放射免疫分析全面版课件.pptx

1、1放射免疫分析放射免疫分析第1页/共119页第2页/共119页第3页/共119页第4页/共119页R.S.YalowS.A.Berson第5页/共119页第6页/共119页第7页/共119页第8页/共119页第9页/共119页第10页/共119页第11页/共119页第12页/共119页第13页/共119页Ag*+AbAg*-Ab+AgAg-Ab第14页/共119页第15页/共119页第16页/共119页0第17页/共119页第18页/共119页第19页/共119页第20页/共119页第21页/共119页第22页/共119页第23页/共119页第24页/共119页第25页/共119页第26页/共

2、119页第27页/共119页第28页/共119页第29页/共119页第30页/共119页第31页/共119页第32页/共119页第33页/共119页Ag +Ab*Ag-Ab*+ImAd-AgImAd-Ag-Ab*第34页/共119页第35页/共119页Ag +ImAd-AbImAd-Ab-Ag+Ab*ImAd-Ab-Ag-Ab*第36页/共119页第37页/共119页第38页/共119页第39页/共119页第40页/共119页第41页/共119页第42页/共119页第43页/共119页第44页/共119页第45页/共119页第46页/共119页第47页/共119页蛋白质 COOH+RNCNR蛋

3、白质 COOCNHRNR+NH2半抗原+RNCNRHHO蛋白质 CONH半抗原（碳化二亚胺）第48页/共119页蛋白质 NH2+H2N半抗原+HCO(CH2)3COH蛋白质 NCH(CH2)3CHN半抗原（戊二醛）第49页/共119页第50页/共119页半抗原COOH+ClCOOCH2CH(CH3)2+三正丁胺(C4H9)3N半抗原 COOCOOCH2CH(CH3)2+蛋白质 NH2蛋白质 NHCO半抗原（氯甲酸异丁酯）第51页/共119页第52页/共119页半抗原CH2OH+COOCOCH2CH2（琥珀酸酐）半抗原 CH2OCOCH2CH2COOH第53页/共119页半抗原CO+H2NOCH

4、2COOH半抗原 CNOCH2COOHO(羧甲基)羟胺第54页/共119页OH半抗原+ClCH2COONaO半抗原CH2COOH第55页/共119页COOHNH2+NaNO2NCOOHNNCOOHNHO半抗原HO半抗原+第56页/共119页第57页/共119页H3CSNClOONa第58页/共119页第59页/共119页第60页/共119页第61页/共119页第62页/共119页第63页/共119页具有羟基、酮基、酚基的半抗原先分别用琥珀酸酐法、O-(羧甲基)羟胺法、一氯醋酸钠法和重氮化的对氨基苯甲酸法合成具有羧基的半抗原衍生物，再用碳化二亚胺法或氯甲酸异丁酯法合成人工抗原。准确性是指测量值与

5、真值的符合程度。急诊检测法：为临床上快出结果而提出的反应方式，不等RIA反应达到动态平衡就终止反应。当Ab0和Ag*0都已确定时，如果Ag0低，则生成的Ag*-Ab多(其浓度B高)，剩余的标记抗原Ag*少(其浓度F低)，B/F值较高；当Ab0和Ag*0都已确定时，如果Ag0低，则生成的Ag*-Ab多(其浓度B高)，剩余的标记抗原Ag*少(其浓度F低)，B/F值较高；放射性强度与血清中自身抗体量呈正比。用缓冲液冲洗Iodo-bead和反应管，洗液与反应液合并，后经纯化。具有类似原理的其他分析方法待测样品作一系列稀释，将其反应曲线与标准曲线比较。在反应管中加入抗原5 g(10 L)。第64页/共1

6、19页第65页/共119页第66页/共119页第67页/共119页第68页/共119页第69页/共119页第70页/共119页第71页/共119页式中A为投入总放射性，Y为标记率，W为投入待标记抗原重量。第72页/共119页第73页/共119页第74页/共119页第75页/共119页第76页/共119页第77页/共119页第78页/共119页第79页/共119页第80页/共119页 第81页/共119页第82页/共119页第83页/共119页第84页/共119页指抗体与待测抗原的类似抗原的交叉反应程度，前文已作叙述。根据加样顺序与温育次数的不同，放射免疫分析可分为如下三种。磁性微粒子固相抗体或

7、固相亲和素首先应用于CLIA试剂盒的制造，最近也应用于IRMA和RIA。抗体的滴度反应其浓度。放射免疫分析及其相关的技术.3H标记的四环素可与样品中四环素类药物竞争结合特异性受体，当样品中残留有四环素类药物时，残留药物与受体结合，从而阻止了标记四环素与受体的结合。正向两步法：待测抗原先与固相抗体结合，再与标记抗体结合，然后去除游离的标记抗体，测固相抗体-抗原-标记抗体复合物的放射性计数。放免实验室通风换气应良好，避免空气中有粉尘，应采用湿式操作的方法，可使污染降低到最低。肿瘤抗原：癌胚抗原、甲胎蛋白第四军医大学出版社.具有羟基、酮基、酚基的半抗原先分别用琥珀酸酐法、O-(羧甲基)羟胺法、一氯醋

8、酸钠法和重氮化的对氨基苯甲酸法合成具有羧基的半抗原衍生物，再用碳化二亚胺法或氯甲酸异丁酯法合成人工抗原。有的放射免疫分析先在37温育一段时间，再在4下温育。具有羟基、酮基、酚基的半抗原先分别用琥珀酸酐法、O-(羧甲基)羟胺法、一氯醋酸钠法和重氮化的对氨基苯甲酸法合成具有羧基的半抗原衍生物，再用碳化二亚胺法或氯甲酸异丁酯法合成人工抗原。常用的缓冲液有磷酸盐缓冲液、巴比妥缓冲液、Tris-HCl缓冲液、醋酸缓冲液和硼酸缓冲液。第113页/共119页福建水产,2005,(3):47-49.采用磁性微粒子RIA技术，具有简便、快速、特异性高等优点，其原理是血清中的抗体和125I-抗原混合温育，生成抗原

9、-抗体复合物，然后反应液中加入抗人IgG磁性微粒子分离剂5 min，置于磁性分离器上，弃上清液，测放射性。第85页/共119页第86页/共119页第87页/共119页第88页/共119页第89页/共119页第90页/共119页第91页/共119页第92页/共119页第93页/共119页第94页/共119页第95页/共119页第96页/共119页Bs/B0(%)=cpms cpm0 100 cpms为标准抗原+标记抗原+抗体反应的平均计数率，cpm0为标记抗原+抗体反应的平均计数率。第97页/共119页logitb=loge 100 b b第98页/共119页第99页/共119页第100页/共119页回收率(%)=所加标准品的量 100 样品加标准品的测定含量 样品的测定含量 第101页/共119页第102页/共119页第103页/共119页第104页/共119页第105页/共119页第106页/共119页第107页/共119页第108页/共119页第109页/共119页第110页/共119页第111页/共119页第112页/共119页第113页/共119页第114页/共119页第115页/共119页第116页/共119页第117页/共119页第118页/共119页第119页/共119页