一化法15-4 色谱法定性和定量分析文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。外标法外标法1 2 3 4 5 6 SamplemAAimi15-4 色谱法定性和定量分析文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。Company 外标法（标准校正法）特点：外标法（标准校正法）特点：分离、检测条

48、件的稳定性对定量结果影响很大。分离、检测条件的稳定性对定量结果影响很大。为获得高定量准确性，定量校正曲线必须经常重为获得高定量准确性，定量校正曲线必须经常重复校正。复校正。应用最广、操作简单，适用大批量样品测定应用最广、操作简单，适用大批量样品测定。15-4 色谱法定性和定量分析文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。Company 不存在试样中不存在试样中内标物是高纯化合物内标物是高纯化合物 内标物与样品能互溶但无化学反应；内标物与样品能互溶但无化学反应；分子结构、保留值与检测响应最好与待测组分接近分子结构、保留值与检测响应最好与待测组分接近内标物必须能

49、与样品中各组分完全分离；内标物必须能与样品中各组分完全分离；内标物要求：内标物要求：15-4 色谱法定性和定量分析内内 标标 法法文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。内标法内标法siSample(i)Standard(内标物）ms15-4 色谱法定性和定量分析siississiisimmAAfAfAfmm.ssisiimAfAm标准和内标混合进样标准和内标混合进样样品和内标混合进样样品和内标混合进样文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。Company 16-3 16-3 气相色谱法定性和定量分析气相色谱法定性和定

50、量分析配制一系列浓度的标样，其中加有等量内标物配制一系列浓度的标样，其中加有等量内标物文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。Company 15-4 色谱法定性和定量分析 mi（或（或Ci）Ai /AS内标标准曲线内标标准曲线 采集不同浓度标样的色谱图采集不同浓度标样的色谱图文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。Company 按按标样峰面积与内标峰面积之比标样峰面积与内标峰面积之比对浓度建立标准曲线对浓度建立标准曲线 15-4 色谱法定性和定量分析 mi（或（或Ci）Ai /AS不必测校正因子，消除了某些操作条件